INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE BIOQUIMICA MICROBIANA

Prctica 1 Transporte de glucosa en levaduras

Grupo: 5IM1
Seccin 1
Equipo 3

Integrantes:

Fecha de entrega: 24-Septiembre-2015

HIPOTESIS
S Saccharomyces cerevisiae transporta la glucosa por difusin facilitada, es decir,
que necesita una protena transportadora, entonces el transporte se ver inhibido
por la N-etil maleimida.
OBJETIVO
Demostrar y concluir que el transporte que la levadura (Saccharomyces
cerevisiae) utiliza para incorporar glucosa es por difusin facilitada.
ANALISIS DE RESULTADOS
Tabla 1. Determinacin de Glucosa residual

Matraz numero
1
2
3
4
5

Absorbancia 540 nm
Tiempo
0 min
0.366
0.421
0.349
0.452
0

10 min
0.348
0.172
0.241
0.388
0.002

20 min
0.368
0.006
0.083
0.409
0.003

Tabla 2. Curva tipo de glucosa 500 g/ml

g de glucosa

Absorbancia (540 nm)

0
100
200
300
400
500

0
0.033
0.128
0.228
0.306
0.432

30 min
0.331
0.01
0.015
0.515
0.003

Grfica de curva tipo de glucosa

Clculos:
Se calcul la cantidad de azcar residual mediante la ecuacin de la recta la cual
nos dar la concentracin en g
Glucosa residual (mg)
Matraz/Tie
mpo
1

10

20

30

0.4423 0.4223

0.4445

0.4034

0.5034

0.2267

0.0423

0.0467

0.4234

0.3034

0.1278

0.0523

0.5378

0.4667

0.4901

0.609

0.0356

0.0378

0.039

0.0578

Glucosa residual real (mg)

Matraz/Tie
0
10
20
mpo
1
0.407
0.385
0.405
2
0.468
0.189
0.0033
3
0.388
0.266
0.0088
4
0.502
0.429
0.4511

30
0.345
0
0
0.551

x=

y+ 0.0321
0.0009

x=

0.366+0.0321
=442.33 g
0.0009

1mg ----1000g

Para obtener la glucosa residual

real a los matraces del 1 al 4 se
les resto la concentracin
obtenida del matraz 5 de cada
serie de tiempo correspondiente.
(0.4423 0.0356) mg = 0.407mg

Glucosa residual real (mg/ml)

Glucosa residual en mg/ml:

Matraz

10

20

30

2.035

1.93

2.025

1.72

2.34

0.95

0.0165

1.94

1.33

0.044

2.51

2.145

2.25

2.75

x=( mg glucosa)( f . d)(

x=( 0.407 mg)(1.5)(

1
)
alicuota

1
)
0.3 ml =2.03

5mg/ml

Glucosa consumida (mg/ml)

Matraz
0
10
20
1
0
0.105
0.01
2
0
1.39
2.3235
3
0
0.61
1.896
4
0
0.365
0.26

Glucosa consumida =
30
0.315
2.34
1.94
0

Gulosa tiempo cero Glucosa

tiempo x
(2.035 - 1.93) mg = 0.105 mg/ml

Glucosa consumida en funcin del tiempo

2.5
2
Matraz 1

1.5
Glucosa consumida (mg/ml)

Matraz 2
Matraz 3

Matraz 4

0.5
0
0

10 15 20 25 30 35
Tiempo (min)

DISCUSIN
Para determinar cul es el mecanismo de transporte que Saccharomyces
cerevisiae utiliza para transportar la glucosa al interior de la clula tenemos que
analizar los resultados obtenidos.

Se realiz una serie de matraces preparados de diferente manera, para analizar

los diferentes factores que determinan el tipo de transporte que se realiza.
Se tom como referencia el matraz No.2 ya que este fue realizado a temperatura
ambiente, condicin ptima para que S.cerevisiae realice el transporte, esto se
debe a que es un microorganismo mesfilico, es decir, que su temperatura ptima
de crecimiento es de 25C a 40. Al observar el comportamiento del matraz 2
podemos observar el comportamiento ideal de la levadura al transportar glucosa.
Matraz 1 (4C)
Este matraz fue preparado de la misma manera que el matraz nmero dos,
cambindole slo una condicin, la temperatura.
Como anteriormente se explic S.cerevisiae es un microorganismo mesfilo, al
disminuir la temperatura, a una distinta de la ptima, podemos observar una
disminucin en la cantidad de glucosa transportada. Esto se debe a en la
membrana citoplsmica de este microorganismo hay un disminucin en la energa
cintica, los fosfolpidos presentes se rigidizan y se modifican las protenas.
Matraz 3 (DNF)
Al matraz nmero tres se le agreg 2,4-dinitrofenol (DNF), el cual es un agente
desacoplante debido a que el pKa del grupo OH fenlico esta disociado al pH
intracelular pero al acercarse a la membrana interna mitocondrial, se protona
aumentando su hidrofobicidad para ingresar, difundindose en la membrana por
accin de masa, una vez dentro el pH es ms alto lo que ocasiona su
desprotonacin, de esta forma capta el transporte de protones evitando el canal
protnico de la fosforilacin oxidativa, provocando una inhibicin de la sntesis de
ATP.
Al analizar el comportamiento de este matraz en la grfica se puede observar que
el uso del 2,4-dinitrofenol no interfiri con el transporte de glucosa y por lo tanto
podemos decir que el transporte que realiza S.cerevisiae de la glucosa no es un
transporte activo ya que este no requiere de energa, por ello no se ve afectado
por la accin de DNF.
Matraz 4 (NEM)
Al matraz nmero tres se le adicion N-etil maleimida.
Al analizar la grfica se puede ver una interferencia con el transporte esto debido a
la NEM.
Podemos decir que realiz dicho transporte por difusin facilitada, ya que necesita
de una protena transportadora, al haber un cambio conformacional por la unin de
NEM a los grupos sulfihidrilo de las protenas de la membrana, esta protena
(acarreadora) ya no reconoce a la glucosa.

CONCLUSION
Saccharomyces cerevisiae realiza transporte por difusin facilitada.
BIBLIOGRAFIA