AGAPITO SIERRA BRENDA KARINA

CASTELANO ANAYELI
VAZQUEZ MARIANA

Medio Diferencial para identificacin y

diferenciacin de Enterobacteriaceas en
funcin de tres diferentes parmetros, los
cuales estn representados por las letras de
su nombre
S Sulfur Reduction= Reduccin del Azufre
I Indole Production = Produccin de Indol
M Motility = Motilidad

FUNDAMENTO:
Mezcla de peptonas constituye el elemento
nutritivo del medio.

Amonio Hierro(III) Sulfato 0,2 g

Peptona
6,1 g
Triptena
20,0 g
Sodio Tiosulfato.
0,2 g
Agar.
3,5 g
pH final: 7,3 0,2

El agar es escaso para permitir la dispersion de

organismos moviles fuera de la linea de
picadura.
El Sodio Tiosulfato y el Amonio Hierro(III) Sulfato
permiten poner de manifiesto la formacin de
Hidrgeno de Sulfuro por el precipitado negro
que se forma.
La

produccin

del

Indol

es

fcilmente

detectable al aadir unas gotas de reactivo de

Kovacs al cultivo.

S hay un oscurecimiento en el medio entonces hay reduccin del Azufre. S un

organismo puede reducir el azufre a sulfuro de hidrogeno, este se combinara con
el hierro para formar sulfuro frrico, el cual es un precipitado de color negro. La
reduccin de azufre es una prueba muy til en diferentes organismos entricos

2.- Algunos organismos poseen la habilidad de producir la enzima triptofanasa, la

cual hidroliza el triptfano. El producto final de esta hidrlisis es el Indol, Acido
Piruvico y Amoniaco.

3.-La movilidad se manifiesta mediante una turbidez que se forma alrededor

de la lnea de siembra. La motilidad es la habilidad de moverse activamente
y de manera espontanea, las cepas mviles presentan turbidez que se
extiende ms all de la lnea de siembra, cuando se trata de cepas inmviles
el crecimiento solamente se observa en la lnea de siembra. motilidad sirve
para analizar gran variedad de organismos como Salmonella y Shigella.

 Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio

slido, sembrar por puncin profunda con

aguja de inoculacin recta. Se debe inocular
el centro del tubo, y la puncin debe abarcar

2 tercios de profundidad del medio de cultivo

desde la superficie.
Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.

OBSERVACIONES:

Streptococus
pyogenes
Es negativo para
motilidad (no
presenta
turbidez) y
reduccin de
azufre (color
transparente).

Serratia
marcescens
Es positivo
para
motilidad
(Ligera
turbidez) y
negativo para
reduccin de
azufre (color
transparente).

Salmonella
typhimurium
Es positivo para
motilidad
(Presenta
turbidez) y
positivo para
reduccin de
azufre
(oscurecimiento).

Streptococus
pyogenes
Es negativo
en la
produccin
de Indol (sin
cambio de
color).

Escherichia
coli
Es positivo
para la
produccin
de Indol
(presenta
coloracin
roja).

Salmonella
typhimurium
Es negativo
para la
produccin
de Indol (sin
cambio de
color).

 Limitaciones
-En las bacterias aerobias estrictas, que slo
crecen en superficie, la movilidad puede
ser difcil de observar.
-Algunas
bacterias
productoras
de
melanina, pueden dar un color parduzco,
que no debe confundirse con el color
negro debido a la produccin de cido
sulfhdrico.

 Control fsico-qumico
-Aspecto: Polvo fino.
-Solubilidad: Ligeramente opalescente.
-Color: Beige.
-pH: 7.3 0.2
Control microbiolgico

Tecnolgico Nacional de Mxico

Instituto Tecnolgico de Celaya
Departamento de Ingeniera Bioqumica
Microbiologa
Prof. IBQ Ana Florina Villagmez Torres

caldo rojo de metilo voges proskauer (rm-vp)

Presenta:
Jaral Ortiz Brenda Rub
Navarro uro Rafael
Rodrguez lvarez Paola del socorro
Vega pia ariadna

Uso.
El Medio MR-VP es utilizado como medio
diferencial, para organismos coliformes en base a
las pruebas de Rojo de Metilo y Voges-Proskauer.
Es particularmente til para la clasificacin de
enterobacterias.
Tambin conocido como Rojo de Metilo VogesProskau

Formula.
Pluripeptona:

aporta los
nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la
glucosa es el hidrato de
carbono fermentable.

Glucosa:

puede
ser
metabolizada, a travs de
distintas
vas
metablicas.
Segn la va utilizada, se
originarn productos finales
cidos (cido lctico, cido
actico, cido frmico), o
productos
finales
neutros
(acetil metil carbinol).

Fundamento
La composicin lo hace un medio de enriquecimiento
para organismos no exigentes.
PRUEBAS
Rojo de metilo: revela la presencia de productos cidos.
C6H12O6 C303H5 (LACTATO) CH3COOH + CO2,
HCOOH
Voges y Proskauer Alfa naftol e hidrxido de potasio:
evidencian la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer describieron una coloracin rojiza que
apareca despus de adicionar hidrxido de potasio a los
cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa.
Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil
carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del
medio para dar un color rojo.

Siembra
Por inoculacin directa, a
partir del cultivo en estudio.

Incubacin

En aerobiosis, a 35-37C
por 3 das

Revelado de pruebas bioqumicas

a-Prueba del rojo de metilo:
Aadir unas gotas de una solucin
de rojo de metilo al 0.04%, observar
el color del medio.

b-Prueba del Voges Proskauer:

Aadir 0,6 ml de alfa naftol al
5% en alcohol etlico absoluto y
0.2 ml de hidrxido de potasio
al 40% a 2.5 ml de cultivo.
Agitar vigorosamente el tubo, y
dejar a temperatura ambiente
durante 10-15 minutos.
Observar el color de la
superficie del medio

resultados
1-Prueba del rojo de metilo:
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.

2-Prueba de Voges Proskauer:

Positivo: desarrollo de un color
rojo en pocos minutos despus
de una completa agitacin del
tubo.
Negativo: ausencia de color
rojo

resultados

limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba VP,
pueden no desarrollar el color rojo en la superficie
mediante el revelado por la metodologa descripta
anteriormente. En estos casos, se recomienda
calentar el medio de cultivo para favorecer el
desarrollo de color rojo

Bibliografa
Caldo rojo de metilo - voges proskauer (rm-vp) pgina web.
http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/mrvpmedio.htm
Fotografas: Color Atlas of Medical Bacteriology, Washington,
D.C: ASM Press. p. 103
Voges Proskauer Test Voges proskauer test voge mgkid.com

LISINA, HIERRO AGAR (LIA)

Omar Garcia Salgado
Adolfo Angel Suarez Garcia
Gustavo Diez Rodriguez
Janeth Rodriguez

El Agar de Hierro y Lisina es un medio utilizado para la

diferenciacin
de
microorganismos
entricos,
especialmente Salmonella spp en base a su
capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y
de producir sulfuro de hidrgeno. Este medio tambin
es conocido como LIA Edwards y Fife desarrollaron este
medio para diferenciar a Salmonella arizonae.
Eliminando la lactosa e incorporando la lisina, Edwards
y Fife encontraron que este medio diferenca a los
bacilos entricos en base a su capacidad para
descarboxilar o desaminar la lisina y producir H2 S. Este
medio es especialmente recomendado para la
identificacin de bacilos que fermentan rpidamente
la lactosa.

En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura

aportan
los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el
hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato utilizado
para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y
deaminasa.
El citrato de hierro y amonio y el tiosulfato de sodio son los
indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de
bromocresol, es el indicador de pH (su color es amarillo a pH
igual
o menor a 5.2 y violeta a pH igual o mayor a 6.8) y el agar es el
agente solidificante.

Los microorganismos fermentadores de glucosa

que no tienen actividad lisina decarboxilasa,
producen un viraje de la totalidad del medio de
cultivo al color amarillo. A las 24 horas de
incubacin se observa el fondo del tubo color
amarillo y la superficie de color violeta debido al
consumo de las peptonas que producen
alcalinidad.
La generacin de sulfuro de hidrgeno, se
visualiza por el ennegrecimiento del medio
debido a la formacin de sulfuro de hierro.

Suspender 35 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar

5 minutos. Calentar agitando con frecuencia y hervir durante un
minuto hasta la disolucin completa. Distribuir en tubos y esterilizar
en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Enfriar y dejar solidificar en posicin inclinada (pico de flauta
profundo).
Almacenamiento:
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 C.
Medio de cultivo preparado a 2-8 C.

Siembra:
A partir de un cultivo puro del microorganismo en
estudio y mediante el uso de aguja de
inoculacin, inocular el medio de cultivo,
picando el fondo y extendiendo sobre la
superficie del mismo.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 18-24 horas.

Decarboxilacin de la lisina:
Resultado Positivo: superficie alcalina / profundidad alcalina (pico
violeta / fondo violeta).
Resultado negativo: superficie alcalina /profundidad cida (pico
violeta / fondo amarillo).
Desaminacin de la lisina:
Resultado positivo: superficie rojiza / profundidad cida. Esto
sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y algunas de
Morganella spp.
Produccin de SH2:
Resultado positivo: ennegrecimiento del medio de cultivo
(especialmente
en el lmite entre la superficie y profundidad).
Resultado negativo: el medio de cultivo permanece sin cambio
de color.

Precauciones
- Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o daado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o deterioro,
as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas
manipularlas
apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidadas por el laboratorio.
- Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conserva
apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo segn reglamentaciones vigentes.

Precauciones
- Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o daado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o deterioro,
as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas
manipularlas
apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidadas por el laboratorio.
- Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conserva
apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo segn reglamentaciones vigentes.

Consultado 18-marzo-2015
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lisinahierroaga
r.htm
Consultado 18-marzo-2015
http://www.britanialab.com/productos/286_hoja_tecnica_es.pdf
Consultado 18-marzo-2015
http://fgyrbmesa3.blogspot.mx/2010/05/medio-agar-hierrolisina.html

INSTITUTO TECNOLOGICO DE CELAYA

DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA

MICROBIOLOGIA
Agar Citrato de Simmons
EQUIPO: ARVALO GONZLEZ MARA ISABEL
GMEZ NICASIO ROSALIA DEL CARMEN
MAGUEYAL GUERRERO PAOLA
PANTOJA CAPULIN MOISES

INTRODUCCION
Agar Citrato de Simmons
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a
la capacidad de usar citrato como nica fuente de carbono y
energa.

En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica

fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente
de carbono.
Ambos componentes son necesarios para el desarrollo
bacteriano.
Las sales de fosfato forman un sistema buffer
El magnesio es cofactor enzimtico.
El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
El azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al
color
azul en medio alcalino y el agar es el agente solidifcate.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Citrato de sodio

2.0

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato dipotsico

1.0

Fosfato monoamnico

1.0

Sulfato de magnesio

0.2

Azul de bromotimol

0.08

Agar

15.0

Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de

agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir
en tubos y esterilizar en autoclave a 121C durante 15
minutos. Enfriar en posicin inclinada.

pH final: 6.9 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en
superficie un inculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el
agar.

Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das
de incubacin.

RESULTADOS
Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.

Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no

hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

Microorganismo

Citrato
permeasa

Color del
medio

Klebsiella pneumoniae
ATCC 700603

Positivo

Azul

S. typhimurium ATCC 14028

Positivo

Azul

E. coli ATCC 25922

S. flexneri ATCC 12022

Negativo
Negativo

Verde
Verde

Limitaciones
Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de
cultivo, puede variar el color del pico del verde al
amarillo-amarronado. Esto no afecta el color verde del
resto del medio de cultivo, pero puede afectar la
visualizacin azul de un resultado positivo.
Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos
positivos.
Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a
partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de
inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino
inocularla primero. Cualquier arrastre de materia
orgnica puede originar resultados falsos positivos.

Caractersticas del medio

Medio de cultivo deshidratado: color amarilloverdoso, homogneo, libre deslizamiento. Medio
de cultivo preparado: color verde.
Almacenamiento
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 C. Medio
de cultivo preparado a 2-8 C.

Bibliografa
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/si
mmonscitagar.htm

http://www.britanialab.com/productos/328_hoja_tecn
ica_es.pdf

Agar Hierro y Triple Azcar (TSI)

Microbiologa
Ing. Ana Florina Villagmez Torres
Equipo 2
Integrantes:

Historia
Rusell fue el primero que
demostr que la utilizacin
de dos azcares (Glucosa y
lactosa) permita
diferenciar los bacilos Gram
(-) de origen intestinal.

Otros autores introdujeron el tercer azcar, la

sacarosa, que permiti detectar aquellos
Coliformes que degradan lentamente la
lactosa y que muchos de ellos atacan
rpidamente la sacarosa.
Sulkin y Willett (1940) describieron un medio
con tres azcares y Hierro(II) Sulfato que salvo
algunas modificaciones es el actual Agar
Hierro y Triple Azcar, con especial valor
cuando se utiliza combinado con medios
selectivos para Enterobactericeas.

Esta prueba se recomienda para la

identificacin de patgenos entricos Gram (). Se emplea para detectar la fermentacin
de lactosa, sacarosa y glucosa, con
formacin de cido y gas, y tambin para
detectar produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne
y la pruripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano.
La lactosa, sacarosa y glucosa son los
hidratos de carbono fermentables.
El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario
para la produccin de cido sulfhdrico.

 El sulfato de hierro y amonio es la fuente de

iones Fe3+, los cuales se combinan con el
cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro,
de color negro.
El rojo de fenol es el indicador de pH y el
cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico. Por medio de fermentacin de
azcares, se producen cidos, que se
detectan por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color amarillo en medio
cido.
El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
hidrgeno el que reacciona luego con una

Medio de Cultivo.

Preparacin
Suspender 59,4 g en 1 l de agua destilada;
calentar y agitar hasta ebullicin y
disolucin total, y hervir durante 1 minuto.
Distribuir en tubos de ensayo (1/3 del
volumen del tubo) y esterilizar a 118C
durante 15 minutos. Dejar endurecer el
medio en posicin inclinada.

Modo de Empleo
Incubar a 37C de 18 a 24 horas. Se pueden
realizar incubaciones de hasta 48 horas
segn la investigacin en curso, sin
embargo se recomienda hacer siempre
una lectura a las 24 horas de incubacin.

Este medio se siembra partir de un cultivo

puro. Debe sembrarse por estra en la
superficie inclinada y por picadura en la
columna vertical.

Resultados

Control Microbiolgico
Los siguientes resultados fueron obtenidos a
partir de cepas patrn, despus de
incubacin a temperatura de 37 oC y
observados a las 24 horas.

Bibliografa
Manual Bsico de Microbiologa. 2003.
Cultimed. Pg. 65
Reacciones en el Agar Hierro y triple azcar
consultado de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/f
acultad_farmacia/catedraMicro/tsi.pdf
TSI Agar consultado de:
http://www.britanialab.com.ar/esp/product
os/b02/tsiagar.htm

Agar XLD
Equipo 4

Introduccin
El agar XLD es un medio moderadamente
selectivo y de diferenciacin para el
aislamiento
y
la
diferenciacin
de
patgenos entricos gram negativos
(Salmonella y Shigella) a partir de muestras
clnicas. Es adecuado en especial para el
aislamiento de la especie Shigella.

Composicin

MODO DE PREPARACION
En un litro de agua agregar 55g de agar y
calentar hasta diluir (sin sobrecalentar) una
vez disuelto el agar transferir a bao mara
a 50 C por 5 minutos
Dejar enfriar un poco hasta aguantar el
calor y transferir a los tubos

FUNDAMENTO:

La degradacin de los carbohidratos presentes en el medio (Xilosa, lactosa y

sacarosa) genera la produccin de acido haciendo virar el indicador rojo fenol
a amarillo.
En este medio se incorpora la xilosa por que es prcticamente fermentada por
todas las entereobacterias con excepcin de los microorganismo
pertenecientes al genero Shigella.
La lisina se incluye para aumentar la diferenciacin de los microrganismos
pertenecientes al genero Salmonella. Como la cantidad de xilosa es limitada,
una vez que es consumida, utilizan la lisina la cual produce una alcalinizacin
del medio lo que genera que el indicador regrese al color rojo.
En caso de los coliformes lisina positivos, para prevenir la alcalinizacin del
medio por la fermentacin de lisina , se incorpora un exceso de lactosa y
sacarosa.
El medio tambin tiene la capacidad de detectar la produccin de H2S a
travs del sistema indicador del tiosulfato de sodio y citrato frrico amonio
El desoxicolato de sodio es utilizado como inhibidor de los microrganismo
gramm positivos.

Colonia tpicas

bibliografa
http://www.bd.com/resource.aspx%3FIDX%
3D8783

Microbiologa
Caldo de urea
Cervantes Olalde Mauricio
Esparza Rodrguez Fabiola
Gonzlez Brcenas Elisa
Vega Cervantes Jos Alfonso

USO
se puede utilizar, para la determinacin de la
actividad ureasa de las Enterobacterias, as como
para microorganismos de la familia de Brucella,
Bacillus, Micrococcus, Mycobacteria y Proteus. Se
emplea para la diferenciacin de bacterias por
medio de la utilizacin de la urea como nica fuente
de carbono.

PRINCIPIO

La enzima ureasa hidroliza la urea en amonaco y

anhdrido carbnico, ante la variacin de pH por la
alcalinizacin, el indicador rojo de fenol, vira de
amarillo claro a ligeramente rosado o rosa mexicano.
Se utiliza solamente para la deteccin de la actividad
de la ureasa en especies del gnero Proteus que dan
la prueba positiva despus de una incubacin de 8 h.
Si los nutrientes suministrados por el extracto de
levadura se consumen antes de que la bacteria
muestre un crecimiento aceptable no podr
determinarse con exactitud su capacidad de
hidrolizar la urea

 Si un microorganismo es capaz de hidrolizar

la urea, pero no de utilizar el amonaco
como fuente de nitrgeno, no se produce
crecimiento y es posible observar un
resultado falso negativo. No se recomienda
para las bacterias con reaccin de ureasa
retardada.

FORMULA EN GRAMOS POR LITRO DE

AGUA DESTILADA
Extracto de levadura
0.10
Fosfato Monopotsico
9.10
Fosfato Disdico
9.50
Rojo de fenol
0.01
Urea
20.0
pH
6.80.2
A 25 C

La urea es una fuente de

nitrgeno
para
aquellos
organismos que producen
ureasa.
El
extracto
de
levadura es una fuente de
vitaminas, en particular del
Grupo de B esencial para el
crecimiento bacteriano. Los
fosfatos
de
potasio
proporcionan la capacidad
de buffer. El Rojo fenol es el
indicador de pH.

PREPARACIN

Rehidratar 3.87 g
del medio en 100
ml de agua
destilada.

Reposar 10 a 15
minutos.

Cuando se ha
disuelto,
esterilizar por
filtracin.

Conservar en
refrigeracin de
2 a 8 C.

Distribuir en tubos
de ensayo en
volmenes de
0.5 a 2 ml.

Se puede esterilizar en autoclave de 5 a 8

libras de presin durante 15 minutos. ES
IMPORTANTE PROTEGERLO DE LA LUZ.

Caractersticas.
Control fsico-qumico
Aspecto:polvo fino.
Color: rosa claro.
Solubilidad:total.
pH:6,8 0,2
Siembra.
Sembrar grandes inculos por suspensin.
Incubacion.
incubar a 37C durante 48 horas, haciendo
registros peridicos del crecimiento

CONTROL MICROBIOLGICO
Los siguientes resultados, fueron obtenidos en el desarrollo del
medio a partir de clulas tipo, despus de incubacin a
temperatura de 35 2C y observados despus de 24 horas

Resultados.

Bibliografa.
www.condalab.com/.../1226_CALDO_UREA_
Rev_0_Mayo_2010_01.p
depa.fquim.unam.mx/amyd/.../U3c_Prueba
sBioquimicas_17461.PDF
http://microbiologamonitoria.weebly.com/mediosdiferenciales.html