Unit

INSERM
UMR-S 747

Pharmacologie, Toxicologie et
Signalisation Cellulaire.

Maintenance et
suivi mtrologique des appareils

Procdure

Identification: MSMA/PR/ctrl-pip-mg

Indice : 03

Contrle mtrologique

des pipettes par la

mthode gravimtrique

Rdacteur

Vrificateur

Nom, prnom

Fonction

Date

Franois ETIENNE

Jean BASTIN

Approbateur

Robert BAROUKI

Responsable management
qualit

Directeur de lquipe 3

Directeur de lUMR-S 747

28/01/13

Signature

28/01/13

28/01/13

Suivi des mises jour et description des modifications

Indice

date

Objet de la modification

Observations

00

28/02/12

01

02/05/12

02

25/10/12

03

28/01/13

Cration du document partir de la mthode

gravimtrique utilise dans lquipe 3
Thrapie pharmacologique des dficits du
mtabolisme nergtique mitochondrial
responsables Dr Jean BASTIN et Dr Fatima
DJOUADI et expose par le Dr Jean BASTIN.
Mise jour du document suivant les normes
DIN EN ISO 8655-2 et DIN EN ISO 8655-6. Mise
en place de larchivage.
Prcisions apportes quant aux matriels
utiliss. Illustration du document. Modification
de larchivage
Modification de lentte.
Notification de lexclusion des pipettes P2 de la
procdure.
Modification de larchivage : ajout dun
tableau de suivi du contrle qualit labor
par Alexandra LOPES-COSTA et Carole
LEBACHELIER (quipe 3).

Version en application

Sommaire

I- Synopsis
II- Objet et domaine dapplication
III- Documents de rfrence
IV- Dfinitions
V- Mode opratoire
VI- Analyse des donnes, Erreurs maximales tolres
VII- Actions correctives et prventives
VIII- Archivage, traabilit
IX- Annexe

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I- Synopsis

Effectuer 10 prlvements successifs dH2O distille correspondant

au volume maximum spcifique de chaque type de pipette en
pesant chaque prlvement (= 10 valeurs de pese).

Recommencer la mme opration au volume minimum de chaque

type de pipette (= 10 valeurs de pese).

Introduire les 20 valeurs de pese dans le fichier Excell Feuille de

Calcul pipettes mthode gravimtrique pour calculer la justesse et
la rptabilit de chaque pipette teste.

Comparer les valeurs obtenues aux limites derreurs maximales

tolres dfinies par la norme ISO 8655-2 pour chaque pipette.

Retirer de la circulation les pipettes dfectueuses et

les envoyer en rvision.

Archiver les rsultats dans les documents Word Fiche de contrle

pipettes mthode gravimtrique et Tableau suivi contrle
qualit pipette , renouveler le contrle intervalle rgulier pour
toutes les pipettes.

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II- Objet et domaine dapplication

Cette procdure dfinit les tapes respecter lors de la vrification de routine des pipettes de lensemble des
quipes de lUMR-S 747.
Elle sapplique la vrification des pipettes piston, mono-canal, volume variable et dplacement dair (un
volume dair est contenu entre le piston et la surface du liquide contenu dans le cne pipette de Type A).
La mthode utilise est la mthode gravimtrique par distribution (norme ISO 8655-6).
Si la suite de cette procdure des pipettes ne sont pas conformes ou montrent des drives, alors les oprations de
maintenance prventive ou curative seront ralises par une socit agre.
Les pipettes contrles sont les suivantes:
- P10
- P20
- P100
- P200
- P1000
- P5000

Les pipettes P2 sont exclues de cette procdure cause des volumes trop petits mesurer et sont par consquent
donner obligatoirement une socit agre pour vrification en cas de doute.

III- Documents de rfrence
Cette procdure a t tablie daprs les documents suivants:
Norme ISO 9001
Norme DIN EN ISO 8655-2 Pipettes piston.
Norme DIN EN ISO 8655-6 Essais gravimtriques.

IV- Dfinitions
Volume nominal : Volume indiqu sur linstrument pour lequel une performance de justesse et de reproductibilit a
t spcifie par le fabriquant.
Erreur systmatique (justesse): Diffrence entre le volume distribu et le volume nominal ou volume slectionn.
Erreur alatoire (rptabilit): Dispersion des volumes autour de la moyenne des volumes distribus.

V- Mode opratoire
La mthode utilise est la mthode gravimtrique par distribution (norme ISO 8655-6).

Volumes tests
Le contrle est effectu pour deux volumes :
- un volume minimal
- et un volume maximal,
dont les valeurs sont prdfinies dans cette procdure selon le type de pipette.

Nombre de prlvement
Le nombre de prlvements par volume nominal est fix 10.

Frquence
La frquence recommande est tous les trois mois pour les pipettes utilises tous les jours. Prvoir au moins une fois
par an pour les pipettes les moins utilises.

Protocole
Avant de commencer lopration, la pipette ainsi que leau distille doivent tre laisses au repos au moins deux
heures dans la pice o le contrle sera effectu afin quelle soit en quilibre avec les conditions ambiantes
(temprature, hygromtrie, pression atmosphrique) (norme 8655-6 6.2). Il en est de mme pour les rcipients et le
portoir.

a) Contrle de ltanchit.
Prlever le volume nominal maximal puis maintenir la pipette verticale et vrifier quelle ne fuit pas. Si elle fuit,
retirer la pointe et nettoyer lembout de la pipette avec un kimwipes et de leau distille.
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Mettre un nouveau cne et rpter lopration. Si la pipette fuit encore, arrter le contrle et la faire parvenir
une socit agre pour effectuer une opration de maintenance curative.

b) Prparer le matriel.
- Choisir un rcipient de mesure et son support, lgers, et adapts au type de pipette et au nombre de mesures
effectuer.
Exemples, en fonction du modle de pipette contrl :

P10, P20 et P100 : un eppendorf de 1,5 ml
P200 : un tube plastique type hmolyse
maintenu dans un morceau de polystyrne.
maintenu dans un petit bcher en plastique.

P1000 : un tube Falcon de 15 ml
maintenu dans un petit bcher en plastique.

P5000 : un bcher plastique de 100 ml.

- Prvoir un rcipient de stockage (petit bcher) pour leau distille.
- Choisir une balance dont la gamme de mesure et la rsolution sont adaptes aux volumes deau distille pess.
- Eau distille.
- Cnes adapts en nombre suffisant : le cne doit tre chang chaque mesure.

c) Prparer les fiches de relev des rsultats et darchivage.
- Prvoir pour chaque pipette teste, un exemplaire papier du document Word Fiche de contrle pipettes
mthode gravimtrique joint la procdure. Sur chaque fiche commencer par renseigner au stylo :
- le numro de lquipe,
- le nom de loprateur,
- la date du contrle.
Ensuite dans la partie Dsignation du pipetman inscrire :
- la marque (ex : Eppendorf),
- le modle (ex : P10 : 0,5-10 l),
- le numro de srie (ex : 3253801),
- et le reprage de la pipette (lutilisateur est libre de choisir le reprage qui lui convient).





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d) Test des volumes de pipetage.

- Mettre dans le rcipient de mesure un volume deau suffisant (sans excs) pour limiter le phnomne
dvaporation :
- P10, P20 et P100 : 0,2 ml dH2O dans un eppendorf de 1,5 ml.
- P200 : 1 ml dH2O dans un tube plastique type hmolyse.
- P1000 : 1 ml dH2O dans un tube Falcon de 15 ml.
- P5000 : 5 ml dH2O dans un bcher plastique.
- Placer le rcipient dans son portoir sur le plateau de la balance et faire la tare.
- Conditionner la pipette en aspirant et vacuant leau distille au moins 5 fois. Cette opration permet de
stabiliser le taux dhumidit lintrieur de la pipette.

d.1.) Test du volume maximal de pipetage.
- Rgler la pipette sur le volume maximal tester. La valeur du volume maximal rgler est dfinie dans le
tableau ci-dessous en fonction du type de pipette teste :

Type de pipette
volume maximal (l)
P10
10
P20
20
P100
100
P200
200
P1000
1000
P5000
5000


- Mettre un nouveau cne.
- Prlever le volume deau distille dans le rcipient de stockage en une fois (ne pas faire dallers-retours )
- Vider le cne dans leau contenue dans le rcipient de mesure (pas sur les parois du tube, surtout pour les
petits volumes)

- Noter la masse (en mg) indique par la balance dans le tableau du document Word Fiche de contrle
pipettes mthode gravimtrique , dans la partie correspondant au volume maximal.


1er pipetage
2e pipetage
3e pipetage
4e pipetage
5e pipetage
6e pipetage
7e pipetage
8e pipetage
9e pipetage
10e pipetage

10 mesures
(mg)

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- Ne pas refaire la tare de la balance. (Comme la balance nest pas remise zro entre chaque mesure, la
masse obtenue chaque pipetage correspond la somme de toutes les masses obtenues lors des pipetages
prcdents.)
- Jeter le cne et rpter cette opration 10 fois en changeant de cne chaque mesure.

d.2.) Test du volume minimal de pipetage.
- Rgler la pipette sur le volume minimal tester. La valeur du volume minimal rgler est dfinie dans le
tableau ci-dessous en fonction du type de pipette teste :

Type de pipette
Volume minimal (l)
P10
1
P20
2
P100
20
P200
20
P1000
200
P5000
1000

Le volume minimal tester pour la P100 est fix 20 L car en dessous de ce volume il est conseill dutiliser
une pipette P20.
De mme, le volume minimal tester pour la P1000 est fix 200 L car en dessous de ce volume il est
conseill dutiliser une pipette P200.

- Mettre un nouveau cne puis reprendre les tapes prcdemment dcrites en d.1.






VI- Analyse des donnes, Erreurs maximales tolres

- Ouvrir le fichier Excell Feuille de Calcul pipettes mthode gravimtrique joint la procdure. Afin dillustrer
cette partie, le fichier est prsent dans le cas du contrle dune pipette 0.5 10 l.

- Devant Facteur Z (l/mg) =, entrer la valeur du facteur Z (colonne B, ligne 3). Ce facteur permet de faire la
conversion de la masse pese (en mg) en volume (en l) suivant la valeur de la temprature et de la pression
atmosphrique. La grandeur Z = 1,0033 entre par dfaut, correspond une temprature de 22C et une pression
atmosphrique comprise entre 950 hPa et 1040 hPa. Si besoin, vous trouverez les valeurs de Z dans la table 1 de la
norme ISO 8655-6 fournie en Annexe.

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- Devant Volume maximal (l) : , (colonne B, ligne 5) entrez la valeur du volume maximal que vous voulez
contrler (ex : 10l pour une P10).

- Dans la colonne 10 mesures (mg) (colonne B, ligne 8 17), entrer les valeurs des masses que vous avez releves
chaque pipetage (1er pipetage, 2nd pipetage,jusquau 10ime pipetage). Comme la balance nest pas remise zro
entre chaque mesure, la masse obtenue pour chaque pipetage correspond la somme de toutes les masses
obtenues lors des pipetages prcdents. Ce sont les seules donnes que vous avez entrer dans cette feuille.
Ainsi, vont safficher automatiquement pour chaque pipetage la masse en mg (colonne masse/pipetage (mg) ) et
le volume en g (colonne volume/pipetage (g) ).

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- Puis ds que la valeur de la masse du 10ime pipetage est entre alors le rsultat du contrle saffiche
automatiquement dans la partie grise ; apparat alors pour le volume contrl:
- le volume moyen avec le minimum et le maximum,
- lerreur systmatique et alatoire (en l),
- la justesse (en %, note E) et la rptabilit (en %, note Cv).

Ne pas oublier de faire enter aprs avoir entr la valeur du dixime pipetage afin que le calcul de lerreur
systmatique et de lerreur alatoire puisse seffectuer correctement.















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La procdure est la mme pour le volume minimal (ex : 1 l pour une P10), seule la valeur du facteur Z nest pas
rappeler.

Ne pas oublier de faire enter aprs avoir entr la valeur du dixime pipetage afin que le calcul de lerreur
systmatique et de lerreur alatoire puisse seffectuer correctement.

















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Le contrle des volumes dlivrs porte sur le constat que :

les valeurs obtenues (en %) pour E (justesse) et Cv (rptabilit) doivent se situer dans les marges de limite derreur
maximale tolre dfinies par la norme ISO 8655-2 et reportes dans la table 2 ci-dessous en fonction du volume
contrl.

Table 2 :
Extrait de la norme DIN EN ISO 8655-2

Volume
nominal l

10

20

50

100

200

500

E %

2,5

1,2

1,0

1,0

0,8

0,8

0,8

CV %

Volume
Nominal ml

1,5

0,4

0,4

0,3

1,0

2,0

5,0

10

0,8

0,8

0,6

CV %

0,3

0,3

0,3

0,3

0,4

0,8

0,5

E %

0,8

Par exemple un volume maximal contrl de 10l :
- E doit tre infrieur ou gal 1,2 %
- Cv doit tre infrieur ou gal 0,8 %.

Pour un volume minimal contrl de 1l :
- E doit tre infrieur ou gal 5 %
- Cv doit tre infrieur ou gal 5 %.


VII- Actions correctives et prventives.
Si les rsultats ne sont pas conformes, c'est--dire si les valeurs obtenues pour E et/ou Cv sont hors des limites
derreur maximale tolres:
a) Vrifier si toutes les tapes de la procdure ont t effectues correctement, puis recommencer le contrle.
b) Si les rsultats ne sont pas satisfaisant, la pipette est dclare non conforme et doit faire lobjet doprations de
maintenance prventive ou curative par une socit agre.


VIII- Archivage, traabilit
Les rsultats des contrles doivent tre enregistrs au fur et mesure, puis archivs afin de pouvoir effectuer un
suivi de ltat des pipettes au cours du temps (norme ISO 9001).

Document Word Fiche de contrle pipettes mthode gravimtrique
Pour chaque volume (minimal et maximal), reporter sur le document Word Fiche de contrle pipettes mthode
gravimtrique les donnes suivantes obtenues dans le fichier Feuille de Calcul pipettes mthode gravimtrique :
- le volume moyen avec le minimum et le maximum (en l),
- lerreur systmatique et alatoire (en l),
- la justesse (en %, note E) et la rptabilit (en %, note Cv),
- le rsultat du contrle : conforme ou non conforme.
Dans le cas o la pipette est dclare non conforme suite ce contrle, elle doit faire lobjet doprations de
maintenance prventive ou curative par une socit agre. Dans ce cas il est important de noter dans la partie
Conclusion la date du constat de vrification et le nom de lorganisme de contrle.



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Document Word Tableau suivi contrle qualit pipette

Ce document est essentiel pour assurer le suivi de chaque pipette ainsi que le reprage de chacune dentre elle lors
de leur remise une socit agre pour vrification en cas de non-conformit. Par consquent il est essentiel
dindiquer dans ce tableau les informations suivantes :
- le reprage (lutilisateur est libre de choisir le reprage qui lui convient),
- la marque (ex : Eppendorf),
- le numro de srie (indispensable pour reprer les pipettes lors de leur remise une socit agre pour
vrification en cas de non-conformit),
- le modle (ex : P10),
- la date du contrle,
- le motif du contrle (contrle tous les trois mois pour les pipettes utilises tous les jours, une fois par
an pour les pipettes les moins utilises, pipette tombe de la paillasse)
- la conformit,
- la date de la remise de la copie du document Fiche de contrle pipettes mthode gravimtrique au
responsable management qualit,
- la date de lopration de maintenance effectue par une socit agre en cas de non-conformit,
- la date de la remise de la copie du constat de vrification (effectue par une socit agre) au
responsable management qualit.

Les documents remettre pour archivage au responsable management qualit aprs chaque contrle
sont les suivants :
- une photocopie du document Word Fiche de contrle des pipettes par la mthode
gravimtrique pour chaque pipette contrle,
- une photocopie du document Word Tableau suivi contrle qualit pipette .

Si une pipette est dclare non conforme, elle doit tre vrifie par une socit agre. A lissue de cette
vrification le constat de vrification mis par la socit agre est remis au possesseur de la pipette
concerne et une photocopie est garde pour archivage par le responsable qualit.

IX- Annexe

Table 1 :
Extrait de la norme DIN EN ISO 8655-6. La table se rfre 1013 hPa.
Valable pour 950 hPa jusqu 1040 hPa.

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