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Cintica de Michaelis-Menten

La cintica de Michaelis-Menten describe la velocidad de reaccin de muchas


reacciones enzimticas. Recibe este nombre en honor a Leonor Michaelis y
Maude Menten. Este modelo slo es vlido cuando la concentracin del sustrato
es mayor que la concentracin de la enzima, y para condiciones de estado
estacionario, es decir, cuando la concentracin del complejo enzima-sustrato es
constante.
ndice

1 Determinacin de constantes

2 Velocidad de reaccin

3 Constante de Michaelis

4 Ecuacin

5 Fuentes

Determinacin de constantes
Para determinar la velocidad mxima de una reaccin enzimtica, la concentracin
de sustrato ([S]) se aumenta hasta alcanzar una velocidad constante de formacin
de producto. Esa es la velocidad mxima (Vmax) de la enzima. En ese caso, los
sitios activos de la enzima estn saturados con sustrato.

Diagrama de velocidad de reaccin y constante de Michaelis-Menten.


Velocidad de reaccin
La velocidad V indica el nmero de molculas del sustrato que se convierten en
producto por segundo. Con concentraciones crecientes de sustrato[S], la enzima

va acercndose asintticamente a su velocidad mxima Vmax, pero nunca la


alcanza. Por esta razn, no hay un valor de [S] determinado para la Vmax. De todas
formas, se puede definir un parmetro caracterstico de la enzima empleando la
concentracin de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad mxima
(Vmax/2).
Constante de Michaelis
Como se acaba de mencionar, aunque es imposible medir exactamente la
concentracin de sustrato que da Vmax, las enzimas pueden caracterizarse
mediante la concentracin de sustrato a la cual la velocidad de reaccin es la
mitad de la velocidad mxima. Esta concentracin de sustrato se conoce como
constante de Michaelis-Menten (KM).
Para enzimas que exhiben una cintica de Michaelis-Menten simple esta
constante representa la constante de disociacin del complejo enzima-sustrato
(ES) (o la inversa de la afinidad entre enzima y sustrato). Valores bajos indican
que el complejo ES est unido muy fuertemente y raramente se disocia sin que el
sustrato reaccione para dar producto.
En estos casos se obtendr una KM diferente segn el sustrato especfico sobre el
que acte la enzima (como sucede en el caso de enzimas que actan sobre
sustratos anlogos) y segn las condiciones de reaccin en que se realicen las
mediciones.
Nota: KM solo se puede usar para determinar la afinidad de una enzima por un
sustrato k2 es limitante de la velocidad, por ejemplo, k2 << k1 y KM se convierte en
k-1/k1. Generalmente, k2 >> k1 o bien k2 y k1 son comparables.
Nelson, DL., Cox, MM. (2000) Lehninger Principles of Biochemistry, 3rd Ed., Worth
Publishers, USA
Ecuacin
La derivacin de Michaelis y Menten est descrita por Briggs y Haldane. Se
obtiene de la siguiente manera:
Se supone que la reaccin enzimtica es irreversible, y que el producto no se liga
con la enzima despus de la reaccin.

Siguiendo la aproximacin del estado estacionario, que seala que la


concentracin del complejo enzima-sustrato (ES) es pequea y se mantiene casi
constante a lo largo de la reaccin enzimtica:

Se define:

Entonces:

(1)
La velocidad de reaccin es:

(2)
La concentracin total de la enzima:

Por lo tanto:
(3)
Sustituyendo (3) en (1) da:

Reordenando:

(4)
Sustituyendo (4) en (2) :

Esta ecuacin se puede analizar experimentalmente con un diagrama de


Lineweaver-Burke, un diagrama de Eadie-Hofstee o un diagrama de Hanes-Woolf.

E0 es el total de enzima. No es prctico medir la cantidad de complejo


enzima-sustrato durante la reaccin, por lo que debe escribirse sta en
trminos de cantidad total o inicial de enzima, que es una cantidad
conocida.

d[P]/dt o V0 es la velocidad de formacin del producto.

k2[E0] o Vmax es la velocidad mxima. k2 se denomina con frecuencia kcat.

Cabe observar que [S] es grande comparada con K m, [S]/(Km + [S]) tiende a 1. La
velocidad de formacin de producto es igual a k 2[E0] en ese caso.
Cuando [S] es igual a Km, [S]/(Km + [S]) vale 0.5. En ese caso, la velocidad de
formacin de producto es la mitad de la mxima (1/2 V max). Representando
grficamente V0 frente a [S] se puede fcilmente determinar Vmax y Km. Esto
requiere una serie de experimentos a E0 constante y diferentes concentraciones
de sustrato [S].