UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO
GUIA N 1: MICROSCOPIA
PRINCIPIOS OPTICOS, MANEJO Y CUIDADOS DEL
MICROSCOPIO
OBJETIVOS:

Sealar los componentes mecnicos y pticos que constituyen el microscopio.

Realizar montajes hmedos.
Comprobar las propiedades que posee el microscopio.

Marco Terico
La invencin de los aparatos de ptica, el telescopio y el microscopio compuesto, a finales del siglo XVI y principios del
siglo XVII, han contribuido a modificar la concepcin que el hombre tenia del mundo. Con el primero se comenz a sondear
las profundidades del cosmos, y con el segundo el mundo de lo infinitamente pequeo.
En 1558 el suizo CONRAD GESNER public un trabajo sobre la estructura de los foraminferos; su descripcin,
ampliamente detallada, sugiere el empleo de un instrumento amplificador compuesto por lentes finas.
FRANCIS Y ZACHARIAS JANSSENS, holandeses, manufacturaron el primer microscopio compuesto en 1590. Este
microscopio posea un aumento de 10X y 30X y fue empleado para observar estructuras de insectos.
GALILEO GALILEI (1564 1642) ESCRIBIO TRABAJOS DE GRAN IMPORTANCIA EN Biologa. Construy su propio
microscopio alrededor de 1610 y los utiliz principalmente para estudiar los arreglos de la facetas de los ojos compuestos
de los insectos.
ANTONY VAN LEEUWENHOEK (Holands, 1632 1723) fue uno de los ms distinguidos microscopistas: se hizo experto
en pulir lentes y construir microscopios, algunos con aumentos cercanos a los 300X. Fue el primero en describir organismos
como bacterias (bacilos, cocos, espirilos), protozoarios, rotferos e hidras; describi por primera vez espermatozoides de
humanos, perros, conejos, ranas, peces e insectos. Observ adems la circulacin de la sangre en la oreja del conejo y en
las patas de las ranas.
Las observaciones de VAN LEEUWENHOEK fueron confirmadas por el ingls ROBERT HOOKE (1635 1703) quien
populariz el microscopio entre los bilogos contemporneos en Inglaterra. Adems construy varios microscopios
compuestos. Al observar un corte fino de corcho, seal que estaba conformado por una estructura parecida a un panal de
abejas y que estaba compuesto por unidades pequeas que denomino clula. As HOOKE fue el primero en introducir el
vocablo CELULA en Biologa; lo que el observ, claro est, no fueron clulas sino los espacios dejados por la porcin viva
de la clula (lumen).
Existen diversos microscopios y tipos de iluminacin; entre los principales se encuentran: el microscopio de luz transmitida o
combinado con iluminacin por transmisin y reflexin, con campo oscuro, contraste de fase; el microscopio invertido, el
microscopio con luz polarizada, el microscopio con luz ultravioleta.
Los anteriores trabajan con luz fotnica, mientras que el microscopio electrnico tiene como fuente de luz haces de
electrones y en vez de lentes utiliza campos electromagnticos.
Principios pticos
Toda lente o sistemas de lentes que, interpuesto entre un objeto prximo y el ojo, permite observar aqul de un tamao
mayor y con detalle no visible a simple vista, se le considera un microscopio. El microscopio simple est formado por una
sola lente biconvexa o planoconvexa, o por la unin de varias que actan como nica. El microscopio compuesto, por el
contrario, consta de dos sistemas de lentes convergentes y la imagen del objeto observado a travs de l es VIRTUAL,
INVERTIDA y MUY AMPLIFICADA.

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO
Figura 1. Esquema de la marcha de los rayos luminosos en el microscopio compuesto ab= objeto ab= imagen intermedia
ab= imagen aumentada, virtual e invertida.
Se podra pensar que al emplear lentes adicionales se lograra mayores aumentos, pero en la formacin de la imagen no
solo es importante la ampliacin se requiere que la imagen sea ntida, para lo cual es necesario combinar los diferentes
poderes de microscopio que son:
a.
b.
c.
d.

Poder de aumento.
Poder de resolucin.
Poder de definicin.
Poder de penetracin de foco a campo.

PODER DE AUMENTO: permite magnificar la imagen. En general el aumento (A) est dado por la relacin:
A=

Tamao de la imagen
Tamao del objeto

En el microscopio compuesto la ampliacin es igual al producto del aumento del objetivo por el aumento ocular:
A total = aobjetivo Aocular

EL PODER DE RESOLUCION: se refiere a la capacidad de un sistema ptico de presentar dos puntos prximos distintos o
separados. Se especifica por la distancia mnima en que se logra resolver esos dos puntos. (En el hombre el poder de
resolucin es de 0.1 mm a la distancia mnima de visin clara de 25 cm.)
El poder de resolucin depende a su vez de la longitud de onda () y de la apertura numrica del objetivo (N.A). Esta ltima
relaciona el ngulo de apertura de los rayos de luz, que provienen de la muestra, con ndice de refraccin; (en caso del
objetivo de inmersin se coloca, entre el preparado y la lente, aceite de inmersin, que tiene un ndice de refraccin igual al
de la lente y evita la refraccin de los rayos luminosos).
El poder de resolucin est dado por la expresin:
Poder de 2esolucin =

2 NA

Por lo tanto, si se tiene un objetivo de 100X con una apertura numrica (NA) de 1.30 y una longitud de onda promedio de
520 nm (nanmetro= 10-9) el poder de resolucin ser:
Poder de resolucin =

520 nm
= 200 nm = 0.2m (micrones)
2 NA

EL PODER DE DEFINICIO: permite formar imgenes claras con contornos definidos.

Con el PODER DE PROFUNDIDAD: de foco es posible observar varios palnos con un mismo enfoque.
CUESTIONARIO PRELABORATORIO
1.
2.
3.

Realice una breve resea histrica del desarrollo del microscopio

Describa brevemente las propiedades de las lentes.
Qu es una imagen, real, una imagen invertida?

Materiales para la prctica

1.
2.
3.
4.
5.

Biolgicos: muestra de agua de cilantro, sangre

Equipos: microscopio
Reactivos: aceite de inmersin, xilol.
Vidriera: laminas, laminillas, pipetas.
Otros: bayetilla, block de papel blanco, papel de arroz, papel absorbente, lpices negros, tijeras, papel
milimetrado

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO
Procedimiento
1.

Identificacin de las partes del microscopio y a su vez antalas en la figura 2.

El microscopio compuesto consta de un sistema combinado de lentes: OBJETIVO y OCLULAR. El primero localizado hacia
la parte media del aparato, produce una imagen ampliada del objeto y esta imagen intermedia es captada y sufre una
nueva ampliacin por el ocular, que se encuentra en el extremo superior del TUBO OPTICO.
Los objetivos corrientemente utilizados son: menor aumento (10X), mayor aumento (40X) y de inmersin (100X). Para
cambiarlos se gira el REVOLVER PORTAOBJETIVOS. El ocular generalmente utilizado de 10X.
El TUBO OPTICO puede ser recto o inclinado, tiene un soporte o BRAZO, que se une a la PLATINA y a la BASE del
microscopio. La platina es una superficie plana que lleva un orificio central sobre la cual se coloca la lmina que se sujeta
con las pinzas o con el carro mvil. Debajo de la platina se encuentra: el CONDENSADOR y el DIAFRAGMA, que ayudan a
regular la intensidad y cantidad de luz respectivamente. Ocasionalmente bajo el diafragma aparece el anillo portafiltro.
El sistema de iluminacin puede estar incorporado al microscopio o ser externo en cuyo caso la luz difusa se dirige a la
preparacin con un ESPEJO CIRCULAR. Los rayos luminosos atraviesan as el condensador y la preparacin para
finalmente pasar por el objetivo y el ocular, que estn dispuestos en el mismo eje ptico.
Al lado del tubo o en la base del microscopio se encuentran dos tornillos concntricos, el MACROMETRICO de ajuste
grueso y el MICROMETRICO, ms pequeo de movimiento rpido y ajuste fino, que accionan una cremallera y ajustan la
distancia de trabajo, segn el objetivo que se emplee, mediante el desplazamiento del tubo ptico, o de la platina en
algunos modelos.
La distancia de trabajo o DISTANCIA FRONTAL de un objetivo, es el espacio que existe entre la superficie de la lente del
objetivo y la laminilla, una vez se encuentra enfocada la preparacin. A mayor aumento del objetivo la distancia de trabajo
disminuye. Los objetivos en ningn momento deben tocar la preparacin ya que se puede romper la lmina, daar el
objetivo o estropear el microscopio.

Figura 2.Esquema del microscopio compuesto.

2.

Realice un montaje hmedo de una letra pequea y asimtrica de un peridico en la siguiente forma:
2.1 Sobre una lmina porta-objeto limpia, coloque una gota de agua.
2.2 Dentro de una gota de agua ponga una letra impresa.
2.3 Acerque una laminilla, en posicin oblicua, y apoyando una arista sobre la lmina al lado de la gota, djela
caer suavemente sobre la gota.

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO

La preparacin debe quedar completamente cubierta y embebida en el lquido. Evite exceso de agua (o colorante en
preparaciones coloreadas), en los bordes de la laminilla sobre esta, retire el exceso con papel absorbente.
Antes de colocar la lmina sobre la platina fjese que est completamente seca en la parte inferior. Si usted ve que la
preparacin se est deshidratando puede agregar agua en forma de gota con una pipeta al lado de la laminilla.
3.

A continuacin obsrvela al microscopio.

Para el uso correcto del mismo es importante y necesario seguir los pasos que se describe a continuacin:

4.
5.

Ocular:

3.1 Iluminacin: prenda el microscopio o la lmpara (segn el caso): con el objetivo de menor aumento (4X)
3.2 Enfoque: los microscopios con lentes parafocales poseen un sistema sincronizado de enfoque a diferentes
aumentos. As, una vez enfocada la preparacin a menor aumento, queda enfocada al utilizar el objetivo de
mayor aumento (para ajuste mayor, se debe mover ligeramente el tornillo micromtrico).
Dibuje sus observaciones anotando el aumento.
Inicie sus observaciones con el objetivo de menor aumento, el cual le brindara una imagen panormica
amplia y con mayor profundidad de foco. Luego pase a mayor aumento y precise las estructuras. Sintese
en posicin correcta y cmoda para observar y dibujar. Los dibujos deben de ser claro y guardar
proporciones. Acostmbrese a observar CON AMBOS OJOS ABIERTOS, esto le evitar la fatiga ocular.
Realice un montaje hmedo de hilo o tela delgada de color (lino o dacrn) ver 2.
Observacin al microscopio. Ver 3. Consignes sus observaciones.

____X

Objetivo: ____ X
Total:

Ocular:

____ X

____X

Objetivo: ____X
Total:

____X

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO
6.

Ocular:

Tome, con una pipeta, una gota de agua de florero o agua con cilantro, colquela sobre una lmina, cbrala con
la laminilla y obsrvela al microscopio. Ver 3. Consigne sus observaciones.

____X

Objetivo: ____ X
Total:

____ X

Ocular:

____X

Objetivo: ____ X
Total:

____ X

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

Enfoque con el objetivo de inmersin

Con un gotero coloque una gota muy pequea de aceite de inmersin sobre la laminilla con un extendido de sangre
perifrica teido con coloracin de Wright (si la preparacin es un extendido fijado al calor, coloque la gota de aceite de
inmersin directamente sobre la lmina) y proceda a acercar el objetivo a la preparacin en menos de 1 mm, en este
objetivo se requiere mayor intensidad de luz.
Con el preparado anterior realice su observacin con aceite de inmersin. Consignes sus observaciones.
Ocular:

____X

Objetivo: ____X
Total:

____ X

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO
Medidas microscopias:
rea de campo visual: determina la relacin entre el campo visual y el poder de resolucin.
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Coloque el objetivo en la posicin adecuada (primero 4x, luego 10x y por ltimo 40x).
Tome papel milimetrado y corte una tira la cual coloca sobre el portaobjeto seguidamente coloque una gota de
agua sobre el papel milimetrado y por ltimo coloque la lamina cubre objeto).
Ubique la preparacin sobre la platina.
Observe la preparacin con el microscopio.
Cuente el nmero de cuadros que se ubica en el dimetro del circulo observado en el microscopio, para
determinar el radio (mitad del dimetro) de la circunferencia.
Ahora con la informacin hallada en el punto anterior determine el rea del campo visual en milmetros cuadrados
y luego convierta esta medida en micrmetros y nanmetros cuadrados teniendo como base la siguiente
informacin:

1 mm

103 micrmetros
106 nanmetros
107 angstrom

1 micrmetro

103 nanmetros
104 angstrom

= 2

= 3.1416
R= radio

4x= (3.14169) x (______)=_______

10x= (3.14169) x (______)=_______
40x= (3.14169) x (______)=_______
Cuando usted utiliza los objetivos de 10x y 40x, ve que la determinacin del dimetro se hace difcil porque sus ojos no
pueden discriminar distancias tan pequeas, lo que hace necesario medir el campo visual de 10x y 40x, utilizando la
relacin que existe entre los objetivos de un microscopio. Es decir, usted observa que cuando utilizamos los objetivos de
mayor aumento, disminuye el campo de observacin.
La imagen obtenida del microscopio de luz

Ocular:

En tu casa imprime la siguiente informacin 1eimtT, en arial y a 8 puntos, posteriormente en el laboratorio monta
este letrero en una lmina portaobjetos, luego coloca una gota de agua sobre el papel, y finalmente coloca la
laminilla, para observa el preparado al microscopio.
Observe el letrero en general y posteriormente observe cada letra, utilice los objetivos de 4x y 10x; dibuje lo
observado y describa lo observado.

____X

Objetivo: ____X
Total:

____ X

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO

Ocular:

____X

_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________
_________________________________

Objetivo: ____X
Total:

____ X

Segn lo observado en la prctica que puede concluir?

PROFUNDIZACION
1.
2.

3.
4.
5.
6.

Realiza un diagrama de flujo de la actividad a realizar en el laboratorio

Realice una breve descripcin de los siguientes sistemas de observacin microscpica: microscopio ptico,
microscopio de campo oscuro, microscopio de contraste de fase, microscopio de interferencia, microscopio de luz
polarizada, microscopio de fluorescencia.
Describa cada uno de los pasos de las tcnicas histolgicas para desarrollar un micro preparado.
Defina los siguientes trmino: foco, magnificacin, nitidez,
Explique la funcin del aceite de inmersin cuando se utiliza el objetivo de 100 x
Cmo se modifica la imagen al utilizar el microscopio de luz? Realice un grfico en el que se evidencie el cambio
que sufre la imagen.

BIBLIOGRAFIA
1. Texto gua para resolucin de conflictos: Gartner, L., Hiatt, J. (2008) Texto Atlas de
Histologa. Mxico: Mcgraw-Hill
2. Ross, M. y Pawlina, W. (2007)Histologa Texto y atlas color con biologa Celular y
molecular. Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana.
3. Welsch, U. (2008) Histologa de Sobotta. Buenos Aires: Editorial Mdica Panamericana
4. Fawcett, D. (1995) Tratado de Histologa Bloom. Madrid: Mcgraw-Hill
5. Geneser, F., Qvortrup, K., Tranum-Jensen, J., Christensen, E., Bruel, A. (2014)Geneser
Histologa. Mxico: Editorial Mdica Panamericana.
6. Cui, D., Naftel, J., Daley, W., Lynch, J., Haines, D., Yang, G., Fratkin, J. (2011) Histologa con
correlaciones funcionales y clnicas. Espaa: Lippincott Williams & Wilkin.

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACUILTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
MEDICINA
HISTOLOGIA
MD. JUAN CARLOS ROBAYO
7. Sepulveda, J, Medina, R. (2011) Histologa Biologa celular y tisular instructivo de
laboratorio. Mxico: Mcgraw-Hill.
8. Cediel, J., Cardenas, M., Gaca, A., Chuaire, L., Payn, C., Villegas, V., Snchez, C. (2009)
Manual de Histologa: tejidos fundamentales. Bogot: Editorial Universidad del Rosario.
9. Castaeda, M. (2003) Histologa General: tejidos fundamentales. Gua de Laboratorio.
Tunja: Ediciones Uniboyaca.
10. Castaeda, Z. (2003) Hstologa Especial: Organografa. Gua de Laboratorio. Tunja:
Ediciones Uniboyaca.
11. Poirier, J., Ribadeau, J., Catala, M., Andr, J., Gherardi, R., Bernaudin, J. (2000) Manual de
Histologa. Barcelona: Masson.
12. http:// http://histology-umms.org/
13. http://www.bu.edu/histology/m/