PRACTICA DE MONTAJE PARA LA OBSERVACION MICROSCOPICA DE

HONGOS FITOPATGENOS
INTRODUCCIN.
Para el diagnstico y estudio de enfermedades, en la mayora de los casos es necesario
aislar y/o cultivar el patgeno a fin de identificarlo o conocer parte de sus estructuras.
Una prctica muy til es la observacin del agente causal en preparaciones
microscpicas tomadas directamente del material enfermo o del aislamiento del
patgeno. El procedimiento que a continuacin se describe fue tomado las muestras de
una mandarina enferma, donde utilizamos el mtodo del montaje para luego levar al
microscopio e identificar qu tipo de patgeno u hongo est ocasionando el problema en
la mencionada fruta.
MONTAJE DE PREPARACIONES.
Coloque la muestra del patgeno o estructuras del mismo en estudio en un portaobjetos
limpio, sobre una gota de solucin de montaje que debe ser, de preferencia, agua
destilada estril o un colorante para la tincin de las estructuras fungosas que se desean
observar con mayor contraste. Entre los colorantes ms comunes se encuentran el
lactofenol, azul de metileno y la safranina, entre otros.
PASOS A SEGUIR EN UN LABORATORIO PARA HACER UN MONTAJE
1. Tomar la muestra con un estilete de diseccin o con la punta de una navaja o
cuchilla de bistur, raspando ligeramente el tejido enfermo, tomndolo tanto del
cultivo o de la parte afectada de la planta donde este se manifiesta.

2. Colocar cuidadosamente este raspado sobre el portaobjetos dentro de la gota de

agua o colorante.

3. Cubrir suavemente con un cubreobjetos con la ayuda de una aguja procurando

que no queden burbujas de aire.

Si se utiliza cinta transparente para hacer preparaciones rpidas no permanentes a partir

de crecimientos en medio de cultivo o en estructuras de las plantas (frutos, hojas, tallos).
Este mtodo se recomienda para observar las estructuras en su estado y posicin
normales (cadenas de esporas o conidios pegados al conidiforo), lo cual generalmente
es muy difcil de lograr con las preparaciones antes descritas, ya que las estructuras se
separan al ser tomadas con el estilete.
Se debe tomar un pedazo de cinta transparente y, con el lado que tiene el pegamento,
tocar ligeramente la muestra o el cultivo de la caja Petri o del tejido enfermo, enseguida
colocarlo sobre una gota de agua estril en un portaobjetos.
4. Tomar un pedazo de cinta transparente y, con el lado que tiene el pegamento,
tocar ligeramente la muestra.

5. Coloque la cinta con la muestra o estructuras sobre una gota de agua estril en
un portaobjetos.

6. Fije la cinta al portaobjetos y retire el exceso de agua o colorante.

PRACTICA REALIZADA EN EL LABORATORIO DE FITOPATOLOGA

Primeramente se procedi por el respectivo aseo de las mesas del laboratorio para evitar
que haya residuos de cualquier otro material extrao para evitar que las muestras se
contaminen.
Se coloc la muestra en la mesa que ya presentaba signo de la enfermedad.
Donde se utilizaron los siguientes materiales:
MATERIALES

Estilete
Portaobjeto
Cubre objeto
Cinta transparente
Mechero
Alcohol
Azul de metileno
Plumn

MATERIAL VEGETAL
Mandarina

PROCEDIMIENTO
Luego se procedi a hacer los montajes primero se realiz haciendo uso de portaobjeto
luego realizamos sacando la un porcentaje de la muestra haciendo uso de la cinta
transparente.
Montaje con cubre objeto
En el portaobjeto se coloc una gota de azul de metileno una vez puesto este reactivo
con la ayuda de un estilete se extrajo un porcentaje de la muestra (mandarina) y
cuidadosamente se coloc sobre la gota de azul de metileno en el portaobjeto.
Luego se pas con una pintura de uas por el borde del cubre objeto con la finalidad de
sellar a la muestra.
Montaje con cinta transparente
La cintra transparente se coloc sobre la muestra (mandarina) por el lado pegante para
extraer un porcentaje de material enfermo y este se llev y se coloc sobre el
portaobjeto tratando de pegarlo de una manera uniforme que no se formen burbujas de
aire en el interior de la cinta.
A esta muestra tambin se acondiciono con la pintura de uas para sellarlo que no
presente espacios que puede entrar aire y malograr la muestra.
Una vez realizada ambas muestras se identific con un plumn con respectivo nombre.
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