TECNICAS PARA LA DETERMINACION DE PLAGUICIDAS ORGANO-CLORADOS EN MEDIOS BIOLOGICOS arlos A. Gotelli Cétedra de Toxicologia-Facultad de Medicina-UNBA Buenos Aires, Argentina El problema que se plantea en primera instancia ante un cuadro de intoxicacién aguda, es la necesidad de efectuar un Giagndstico quimico-toxicolégico répido y seguro, que permita descartar cualquier otra etiologia y oriente sobre el trata- miento que debe implantarse; el éxito del mismo dependeré, en gran parte, de le celeridad con que se halla determinado 1a presencia del agente tdéxico. En el caso concreto de 1a investigacién de plaguicidas clorados en medios biolégicos de un intoxicade, 1a busqueda de los mismos implica la tenencia de equipos ultrasensibles y de alto costo, tales como cromatografia en fase gaseosa con detector de captura electrénica. Desgraciadamente las posibi- lidades de contar com equipos adecuados estén circunscriptas a escasos laboratorios, que generalmente se hallan en los centros densamente poblados. En contraposicién a lo expuesto, @1 empleo de los pesticidas en gran escala se realiza en las zonas rureles, carentes de centros especializados capaces de efectuar determinaciones je plaguicidas en forma répida y certera. En los Ultimos cuatro afios han aparecido un considerable mimero de procedimientos anatiticos simples que utilizan como nétodo resolutivo 1a cromatografia en capa delgada. De to- dos ellos, el publicado por Luckens y colaboradores en e1 ato 1970, es el que més se adapta a las necesidades de un labora- torio toxicolégico de urgencia. En el Laboratorio de la Cétedra de Toxicologia de la Facultad de Medicina, pusimos a punto dicha técnica e introdu- cimos modificaciones que lo hacen mas accesible y prdctico.32 CONSIDERACIONES PREVIAS La sangre y la orina son los fluidos corporales que se pueden conseguir mds rapidamente en un supuesto intoxicado. Es de esperar que 1a orina contenga el compuesto drgano-clorado en su estado normal o bien uno o més metabolitos provenientes Ge su degradacién. La sangre revela 1a cantidad de pesticida circulante, 1a concentracidn total del mismo es la resultante del equilibrio entre el plaguicida libre y el fijado en los elementos propios Je la sangre y:tejidos irrigados. Por medio @e la manipulacién selectiva se puede determinar 1a cantidad de téxico libre, de téxico fijo o bien la concentracién ae téxico total. Una cantidad significativa de los pesticidas organoclora- dos circulantes se hall3 ligada a los hematfes (1). Weikl y col., en una serie de experimentos in vitro, determinaron los siguientes porcentajes de fijacié: Para EL DOM eeeeeeeer eee eee e 38-408 para el Lindano....eeee essere ees 60-65% para el Dieldrin 34-398 Kadis y Jonasson (2) demonstraron en el afio 1965 gue et Aldrin se halle asociado a la hemoglobina y a un constituyen~ te no determinado de los eritrocitos. En base a estas conside- raciones, la determinacién de los pesticidas organoclorados en sangre total, ofrece datos y resultados més _representativos que los hallados en la determinacidn de dichos pesticidas en Plasma o suero. MATERIAL E METODOS 8) Equipo: e1 habitual para la realizacién de cromatografia en capa delgada. Nosotros empleamos como soporte portaobje- tos conteniendo un depésito de adsorbente de 2 mm de espe- sor, constitusdo por una mezcla en partes iguales de éxido de aluminio G y sf{lica gel G (Merck), a1 30% en una solucién de nitrato de plata al 1% en agua destilada.33 b) Lfquido resolutivo: n-hexano saturado con N-N-dimet i1- formamida y conteniendo 0.1% de acetona. c) Revelado: Compreende dos etapas; 1) observacién a la LUV 2) aspersién de una solu- cidn de o-toluidina al 1% en alcohol. TECNICA OPERATORIA Extraccién: los insecticidas organoclorados son altamente lipo filicos, motivo por el cudl, cuando se procede a su extraccién con fines analiticos, se produce 1a extraccién simulténea de los 1ipidos presentes en el medio. Tales extractos generalmente no son satisfactorios para la aplicacién de técnicas cromatogréficas, ya sea en fase gaseosa o en capa delgada, debido a 1a presencia de cantidades excessivas de pigmentos y 1{pidos que interfieren en la deter- minacién. Este inconveniente se subsana mediante la ejecucién Ge operaciones de limpieza que demandam demasiado tiempo. Cuando se desea acortar el tiempo de la determinacién, el analista debe sacrificar 1a recuperacién méxima del pesticida, empleando un sistema de solventes que extraigan 1a minima cantidad de sustancias interferentes, con una kecuperacién razonable del téxico. £1 p-hexano es el solvente que més se adapta a esta segunda posibilidad, dado que permite la extraccién méxima de inseticida, acompafiado de un pequeiio porcentaje de sustancias interferentes, Este extracto sin embargo, contiene suficientes elementos como para interferir en la resolucién cromatogré- fica en capa delgada. La hemélisis previa a la extraccidn eli- mind este problema y permite contar con un extracto que se pue de cromatografiar directamente sin proceso previo de limpieza. TECNICA A 5 ml de sangre total, extraida usando oxalato de potasio como anticoagulante, se adicionan 15 ml de agua destilada, agitando fuertemente durante 30 segundos para favorecer 1a34 hemélisis. Posteriormente se agrega 5 ml de n- hexano (Merck o similar) y se agita energicamente durante un minuto; separar por decantacién o centrifugacién y evaporar a sequedad en bavio maria 1a fase orgdnica. E1 residuo se disuelve en 0,05m1 de n-hexano puro. Las placas preparadas segin la técnica descripta, se activan entre 90-100° durante 30 minutos y luego se siembran alfcuotas de 5,10 y 20 microlitros del extracto y se colocen en la cuba, previamente saturada con el solvente. El corrimiento insume de 10 a 15 minutos, transcurridos los cuales, las placas se secan al aire y se procede a la lecalizacién de las manchas con la ayuda de la luz ultravio-~ leta. Posteriormente, mediante 1a aspersién de una solucién de o-toluidina #1 18 en alcohol, se procede al revelado, apare ciendo los plaguicidas organoclorados como manchas de color amarillo. La siembra simuiténea de cantidades conocidas de los pla~ guicidas més comunes (DDT, aldrin, dieldrin, etc.),permite obtener informacién aproximada acerca de 1a concentracién del pesticida en la muestra analizada. DISCUSION El] método descripto permite detectar concentraciones de? ordén de 0,1 ppm de pesticidas organoclorados en sangre ou orina. Dicha técnica es ciega a las concentraciones habituales de plaguicidas organoclorados en la poblacién. Los ensayos de recuperacién efectuados, arrojaron un resul tado de 85% para valores conocidos de DDT, 92% para dieldrin y 808 para aldrin. Mediante 1a adaptacién de un simple dispositive de mues- treo, se puede abordar, con éxito, la determinacién de pes- ticidas en ambientes leborales. La sencillez, rapidez y efectividad de la técnica descrip ta, son cualidades suficientes para que se implante en todos los centros asistenciales cercanos a las zonas de produccién35 agricola, cubriendo de esta forma una necesidad impostergable y contribuyendo positivamente a evaluar en su verdadera dimen- sién, los trastornos e inconvenientes provocados por el mal uso de 108 plaguicidas.