DETERMINACION DE BIOMASA: PESO SECO

I.

INTRODUCCION:

La determinacin de la biomasa de las clulas en peso seco, es la tcnica mas

directa para la estimacin cuantitativa de una masa de clulas, y probablemente la
mas segura y reproducible. Sin embargo solo puede utilizarse con suspensiones
muy densas de clulas y estas deben estar bien lavadas para privarlas por
completo de toda materia extraa.
II.

OBJETIVOS:

Determinacin de la biomasa celular, utilizando la biomasa de una poblacin de

Saccharomyces

cerevisiae

MIT-L51,

siguiendo

los

procedimientos

de

determinacin del peso seco.

III.

MATERIALES Y METODOS:
Materiales:

Tubos de prueba de 13 x 100 mm

Centrifuga de laboratorio

Estufa

Balanza analtica

Pipeta de 5 ml
Mtodos:

Se pesa dos tubos de prueba vacos y secos (P1)

Luego se extrae la muestra de biomasa de levadura con una

pipeta de 5 ml y se vaca a los 2 tubos de prueba
Se centrifuga a una velocidad de 4000 rpm por un tiempo de

20 min.

Luego se vaca el sobrenadante y se llevan los tubos a una

estufa a 100C pesando en una hora o hasta que el peso sea constante (P 2)

IV.

RESULTADOS:

1.5 ml

Muestra

ESTUFA
CENTRIFUGA
5700 RPM
15

LECTURA EN CAMARA NEUBAUER:

120 levaduras / mm2
Esto es equivalente a 1.2 * 106 levaduras / ml
PESO SECO:
Tubo vaco 1: 5.2434 g
Tubo vaco 2: 5.3117 g
Tubo 1 mas muestra seca: 5.2468 g
Tubo 2 mas muestra seca: 5.3168 g
Diferencia
Tubo 1:

3.4 * 103 g
g
2.267 * 10 3
1.5ml
ml

4.8 * 103 g
g
Tubo 2:
3.2 * 10 3
1.5ml
ml

60C

Tubo 1:

1.2 * 106
levaduras
8
3 5.3 * 10
2.267 * 10
g

Tubo 2:

1.2 * 106
8 levaduras
3 3.75 * 10
3.2 * 10
g

PROMEDIO:
4.525 levaduras / g
V.

COMENTARIO:

Al retirar los dos tubos de la estufa, determinamos la materia seca de cada tubo,
en el cual pudimos observar que difieren en el peso a una razn de 1.067*10 -3 g,
los cuales han tenido que ser iguales, ya que se trabajo con igual numero de
muestra; la razn de esta diferencia se debi al tomar la muestra en la lectura del
menisco, otro error que pudo causar esta diferencia fue al retirar el liquido
sobrenadante despus del centrifugado.
El sistema de peso seco, obviamente, no diferencia clulas vivas de muertas y su
sensibilidad es limitada.
El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran
en una suspensin se obtiene por el secado de un volumen en una estufa a 60C
hasta peso constante. Esta tcnica es til para grandes volmenes de muestra,
debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un
gran nmero de bacterias. La desventaja de este mtodo es que componentes
voltiles de la clula pueden perderse por el secado y puede existir alguna
degradacin. Tambin la muestra seca puede recobrar humedad durante el
pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.
El aumento de volumen con la humedad tiene un lmite. Este va creciendo hasta
que la clula alcanza un porcentaje de humedad que corresponde al punto de
saturacin de la pared celular, aproximadamente del 30 % para todas las especies
en clculos tcnicos. A partir de ste valor el volumen permanece constante, ya

que el agua que penetra en el volumen de las clulas no produce hinchamiento de

la pared celular. Por lo tanto, el valor del 30 % es un valor para utilizarlo
prcticamente, si bien cada especie tiene su punto de saturacin de la pared
celular. No sucede as con el peso, cuyo valor sigue aumentando hasta alcanzar el
contenido mximo de agua para la especie correspondiente.

VI.
-

BIBLIOGRAFIA:
PELCZAR, M y R. REID. 1966. Microbiologa. Editorial Castilla,
Madrid. Espaa.

Internet.

CAUSAS MAS COMUNES DE LOS ERRORES PARA LA CUANTIFICACION

DE LA BIOMASA EN EL METODO DE PESO SECO
-

Mal secado de la muestra al no tener una temperatura y tiempo de

secado optimo.

Velocidad adecuada de la centrifuga.

Contaminacin de la muestra.

Peso inexacto del material de trabajo al no contar con equipos de

buena sensibilidad.