Prueba

Bioqumica

T.S.I
(Triple Sugar Iron)
> Medio Slido<

Funcionamiento

Lectura

Lactosa, sacarosa y glucosa: hidratos de carbono

fermentables.

Observar el color del medio de cultivo y

la produccin de gas.

Superficie
alcalina/profundidad
cida (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo
solamente
fermenta la glucosa.

Superficie cida/Profundidad cida

(pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa.

Superficie
alcalina/Profundidad
alcalina (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador
de azcares.
La presencia de burbujas o la
ruptura del medio de cultivo
indican que el microorganismo
produce gas.

Tiosulfato de sodio: sustrato para la produccin de

cido sulfhdrico (se reduce a cido)
Sulfato de hierro y amonio: fuente de iones Fe3+, los
cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen
sulfuro de hierro, de color negro.
Rojo de fenol: es el indicador de pH ( vira al color
amarillo en medio cido)
Enzimas responsables: cistena, desulfhidrasa y
tiosulfato reductasa

Glucosa: hidrato de carbono fermentable

Lisina: sustrato para detectar presencia de la enzima
decarboxliasa y deaminasa
Citrato de hierro y amonio, tiosulfato de sodio:
indicadores de la produccin de cido sulfhdrico.
Purpura de bromocresol: indicador de pH (color es
amarillo a pH igual o menor a 5.2 y violeta a pH igual o
mayor a 6.8)

L.I.A.
(Lisina Hierro Agar)

>Medio Slido<

Los microorganismos fermentadores de glucosa:

acidifican el medio y provocan el viraje del color
prpura al amarillo. El ambiente cido favorece la
actividad enzimtica decarboxilasa y se metaboliza la
lisina a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo
y tornndolo al color prpura o violeta.
Los microorganismos fermentadores de glucosa que no
tienen actividad lisina decarboxilasa: producen un
viraje de la totalidad del medio de cultivo al color
amarillo. A las 24 horas de incubacin se observa el
fondo del tubo color amarillo y la superficie de color
violeta debido al consumo de las peptonas que
producen alcalinidad. La generacin de sulfuro de
hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del
medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y
algunas de Morganella: desaminan la lisina. Esto
produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual con la sal
de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color
rojizo en la superficie del medio.

Decarboxilacin de la lisina:

Resultado Positivo: superficie

alcalina / profundidad alcalina (pico
violeta / fondo violeta).

Resultado negativo: superficie

alcalina /profundidad cida (pico
violeta / fondo amarillo).

Desaminacin de la lisina:

Resultado positivo: superficie rojiza

/ profundidad cida. Esto sucede
con cepas del gnero Proteus,
Providencia y algunas de
Morganella spp.

Produccin de SH2 :

Resultado positivo:
ennegrecimiento del medio de
cultivo (especialmente en el lmite
entre la superficie y profundidad).

Resultado negativo: el medio de

cultivo permanece sin cambio de
color.

Movilidad:
Tripterna: peptona con triptfano que produce indol
al ser metabolizado por algunas bateras gracias a la
triptofanasa.
El indol producido se puede identificar al combinarse

Resultado positivo: presencia de

turbidez o crecimiento ms all de
la lnea de siembra.

Resultado negativo: crecimiento

solamente en la lnea de siembra.

S.I.M.
>Medio
Semislido<

con el aldehdo del reactivo de Ehrlich o de Kovacs,

para originar un compuesto de color rojo.

Al ser semislido detecta la movilidad, que se

evidencia por el enturbiamiento del medio o por
crecimiento que difunde ms all de la lnea de
siembra del microorganismo en estudio.

Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia

de extracto de levadura, peptona y triptena.
Tripterna: aportador de triptfano que con
tripofanasa forma indol, el cual se identifica al
combinarse con el aldehdo del reactivo de Ehrlich o de
Kovacs, para originar un compuesto de color rojo.
Glucosa: hidrato de carbono a fermentar
Ornitina: para la deteccin de ornitina decarboxilasa
Purpura de bromocresol: indicador de pH
Los microorganismos fermentadores de glucosa
acidifican el medio de cultivo y producen viraje del
color prpura al amarillo. Las condiciones de acidez son
favorables para la actividad enzimtica ornitina
decarboxilasa, que actua sobre la ornitina generando
putrescina, con la consecuente alcalinizacin del medio
de cultivo y viraje al color prpura

Gelatina Nutritiva

La gelatina es el sustrato para determinar la capacidad

de un microorganismo de producir enzimas de tipo
proteoltico (gelatinasas), que lican la gelatina.
Escherichia coli y Salmonella typhimurium negativo
Serratia
marcescens,
Proteus
mirabilis
Staphylococcus aureus positivo

Caldo Urea
>Medio Lquido<

Resultado positivo:
ennegrecimiento del medio de
cultivo a lo largo de la lnea de
siembra o en todo el medio.

Resultado negativo: el medio

permanece sin cambio de color.

Tiosulfato de sodio: sustrato para la produccin de

cido sulfhdrico.
Sulfato de hierro y amonio: fuente de iones Fe3+ ,los
cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen
sulfuro de hierro, de color negro.

MIO
>Medio
Semislido<

Produccin de SH2 :

Prueba del indol: Agregar al

medio de cultivo 3 a 5 gotas de Indol
Reactivo

Resultado positivo: color rojo.

Resultado negativo: el color del

reactivo revelador permanece
incoloro-amarillento.

Movilidad:

Resultado positivo: presencia de

turbidez o crecimiento ms all de
la lnea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento
solamente en la lnea de siembra.

Ornitina decarboxilasa:

Resultado positivo: color prpura.

Resultado negativo: color amarillo.
A veces se puede desarrollar un
color violceo en la superficie del
medio

Prueba del indol: Agregar al

medio de cultivo 3 a 5 gotas de Indol
Reactivo

Resultado positivo: color rojo.

Resultado negativo: el color del

reactivo revelador permanece
incoloro-amarillento.
Revisar los tubos diario :
La
licuefaccin
se
comprueba
sumergiendo los tubos en agua helada
o refrigeracin, si hay licuefaccin no
se solidifica el medio. Evitar agitar los
tubos
en
tanto
su
contenido
permanezca lquido.
Si la fluidificacin de la gelatina
procede
lentamente
como
generalmente ocurre, la agitacin
puede mezclar la gelatina hidrolizada
con la no hidrolizada, dando lugar a
una mezcla que se solidifica y da una
reaccin falsa negativa.