INFLUENCIA DE LA RELACIN C/N SOBRE EL PESO MOLECULAR DEL POLI-3HIDROXIBUTIRATO (PHB) SINTETIZADO POR LA CEPA OPNA DE Azotobacter vinelandii

Jasmin Barreto , Tania Castillo , Daniel Segura , y Carlos F. Pea *. Instituto de Biotecnologa, UNAM.
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Dpto. Ingeniera Celular y Biocatlisis. Depto. de Microbiologa Molecular. UAEM.Centro de Investigaciones en

Biotecnologa. Cuernavaca, Morelos Mxico. e-mail: jasmin_baal@hotmail.com
Palabras clave: peso molecular, PHB, Azotobacter vinelandii

Metodologa. Se realizaron, por triplicado, cultivos lote

3
de la cepa OPNA de A. vinelandii . Los cultivos se
llevaron a cabo en un fermentador de 3 L a un pH de 7.2,
29C, 500 rpm y una aireacin de 0.5 vvm. Como medio
-1
de cultivo se emple sacarosa (20 g L ) y extracto de
levadura. Se evaluaron 3 condiciones C/N: 10, 18 y 60,
-1
con 14, 6.5 y 1.6 g L de extracto de levadura,
respectivamente. Se realiz el seguimiento del
crecimiento mediante la cuantificacin de protena total
3
(Lowry) y se cuantific produccin de PHB por HPLC . La
determinacin del peso molecular del PHB se llev a
cabo mediante cromatografa de filtracin en gel
4
(GPC/HPLC) .
Resultados. Entre las condiciones C/N = 10 y C/N = 18
no se observaron diferencias significativas en el
crecimiento celular (Fig.1) con concentraciones mximas
-1
de protena de 0.57 0.13 y 0.60 0.06 g L ,
respectivamente. Sin embargo, en la condicin C/N = 60
se afect negativamente el crecimiento, alcanzndose
una concentracin de protena mxima de 0.31 0.10 g
-1
L , como un reflejo de la limitacin por nitrgeno
presente en esta condicin. No obstante, el contenido de
-1
PHB (% g gbio ) para las tres condiciones evaluadas fue
en promedio de 80.8 1.3. En lo que se refiere al PMP
del PHB (Fig. 2), este fue mayor (6585 784 kDa) en la
condicin C/N = 18 durante la fase estacionaria; en

contraste, el peso molecular ms bajo se obtuvo en la

condicin C/N = 10 (2599 682 kDa) y permaneci
constante en las dos etapas del cultivo.
Protena (g L -1)

1.00

0.10

0.01
0

10

20

30

40

50

60

Tiempo de cultivo (h)

Fig 1. Cintica de crecimiento: C/N = 10 (), C/N = 18 () y C/N = 60 ()

Lo cual sugiere que la relacin C/N tiene un papel

relevante en el proceso de polimerizacin del PHB.
8000
7000

PMP (kDa)

Introduccin. El polihidroxibutirato (PHB) es un polmero

intracelular de la familia de los polihidroxialcanoatos. El
PHB tiene propiedades termo-mecnicas comparables a
las del polipropileno, con la ventaja de que es un
polmero biocompatible y biodegradable. Este polmero
es acumulado por Azotobacter vinelandii como material
de reserva de carbono y energa en forma de grnulos
1
intracelulares . Las propiedades termo-mecnicas de
este polmero dependen principalmente del peso
1
molecular promedio (PMP) . Se han diseado estrategias
para mejorar la produccin de PHB de alto peso
molecular, a travs de la manipulacin gentica y
modificaciones en los parmetros de cultivo. Entre las
variables de cultivo que se ha observado en otras
especies bacterianas, influyen en la produccin del PHB,
2
se encuentra la relacin carbono-nitrgeno (C/N) .
El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de la
relacin C/N sobre el peso molecular del PHB producido
por la cepa OPNA de A. vinelandii.

6000
5000

4000
3000
2000
1000
0
C/N = 10

C/N = 18

C/N = 60

Fig 2. Peso molecular promedio del PHB bajo diferentes relaciones C/N en fase
exponencial (colores claros) y en fase estacionaria (colores obscuros).

Conclusiones. Los cambios en la relacin C/N en el

medio de cultivo no afectaron el contenido de PHB con
respecto a la biomasa total. En contraste, el PMP de este
polmero fue mayor en la condicin C/N=18, debido a
que en esta condicin la relacin C/N podra favorecer el
proceso de polimerizacin del PHB.
Agradecimiento. DGAPA PAPIIT a travs del proyecto
IT100513.
Bibliografia.
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4. Pea C., Lpez S., Garca A., Espn G., Romo-Uribe A. and Segura D.,
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