TIAMIN, VITAMIN B1

6
HN
1
2 N
H3C
3

4'

3'

N
4

2'

NH2

1'

CH3
2Cl-

5'

CH2CH2OH

1.

3 - (4 -amino - 2 - metil - 5 - pirimidinil) - metil - 5' - hidroksietil - 4' - metil - tiazolium hlorid

Osobine:
beo kristalan praak ili bezbojni kristali ,
gorkog ukusa, rastvoran u vodi i etanolu

kiseli vodeni rastvori (pH 3-4) su stabilni u

prisustvu kiseonika, termo- i fotostabilni
termolabilan vodeni rastvor iznad pH 5
neutralan vodeni rastvor stajanjem uti

1.

H
H2 O

CH2 OH

H3 C

CH3
N

NH2

CH2 CH2 OH

degradacioni proizvodi

1.

CH3

cH+

H3C

N
N

OH

Oksitiamin

CH2 CH2 OH

1.

OH

CH3

pH 9

HO

N
S

CH2 CH2OH
CH3
CH2 CH 2OH

N
H3C

N
N

SH

NH2 C H
O

Tiol degradacioni proizvod

H+ rast. dominira tiazol a u OH- i

neutralnim tiol.
U vodi obe forme su u ravnotei:
prisutna 2 apsorpciona maksimuma na
232 nm i na 266 nm.

UV spektar tiamin hidrohlorida

Maksimumi apsorpcije:

Metanol: 262 nm, 238 nm

0.1M HCl: 246 nm

0.1M NaOH: 232 nm

IR spektar tiamin nitrata

Identifikacija: Ph.Eur.

1. IR spektri
2. Tiohromna reakcija: svetlo plava fluorescencija
u butanolu UV max. 365nm. Dodatkom
mineralnih kiselina gasi se fluorescencija.
Reakcija je specifina za vitamin B1 tek ako se
izvodi u priustvu NaHSO3 ne sme doi do
fluoroscencije!

CH3

1. OH , t
H

pH 11

N
N

H3C

oksidacija
CH2CH2OH
S

N
H
zut

CH3
N
H3C

N
N

CH2CH2OH
S

TIOHROM
fluorescira
plavo u butanolu(365nm)

K-heksacijan
ferat(III)

1. +
slabo
kiseo
r-ra
B1

HSO3

Nu- jaci
od H2O

CH2SO 3H

- XH3C

NH2

CH3
+

N
S

CH2CH2OH

Odreivanje:
TNS

kao slaba baza sa HClO4. u HCOOH /

(CH3COO)2O.
z.t.t. potenciometrijski
kao

hidrohlorid titracija sa 0.1M NaOH;

z.t.t. potenciometrijski.

RIBOFLAVIN
VITAMIN B2
CH2 OH
CH2 OH

CH2
H3C
H3C

10

O
2

7
6

N
5

N3

7, 8 - dimetil - 10 - (1 - D - ribitil) - 2, 4 - (3H, 10H) - benzopteridindio

Osobine:
ut do oran - ut kristalan praak,
R. u vodi samo pri dodatku elektrolita ili
uree kao polarnih komponenti,
sa bazama gradi soli.
U H+ sredini termostabilan (moe da se
sterilie) i prema O2

Rastvori fotosenzitivni, posebno u

prisustvu alkalija. Nestabilan u OH- sredini.
Optiki je aktivan (C*u ribitil ostatku)

Rastvaranje
R
N

O
NH

(Na)

O
NH

DIKATION
u c.H2SO4 na N5

Neutralan rastvor ima ukasto-zelenu

fluorescenciju koja je pH zavisna!- Gasi se
dodatkom H+, OH- ili redukcionih sredstava
(Identifikacija!)
UV apsorpcija sa max= 223, 267, 373 i 444
uta boja slui u identifikaciji i odreivanju.
U H+ sredini u prisustvu redukcionih sredstava
Zn (HCl) ili Na2S2O4 gubi se uta boja
dihidroriboflavin.

UV spektar riboflavina

Fotosenzitivan na povienoj temperaturi - tip fd.p. zavisi od

pH i prisustva kiseonika

1. hv
O2
cvrst

O2 H+ ili
neutralan
rastvor

CH3 H

H
H3C

H3 C

N
N

N
O

neutralan
rastvor

H3C

H3 C

O
N

zut
lumihrom

oranz
lumiflavin

TT 330oC

TT 300oC
FOTOLITOCKI PROIZVODI RIBOFLAVINA

leukoriboflavin
leukolumihrom

Identifikacija i odreivanje: Ph.Eur.

1. []D20 = -115 -135 (u baznim rastvorima).
ili u prisustvu boraksa kada o.a. jako raste
ali je (+)!
2. IR spektri
3. Gaenje uto-zelene fluorescencije
vodenog rastvora dodatkom min. kiseline ili
baze.
Odreivanje:
spektrofotometrija, bazni
rastvor = 444 nm (Ph. Eur.) Izvodi se

Test istoe

Ispitivanje na lumiflavin TLC metodom

ili
testom rastvaranja u hloroformu osloboenim od
etanola
fotod. proizvod rastvorljiv, riboflavin ne.

PIRIDOKSIN
VITAMIN B6

Osobine:
u formi baze - bezbojni kristali rastvorni u
organskim rastvaraima. T. T. = 160C.
Hidrohlorid bezbojan, kiselog ukusa, T. T.
= 205C ili 212C, hidrosolubilan.
Vitamin B6 amfoteran (pirid. N bazan)

(fenol kiseo)

UV apsorpcija je pH zavisna

CH3

HOH2 C

OH
CH2 OH
+ H+

- H+

pH< 7
290 i 232 nm

H
N

CH3
pH neutralno

O-

HOH2C

253 i 324 nm

CH2OH

- H+

+ H+

N
HOH2C

CH3
pH > 7

OCH2OH

245 i 309 nm

Osobine

Stabilan je na vazduhu. Fotosenzibilan u

alkalnim i neutralnim rastvorima.

Rastvori u mineralnim kiselinama su

termostabilni i mogu biti autoklavirani na
120C, 30 minuta, dok neutralni rastvori
podleu polimerizaciji i oksidaciji

Za analitiku vane:

1. OH grupa (fenolna azafenol)

2. N bazan piridinski
3. pikolin (CH3 grupa kisela)
4. bifunkcionalna parcijalna struktura fenola
i susednih hidroksimetil grupa.
5. pozicija 6 koja je sub. elektrofilnog
napada (ES)

Identifikacija po Ph.Eur.

1.UV spektar : 0.1M HCl. max 288-296 nm,

- u fosfatnom puferu dva max

248-256nm i 320-327nm
IR spektri (fenolna grupa)

TLC metode-detekcija mrlja sa Gibbs-ovim

regensom

UV spektar piridoksina

0.1M HCl. max 288-296 nm,

- u fosfatnom puferu dva max

248-256nm i 320-327nm

U 0.1M NaOH takoe dva aps.

Max. 309 i 244nm

IR spektar piridoksina

Ostale metode identifikacije

Fenolna funkcionalna grupa:

-Gibbs-ov reagens za VIS i TLC detekciju
-FeCl3 - ljubiasta boja kompleksa i

-kuplovanje sa diazonijum solima

R-ja alkilovanja sa CH3J

Fluorescentni metod

Cl

CH3

O-

HOH2C

Cl

CH2OH

Cl

2,6-dihlorhinonhlorimid

Cl
N

O
Cl

HOH2C

CH3
O-

CH2OH

Indofenol plave boje

620 nm

-Cl
-H

HOH2C

CH3

CH3

N
+ H3BO3

OCH2OH

HOH2C

O
-

OH
OH

Helat B
ili
dimerni helat B

gde je fenol blokiran i reakcija sa Gibbs-ovim reagensom

izostaje.
Dodatkom H3BO3 raste specifinost reakcije.

kuplovanje

CH3

HOH2C

N N
Cl-

OH
CH2OH

Ar

N N

CH3

HOH2 C

OH
CH2OH

Azo boja
zuto - narandzasta

- HCl

CH3

Reakcija sa CH3J

1. +

2CH3J

CH3

OCH3

HOH2 C
CH2OH
OH-

CH3
CH 3
N
CH 3

O
C

CH2OCH3

HOH2 C
CH2 OH

H2O

ALDOLNA
KONDENZACIJA

CH 3
N CH 3

CH3
N
OCH3

HOH2C
CH2OH

CIANIN ( VIS APSORPCIJA )

Fluorescentni metod
CH3

CH3

N
KMnO 4

HOH2C

oksidacija

OH
CH2OH

COOH

CH3

OH

HOOC

OH

CH3

OH

FLUORESCEIN
jaka fluorescencija

Odreivanje: titracija u nevodenoj sredini sa HClO4 / HgAc2O

z.t.t. potenciometrijski

FOLNA KISELINA

COOH

O
H

N
H2N

CH2

NH

CO

CH
CH2

COOH

H
2 - amino - 3, 4 - dihidro 4 - oxo - 6 - pteridinil metil

NH

1.
4 - amino - benzoil

L - glutaminska
kiselina

N - 4 [ 2 - amino - 3, 4 - dihidro - 4 - oxo - 6 - pteridinil metil amino] benzoil

- L - glutaminska kiselina

Osobine: ut praak, nerastvoran u vodi i

organskim rastvaraima, soli rastvorljive u vodi,
rastv. u alkalnim hidroksidima, karbonatnim
rastvorima i mineralnim kiselinama.
Spektralne osobine:
U baz. rast. tri aps. max. max = 256 nm, 283 nm
(pteridin) i 365 nm (PAB).(Ph. Eur.)
U kiselim rastvorima max = 298 nm

Identifikacija: Ph.Eur.
1.) specifina optika rotacija u 0.1M NaOH
je +18 do +22
2.) HPLC metod iz odreivanja (tR)
3.) TLC metod. Detekcija mrlja na 365nm UV
denzitometrijski.

Ostale identifikacije:
N

1.

Cu(II)

alkalni
rastvor

NH2

O
Cu
O
N

N
H2N

OXINAT - komplex
pahuljast zuckasto zeleni precipitat

3.

HN

H2N

CH2

NH

R
+Zn
HCl

mucka i filtrira

O
N

HN
H2N

CH3
H2N

filtrat

diazotacija i
kuplovanje

metil pteridin
COOH

R=

CO

NH CH (CH2 )2

kvantitativna reakcija
COOH

4.

O
N

HN

H2N

alkalni rastvor folne kiseline

KMnO4
ili hO2

HN
H2N

COOH

Violet
boja - zelen (Mn (VI))
fluorescencija

Odreivanje:
HPLC po Ph.Eur.
spektrofotometrijski
Za sve vitamine hromatografske metode
(TLC, HPLC, GH)