Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
MOLECULARĂ ÎN UV - VIS
PRIBCIPIUL METODEI
Spectrofotometria de absorţie moleculară în UV – VIs se bazează pe
absorbţia radiaţiilor de regulă între 180 – 800 nm de către speciile
moleculare din probe lichide, solide sau gazoase.
Proba lichidă se pune într-o cuvă şi asupra ei se trimite un fascicul primar
emis de o sursă externă de spectru continuu. Fotonii întâlnesc în calea lor
speciile absorbante moleculare, care absorb o parte din radiaţia incidentă.
Puterea radiantă transmisă prin cuvă este măsurată cu ajutorul unui
detector optic sensibil în domeniul UV – Vis.
P0 = Pa + Pt
Puterea radiantă absorbită (Pa)
şi cea transmisă (Pt) depind de
TRANSMITANŢA (T) Pt Pt
T= T% = × 100
P0 P0
Gradul de absorbţie a radiaţie prin
ABSORBANŢA (A) probă la o anumită lungime de undă
A = − log T A = 2 − log T%
DOMENIILE DE VARIAŢIE ALE
TRANSMITANŢEI ŞI ABSORBANŢEI
Pt = 0 P t = P0
T Є 0 1
T% Є 0 100
A Є ∞ 0
A = ε × b× c A = a× b× c
A – absorbanţa fără unitate de măsură
b – grosimea stratului absorbant (grosimea cuvei , în cm)
ε - absorbtivitatea molară, în l mol-1 cm-1
a – absorbtivitatea, în l g-1 cm-1
c – concentraţia speciilor absorbante în mo l-1 (pentru ε ) sau
g l-1 (pentru a)
Absorbanţa creşte liniar cu concentraţia speciilor absorbante
şi grosimea cuvei. Dacă grosimea cuvei este constantă atunci
absorbanţa depinde liniar numai de concentraţie.
ABSORBTIVITATEA MOLARĂ (ε )
A 1
ε= = = l × mol × cm
−1 −1
b × c cm × mol× l −1
A=ε
Absorbtivitatea molară (ε ) este absorbanţa unui strat de soluţie cu
grosimea de 1 cm şi concentraţia speciilor absorbante de 1 mol l-1
Cu cât ε este mai mare cu atât substanţa absoarbe mai bine
radiaţia optică.
CARACTERISTICILE ABSORBTIVITĂŢII
MOLARE
CARACTERITICILE
ABSORBTIVITĂŢII MOLARE
(ε )
ESTE O MĂRIME CALITATIVĂ
NU DEPINDE DE CONCENTRAŢIA
SPECIEI ABSORBANTE
DEPINDE DE LUNGIMEA DE
UNDĂ
RELAŢIILE DE LEGĂTURĂ DINTRE
ABSORBANŢĂ ŞI TRANSMITANŢĂ
Absorbanţa
0.4
Co(H2O)62+
Absorbanţa
0.3
0.2 0.2
0.1 0
0 Cr(H2O)63+ 0 2 4 6 8 10 12 14
380 430 480 530 580 630 680 730 780
120
120
100 100
80
Transmitanţa
Co(H2O)62+
Transmitanţa
80
60
60 40
20
40
Cr(H2O)63+
380 430 480 530 580 630 680 730 780
0
0 2 4 6 8 10 12 14
Lungimea de undă / nm
Concentraţie Cr3+ / mg l-1
NIVELE ENERGETICE
CUANTIFICATE PENTRU MOLECULE
ELECTRONICE Ee
Creşte energia
VIBRAŢIONALE Ev
ROTAŢIONALE Er
Alungire Forfecare
Et = E e + E v + E r
Et = hν e + hν v (v + 1) + hcBJ( J + 1)
ν e – frecvenţa radiaţiei optice care provoacă tranziţia energetică
electronică
ν v – frecvenţa radiaţiei optice care provoacă tranziţia energetică
vibraţională
v – numărul cunatic vibraţional (v = 0, 1, 2, 3,......n)
J – numărul cunatic rotaţional (J = 0, 1, 2, 3,.......n)
B – constanta
TRANZIŢII ENERGETICE ALE MOLECULEI LA
ABSORBŢIA UNEI RADFIAŢII UV VIS
REGULI DE SELECŢIE
3
2 La absorbţia unei radiaţii
1
UV Vis nu există nici o
v=0 E1
regulă de selecţie. Astfel
Abs. Emisie sunt posibile orice tranziţii
radiaţie căldură energetice
3 ∆ n=± 1
2
1 ∆ v = 0, ± 1, ± 2, ± 3, etc
v=0 E0 ∆ J = 0, ± 1, ± 2, ± 3, etc
La absorbţia unei radiaţii UV Vis molecula suferă o tranziţie energetică electronică de pe
nivelul fundamental (E0) pe cel excitat (E1). Tranziţia electronică a moleculei este însoţită
de mai multe tranziţii energetice vibraţionale şi rotaţionale. In spectrul de bandă a
moleculei sunt grupate mai multe linii spectrale. Banda moleculară are un caracter
hiperfin. Conform principiului Frank – Condon tranziţia de vibraţie pentru care este
aceeaşi distanţă interatomică pe cele două nivele are loc cu probabilitate maximă.
Astfel benzile moleculare de absorbţie UV Vis sunt asimetrice spre lungimi de undă
mari.Spectrele moleculare de absorbţie UV Vis sunt spetre electronice – vibraţionale.
FORMA SPECTRELOR DE ABSORBŢIE
MOLECULARĂ UV VIS
Benzen
vapori
Benzen
lichid
DISPOZITIV
SURSĂ IZOLARE BANDĂ CUVA CU DETECTOR
PRIMARĂ DE SPECTALĂ ŞI PROBĂ OPTIC UV
RADIAŢIE SELECTARE VIS
LUNGIME DE UNDĂ
PROBA AMPLIFICATOR
MĂSURĂ ŞI
AFIŞAJ
SPECTRUL CONTINUU
SPECTRUL DE LINII
SPECTRUL CONTINUU
Este format din linii spectrale foarte apropiate între ele încât nu pot
fi separate
SPECTRUL DE LINII
Spectrul de linii conţine radiaţii discrete cu lungime de undă bine
definită care port fi separate între ele.
SURSE DE SPECTRU CONTINUU
UTILIZATE ÎN UV VIS
SURSE DE SPECTRU CONTINUU
UTILIZATE ÎN UV VIS
CU CORP
INCANDESCENT
CU DESCĂRCĂRI
ELECTRICE ÎN GAZE
W(s) W(g)
W(g) + I2(g) WI2(g)
WI2(g) W(s) + I2(g)
Forma spectrului continuu emis de
becul cu filament de W
Becul cu filament de W
Intensitatea
spectrului
continuu creşte
cu temperatura
filamentului
Lampa cu halogen
LUNGIMEA DE UNDĂ / nm
Lampa de deuteriu
Funcţionarea se bazează pe o descărcare electrică între doi
electrozi de W imersaţi într-o atmosferă gazoasă de deuteriu sau
hidrogen.
Spectrul este:
unul continuu în domeniul UV emis de moleculele de deuteriu
(180 – 380 nm
Unul de linii în domeniul vizibil emis de atomii excitaţi de
hidrogen sau deuteriu (liniile hidrogenului din seria Balmer)
Spectrul lămpii de deuteriu este mai intens
SPECTRU
CONTINUU
180 – 380 nm
SPECTRU
DE LINII
Lungimea de undă / nm
SPECTRUL DE EMISIE A LĂMPII DE XENON
Lungimea de undă / nm
ROLUL DISPOZITIVELOR.
Sursele primare de radiaţie sau proba emit de regulă un spectru
policromatic, format din radiaţii cu mai multe lungimi de undă.
Determinările spectrale se efectuează de regulî în radiaţie
monocromatică (radiaţie cu o singură lungime de undă.
Dispozitivele de izolare bandă spectrală de trecere au două roluri:
De a dispersa radiaţia policromatică provenită de la sursă în
funcţie de lungimea de undă
De a izolara benzi spectrale de trecere înguste pe ca se
consideră că radiaţia este monocromatică. Cu alte cuvinte de a
selecta radiaţii cu anumite lungimi de undă din spectrul
policromatic.
BENZILE SPECTRALE DE TRECERE IZOLATE.
SELECTARE LUNGIMI DE UNDĂ
λ1 λ2 λ3 λ4
Lungimea de undă / nm
λi– lungimi de undă selectate din spectrul sursei de radiaţie
Nu se poate izola din spectru o radiaţie perfect monocromatică. Pe banda
spectrală de trecere se consideră ca radiaţia este monocromatică.
MONOCROMATOR ŞI POLICROMATOR
DISPOZITIVE
SELECTARE λ
Selectează odată o singură
MONOCROMATOR lungime de undă (o singură
bandă spectrală de trecere)
din spectru
SURSA DE
RADIAŢIE Plan
focal
Fantă de
ieşire
λ1 λ1
λ2
λ3
Monocromator Policromator
O singură fantă de ieşire Mai multe fante de ieşire
Reţeaua se roteşte pt select λ Reţea fixă
ELEMENTELE COMPONENTE
MONOCROMATOR / POLICROMATOR
ELEMENTE
COMPONENTE
FANTA DE INTRARE
COLIMATOR
ELEMENT DE DISPERSIE
FOCALIZATOR
FANTA/FANTE DE IEŞIRE
ROLUL COMPONENTELOR
MONOCROMATORULUI / POLICROMATORULUI
MONOCROMATOARE
θ α – unghiul de incidenţă
α Θ – unghiul de reflexie
C D d – distnaţa dintre striaţiuni
δ = AC + BD = d (sin α ± d sin θ ) = mλ
CARACTERISTICILE SPECTRALE ALE
MONOCROMATORULUI CU REŢEA
absorbite de aer.
MONOCROMATORUL CZERNY TURNER
Axa optică Normala
α
Colimator Focalizator
Fanta de ieşire
Fanta de
intrare Detector
λDetector
optic
λ
optic
1
λ
2
Sursa de Reţea
3
radiaţie
In montajul optic Czerny Turner, reţeua este montată simetric faţă de
colimator şi focalizator. Selectarea lungimii de undă se realizează prin rotirea
reţelei, câd se modifică unghiul de incidenţă şi sunt focalizate diferite radiaţii
asupra fantei de ieşire. Inregistrarea spectrului se realizează prin baleiaj.
DETECTOARE OPTICE UTILIZATE
IN UV VIZIBIL
ROLUL DETECTOARELOR
Sunt dispozitive optoelectronice care realizează transformarea
semnalului optic ănre-un semnal electric. Semnalul electric este
direct proporţional cu cel optic.
S = S0 + k × P S = S0 daca P=0
Unde
S – semnalul electric
S0 – semnlul curentului de întuneric (zgomotul detectorului)
generat de detector în absenţa semnalului optic.
Cu cât semnalul de întuneric este mai mic cu atât detectorul este
mai sensibil.
TIPURI DE DETECTOARE IN UV VIS
FOTOELECTRONICE
FOTOCELULA FOTOMULTIPLICATORUL
FOTOCONDUCTIVE
DETECTOARELE FOTOELECTRONICE
Funcţionarea se bazează pe efectul
fotoelectric.
Au în construcţia lor electrozi pe suprafaţa
cărora este depus un material care pune uşor
în libertate electroni sub acţiunea radiaţiilor
UV Vizibil, generând un semnal electric ca
urmare a deplasării electronilor generaţi între
electrozi sub acţiunea unei tensiuni aplicate
între electrozi.
FOTOMULTIPLICATORUL
CONSTRUCŢIE
Anod
Fotomultiplicatorul are trei electrozi
1. Un catod
2. Un anod
3. Mai multe dinode.
ROLUL ELECTROZILOR
1. Catodul pune în libertate electroni
1000
300-
primari sub acţiunea fotonilor
V
Radiaţie Dinodă 2. Dionodele au rol de transportare a
optică lectronilor pănă la nod şi rol de
amplificare internă a semnalului
Electroni prin generarea a 2 – 5 electroni
secundari pentru fiecare electron
care atinge suprafaţa sa
3. Anodul are rol de colectare a
Catod electronilor
CARACTERISTICILE
FOTOMULTIPLICATORULUI
1. Semnalul fotomultiplicatorului depinde de mărimea
semnalului optic şi tensiunea aplicată pe fotomultiplicator.
La semnale optice mici se aplică o tensiune mai mare,
respectiv invers. Dacă se menţine tensiunea constantă
semnalul electric depinde liniar de semnalul optic.
2. Fotmultiplicatirul are cea mai mare sensibilitate dintre
detectoarele optice utilizate în UV - VIS. Aceasta se
datorează amplificării interne mari (numarul electronilor care
ajung la anod este cu 8 – 9 ordine de mărime mai mare decât
al electronilor primari generaţi de catod.
3. Fotmultiplicatorul acoperă domeniul UV – VIS între 190 – 900
nm
4. Se interzice ca fotomultiplicatorul să fie sub tensiune şi pe
suprafaţa catodului să cadă lumina zilei.
APLICAŢII CANTITATIVE ALE ABSORBŢIEI
MOLECULARE UV VIS. DETERMINAREA
CONCNTRAŢIEI.
Spectrofotometria de absorbţie moleculară UV – Vis se aplică atât la
analiza substanţelor incolore cât şi la cele colorate.
Se pot analiza atât substnaţe organice cât şi anorganice.
Substanţele organice care sunt incolore prezintă spectre de absorbţie
foarte intense în domeniul UV al spectrului (200 – 400 nm).
Substanţele organice şi anorganice colorate absorb în domeniul
Vizibil al spectrului (400 – 800 nm).
Absorbţia moleculară Uv - Vis se aplică adesea la determinarea
cationilor metalici în soluţii apoase.
In cazul în care cationii nu sunt coloraţi, se aplică o reacţie de
derivatizare prin chelatizare cu un ligand ca reactiv de culoare. In
urma reacţiei rezultă un complex numit specie absorbantă mult mai
intens colorată comparativ cu cationul original, denumit specie de
determinat.
REACŢII DE DERIVATIZARE
Me + mL → [ MeLm ]
n+ − + ( n− m )
3-
HO3S COOH HO3S CO
Fe 3+
+3
Fe
OH O 3
m
1. Metoda are sensibilitatea
maximă (panta dreptei de
etalonare este maxiumă)
2. Dreapta de etalonare are cea
mai bună liniritate (nu
prezintă abateri semnificative
λ opti de la legea lui Lambert – Beer.
Lungimea de
m undă / nm 3. Se pot determina precis
concentraţii mai mici de
Spectrul de absorbţie moleculară. analit.
Absorbanţa în funcţie de λ
DREAPTA DE ETALONARE IN
ABSORBŢIA MOLECULARĂ
Dreapta de etalonare în absorbţia moleculară este reprezentarea
grafică a absorbanţei faţă de concnetraţia etaloanelor. Dreapta de
etalonare se trasează la lungimea optimă de analiză.
probă tgα = ε b
Ax Cu cât absorbtivitatea molară
Concentraţie
probă (ε ) este mai mare cu atât
dreapta are o pantă mai mare,
metoda este mai sensibilă şi
cx pot fi determinate concentraţii
Concentratie mai mici.
INFLUENŢA DESCHIDERII FANTEI ŞI A LUNGIMII
DE UNDĂ SELECTATE ASUPRA ABATERILOR
D C B C
A
B A
ε
Absorbtivitate Absorbanţă
D
m
λ
λ m
Lungimea de undă / nm Concentraţie
Absorbanţă CURBA D şi E.
Curbe acare includ 2 sau 3 surse de
incertitudini.
DETERMINAREA SUBSTANŢELOR IN
AMESTEC PRIN ABSORBŢIA MOLECULARĂ
PRINCIPIU:
Determinarea substanţelor în amestec se bazează pe aditivitatea
legii liu Lambert – Beer la o anumită lungime de undă pentru un
amestec de substanţe.
La o anumită lungime de undă, absorbanţa totală este suma
absorbanţelor compuşilor din amestec.
n n
At = ∑i Ai = ∑i ε iλ × b × ci
Unde
Ai – absorbanţa componentului (i) la lungimea de undă (λ )
ε i – absorbtivitatea molară a componentului (i) la lungimea de undă
(λ )
Pentru un mestec binar, legea lui Lambert – Beer este:
At = A1 + A2 = ε × b × c1 + ε × b × c2
1
λ λ
2
At 1 = ε1 bc 1 + ε2 bc 2
λ λ
1 1
Pentru λ 1
At 2 = ε1 bc 1 + ε2 bc 2
λ λ
2 2
Pentru λ 2
λ 1 λ 2
Lungimea de undă / nm
DETERMINAREA COEFICIENŢILOR
SISTEMULUI
Se prepară etaloane din fiecare compus
Se măsoară absorbanţele etaloanelor la cele două lungimi de undă
Se trasează drptele de etalonare A = f(c) pentru fiecare compus la cele
două lungimi de undă şi se calculează panta dreptelor, care sunt egale cu
coeficienţii sistemului.
Comp. I Comp. II
ε 1λ 1b ε 2λ 2b
Absorbanţă
Absorbanţă
Comp. II Comp. II
ε 2λ 1b ε 1λ 2b
Concentratie Concentratie
λ 1 λ 2