Imunologia PRINCÍPIOS

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Captulo1
Imunologia
AntnioTeva
JosCarlosCoutoFernandez
ValmirLaurentinoSilva
1. Introduo Imunologia
Aimunologiaumacinciarecente.Suaorigematribuda,poralguns
autores,aEdwardJenner,que,em1796,verificouproteoinduzidapelo
cowpox(vrusdavarolabovina)contraavarolahumana,nomeandotalprocessodavacinao.Noentanto,sabidoque,naantiguidade,oschinesesj
inalavam o p das crostas secas das pstulas de varola ou as inseriam em
pequenoscortesnapele,embuscadeproteo.
Osistemaimuneoconjuntodeclulas,tecidos,rgosemolculas
queoshumanoseoutrosseresvivosusamparaaeliminaodeagentesou
molculas estranhas, inclusive o cncer, com a finalidade de se manter a
homeostasiadoorganismo.Osmecanismosfisiolgicosdosistemaimuneconsistemnumarespostacoordenadadessasclulasemolculasdiantedosorganismosinfecciososedosdemaisativadores,oquelevaaoaparecimentode
respostasespecficaseseletivas,inclusivecommemriaimunitria,quetambm
20| ConceitoseMtodosparaaFormaodeProfissionaisemLaboratriosdeSade
podesercriadaartificialmente,atravsdasvacinas.Naausnciadeumsistema
imunefuncional,infeceslevespodemsobrepujarohospedeiroelev-lo
morte.Porm,mesmocomumsistemaimunefuncional,ohomem,porexemplo,podeadquirirumadoenainfecciosaouumcncer,poisarespostaimune
especfica,diantedeumagenteagressor,levatempoparasedesenvolvere,
almdisso,tantoorganismosestranhos,comoclulasneoplsicas,desenvolvemmecanismosdeevasoparafugirdarespostaimune.
Nestecaptulo,seroabordadosconceitosbsicosdosprincipaiscomponentes do sistema imune, os mecanismos de resposta especfica ante os
diversosagentesinfectoparasitrios,comotambmainvestigaodosvestgios
dapassagemdessesagentes,pormeiodemtodoslaboratoriaisparapesquisa
deantgenoseanticorposespecficos,principalpropsitodessetexto,uma
vezquesedestinaaalunosdeescolastcnicasdenvelmdio.
2. rgos, tecidos e clulas
envolvidos na resposta imunitria
2.1.Clulasqueparticipamdosistemaimunitrio
Asrespostasimunessomediadasporumavariedadedeclulasepor
molculasqueestasclulasexpressam(Figura1).Osleuccitossoasclulas
quedesempenhamasprincipaisaes,masoutrasclulas,queseencontram
nostecidos,tambmparticipamdarespostaimunitria,enviandosinaiserecebendoestmulosdosleuccitos.Asclulasqueparticipamdosistemaimunitrio
seoriginamnamedulassea,ondemuitasevoluemparaafaseadulta.Apartir
damedula,epormeiodevasossanguneos,elasmigramjuntocomtodosos
elementoscelularesdosangue.Inclusiveashemcias,quetransportamooxignio,easplaquetasqueparticipamdacoagulao,umavezqueesteselementos se originam das clulas-tronco progenitoras da medula. As clulas que
derivam do progenitor mieloide e do progenitor linfoide so as que mais
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interessam paraoentendimentodasaesdosistemaimunitrio,demodo
que,nestetexto,noseroconsideradososmegacaricitoseoseritrcitos.
O progenitor mieloide o precursor dos granulcitos, fagcitos
mononucleares(macrfagos),clulasdendrticasemastcitosdosistemaimune.Osmacrfagossoasclulasfagocitriasmaisrelevantes.Estasclulasso
aformadiferenciadadosmoncitossanguneos,queseencontramestrategicamentedistribudosemvriostecidosparadarorigemaosistemafagocitrio
mononuclear.Osmicroglicitossoosmacrfagosdocrebro,asclulasde
Kupffersoosmacrfagosdofgado,osmacrfagosalveolaresfazempartedo
tecidopulmonar,entreoutrosmacrfagosresidentesemdiferentestecidos.As
funesdosmacrfagossecaracterizampelaneutralizao,ingestoedestruiodepartculas,incluindoosbiopatgenos,almdeprocessareapresentar
antgenosparaoslinfcitosT.Nestecontexto,soasclulasdendrticasas
maisespecializadasnacapturaenaapresentaodeantgenosparaoslinfcitos
T.Asclulasdendrticasimaturasmigramdosanguepararesidiremnostecidos
erealizamtantoafagocitosequantoamicropinocitose.Apsoencontrocom
umpatgeno,maturamrapidamenteemigramparaosnduloslinfticos,onde
encontramoambienteadequadoparaaapresentaodeantgenos.
Osgranulcitosrecebemessadenominaoporpossuremgrnulosem
seucitoplasmaquesecoramdensamenteporcoranteshematolgicostradicionais.Sotambmchamadosdeleuccitospolimorfonucleares,devidosformas
deseusncleos.Existemtrstiposdegranulcitos,sendoelesosneutrfilos,os
eosinfiloseosbasfilos;todoscomumtempodevidarelativamentecurtoe
produzidosemgrandenmeroduranteasrespostasinflamatrias.
Osneutrfilos,assimcomoosmacrfagoseasclulasdendrticas,so
representantes do grupo de clulas fagocitrias do sistema imunitrio, mas,
diferentementedestasclulas,noapresentamantgenosparaoslinfcitosT.
Osneutrfilossooselementoscelularesmaisnumerososeimportantesda
respostainata.
Os eosinfilos parecem ser importantes, principalmente na resposta

diante de infeces parasitrias ou processos alrgicos, j que seu nmero
aumentanocursodestasreaes.
Afunodosbasfilosprovavelmentesimilarecomplementardos
eosinfilosemastcitos.
Os mastcitos, cujo precursor parece ser comum aos basfilos,
devidoasemelhanasfuncionais,tambmsediferenciamaochegaraos
tecidos onde residem. Eles se localizam principalmente margem dos
vasossanguneoseliberammediadoresqueagemnasparedesvasculares
quandoativados.
Figura1.Clulasqueparticipamdosistemainunitrio
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Oprogenitorlinfoidecomumdorigemaoslinfcitos.Oslinfcitosso
asclulasquereconhecem,especificamente,osantgenos.Suamorfologiatpica
consisteemumapequenaclularedondacomncleoesfrico.Apesardaaparnciauniformemicroscopiatica,vriostiposdelinfcitospodemserdistinguidos
combasenassuaspropriedadesfuncionaiseprotenasespecficasqueexpressam.
Adistinomaisfundamentalconsistenaclassificaodestasclulasemduas
linhagensprincipais,conhecidascomolinfcitosBelinfcitosT.
OslinfcitosB,tambmchamadosdeclulasB(debursaoubolsade
Fabricius, nas aves, e derivadas da medula ssea, nos mamferos), quando
ativados,proliferamesediferenciamemclulasplasmticasou plasmcitos,
quesoasclulasefetorasdalinhagemB,cujafunoprincipalasecreode
anticorpos.OslinfcitosT,ouclulasT(derivadosdotimo),seapresentam
emduasclassesprincipais.Umasediferencia,quandoativada,emclulasT
CD8+oucitotxicas,quematamasclulasinfectadas,aopassoqueaoutra
classedeclulasT,chamadasdeclulasTCD4+ouauxiliares,atuamna
ativao de outras clulas, como os linfcitos B e os macrfagos, alm de
coordenararespostaimunitria.
OreceptordeantgenodaclulaB(BCR)(Figura2)umaformade
anticorpoligadamembranaqueaclulaBpassaaproduzir,apssuaativao
ediferenciaoemclulaplasmtica.Osanticorpossomolculasagrupadas
emumaclassedesubstnciasdenominadasimunoglobulinas,eoreceptorde
antgenodolinfcitoBtambmconhecidocomoimunoglobulinademembrana. A imunidade humoral a principal funo das clulas B e dos
plasmcitos,econsisteemsecretaranticorposnosangueeemoutroslquidos
orgnicos,resultandoefeitosprotetores,mediadosporlquidosteciduais.
OreceptordeantgenodaclulaT(TCR)(Figura2)constituiuma
classeheterogneadeprotenasdemembranaque,emboraestejamrelacionadasevolutivamentecomasimunoglobulinas,sodiferentesdelas,jqueesto
adaptadas para detectar antgenos derivados de protenas estranhas ou

patgenosqueentramnasclulashospedeiras.Todavia,emcontrastecomas
imunoglobulinas,osTCRsnuncasosecretados,demodoqueaclulaT
precisamigraratasreasdelesoparaexercerseusefeitosprotetores,por
meiodecontatodiretocomaclulaalvoouparainfluenciarasatividadesde
outras clulas do sistema imunitrio. Juntamente com os macrfagos, as
clulasTdesenvolvemumacategoriaderespostaimunedenominadaimunidademediadaporclulas.
Figura2.EstruturasbsicasdoreceptordesuperfciedaclulaBedoreceptorT.
A maioria dos linfcitos virgens possui uma sobrevida muito curta,

sendoprogramadaparamorrerempoucosdiasapstersadodamedula
sseaoudotimo.Noentanto,seumadessasclulasrecebersinaisindicandoapresenadeumimungeno(antgenoqueestimulaumarespostaimune
especfica), ela poder responder por meio de um fenmeno conhecido
comoativao,duranteoqualpodesofrervriosciclosdedivisocelular.
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Algumasdasclulas-filhasretomamaoestadoderepouso,tornando-seclulasdememria,quepodemsobreviverporvriosanos.Esteslinfcitosde
memriarepresentamumagrandeproporodasclulasdosistemaimunitrio.
Aoutraprogniedolinfcitovirgemativadodiferencia-seemclulasefetoras,
quesobrevivemapenasalgunsdias,masque,duranteesteperodo,executam
atividadequeresultamemdefesa.
Outraclassedeclulaslinfoides,chamadadeclulasmatadorasnaturais ou clulas natural killer (NK), desprovida de receptores antgenoespecficos, sendo parte do sistema imune inato. Essas clulas circulam no
sangue como grandes linfcitos, com diferentes grnulos citotxicos, e so
capazes de reconhecer e matar algumas clulas anormais, tais como clulas
tumoraiseclulasinfectadasporvrus.Eparecemserimportantesnadefesa
contrabiopatgenosintracelularesnaimunidadeinata.
2.2.Osrgoslinfoidesearedelinftica
Osrgoslinfoides(Figura3)sotecidosorganizadosquecontm
grandesquantidadesdelinfcitosemumambientedeclulasnolinfoides.
Nessesrgos,asinteraesqueoslinfcitostmcomasclulasnolinfoides
soimportantes,tantoparaodesenvolvimentodoslinfcitoseoincioda
respostaimuneadaptativa,comoparaamanutenodosmesmos.Taisrgospodemserdivididosemrgoslinfoidescentraisouprimrios,produtoresdelinfcitos,ergoslinfoidesperifricosousecundrios,quedesempenham a funo de maximizar o encontro entre os linfcitos e os
produtosprocessadospelasclulasapresentadorasdeantgenos,dandoincio resposta imune. Os rgos linfoides centrais so a medula ssea
vermelhaeotimo,umgrandergolocalizadonaporosuperiordotrax.
TantooslinfcitosBcomoasclulasTsurgemnamedulassea,masapenas
oslinfcitosBalisediferenciam.OslinfcitosTmigramparaotimopara
sofrer seu processo de diferenciao. Uma vez completada sua maturao
celular,osdoistiposdelinfcitosentramnacorrentesangunea,migrando
paraosrgoslinfoidesperifricos.Duranteavidaintrauterina,ofgado
fetaldesempenhaopapelqueamedulasseavermelhapassaadesenvolverplenamenteapsonascimento.
Os rgos linfoides perifricos so especializados na captura do
antgeno para possibilitar o incio das respostas imunes adaptativas. Os
microrganismos patognicos podem penetrar no hospedeiro por muitas
portasdeentrada,instalandooprocessoinfecciosoemqualquerstio,mas
oencontrodoantgenocomoslinfcitosacontecernosrgoslinfoides
perifricos:osnduloslinfticos,obaoevriostecidoslinfoidesassociadosssuperfciesdasmucosas.Oslinfcitosestoemcontnuarecirculao
entreessestecidos,paraosquaisoantgenotambmcarreado,vindode
todososlocaisdeinfeco,primariamentedentrodemacrfagoseclulas
dendrticas.Dentrodosrgoslinfoides,clulasespecializadas,comoas
clulasdendrticasmaduras,apresentamoantgenoparaoslinfcitos.
A rede linftica consiste em um extenso sistema de vasos que
coletam o lquido intersticial, fazendo-o retornar para o sangue. Esse
lquidointersticialproduzidocontinuamentepelapassagemdeguae
solutosdebaixopesomolecularatravsdasparedesvascularesquepenetramnoespaointersticial,pelasecreocelulareoutrosfatoresde
excreo.Aoserparcialmentedrenadoparaosvasoslinfticos,passaa
serchamadodelinfa.Alinfafluilentamentepelosvasoslinfticosprimrios,desguaemvasoslinfticosdecalibreprogressivamentemaior,que
convergemparaoductotorcico,edesembocanaveiacavasuperior,
que,porsuavez,devolvetodoovolumeparaacorrentesangunea,num
fenmenodenominadorecirculao.
Localizadosempontosdeconvergnciadaredevascular,osnduloslinfticosconstituemumasriedergosencapsuladosemformade
caroodefeijo,quesedistribuemaolongodosvasoslinfticos.Os
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vasoslinfticosaferentesdrenamofluidodostecidosecarregamantgenos
eclulasinfectadasaosseiosdosnduloslinfticos,ondeosantgenosso
capturados.Osseiossorevestidospororifciosminsculos,quepermitemalinfaeseucontedoatravessaremondulolinfticoeentraremem
contatocomoslinfcitos.Nosnduloslinfticos,oslinfcitosBselocalizam em folculos nas reas corticais, tambm denominadas reas timoindependentes;asclulasTsomaisdifusamentedistribudasemtornodas
reasparacorticais,tambmconhecidascomozonasdeclulasToureas
timo-dependentes.AlgunsdosfolculosdeclulasBcontmreascentrais,denominadascentrosgerminativos,ondeocorreintensaproliferao
doslinfcitosB,apsseuencontrocomoantgenoespecficoeclulasT
auxiliares.Porfim,alinfasaiporumvasolinfticoeferentenoladooposto
dondulolinftico,numaregioconhecidacomohilo.
Obaoencontra-sesituadoatrsdoestmagoefiltraosangueda
mesmaformacomoosnduloslinfticosfiltramalinfaecoletamantgenos.
Tambm captura e se desfaz de clulas vermelhassenescentes.Amassa
principaldestergocompostapelapolpavermelhaeoslinfcitoscircundamasarterolasqueopenetram,formandoreasdapolpabranca,cuja
regiomaisinternadivididaemumacamadalinfoideperiarteriolar,contendoprincipalmenteclulasTerevestidasporumacoroadeclulasB.
Figura3.rgos,tecidoseclulasenvolvidosnarespostaimunitria.
2.3.Tecidolinfoideassociadomucosa
Aexpressotecidolinfoideassociadomucosa(MALT=mucosalassociatedlymphoidtissue)umadescriogeralparaostecidoslinfoidesno
encapsulados,queexistemnasregiessubjacentessmucosas.OsMALTsse
distribuemanatomicamenteeseuscomponentesindividuaisincluem:
Anel de Waldeyer - Anel de estruturas linfoides que circunda a
faringe.formadopelastonsilaseadenoides.
Tecidolinfoideassociadoaosbrnquios(BALT=bronchial-associated
lymphoidtissue)-Agregadoslinfocitriossemelhantes,masorganizados
difusamente,queprotegemoepitliorespiratrio.
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Tecidoslinfoidesassociadosaointestino(GALT=gut-associated
lymphoidtissues)-Incluemfolculoslinfoidesisoladoseoapndice
cecal,almdeestruturasespecializadasdointestinodelgado,asplacas
dePeyer.
Tecidolinfticourogenital
EntreoutrosMALTs(Figura3).
Coletivamente, estima-se que o sistema imune de mucosa contenha

tantoslinfcitosquantoorestodocorpo.Esseslinfcitosformamumgrupo
especialdeclulasqueseguemleisumtantodiferentes.Emboranotavelmente
diferentesemsuaaparncia,osnduloslinfticos,obaoeostecidoslinfoides
associadosmucosademonstramamesmaarquiteturabsica.Cadaumdeles
operasegundoomesmoprincpio,capturandooantgenonoslocaisdeinfecoeapresentando-oapequenoslinfcitosmigratriospara,assim,induzirem
asrespostasimunesadaptativas.Ostecidoslinfoidesperifricostambmproveem
sinaisdesobrevivnciaaoslinfcitosquenoencontramseuantgenoespecfico. Isto importante para manter o nmero correto de linfcitos T e B
circulantes,easseguraquesomenteoslinfcitoscomopotencialderesponder
aoantgenoestranhosejammantidos.
2.4.Recirculaodelinfcitos
OspequenoslinfcitosTeBquesediferenciaramnamedulasseae
notimo,masqueaindanoseencontraramcomoantgeno,soreferidos
comolinfcitosvirgensouemrepouso.Esteselementoscirculamcontinuamentedosangueparaostecidoslinfoidesperifricos,nosquaispenetrampor
meio de interaes adesivas especiais com os capilares e retornam para o
sangue atravs dos vasos linfticos ou, no caso do bao, diretamente ao
sangue.Napresenadeumainfeco,oslinfcitosquereconhecemoagente
infecciososoretidosnotecidolinfoide,ondeproliferamesediferenciamem
clulasefetoras,capazesdecontrolarainfeco.
Quandoocorreumainfecotecidual,osantgenossocapturadospor
clulasdendrticas,quesedeslocamdostiodainfecopelosvasoslinfticos
aferentesparaosnduloslinfticos.Nosnduloslinfticos,essasclulasprocessameapresentamoantgenoaoslinfcitosTqueestorecirculando,os
quaiselasajudamaativar.AsclulasBqueencontramoantgeno,medida
quemigramatravsdondulolinftico,tambmsodetidaseativadascomo
auxliodealgumasclulasTativadas.Umavezqueesseslinfcitosespecficos
tenhampassadoporumperododeproliferaoediferenciao,elesdeixam
osnduloslinfticoscomoclulasefetorasatravsdosvasoslinfticoseferentes.
3. Clulas T
: desenvolvimento, diversidade e ativao
T:
Oslinfcitossoasnicasclulasdoorganismoqueexpressamreceptoresaltamentediversificadosparaoantgeno,oquepermiteoreconhecimento
deumagrandevariedadedesubstnciasestranhas.Essadiversidadegerada
duranteoprocessodedesenvolvimentodoslinfcitosTeB,apartirdeclulas
precursoras.OdesenvolvimentodoslinfcitosTalfabeta(ab)egamadelta
(gd)segueestgiossequenciais,consistindonarecombinaosomticaeexpressodosgenesdoTCR,proliferaocelular,seleoinduzidapeloantgeno
eaquisiodefentiposdecapacidadefuncional.Essasclulasseoriginamde
precursoresdofgadofetaloudamedulasseadeadultosecompletamoseu
desenvolvimento no timo. As clulas T em desenvolvimento no timo so
chamadasdetimcitos.AmaioriadostimcitosimaturosnoexpressaoTCR
ouoscorreceptoresCD4eCD8emigramatravsdocrtex,ondeoseventos
dematuraoocorremquandoexpressampelaprimeiravezoTCReiniciama
maturaoemclulasCD4ouCD8.
Osnveisdeproliferaoeapoptosesoextremamentealtosnostimcitos
corticais,ondecercade95%morremantesdechegarregiomedulardo
timo.OresultadodesseprocessoseletivoarestrioaoMHCprprioea
tolernciaamuitosautoantgenos.Adiferenciaofuncionalefenotpicaem
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clulasTCD4ouCD8ocorrenamedulatmica,easclulasTmadurasso
liberadasparaacirculao.
3.1.Receptoresdeantgenosemolculas
acessriasdoslinfcitosT
OslinfcitosTrespondemaosantgenospeptdicos,quesoexpostospelasclulasapresentadorasdeantgenos(APCs).Oinciodestaresposta requer o reconhecimento especfico do antgeno pelas clulas T, a

adesoestveldasclulasTsAPCseatransduodossinaisativadores.
Cadaumdesseseventosmediadopormolculasdistintas,expressaspelas
clulasT.AsmolculasdeMHCeospeptdeosformamumcomplexona
membranaplasmticadasAPCs.Oreceptorquereconheceessecomplexo
peptdeo-MHCoTCR(Figura2),quedistribudoclonalmente,ou
seja,osclonesdelinfcitosqueapresentamdiferentesespecificidadesexpressamdistintosTCRs.Ossinaisbioqumicos,quesoacionadosnaclula
Tpeloreconhecimentodoantgeno,nosotransduzidospeloTCR,mas
porprotenasnovariveischamadasCD3edzeta(z),queestoligadasde
formanocovalenteaoreceptordoantgenoparaformarocomplexoTCR.
Portanto,nasclulasT,oreconhecimentodoantgenobasicamenterealizadopordoisgruposdemolculas:umreceptorparaoantgenoaltamente
varivel,oTCR,eprotenassinalizadorasnovariveis(CD3ecadeia z).
OutrasmolculasacessriasfuncionamcomomolculasdeadesoparaestabilizaraligaodasclulasTsAPCs,permitindoqueoTCRmantenha
ntimocontatocomoantgenoduranteotemposuficienteparaatransduo
dossinaisnecessriosativaodessasclulas.
As clulas T que expressam o TCR d pertencem a uma linhagem
distintadasclulasTrestritasaoMHC.ApercentagemdasclulasT d
muitovarivelnosdiferentestecidosdasdiferentesespcies,normalmenteno
excedendomaisdoque5%.Elasnoreconhecemosantgenospeptdeos
associadossmolculasMHCenosorestritasaoMHC.Algunsclones
dessasclulasreconhecemumapequenamolculaquepodeserapresentada
pormolculassimilaressdaclasseIdoMHC,ouseja,umaapresentaono
clssicademolculasnormalmenteencontradasnasmicrobactriaseemoutros
microrganismos.Adiversidadelimitadadasclulas dsugerequeosligantes
dessesreceptoressobemconservados.Elaspodeminiciararespostaimune
contraumpequenonmerodemicrorganismosantesmesmodorecrutamento
dasclulasTantgeno-especficasab.
AlmdoscomponentesdocomplexoTCR,asclulasTapresentam
vriasprotenasdemembrana,asquaisexercempapelcrucialnaresposta
destasclulasnoreconhecimentodoantgeno.Essasmolculaspresentes
namembranadelinfcitosligam-seespecificamenteaoutrasmolculasda
membrana de outras clulas, como as APCs, clulas do endotlio de
vasos e da matriz extracelular. Essas molculas no apresentam regies
variveis, no so polimrficas, so idnticas em todas as clulas T de
todos os indivduos de uma mesma espcie, e so responsveis pela
transduodesinaisbioqumicosparaointeriordasclulasT.EssapropriedadeasseguraqueasclulasTeasAPCspermaneamligadasotempo
suficienteparapermitiraosTCRsaoportunidadedelocalizar,reconhecer
eresponderaocomplexopeptdeo-MHCnaAPC.
3.2.CorreceptoresCD4eCD8:Receptoresenvolvidosna
ativao
AsmolculasCD4eCD8soprotenasdasclulasTqueseligams
regiesnopolimrficasdasmolculasdeMHCetransduzemossinaisque,
juntamentecomossinaisliberadospelocomplexoTCR,iniciamaativaodas
clulasT.Normalmente,asclulasT abmadurasexpressamCD4ouCD8,
embora existam referncias da expresso de ambos os marcadores. Esses
correceptoresinteragemcomasmolculasdeMHC,quandooTCRreconhe-
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cedeformaespecficaocomplexopeptdeo-MHCnaAPC.Cercade65%
dasclulasT abmadurasdosangueedostecidosexpressamocorreceptor
CD4e35%doCD8.
4. Natureza dos antgenos
Oantgeno(dogregoanti,contraegen,gerar)qualquersubstnciasolvel,celularouparticuladaquepodeserespecificamenteligadapor
umanticorpoouporumreceptordeantgenodeclulaT.Osantgenos
possuemduaspropriedades:adaimunogenicidade,queacapacidade
deinduzirumarespostaimuneespecfica,eadaantigenicidade,quea
capacidadedeinteragircomoslinfcitosToulinfcitosBjsensibilizados.
Assim,todasassubstnciasimunognicassotambmantignicas.Asmolculasquedesencadeiamarespostaimunesochamadasdeimungenos.
Pequenassubstnciasqumicasnosocapazesdeestimularumaresposta
e,portanto,recebemonomedehapteno.Paratercapacidadedeinduzir
uma resposta imune, o hapteno ligado a uma macromolcula, que
chamadadecarreadora.Ocomplexohapteno-carreador,aocontrriodo
haptenolivre,podeatuarcomoumimungeno.
4.1.Determinanteantignico
OsstiosdeligaodosanticorposedosTCRsinteragemcomuma
rea muito pequena das macromolculas antignicas, que chamada de
determinanteantignicoouepitopo.Portanto,amenorporodamolcularesponsvelpelaligaoaolinfcitoouanticorpo.Apresenade
vriosdeterminantesiguaischamadadepolivalnciaoumultivalnciae
cadaumpodeserligadoporumamolculacomregiovarivel.Assuperfciescelulares,incluindoosmicrorganismos,geralmentepossuemumagrande
quantidadededeterminantesantignicos.
4.2.Relaofilogenticadosantgenos
Aestimulaodelinfcitosdegalinhascomprotenadepatoresultaem
uma resposta imune muito baixa. Por outro lado, se inoculadas em galinhas,
protenasdecoelho,arespostaimunebastanteelevada.Istoaconteceporque
quantomaisprximaforarelaofilogentica,menorseroestmuloeviceversa. Existe pouca diferena entre as protenas de galinhas e patos e muita
diferena entre as protenas de aves e mamferos. Embora este conceito da
relaofilogenticareflitaboapartedasaplicaesimunolgicas,nopodeser
tomadocomoregra.Ainduodeumarespostaimunemuitoespecficafuno
diretadasemelhanabiolgicaentreafontedoantgenoeoanimalreceptor,
aindaquesejamenosintensa.Lebresecoelhospertencemmesmafamliaeso
bastantesemelhantes,tantomorfolgicaquantofisiologicamente.Portanto,aose
injetarprotenasdecoelhoemlebre,poderseobteranticorposmuitoespecficos,ouseja,anticorposquesreagemcontraprotenadecoelho.
4.3.Pesomolecularecomplexidademolecular
Namaioriadosantgenos,quantomaiorforamolcula,maiorsero
nmero de epitopo; e quanto maior a complexidade, maior ser a
imunogenicidade. Um antgeno complexo contm vrios determinantes
antignicos,ondealgunsdosquaissomaiseficientesnainduodaresposta
imuneesochamadosimunodominantes.
4.4.Configuraoespacialeacessibilidade
Aimunogenicidadeeaantigenicidadedeumaprotenanodepende
apenas de sua estruturaprimria(isto,dasequnciadeaminocido),mas
tambmdasestruturassecundrias,terciriaseatquaternrias.Assim,setratarmosumaprotenapelocalor,ouagentesqumicosdesnaturantes,einocularmos
estaemumanimal,poderemosobteraformaodeanticorposcomespecificidade
diferentedoqueseinoculssemosaprotenaintacta.Aconfiguraoespacialde
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diversosepitoposemumanicamolculadeprotenapodeinfluenciaraligao
doanticorpodevriasformas(Figura4).Areaimportanteparaaimunogenicidade
deveficaracessvel,nasuperfciedamolcula.
Figura 4. Distribuio dos determinantes antignicos sequenciais e no
sequenciaisemumamacromolculaproteica
4.5.Formadeadministraoeadjuvantes
Adosedoantgeno,aviaeoesquemadeimunizao,assimcomoo
usodeadjuvantes,sofatoresatuantesnainduodarespostaimune.As
viasdeinoculaosubcutnea,intradrmicaeintramuscularlevamgeralmente
osimungenosparaosnduloslinfticosregionais,e,maisfrequentemente,
induzemaimunidadecelular.Osantgenosinoculadosporviaendovenosae
intraperitonialacumulam-sepredominantementenobao,emaisfrequentemente induzem a uma imunidade humoral. O adjuvante melhora a
imunogenicidade de compostos com ele misturado, sem interferir na
especificidadedaresposta.Emmedicinapreventiva,somuitasvezesadicionadossvacinasparareduziradoseeafrequnciadeinjeesdosantgenos
utilizadosparaaimunoprofilaxiadedoenasinfecciosas.Normalmente,o
antgenoaprisionadoporele,formandodepsitos,oqualliberadoaos
poucosporperododetempomaisextenso.Comisso,hoaumentodo
tempodeexposiodoantgenonoorganismopeloretardamentodesua
destruio,estimulando,assim,amigraodeclulasparaolocaldeinoculao
eaumentandoainteraodestasclulascomomesmo.Otipodeadjuvante
maiscomumenteusadoemestudosexperimentaisoadjuvantedeFreund,
que pode ser classificado em dois tipos: AIF (Adjuvante Incompleto de
Freund),queconstitudoporleomineralneutroelanolinaouArlacel;eo
ACF(AdjuvanteCompletodeFreund),quealmdoleomineralneutro
mais lanolina, adicionado um componente bacteriano, normalmente o
Mycobacterium,mortopelocalor.Almdesses,outrosadjuvantessoutilizados,comoosulfatodealumnio,ohidrxidodealumnio,aIL-12,entre
outros.Dependendodacomposio,adjuvantespodemounoserusadosem
sereshumanos.
Basesqumicasdaespecificidadeantignica
Anticorposformadoscontradeterminadassubstnciastmumareao
fortecontraelas,principalmenteseosanticorposinteragemcomosantgenos
especficosqueinduziramasuaformao(antgenoshomlogos),maspodem
reagir com a mesma ou menor intensidade com outros antgenos, que so
chamadosdeantgenosheterlogos,pormcomestruturasemelhante.Essas
reaescomantgenosheterlogossodenominadas reaescruzadas. As
reaescruzadaspodemocorrerbasicamenteemfunodasimilaridadeentre
doisdiferentesdeterminantesantignicos,ouaindapelofatodedoisantgenos
diferentesapresentaremomesmodeterminanteantignico.
5. Diversidade das imunogobulinas
Osanticorpossoconceituadoscomoglicoprotenasglobularescom
funoimunitriaepertencemsuperfamliadasimunoglobulinas.SosintetizadosporlinfcitosBe,principalmente,porplasmcitos,emrespostaao
estmuloimunognico.Interagem,especificamente,comosimungenos,que
estimulamsuabiossntese;desencadeiamvriosmecanismosnafaseefetora
Imunologia | 37
da resposta imune que, frequentemente, resultam em anular a ao de

biopatgenos,pormeiodaativaodosistemacomplemento,opsonizao
dosantgenosparafagocitose,citotoxicidadecelulardependentedeanticorpo
(ADCC),emqueosanticorposmarcamosmicrorganismosparaseremdestrudos
pelasclulasdosistemaimuneinatoereaesdehipersensibilidades,entre
outrasocorrem.
Estasfunessoestruturalmenteseparadasnamolculaearegiode
ligaoaoantgenovariaamplamente,sendoconhecidacomoregiovarivelou
regioV.Aregiomolecularqueparticipadafunoefetoraconhecidacomo
regioconstanteouC,enovariadomesmomodo,emboraapresentecinco
formasprincipaisqueseespecializaramnaativaodediferentesmecanismos.
Anotveldiversidadedasmolculasdosanticorposconsequnciade
ummecanismoaltamenteespecializado,pelosquaisosgenesexpressosso
reunidosporrearranjosdeDNA,quejuntamdoisoutrsdiferentesseguimentosparaformarumgenederegiovarivelduranteodesenvolvimentodas
clulasB.Subsequentesrearranjosnucleicospodemreunirogenecomposto
da regio varivel e qualquer gene da regio constante, produzindo assim
anticorposdecadaumdos5isotipos.
Estruturalmente(Figura5),aimunoglobulinaformadaporduascadeias
leves(L-light-leve),idnticas,constitudasdepolipeptdeosdecercade25
milDaltonsededuascadeiaspesadas(H-heavy-pesado),tambmidnticas,
compesomolecularde50milDaltonsoumais.Cadacadeialeveestligadaa
umacadeiapesadaporpontesdissulfdricas.Onmeroexatoeasposies
destas pontes entre as cadeias diferem entre as classes e subclasses de
Imunoglobulinas. Alm disso, ambas as cadeias, leves e pesadas, possuem
umaregiovariveleoutraconstante.Portanto,aimunoglobulinapossuina
cadeialeveumaregioconstante(CL) e uma varivel (VL).Omesmona
cadeiapesada,umaregioconstante(CH)eumavarivel(VH).Existemdois
tiposdecadeiasleves,akappa(k)ealambda(l).Emhumanos,60%das
cadeiaslevessodotipokappa,e40%sodotipolambda.Osprimeiros
110, ou mais, aminocidos da regio aminoterminal das cadeias leves ou
pesadasvariammuitoentreosanticorposdeespecificidadediferentesepor
istosochamadasderegiovarivel.
A molcula de imunoglobulina pode ser digerida por enzimas
proteolticas.Adigestopelapapanaquebraamolculaemtrsfragmentos
(Figura5):doisfragmentoschamadosFab(fragmentantingenbinding),que
seligaaoantgenoespecfico,eumfragmentodenominado Fc(fragment
crystallizable,fragmentocristalizvel),porformarcristaisquandoarmazenado
emlocaisfrios.OsfragmentosFabsoosquecontmascadeiasleves(L)
completas,emparelhadascomosdomniosV(varivel)eC(constante)da
cadeiapesada,enquantooFc,contmapenasodomnioC(constante).A
papanaclivaamolculanaporoaminoterminaldaspontesdeenxofre,
permitindoqueasmetadescarboxiterminaisdaFcpermaneamunidas,deixandoofragmentoFclivre.Japepsina,clivanamesmaregio,masna
porocarboxiterminaldaspontesdissulfrdicas,produzindoo(Fab)2,onde
osdoisbraosdosAcpermanecemunidos.
Figura5.Estrutruabsicadeumaimunoglobinaeaformaodosfragmentos
peladigestoenzimtica.
Imunologia | 39
5.1.Geraodadiversidadenarespostaimune
humoralematuraodaafinidade
MesmoarespostaaumAgsimplesdiversa,commuitasmolculasde
Igs,cadaumacomafinidadenicaeespecificidadeacurada.DuranteaorganizaodosdiferentessegmentosgenticosnecessriosparaproduzirumamolculadeIg,combinaesaoacasodosdiferentescomponentesgnicosproduzemumaenormediversidadepotencial.
DuranteasfasesiniciaisdodesenvolvimentodolinfcitoB,aIgMde
membranaproduzidacomoreceptor.AmudanadeisotipoemclulasB
ocorreaoseremestimuladaspeloantgeno.Istoasseguraamanutenoda
mesmaregiovarivel,garantindoaespecificidadeaoAgcorrespondente,
expressanosdiferentesisotipos,aosquaisorientamdiferentesfunesefetoras.
UmadiferenabsicaentreoAcproduzidonarespostaprimriaenarespostasecundriaasuaafinidade.OAcdaclasseIgM,produzidoparaum
Agnarespostaprimria,tendeaserdeafinidaderelativamentebaixaepode
contarcomumaavidezadicional,causadaporsuaestruturapentamrica,para
ligar-seeficientementeaoAg.Entretanto,aIgGeoutrasclassesproduzidas
narespostasecundriatendematerumaafinidademaior.Valeressaltarqueo
aumentogradualdaafinidadedoAcpeloAgindutor,queobservadono
curso de uma resposta, acontece no ndulo linftico. Este fenmeno
(maturaodaafinidade)aconsequnciadahipermutaosomticados
genesdeIgacopladacomaseleodasclulasBcomIgdesuperfciede
altaafinidade.Amaturaodaafinidade,nocursodeumarespostaimune,
podeserencaradacomoumprocessodarwiniano,requerendoprimeiroa
gerao de variabilidade nos receptores de clulas B e ento a seleo
daquelescommaiorafinidadepeloAg.Apsesseprocesso,asclulasB,
queseligamaoAgdemodobem-sucedidoesobrevivemseleo,saem
do centro germinativo do ndulo linftico para tornarem-se clulas B de
memriaouclulasplasmticassecretorasdeAc.
5.2.Distribuioepropriedadesdosisotipos
Osagentesinfectoparasitriosdevemacharseuscaminhosparaamaior
partedoslocaisdoorganismohospedeiro,eosanticorpostambmdevemser
amplamentedistribudosparacont-los.Osanticorpossodistribudospor
difusoatravsdemecanismosespeciais,paralev-los,porexemplo,paraos
pulmeseointestino.Anticorposdediferentesisotipos(Figura6)operam
emlocaisdiferentes.OsprimeirosanticorposaseremproduzidosnumarespostaimunehumoralsosempreasIgMs.Estessoproduzidosantesquea
clulaBtenhasofridohipermutaosomtica;portanto,tendemaserdebaixa
afinidade,comovistoanteriormente.Estasmolculasformampentmeros,cujos
10stiosdeligaocomoAgpodemseunirsimultaneamenteaantgenos
multivalentes,taiscomoospolissacardeosdeparedecelularbacteriana.Esta
estruturapentamricatambmtornaaIgMcapazdeativarocomplementode
maneiramaiseficaz,oquecontribuiparaocontrolemaiseficientedeuma
infeco.QuantoIgD,noseconhecemuitobemasuafuno,masparece
exercer um papel na diferenciao dos linfcitos B induzida pelo Ag. O
principalisotipodeimunoglobulinanosangueenosfluidosextracelularesa
IgG,considerandotodasassubclasses(IgG1,IgG2,IgG3eIgG4).AIgG
tempropriedadesdiversas,dentreasquais,confereproteoaofeto,poisa
nicaclassedeimunoglobulinahumanaquepodesertransportadaatravsda
placentadiretamenteparaacorrentecirculatriadofeto.AIgGtambmatua
naneutralizaodetoxinas,imobilizaodebactrias,sensibilizaoparaNK,
ativaodocomplementoeopsonizao.
AIgAaprincipalimunoglobulinapresenteemsecreesexternas,
comosaliva,muco,suor,sucogstricoelgrimas.Almdisso,aprincipal
imunoglobulina contida no colostro e no leite, e deve ser no neonato a
principalfontedeproteocontrapatgenosnointestino.AIgAsedivide
emduassubclasses,IgA1eIgA2.AIgApresentenoplasmaencontradana
formamonomricaeempequenasconcentraes,enquantoaformadimrica
Imunologia | 41
encontrada em grandes concentraes nas regies mucosas do organismo.

Estasprevinemainvasodebactriasouapenetraodetoxinasnasclulas
epiteliais.AIgEestdifundidademaneiramoderadanosespaosextravasculares
etemcomoprincipalpropriedadeasensibilizaodemastcitosebasfilos,
promovendoreaoinflamatria,atravsdaliberaodemediadoresqumicos
como a histamina, que, por sua vez, promove vasodilatao, permitindo a
passagemdeAcsdovasoparaarealesada,efatoresquimioatraentesque
recrutamfagcitosparaolocaldeinfeco.Almdisso,podemestarenvolvidasemprocessosalrgicosenaajudaparaeliminaodehelmintos,quando
sensibilizameosinfilos.
Figura6.Estruturadoscincoprincipaisisotiposdeimunoglobulinashumanas
5.3.Polimorfismodasimunoglobulinas
QuandoumaIgusadacomoAg,elatratadacomoqualqueroutra
protenaestranhaefazdesencadearumarespostadeAc.Podeserproduzido
Acanti-IgquereconheaaminocidoscaractersticosdoisotipodoAcinjetado. Tambm possvel gerar Acs que reconhecem diferenas no Ac de
membrosdamesmaespcieetalfenmenosedevevariaogenticaou
polimorfismo.Taisvariantesallicassochamadasdealotiposerepresentam
pequenasdiferenaspolimrficasnosloci,quecodificamasregiesconstantes
dascadeiaslevesepesadas.ContrastandocomosAcsanti-isotipos,osAcs
antialotiposreconheceroIgdeumdadoisotipoemalgunsrepresentantesde
umadadaespcie.Finalmente,asvariaesnasequnciadosepitoposdeuma
Igsoconhecidascomoidiotipos(Figura7).
ParaaproduodeAcsaltamenteespecficos,aclivagempelapapana
(Figura5)essencial,poisestaenzima,comojfoiditoanteriormente,corta
amolculaantesdaspontesdesulfeto,oquemantmaporoFcinteira,ea
produodosAcseroaltamenteespecficascontraaregioFcdaqueleisotipo.
QuandosedesejaumamolculadeAcquenoreajacomosistemacomplementoenosefixeemreceptoresparaFcdesuperfciecelular,cliva-seaIg
com a pepsina, que corta depois das pontes de sulfeto, o que mantm a
frao(Fab)2ntegra,permitindoaligaoespecficacomoalvodesejadoe
impossibilitandoasaesefetorascaractersticasdoisotipo.
Figura 7. Localizao das variaes isotpicas, alotpicas na molcula de
imunoglobina.
Imunologia | 43
5.4. Anticorpos monoclonais
Em1975,GeorgesKhlereCesarMilsteinplanejaramummtodoparaa
preparaodoanticorpomonoclonal(Acmo),atravsdafusodaclulaBativada
normalprodutoradeanticorpocomumacluladomieloma(umaclulaplasmtica
cancerosa).Nesteevento,produziramumaclulahbrida(hibridoma),quepossua
aspropriedadesdecrescimentoimortaldacluladomielomaesecretavaoAc
produzidopelaclulaB.
OsclonesresultantesdasclulasdohibridomaquesecretamgrandesquantidadesdeAcmopodemserindefinidamentecultivadas.OshibridomasdeclulasB
soproduzidosutilizandopolietilenoglicol(PEG)parafusionarasclulasdomieloma
comasclulasBdeanimaisqueforamimunizadoscomoAg,atravsdoqualse
desejaproduzirosanticorpos.Asclulasdomielomacontribuemparaocrescimento imortal das clulas fusionadas, e as clulas B contribuem com a informao
genticaparaasntesedoAcespecficodeinteresse.Ascondiesdoprocedimentodevempermitirseletivamenteasobrevivnciaeocrescimentosomentedos
hibridomas.Paratal,utilizadoomeioHAT(hipoxantina,aminopterinaetimidina).
Nestemeio,aaminopterinabloqueiaasntesedeDNApelaviade novo.Na
presenadeaminopterina,asclulasdevemusaraviadesalvamento,ondeas
enzimascatalisadorassoafosforribosiltransferasehipoxantina-guanina(HGPRT)ou
atimidinaquinase(TK),paraproduziroDNA.Umamutaoemqualqueruma
destasduasenzimasbloqueiaahabilidadedaclulaemusaraviadesalvamento.
Portanto,clulasdomielomasozinhasmorrero,poissodeficientesparaasenzimas
HGPRTouTK,essenciaisparaaviadesalvamento.Somenteashbridasiro
sobreviver,poisaclulaBcontribuicomaenzimaquefaltaparaaviadesalvamento.
EmboraasclulasBnofusionadassejamcapazesdesobrevivernomeioHAT,
estasnovivemporperodosextensosinvitroemorrem.
Apsaobtenodoshibridomas,estesdevemserdiludosedistribudosem
placasdeculturaapropriadanumaconcentraode0,5clulapor poo. Tal
procedimentonosdaracertezadequeoAcproduzidosejaoriundode
umnicoclone,poiscomonoexistemeiaclula,teoricamente,teremosum
poovazioeoutrocomapenasumaclula.Feitoisso,cadahibridoma,aps
multiplicaoeproduodeAc,serexaminadoportestesorolgico,tendoem
vistaaidentificaodoshibridomasdesejados,ouseja,aquelesquesintetizamo
anticorpomonoclonalquereajacomoAgcorrespontente.Umavezidentificados,oshibridomassoinduzidosproliferao,tornando-seassimumafonte
inesgotveldeanticorposaltamenteespecficos.
OsAcmosomuitoteiscomoreagentesparadiagnstico,examesde
imagemeprocedimentosteraputicosnaclnicamdica.Paradiagnstico,podem
serutilizadosnadetecodegravidez,diagnsticodenumerososmicrorganismos
patognicos,medidasdenveissanguneosdevriasdrogas,tipagemsangunea,
tipagemdeantgenosdehistocompatibilidade,caracterizaofenotpicadediversos
tiposcelularesedetecodeantgenosproduzidospordeterminadostumores.Por
exemplo,paraessepropsito,Acmoradiomarcadospodemserutilizadosinvivo
nadetecooulocalizaodeantgenostumorais,permitindodiagnsticosprecoces
dealgunstumoresprimriosoumetastticosnospacientes.Naimunoterapia,oAc
moespecficoparaumdeterminadoAgtumoraldesuperfcie,acopladocomum
quimioouradioterpico,podeserpotenteagenteteraputico.
6. Sistema completo
Onomecomplementofoioriginadoapartirdaatividadecomplementarde
protenasnaaobactericidadealgunsAcs.Osistemacomplementoumcomplexoproteicoexistentenoplasma,sobaformainativa,constitudoporsubstncias
termolbeise/outermoestveis;equetemcomofunoaeliminaodeumagente
estranhopelaativaodemecanismosinespecficos,queseconstituide:
Fagocitose-quandoalgumasprotenasativadasdocomplementounem-se
a bactrias, opsonizando-as para ingesto pelos fagcitos portadores de

receptoresdocomplemento;
Imunologia | 45
Reaoinflamatria-quandoospequenosfragmentosdeprotenas
promovemeventosvasculareserecrutamfagcitosaolocaldaatividadeinflamatria.
Lise-quandoumavezdesencadeadaacascata,oscomponentesterminais
docomplementolesamcertasbactrias,vruseclulascomaformaode
porosnamembranacelular.
Almdessastrsfunes,osistemacomplementotambmresponsvel
peladepuraoimune,queconsistenaremoodecomplexosimunesdacirculao
nobaoenofgado.Estesistema,comcercade30protenasoumais,interagepor
ativaoenzimtica.OcomplementopodeagirsozinhooucomAcesoconhecidas3vias,aclssica,aalternativaeaviadaslectinas.Aviaclssicaativadapor
complexos imunes, enquanto as vias alternativa e das lectinas so ativadas por
microrganismos.Todasasviasdeativaoconvergemparaumaetapafinaldereao
emcadeiadenominadasequnciacomum(Figura8).
Figura8.Viasdeativaodosistemacomplemento
Noprocessodeativao,queenvolveumasriedeetapasproteolticas,
umaprotenaprecursorainativaclivadaparafornecerumgrandefragmento
ativo;estaseunesuperfciecelularecontribuiparaaprximaclivagem,e
umpequenofragmentopeptdicoqueliberadoservecomomediadorde
respostainflamatria.Cadaumadastrsviasdeativaogeraumaconvertase
deC3porumcaminhodiferente,determinandoqueasprincipaismolculas
efetoraseoseventostardiossejamosmesmosparaastrsvias.importante
lembrarqueaativaoinadequadaeapersistnciadosefeitosinflamatrios
sopotencialmenteprejudiciaisaoorganismo,demodoqueasuaregulao
precisa ser bem rigorosa. E uma das maneiras de controle se resume ao
pouqussimotempoqueoscomponentes-chavespermanecemativos(milsimosdesegundos),amenosqueseliguemaumasuperfciecelular.Almda
curtavida-mdiadosfragmentosdocomplemento,existemvriospontosna
viadeativao,nosquaispodematuarprotenasreguladoras,oqueprevine
aativaoinadvertidadocomplementosobreclulasdohospedeiroeevitaa
lesodeclulasdoorganismo.
Quanto nomenclatura, todos os componentes da via clssica so
designadospelaletraC,seguidaporumadesignaonumricasimples:C1,
C2.Oscomponentesforamnumeradospelaordemdedescobertaeno
segundoasequnciadereaes(C1,4,2,3,5,6,7,8e9).Quanto
aos produtos de clivagem, so designados por letras minsculas, onde o
maiorfragmentorecebealetrab(excetoofragmentoC2,querecebealetra
a)eomenor,aletraa.Oscomponentesiniciaisdaviaalternativa,emvezde
seremnumerados,soindicadospelasletrasmaisculasBeD,eseusprodutosdeclivagemtambmsodesignadospelasletras bea,ondeomaior
fragmentoBbeomenor,Ba.Quantoaoscomponentesativados,recebem
umalinhahorizontalsuperior,porexemplo,Bb.
Imunologia | 47
6.1.Ativaodaviaclssica
OcomponenteC1umcomplexoformadoportrsprotenasC1q,
C1reC1s.UmavezformadoocomplexoAg-Ac,ocomponenteC1qse
liganaregioFcdoAc,dandoincioaumareaoemcascata,ondeC1q
ativaduasmolculasdeC1rcapazesdeseligaraoutrasduasdeC1s,
resultando no complexo C1q-C1s-C1r-C1r-C1s, que uma serina
protease.Destaforma,C1satuaemC4eC2,dissociando-asemC4ae
C4b,C2aeC2b.Nestaetapa,auniodeC4baC2b(emalgunslivros,
C2a)formaaC3convertase.ApsaformaodaC3convertase,esta
clivaC3emC3aeC3b.OC3afraomaisabundantenoplasmaeo
mais importante entre os componentes do complemento, pois inmeras
molculasdeC3bpodemseligarsuperfciedeumpatgeno.Alguns
fragmentosC3bseligamareceptoresdamembranaeatuamcomoopsoninas,
facilitandoafagocitose,outrosfragmentosdeC3bseligamaC3convertase,
originandoaC5convertase(C4bC2bC3b)daviaclssica(Figura9),
quevaiatuaremC5dissociando-oemC5aeC5b.Comadissociaode
C5,inicia-seumaetapacomumatodasasviasdeativaodocomplemento,ondeafraoC5binteragecomC6,queabreumstiodeligaopara
C7. Por sua vez, o complexo C5bC6C7 deposita-se na superfcie da
membranaeabreostiodeligaoparaC8,quepenetranamembranada
clula.OC8,ento,abreumstioparaC9,que,apsaligaodevrios
C9, forma um canal transmembrnico ou poro hidroflico, chamado de
complexo de ataque membrana (MAC), ocasionando lise celular e
desequilbrioosmtico.importanteressaltarquenocursodacascatado
sistema complemento, os fragmentos menores C4a, C2a, C3a e C5a
liberadosnointerstcio,sopotentesmediadoresinflamatrios.
Figura9.Ativaodacascatadocomplementopelaviaclssica.
6.2.ViadasLectinas
Aviadaslectinas(Figura10)semelhanteviaclssica.Aslectinasso
protenas,ouglicoprotenas,queseligamacarboidratosepodemativaravia
clssica do complemento na ausncia do complexo antgeno-anticorpo. A
principallectinaaprotenaligadorademanose(MBL),quefazopapelde
C1q ao se ligar resduos de carboidratos da superfcie de uma bactria
ativadoraououtrassubstncias.AMBLestassociadacomduaspr-enzimas
MASP-1eMASP-2(SerinaProteaseAssociadaaMBL).QuandoaMBL
seligaaosgrupamentosmanoseterminaisnoscarboidratosbacterianos,MASP1eMASP-2soativadasecontinuamaativaraviaclssica.
Imunologia | 49
Figura10.Ativaodacascatadocomplementopelaviadaslectinas
6.3.ViaAlternativa
Comexceodaetapainicial,oseventosdaviaalternativa(Figura11)
sohomlogosaosdaviaclssicaedaslectinas.Aviaalternativaconstantementeativada,emtaxamuitoreduzida,aqualaumentadrasticamentenapresenadesuperfciesativadorasadequadas,comoasmembranascelularesde
microrganismos.EstaviapodeserativadapelaligaodoC3boudeuma
formahidrolizadaespontaneamente,conhecidacomoiC3b,superfciedo
patgeno.EsteseligaaofatorB,formandoC3bB,componentesuscestvel
aofatorD,umaproteasedoplasma.OfatorDclivaocomponenteBemBa
eBb,ondeBbpermaneceligadoaoC3b,formandoamolculaC3bBbque
aC3convertasedaviaalternada.AC3convertasedaviaalternativaproduzirmaisC3b,tornandoosistemamaisativo,poismuitosfagcitospossuem
receptoresparaestecomponente.AC3convertasedaviaalternativaextremamenteinstvele,porisso,costumasofrerrpidadissociao.Noentanto,
umaprotenaplasmticadenominadaproperdinaseligaaestaconvertaseea
estabiliza,diminuindosuadegradaoepermitindoacontinuaodacascata.
Nestavia,algunsC3bseligamaoC3bBbeformamaC5convertasedavia
alternadaC3b2BbouC3bBbC3b.EstecomplexoclivaC5emC5aeC5b,
dandoincioasequnciacomum,ondeC5biniciaocomplexodeataque
membrana,ligando-seaC6,C7,C8eC9(Figura12).
Figura11.Ativaodacascatadocomplementopelaviaalternativa.
Figura12.Sequnciafinaldacascatadocomplementocomumatodasasvias
deativao,ondeC5biniciaocomplexodeataquemembrana,ligando-sea
C6,C7,C8eC9.
Imunologia | 51
7. Complexo principal de histocompatibilidade
Todoorganismomulticelularpossuialgumsistemadedefesaquedistingueagentesinfectoparasitrioseelimina-osdohospedeiro.Maisainda,os
grandesvertebradostmumsistemaimunemaisevoludoquepodediscriminar
oqueestranhoefazerumarespostaseletivaparaomesmo.Avantagemde
talimunidadeespecficaarpidaadaptaodosistemaimuneaosagentes
patognicosquesomaisfrequentementeencontradosnomeioambientelocal. Esta capacidade conseguida atravs do complexo principal de
histocompatibilidade,cujosprodutosdesempenhamumpapelnoreconhecimentointercelularenadiscriminaoentreoprprioenoprprio.Aidentificaodasmolculasdocomplexoprincipaldehistocompatibilidade(MHC)
aconteceupelainvestigaodasuafunonarespostaimunolgicaaostumores,narejeiodetransplantesdepeleenocontroledarespostaimune.
7.1.EstruturadasmolculasdoMHC
OsgenesquecodificamasmolculasdoMHCestolocalizadosno
cromossomo6humanoeno17emcamundongos,denominadosantgenos
leucocitrioshumanos(HLA)edehistocompatibilidade(H-2),respectivamente. O MHC pode ser dividido em quatro subconjuntos de genes ou
classes:classesI,II,IIIeIV,sendoosdeclasseIeIIligadosaoprocessamento
eapresentaodeantgenos,enquantoosgenesquecompemasclassesIIIe
IVcodificamparaoutrasprotenas,estandoalgumasrelacionadascomarespostaimune,taiscomocomponentesdosistemacomplemento,algumascitocinas,
etc.Emhumanos,existemtrslociquecodificamasmolculasdeclasseI,os
quaissodenominadosHLA-A,HLA-BeHLA-C,etrs locignicosdo
MHCdeclasseII,quesodenominadosHLA-DP,HLA-DQeHLA-DR.
Normalmente,umindivduoherdaduascpiasdecada locusgnico(umde
cadaprogenitor).Assim,emhumanos,temosseislocideclasseIeseislocide
classe II. Todos esses loci apresentam alto grau de polimorfismo, ou seja,
apresentammltiplosalelosnapopulao.AsmolculasdoMHCdeclasseI,
queestopresentesnamaioriadasclulasnucleadas,soreconhecidasprincipalmentepeloTCRdelinfcitosTCD8,aopassoqueasmolculasdeclasse
II,presentesprincipalmentenasuperfciedasclulasapresentadorasdeantgenos
profissionais,soreconhecidaspeloTCRdoslinfcitosTCD4.
7.2.MHCdeclasseI
AsmolculasdoMHCdeclasseIsoexpressasnamembranacelular
damaioriadasclulasnucleadasdosvertebrados.Suaestruturaconstituda
porumacadeiaa(alfa)deaproximadamente45kDa,queatravessaamembranaplasmtica.Aoutraa b2-microglobulinade12kDaqueseencontra
fracamenteligadamembrana.Osgenesquecodificamacadeia a(varivel)
estolocalizadosdentrodaregiogenmicadoMHC,enquantoosgenes
quecodificamab2-microglobulina(invarivel)estolocalizadosforadaregio
do MHC no cromossomo 15 humano. A cadeia a formada por trs
segmentosa1,a2ea3.Aregioemqueopeptdeoseligacorresponde
regioamino-terminalecompostapelossegmentos a1e a2,queformam
umafendaoubolsaondeeleseencaixa.Otamanhodessafendapermiteligar
peptdeosde8a11aminocidosecorresponderegiodoMHCdeclasse
IqueinteragecomoTCRdolinfcitoT.Poressarazo,osantgenosproteicos
precisamserprocessadosparagerarpeptdeos,pequenososuficienteparase
ligaremmolculadoMHC.Aregioinvarivel,quecorrespondeaosegmentoa3,seligaaocorreceptorCD8dolinfcitoT.Essaligaoconferea
especificidadedamolculadeclasseIcomaclulaTCD8.Odomnio a,
tambmseligadeformanocovalentemolculab2-microglobulina,sendo
essecomplexoestabilizadopelopeptdeoprocessadoqueseliganosdomnios a1 e a2 (Figura 13). Somente nessa forma estvel a molcula do
MHCdeclasseIexpressanasuperfciedasclulas.
Imunologia | 53
7.3.MHCdeclasseII
AsmolculasdoMHCdeclasseIItambmsoexpressasnamembrana
celular.Masestassoexpressasnasuperfciedeclulasapresentadorasdeantgenos
profissionais.Essasclulasincluemasclulasdendrticas,osmacrfagoseoslinfcitos
B.AmolculadeclasseIIformadaporumacadeiaaeumab.Acadeiaatem
32-34kDa,enquantoacadeiabtem29-32kDa(Figura13).Asduascadeiasdo
MHCdeclasseIIsocodificadasdentrodaregiogenmicadoMHCeambas
sopolimrficas,ouseja,sovariveis.Ascadeiasaeb,naporoextracelular,
possuemdomniosa1ea2eb1eb2,ondeaporovariveldasduascadeias
soossegmentosa1eb1,conformepodeservistonaFigura13.Osdomnios
a1eb1interagemparaformarafendadeligaoaopeptdeo,queestruturalmentebastantesimilarmolculadoMHCdeclasseI.Estafenda,oubolsaonde
seencaixaopeptdeoaserapresentadoclulaT.Assim,comodeseesperar,
estatambmaregiodamolculadoMHCdeclasseIIqueapresentamaior
variabilidade.NamolculadeclasseII,asextremidadesdafendadeligaodo
peptdeosoabertas,oquepermitealigaodepeptdeosde10-30aminocidos,
mas pode ocorrer ligao de peptdeos maiores, o que no acontece com a
molculadeclasseIquetemasextremidadesfechadas.
Figura13.AstrsclassesdegenesnoMHChumanoeaexpressodos
produtosdeclasseIeII.
7.4.ProcessamentoeapresentaodeantgenossclulasTCD8
AntgenosapresentadospelasmolculasdeMHCdeclasseIso,na
maioriadasvezes,geradosdentrodamesmaclulaqueproduziuamolcula
declasseI.Ospeptdeosgeradossoderivadosdeprotenasqueseencontramnocitosoldaclula,quepodemserdaprpriaclula,deorigemviralou
deoutrosmicrorganismosintracelulareseantgenostumorais.Osantgenos,em
geralprotenaspresentesnocitoplasma,sodegradadosempeptdeosporum
complexomultiproteolticodenominadoproteassoma.Essespeptdeossotransportadosdocitoplasmaparaoretculoendoplasmticorugosoporintermdio
deumaprotenatransportadoradeantgeno(TAP).OspeptdeostransportadospelaTAPparadentrodoretculoendoplasmticoseligammolcula
nascentedoMHCclasseI,tornando-aestvel.Assim,ocomplexoresultante,
MHCclasseIepeptdeo,deixamoretculoendoplasmticoemovem-separa
ocomplexodeGolgi,doqualtransportadoparaasuperfciedaclulaonde
reconhecidopelaclulaTCD8.
7.5.ProcessamentoeapresentaodeantgenossclulasTCD4
As molculas do MHC de classe II tambm se ligam a peptdeos

originadosdadegradaoproteica,mas,geralmente,ospeptdeosresultamda
protelisedemolculasendocitadasoupartculasfagocitadaspelasAPC.As
partculassointernalizadasemvesculasintracelulares,denominadasendossomas,
quesefundemcomlisossomas,contendoenzimasproteolticas.Avescula
resultantedessafusochamadafagolisossoma.Oprocessodedegradao
doantgenoocorreemcondiescidas,queopHtimoparaaaodas
enzimasproteolticas,eospeptdeosoriginadosdadegradaoseligamna
fendadamolculadoMHCdeclasseII.Quandorecm-sintetizadanoretculo
endoplasmtico,amolculadoMHCdeclasseIItemafendaprotegidapor
uma protena denominada cadeia invariante (Ii). Desse modo, a fenda do
MHC classe II no pode acomodar peptdeos presentes no retculo
Imunologia | 55
endoplasmtico. Essa molcula de classe II , ento, direcionada para os

fagolisossomas, onde se encontram os peptdeos exgenos resultantes da
protelisedosantgenos.Nosfagolisossomas,asenzimasproteolticasdigerem
acadeiaII;porm,nototalmente,restandoofragmentochamadopeptdeo
declasseII,associadocadeiainvariante(CLIP=classIIassociatedinvariant
chainpeptide).ComaremoodoCLIP,pormeiodamolculaHLA-DM,
opeptdeoprocessadopodeseligarfendadamolculadeclasseIIeser
reconhecidoespecificamentepeloslinfcitosTCD4.
8. Resposta celular e resposta humoral
Se a resposta inata for suficiente para anular a ao de um agente

infectoparasitrio,noocorrerativaodarespostaimuneadaptativae,portanto,noformarmemriaimunitria.Poroutrolado,casoocorrapersistncia
dainfeco,devidoaosmecanismosdeescapedesseagente,haveranecessidadedaativaodarespostaimuneadaptativa.Emfunodanaturezado
agenteinfectoparasitrioedaformacomqueseusantgenossoprocessados,
arespostaimuneadaptativapodeseguirdoiscaminhosdistintos,quelevam
proliferaodeclulasCD8+(respostacelularpredominantementeTh1)e
secreodeanticorposporclulasBeplasmcitos(respostahumoralpredominantementeTh2)(Figura14).Th1eTh2nososinnimosderesposta
celularehumoral.Existepredomnio,masclulasTh2sofuncionais,eexistem
anticorposIgGligadosaoTh1.
A imunidade mediada por clulas se desenvolve por uma rede de
interaesqueresultaemdefesacontramicrorganismosquesobrevivemdentro
defagcitosoudeoutrasclulas.Osantgenosdepatgenosprocessadosno
citosol,foradevesculascidas,soconduzidosatasuperfciecelularpela
molculadeclasseIeapresentadosparaasclulasTCD8+queeliminam
diretamenteaclulainfectada,enquantoosantgenosdepatgenosprocessadosemvesculascidassoapresentadospelasmolculasdeclasseIIsclulas
TCD4+,quepodemsediferenciaremdoistipos:CD4+Th1,queativam
clulasmononucleares(macrfagoselinfcitos)eCD4+Th2,queinduzema
proliferao e diferenciao das clulas B em plasmcitos produtores de
anticorpos.
Figura14.Esquemageraldarespostacelularehumoral
8.1.RespostacelulareomecanismodeaodasclulasTCD8+
OslinfcitosTCD8+ativadossediferenciamemclulasTcitolticas
(CTL),quedestroemsomenteasclulasportadorasdoantgenoassociadoa
produtosdeclasseIdoMHC,nodanificandoaclulavizinhaduranteo
evento.Omecanismodeaopodeocorrerpelalisediretaatravsdasenzimas
perforinasegranzimas,comotambmpelainduodeapoptose.Noprimeiroprocesso,apsaligaodoTCR/CD3comoantgenoviaMHCI,os
microtbulosdaclulaCD8+semovemparaareadecontatocomaclula
alvo,eosgrnuloscontendoasenzimascitolticastambmseaglomeramnesta
regio.Nestecontato,asprotenasformadorasdeporos(perforinas)entram
em contato com concentraes de Ca++ e sofrem polimerizao. Esta
Imunologia | 57
polimerizaoformaumcanalpermevelaonsnamembranaplasmticada
clulaalvo,levandoaumdesequilbrioosmticoelise(Figura15).Almde
lisedireta,asclulasCD8+CTLproduzemIFN-g,queestimulaaatividade
fagocitriademacrfagos,inibediretamenteareplicaodevruseinduza
expressodemolculasdeclasseI.Osegundomecanismodedestruiode
clula-alvoenvolveainteraodamolculaligantedeFas,denominadaFas-Le
presentenoCTL,comamolculaFas(CD95),presentenaclulaalvo.Essa
interaolevaaclula-alvoapoptose,quetambmpodeserinduzidapela
aodasgranzimas.Nesteevento,asclulasacometidascondensamocitoplasma
eacromatina,formandooscorposapoptticos,queserofagocitadosrapidamenteporclulasvizinhassemaformaodereaoinflamatriaadjacente
(Figura15).Umefeitoadicionaldaapoptoseaativaodeenzimascelulares
quedegradamgenomasviraisemat200paresdebaseseseusmltiplos.
Figura15.NecroseeapoptoseinduzidasporclulasTcitotxicas
8.2.MecanismodeaodasclulasCD4+Th1eCD4+Th2
Alguns microrganismos como Mycobacterium spp so patgenos

intracelularesquecrescememvesculas,ondesoparcialmenteprotegidosda
ao dos anticorpos e das clulas CD8 CTL. Estes normalmente inibem a
fuso destas vesculas com o lisossomo, prevenindo sua destruio. Diante
disso,essesmicrorganismossoeliminadosnormalmentequandoestasclulas
soativadasatravsdecitocinasinflamatrias,comooIFN-g,produzidopelas
clulasCD4+Th1.
Oprocessodeativao,atravsdocontatodosmacrfagoscomas
clulasCD4+Th1,geraumasriedeaesbioqumicasqueconvertemo
macrfagonumapotenteclulaantibacteriana.Estasreaesso:fusodo
fagossomo com o lisossomo, expondo as bactrias s enzimas lisossomais;
aumentodaexpressodeMHCdeclasseIeclasseII;expressodereceptor
deTNF-aesecreodeTNF-a,quejuntocomoIFN- g,sinergizaparao
aumentodaaobactericida,resultandonaproduodexidontrico(NO)
eoxignioreativo(O2);secreodeIL-12,queorientaadiferenciaode
clulasTh0paraTh1;esecreodeIL-10,queinibeaproduodeIFN- ge
serveparaamortecerosefeitoslesivosdaativaoexacerbadademacrfagos
nostecidos.Quandoumpatgenoresisteaosefeitosiniciaisdarespostaimune
celular,pode-seevoluirparaumainflamaocrnica,consistindointensoinfiltrado
mononuclear e proliferao de tecido conjuntivo caracterstico de inflamao
inespecfica ou por um padro de inflamao crnica que se distingue pela
formaodegranulomaquesecaracterizaporagregadosdemacrfagosativados,
osquaisassumemumaaparnciaepitelioidecircundadosporlinfcitosT.Frequentemente,masnoinvariavelmente,clulasgigantesmultinucleadas,que
derivamdafusodevriosmacrfagos,soencontradasemgranulomasmais
antigos.AsclulasCD4Th1eTh2participamregulandotaisgranulomascom
produodecitocinasinflamatriaseanti-inflamatrias,prevenindoadisseminaodospatgenoselesestissulares.
Imunologia | 59
8.3.Respostahumoral
Muitasbactriasimportantesnasdoenasinfecciosashumanassemultiplicam nos espaos extracelulares do organismo, e a maior parte dos

patgenosintracelularessedisseminadeumaclulaparaoutraatravsdos
fludosextracelulares.Arespostaimunehumoralconduzdestruiodos
microrganismos extracelulares e seus produtos, como, por exemplo, as
toxinas;almdetambmpreveniroudiminuiradisseminaodasinfeces
intracelulares,atravsdaneutralizaodessesagentes.Osanticorpostambmfacilitamoreconhecimentodemicrorganismosporclulasfagocitrias,
permitindoqueassimsejamingeridosedigeridos,comoativamosistema
complemento,potencializandoaopsonizao,recrutandoclulasinflamatriasparaolocaldainfecoelisandocertosmicrorganismospelaformaodosporosemsuasmembranas(Figura16).
Figura16.Algunsmecanismosefetoresdarespostamediadaporanticorpos
Nesta resposta, a ativao das clulas B e sua diferenciao em clulas

plasmticassecretorasdeimunoglobulinasdeflagradapeloantgenoespecficoe
requeraparticipaodeclulasCD4Th2(Figura14),quetambmcontrolama
mudanadeisotipoedesempenhampapelimportantenahipermutaosomtica,o
quenecessrioparaamaturaodaafinidadedosanticorpos,queocorrenocurso
darespostahumoral.Aimunoglobulinadesuperfciefuncionacomoreceptorde
antgenos,ouBCR,erealizadoispapisnaativao:atransduodesinaldireto
paraointeriordaclula,quandoseuneaoantgenoeaconduodessesantgenos
aosstiosintracelulares,paraserdegradadoelevadosuperfciedolinfcitoB,
onde,porsuavez,soreconhecidosporCD4Th2antgenosespecficos.Esta
respostadependentedaclulaTchamadadetimo-dependente(TD).Porm,
algunsantgenos,comooslipopolissacardeos(LPS)bacterianos,podemativar
diretamentelinfcitosB,etalrespostachamadadetimo-independente(TI).
Anticorposdealtaafinidadeneutralizamtoxinas,vrusebactrias.Mas,
podemnoresolveroproblema,poismuitosagentesnosoneutralizadospelos
anticorposedevemserremovidosporoutrosmeios.Assim,opapeldosanticorpos
nestassituaesativaroutrasclulas(clulasefetorasacessrias),quetenham
receptoresparaFcdeImunoglobulina.Dentreessas,podemoscitarmacrfagose
neutrfilos,queingerembactriasrecobertasporIgG;assimcomoasNK,que
lisamdiretamenteparasitosrecobertosporIgG;eaindaclulasinfectadascomvrus,
recobertastambmcomIgG.Talfenmenoaconteceporummecanismodenominadocitotoxidadecelular,dependentedeanticorpo(ADCC).AlmdaADCC,
viaIgG,exercidapelaNK,omesmofenmenopodeserobservadopormeioda
IgE,ondeasclulascitotxicassooseosinfilos,eaimportnciadaADCCvia
IgE se deve ao fato de que alguns parasitos no so mortos diretamente por
fagocitose, somente atravs dos mediadores liberados por estas clulas. A IgE
tambmparticipanasensibilizaoeativaodemastcitospromovendoliberao
desubstnciasquedilatamvasossanguneoserecrutamclulasinflamatrias.
Imunologia | 61
9. Resposta imune aos agentes infectoparasitrios
O ambiente em que vivemos povoado por muitas espcies de

microrganismos onde uma pequena parcela tem a capacidade de causar
doenas. O sistema imune evoluiu no sentido de promover aes que
resultemnadefesacontraestesmicrorganismos,contribuindoparaarecuperaoemanutenodahomeostase.Osagentesinfectoparasitriosdiferem em sua patogenicidade e virulncia. A patogenicidade refere-se
capacidadedeumorganismo causar doena, e a virulncia o grau de
patogenicidade.Portanto,apatogenicidadedependedascaractersticasdo
agente, do estado imunitrio do hospedeiro e dos determinantes
socioambientais.Emindivduoscomsistemaimunitrionormal,osagentes
infectoparasitriosdevemsersuficientementevirulentosparaseestabelecer
ecausarinfeco.Poroutrolado,indivduoscomsistemaimunitriodebilitado, agentes pouco virulentos, tais como os comensais, podem causar
lesesgraves.Nestetpicoseroabordadososprincipaismecanismosde
respostasaesdosvrus,bactrias,protozoriosehelmintosqueparasitam
oorganismohumano.
Osvrussomicrorganismosintracelularesobrigatrios,quesereplicamnointeriordasclulasepodemcausarlesotecidualedoena,por
vriosmecanismos(Figura17).Areplicaoviralinterferecomasntesee
comasfunesnormaisdasprotenascelulares,levandolesodaclula
infectadaemorte.Esteoefeitocitoptico,esedizqueainfeco
ltica.Vrusnocitopticospodemcausarinfeceslatentes,duranteas
quaisresidemnasclulasdohospedeiroeproduzemprotenasestranhasao
mesmotempoemqueestimulamaimunidadeespecfica.Emdecorrncia,
as clulas infectadas so reconhecidas e mortas pelas clulas CTL. As
protenasviraistambmpodemestimularasreaesdehipersensibilidade
tardia(DTH),ealesocelularumaconsequnciadiretadasrespostas
imunesfisiolgicascontraosvrus.
Figura17.Mecanismospelosquaisosvruslesionamasclulas
Os principais mecanismos de imunidade inata aos vrus envolvem a

estimulaodiretadeIFNa/bpelasclulasinfectadas,quefuncionaminibindo
areplicaoviralelisedasclulasinfectadaspelasclulasNK.Almdesses
mecanismos,aativaodosistemacomplementoeafagocitoseservempara
eliminarvrusdelocaisextracelulares.Naimunidadeespecfica,combina-sea
respostacelularcomarespostahumoral.Osanticorposespecficosseligams
protenasdoenvelopeoudocapsdeo,impedindoafixaodovrusnaclula
hospedeira e, consequentemente, impedindo sua penetrao (Figura 16).
Almdisso,osanticorposIgGopsonizantestambmpodempotencializara
remoopelafagocitose(Figura16)oudestruiodasclulasinfectadasatravsdaADCCviaclulasNK.Emboraosanticorpossejamimportantesna
imunidadecontravrus,elesnososuficientesparaeliminarinfecesvirais.
Imunologia | 63
Contudo,oprincipalmecanismocontraumainfecoviralestabelecidaatravsdeumarespostacelularviaCD8+citolticosespecficos,quedestroemas
clulasinfectadas,estimulamaaodeenzimasintracelularesquedegradam
genomasviraisesecretamcitocinascomaodeinterferon.
Asbactriasextracelularescausamdoenadeduasmaneiras:induzindo
reaoinflamatriaqueresultanadestruiotecidualnolocaldainfecoe
produzindotoxinas,quepossuemdiversosefeitospatolgicos.Estaspodem
serendotoxinas(componentesdaparedecelularbacteriana)ouexotoxinas
(ativamentesecretadaspelasbactrias).Portanto,asrespostasimunescontra
bactriasextracelularesvisameliminarabactriaeoefeitodesuastoxinas.
Oprincipalmecanismodeimunidadeinataafagocitoseporneutrfilos,
moncitosemacrfagos,masaresistnciadestasbactriasfagocitoseeasua
digestoumdeterminantenavirulncia.Aativaodosistemacomplemento
naausnciadoanticorpoimportante,poisaproduodeC3bopsonizaa
bactriaefavoreceafagocitose.OMAClisadiretamenteabactriaeos
subprodutosdocomplemento(fragmentosmenores),queparticipamdarespostainflamatriarecrutandoeativandoleuccitos.Aimunidadehumoralespecficaaprincipalrespostaprotetoracontraessasbactriaseconsistedo
reconhecimentodeantgenosproteicosporclulasCD4+Th2,apresentados
viaMHCdeclasseII.Osanticorposespecficos,almdeneutralizarembactriasesuastoxinas,impedindosualigaosclulasalvo,ativamosistema
complementopotencializandosuasaes.
Quantosbactriasquesobrevivemnointeriordeclulashospedeiras,
asmaispatognicassoaquelasquesobrevivemnointeriordosmacrfagos,
comoasmicrobactrias.Porserempraticamenteinacessveisaosanticorpos,sua
eliminaorequermecanismosdiferentesdaquelesobservadosparabactrias
extracelulares.Oprincipalmecanismodeimunidadeinatacontraessasbactrias
atravsdafagocitose,masestaspodemativardiretamenteouindiretamente
clulasNK,quepromovemumadefesaprecocecontrabactriasintracelulares
antesdarespostaespecfica.Aprincipalrespostaespecficacontraessasbactriasarespostacelular,comatuaodeclulasTh1(CD4+e/ouCD8+)
queestimulamosmacrfagosaproduziremdiversassubstnciasbactericidas.
Destamaneira,asclulasCD4+Th1eCD8+Th1atuamemconjuntona
respostacelularcontrabactriasintracelulareseomecanismoexercidoporuma
pode complementar o da outra. importante salientar que a ativao de
macrfagostambmpodecausarlesotecidual,manifestadapelareaode
hipersensibilidadetardia(DTHouHT),assimcomoasobservadasnasinfecesviraiseemoutrosagentesinfectoparasitrios.
Emtermosmuitogenricos,osanticorpossomaiseficazescontraos
parasitosextracelulareseosCTLs,contraosintracelulares.Emoutraspalavras,ascitocinasproduzidaspelasclulasTCD4+podemserimportantes
nadeterminaodoresultadodainfeco,umavezqueasclulasTh1e
Th2 possuem um perfil de citocinas contrastante e de contrarregulao,
mostrandoqueopapeldasclulasTh1eTh2nadeterminaodoresultado
da infeco sugere que as respostas das clulas Th1 levem morte dos
patgenos intracelulares e que as respostas das clulas Th2 eliminem os
patgenosextracelulares.Todavia,istomuitomaisumasimplificaodidticadoqueoquadroreal.
Otipoderespostaqueconferirmaiorproteodependedanatureza
e da fase evolutiva do parasito. Por exemplo, o anticorpo por si s, ou
combinadocomocomplemento,podedanificaralgunsparasitosextracelulares,
massersempremelhorquandoatuandocomumaclulaefetora.Diferentes
mecanismosefetoresatuaroemumanicainfecocontraosdiferentesestgiosdociclodevidadoparasito.Assim,namalria,osanticorposcontraas
formas livres bloqueiam sua capacidade para invadir novas clulas, mas as
respostasmediadasporclulasimpedemodesenvolvimentodafaseheptica
noshepatcitos.Aimunidadeprotetoranamalrianosecorrelacionasimplesmentecomosnveisdeanticorposepodeatserinduzidanaausnciadeles.
Imunologia | 65
Oparasitoprecisasuperarosmecanismosdedefesapreexistentesno
hospedeiro,paraquepossaseestabelecercomsucessoantesdainiciaoda
respostaimuneespecficadohospedeiro.Ocomplementoexerceumpapel
nestafase,umavezquevriostiposdeparasitos,incluindoosvermesadultos
easlarvasinfectantes,possuemmolculasemsuasuperfciederevestimento
queativamaviaalternativa.Macrfagos,neutrfilos,eosinfiloseplaquetas
constituem a primeira linha de defesa. Anticorpos e citocinas, produzidos
especificamenteemrespostaaosantgenosparasitrios,potencializamasatividadesantiparasitriasdetodasestasclulasefetoras.Entretanto,osmacrfagos
teciduais,moncitosegranulcitospossuemalgumaatividadeintrnsecaantes
mesmodapotencializao.
Ostripanossomoseosparasitosdamalria(plasmdios)quepenetram
nosanguesoremovidosdacirculaoporclulasfagocticasnofgadoeno
bao.Antesdeagiremcomoclulasapresentadorasdeantgenosnainiciao
deumarespostaimune,osmacrfagosatuamcomoclulasefetorasqueinibem
amultiplicaodosparasitosouatmesmoosdestroem.Estasclulastambm
secretammolculasqueregulamarespostainflamatriaepotencializamaimunidadeatravsdaativaodeoutrasclulas.Afagocitosepelosmacrfagos
forneceumadefesaimportantecontraosparasitosmenores;entretanto,estas
clulastambmsecretammuitosfatorestxicosquepermitemadestruiodos
parasitossemainternalizao.Quandoativadospelascitocinas,osmacrfagos
podemdestruirparasitosextracelularesrelativamentepequenos,comoosestgios eritrocitrios do plasmdio, e tambm os parasitos maiores, como os
estgioslarvaisdoesquistossomo.Osmacrfagostambmatuamcomoclulas
exterminadorasatravsdaADCC.
Aativaodosneutrfilosemacrfagosumacaractersticageraldos
estgiosiniciaisdainfeco.Todasasfunesefetorasdosmacrfagosso
potencializadaslogoapsainfeco.Emborasuaativaoespecficasejainduzida
porcitocinassecretadaspelasclulasT,comoIFNg,GM-CSF,IL-3eIL-4,
mecanismos T-independentes tambm podem ativ-los. Neste caso, clulas

NKsecretamIFNgquandoestimuladaspelaIL-12produzidapelosmacrfagos.
Aspropriedadesefetorasexibidaspelosmacrfagostambmpodemser
apresentadaspelosneutrfilos.Osneutrfilossoclulasfagocticasquepodemdestruirosagressores,sejapormecanismosdependentesdeoxignio,
sejaporindependentes,comooxidontrico.Osneutrfilosproduzemuma
explosooxidativamaisintensadoqueosmacrfagoseseusgrnulossecretores
contmprotenasaltamentecitotxicas.Adestruioextracelularpelosneutrfilos
mediadaporH202,enquantooscomponentesgranularesestoenvolvidos
nadestruiointracelulardosorganismosinternalizados.Osneutrfilosesto
presentesnaslesesinflamatriascausadasporparasitoseprovavelmenteatuando
naeliminaodessesparasitosdasclulasrompidas.Comoosmacrfagos,os
neutrfilos possuem receptores para Fc e receptores para complemento e
podemparticipardasreaescitotxicasdependentesdeanticorpo,afimde
destruir as larvas de Schistosoma mansoni, por exemplo. Dessa forma, os
neutrfilossomaisdestrutivosdoqueoseosinfilosparavriasespciesde
nematdeos,emboraaeficciarelativadosdoistiposcelularespossadepender
doistipoedaespecificidadedoanticorpo.
Oseosinfilosestoassociadosainfeceshelmnticaseseencontram
envolvidosespecificamentenadefesacontraosestgiosteciduaisdehelmintos,
quesograndesdemaisparaseremfagocitados.AreaodomastcitodependentedeIgEconstaprimariamenteemlocalizaroseosinfilosprximosao
parasitoe,ento,potencializarsuasfunesantiparasitrias.
Os eosinfilos so clulas de menor potencial fagoctico perante os
neutrfilos,noentanto,sofremumprocessodedesgranulaoemrespostaa
distrbiosemsuamembranacelular,liberandoocontedogranularsobrea
superfciedosparasitos.Odanoaoshelmintospodesercausadopelaprotena
bsicaprincipal(MBP).AMBPnoespecficaparaumdeterminadoalvo,
masodanosclulasdohospedeiromuitopequeno,umavezquea
Imunologia | 67
protenaficaconfinadaaumespaodiminutoentreoeosinfiloeoverme.
Oseosinfiloseosmastcitospodemagiremconjuntonadestruiodas
larvasdehelmintos,ondeosprodutosdosmastcitospotencializamaao
doseosinfilos.Destaforma,osantgenosliberadosprovocamdesgranulao
localdosmastcitosdependentesdeIgEealiberaodemediadores,que
atraemseletivamenteoseosinfilosparaolocal,potencializandoaindamais
suasatividades(Figura18).
Figura18.Expulsodehelmintosparasitosdolumeintestinal
Arespostaimunecontra Trypanosomacruzi dependenoapenasdas

clulasTCD4+eCD8+,mastambmdasNKedaproduodeanticorpos.
OmesmoverdadeiroparaarespostaimunecontraoToxoplasmagondii.As
clulasNK,estimuladaspelaIL-12secretadaspelosmacrfagos,constituem
outrafontedeIFNg.Asinfecescrnicasnormalmenteestoassociadascom
produoreduzidadeIFNgeprovavelmenteexplicamaaltaincidnciade
tuberculoseetoxoplasmoseempacientescomAIDS,osquaispossuemnmerosreduzidosdeclulasTCD4+.
Em algumas infeces parasitrias, o sistema imunitrio no consegue
eliminaroparasito,masreageisolandooorganismocomclulasinflamatrias.
Ohospedeiroreageaoantgenolocalmente,oqueestimulaaliberaode
citocinas,queporsuavezrecrutamasclulasdedefesaparaolocalafetado.
Naesquistossomose,aformaodogranulomaoutroexemplodareaodo
hospedeirocontraoparasito.Essareaoumarespostacrnicamediadapor
clulasaosantgenossolveisliberadospelosovosdoparasitonofgado.Os
macrfagosseacumulamnolocaleliberamfatoresfibrognicosqueestimulam
aformaodotecidogranulomatoso.Emboraessareaopossaserbenfica
paraohospedeiro,nosentidoqueisolaasclulashepticasdastoxinassecretadas
pelosovosdoshelmintos,tambmconstituiamaiorfontededano,provocandoalteraesirreversveisnofgadoeperdadafunoheptica.
Emmuitasinfecesadistinoentreumarespostamediadaporclulas
ouporanticorpopodeserdifcil,dadoqueambasatuamemconjuntocontrao
parasito.Aexpulsodealgunsnematdeosintestinaisocorreespontaneamente poucas semanas aps a infeco primria. Parece haver dois estgios na
expulso,alcanadosporumacombinaodemecanismosT-dependenteseTindependentes.ClulasT(predominantementeTh2)respondemaosantgenos
doparasitoeinduzemaproduodeanticorpopelasclulasquesofreram
proliferao.Ocorreproliferaodosmastcitosdamucosaehiperplasiadas
clulascaliciformessecretorasdemuconoepitliointestinal.Osvermesso
danificadosporanticorpoeprodutosdosmastcitossensibilizadosporIgE,
quedesgranulamapsocontatocomoantgenoeliberamahistaminaque,
porsuavez,aumentaapermeabilidadedoepitliointestinalondeovermese
encontra.Essesprocessosnososuficientesparaeliminarosvermes;portanto,molculasinflamatriasinespecficas,secretadaspelosmacrfagos,incluindo TNF e IL-1, contribuem para a proliferao das clulas caliciformes e
Imunologia | 69
provocamaumentonasecreodemuco.Omucorevesteosvermeseleva
suaexpulso.
Existeminmerosexemplosdeestratgiasfsicassimpleseprotetorasnos
parasitos.Osnematdeospossuemumacutculaextracelularespessaqueos
protege da agresso txica. O tegumento dos esquistossomos sofre um
espessamentoduranteamaturao,oferecendoumaproteosemelhante.A
superfciefrouxaderevestimentodemuitosnematdeospodesedesintegrar
soboataqueimune.
Amaioriadosparasitosinterferenarespostaimuneeaimunossupresso
umacaractersticauniversaldainfecoparasitria,comprometendotantoas
respostasmediadasporanticorpocomoasmediadasporclulas.
Os antgenos solveis dos parasitos, quando liberados em enormes
quantidades,podemprejudicararespostadohospedeiroporumprocesso
denominadodistraoimune.Assim,osantgenossolveisdevriosagentes
infectoparasitriospareceminativarosanticorposcirculantes,fornecendouma
cortina de fumaa e desviando o anticorpo do parasito. Muitos destes
antgenosdesuperfcieliberadossoformassolveisdemolculasinseridasna
membranadobiopatgeno.
Almdosefeitosdestrutivosdiretosdealgunsparasitosedeseusprodutos
aostecidosdohospedeiro,muitasrespostasimunes,porsis,possuemefeitos
patolgicos.Namalria,natripanossomoseenaleishmaniosevisceral,onmeroea
atividadeaumentadosdosmacrfagoselinfcitos,nofgadoenobao,levamao
aumentodetamanhodestesrgos.Naesquistossomose,grandepartedapatologiaresultadosgranulomasdependentesdelinfcitosqueseformamaoredordos
ovosnofgado.Asalteraessignificantesqueocorremnosindivduoscomelefantase
soprovavelmenteresultadoderespostasimunopatolgicasslarvasadultasnos
linfticos.Aformaodecomplexosimunescomum,elespodemserdepositados
nosrins,comonasndromenefrticadamalria,epodemdarorigemavriasoutras
alteraespatolgicas.
AIgEdasinfeceshelmnticaspodepromoverdesdeefeitosbrandosreaesseverasnohospedeiro,pormeiodaliberaodemediadores pelos mastcitos, caracterizados por pruridos, eritemas, dificuldades

respiratriasoumesmochoqueanafiltico.
10. Aplicao e importncia do diagnstico
imunosorolgico das doenas infecto parasitrias
Odiagnsticosorolgicodasdoenastransmissveisconsistenainvestigaodainfeconoindivduoounapopulao,medianteadeteco,
quantificao e caracterizao de variveis (imunoglobulinas, antgenos,
citocinas)presentesnoplasma/sorosanguneoouemoutrosmateriaisbiolgicos,taiscomoamostrafecal,urina,saliva,escarrooutecidos.
Odesenvolvimentodenovasinformaescientficasestrelacionado
comosprogressosnametodologiapelodesenvolvimentodenovosprocedimentos,novastcnicasouinstrumentos.OsprimeirosmtodosdeidentificaoemedidadeimunoglobulinasforamdesenvolvidosporVonBehring
&Kitasato,influenciadospelosexperimentosdePasteursobreaTeoriados
Germes,aoencontraremnosorodeanimaisimunizadoscontradifteriae
ttano,substnciasneutralizanteseespecficasquedenominaramanticorpos.
Aspesquisasdesenvolvidasporvrioscientistassevoltaramimediatamente
paraacaracterizaobioqumicadessassubstnciasneutralizanteseodesenvolvimentodetcnicascapazesdeinduziraformaodeelevadasconcentraes de anticorpos em animais de laboratrio. Este foi o perodo
fundadordodiagnsticosorolgico.
Neste tpico, as tcnicas sorolgicas sero abordadas, principalmente,sobopontodevistadosprofissionaisquerealizamodiagnstico
sorolgicodasdoenasinfectoparasitrias.
Imunologia | 71
10.1.Aplicaesdostestessorolgicos
Os testes sorolgicos vm sendo constantemente empregados para

auxiliarnaconfirmaodiagnsticadassuspeitasclnicasdeinfeces,permitindoaobtenoderesultadosemcurtoespaodetempo,emfunode
algumascaractersticasqueincluemasimplicidadedeexecuo,baixocusto
operacionaleapossibilidadedeautomao.Suascontribuies,entretanto,
so inestimveis, principalmente quando o patgeno, ou seus produtos,
dificilmentepodemserdemonstradosnosfluidosbiolgicosounaestrutura
hsticadohospedeiro.
Estesmtodossoutilizadosnaqualificaoequantificaodediversos
componentes, incluindo antgenos, anticorpos, imunocomplexos, enzimas e
hormnios,entreoutrasmolculasrelacionadasaoprocessoinflamatrio.O
conhecimento dos fundamentos gerais para adequada aplicao e criteriosa
interpretaodosresultadosexigequeestastcnicassejamrealizadasporprofissionaisbemtreinados,afimdesepreveniraocorrnciadosfalsosresultados,queconduzemparaodiagnsticoetratamentoincorretosdospacientes.
Omtodosorolgicopodeserqualitativoouquantitativo.Omtodo
qualitativoindicaumarespostadotipooutudoounada,porexemplo:
aglutinouounoaglutinou,infectadoounoinfectado.Oensaioquantitativo
medeaconcentraodeantgenoouanticorpos,podendoserexpressasoba
formadecruzes,titulaes,densidadesticasemreaesfotocolorimtricasou
outrasunidadesdemedidaqueseaplicam.Aexpressodoresultadosoba
formadecruzes,ouportitulaes,quecorrespondemamaiordiluioemque
aindaseobservaareaoantgeno-anticorpo,bastantesubjetiva,porretratar
aintensidadedeumareaodeterminadavisualmenteporcritriospessoais.A
utilizaodeaparelhosquerealizamaleituraautomticadasreaessorolgicas
traduzemnmerososresultadosobtidosdemaneiravisual,reduzindo,porum
lado,aprobabilidadedoserros,masporoutro,elevando(emalgunscasos)o
custodoexamelaboratorial.
10.2.Aimportnciadodiagnsticoindividual
Oindivduosintomticoouassintomticocomnveisdeanticorpos
especficosdetectveisdenominadosoropositivo.Aquelequenopossuianticorposdetectveisosoronegativo.Nocasodoindivduodiagnosticadosoronegativo(emumaprimeiraanlise),queaoreavaliaraprimeiraamostrajuntocomumasegunda,decoletamaisrecente(processo
conhecidocomosorologiapareada),enocasoderesultadodaprimeira
amostra se repetir e a segunda resultar positiva, diz-se que ocorreu
soroconverso. O diagnstico individual normalmente se realiza com a
finalidadedeelucidarprocessospatolgicoscomsinaisesintomascomuns
avriasdoenas,procedimentoestedenominadodiagnsticodiferencial.
Como exemplos, podem-se distinguir sorologicamente doenas como a
leishmaniosetegumentardifusaeahansenaselepromatosa,aleishmaniose
visceraleahepatiteviral,ahepatiteBeahepatiteC,atoxoplasmoseea
rubola,entreoutras.
Emalgumassituaestorna-seimportantedeterminarafaseclnica
dadoena,principalmenteaquelasemqueospatgenospossuemhabilidadeparaatravessarabarreiraplacentriaegerarembriopatiasoufetopatias.
Apresenadeanticorposespecficosumaevidnciadaexposioatual
ouanterioraosagentesinfecciosos,caracterizadapeladiversidadefuncionaldasvriasclassesdeimunoglobulinaseaordememqueseapresentam
nosfluidosbiolgicos.Determinadaporfatoresgenticos,aIgM,regra
geral,aprimeiraaapresentarnveisquepossibilitamadetecoaps
estmuloimunognicoecaracterizarfaseinicialnamaioriadasinfeces.O
seudecrscimocompensadopelosurgimentodaIgG,normalmenteencontrada ao final de um processo agudo, permanecendo durante a fase
crnica,epodendoserdetectadadurantelongoperodonoplasmado
hospedeiro,mesmoapsacura,comoimunoglobulinadememria.Nor-
Imunologia | 73
malmente,nassolicitaesdeexamelaboratorial,pedem-seapesquisade
IgM e IgG especficas. Porm, em infeces recentes por Toxoplasma
gondiiouporcitomegalovrus,aIgMeIgGpodemeventualmenteresultar
negativas,masaIgApositivapodecorrigirfalhasnodiagnstico.Porestas
razes,imunoglobulinascomoaIgEeaIgAespecficastmsidopesquisadas
eutilizadascommaiorprecisonadeterminaodefaseinicialdasinfeces,umavezquepossuemvidamdiamenorepermanecemnacirculao
apsoinciodoprocessoinfeccioso,porumperodoaindamaiscurtoque
odaIgM.
Ostestessorolgicossotambmutilizadosparaverificaodopotencialdevirulnciaedeinvasividadedosenteroparasitos.AEntamoeba
histolytica,porexemplo,enquantoparasitaolumeintestinal,pareceno
induzir,oupoucoinduz,aformaodeanticorposespecficos.Poroutro
lado,aulcerao,apenetraotecidualeaconsequentemultiplicaoe
disseminaodesteparasitonohospedeiro,podeproporcionarelevados
ttulosdeIgGantiamebanoplasmasanguneo,facilmentedetectveis.
Alm das imunoglobulinas, as Protenas de Fase Aguda (PFA),
presentesnormalmenteembaixasconcentraesnoplasmasanguneo,alteram-seemrespostaaosestmulosinflamatriosapslesotecidualouinfeco.Emlinhasgerais,asPFAconstituemumvastonmerodeprotenas
plasmticasdeorigemheptica,cujasnteseaumentaem25%oumaise
podemserclassificadasemfunodoincrementodesuaproduoaps
estmuloinflamatrio(Quadro1).Tradicionalmente,aquantificaoda
ProtenaCReativa(PCR)naprticaclnicatemvriosobjetivos,entre
eles,aavaliaodaextensoeaatividadedainflamao,oquepermiteo
acompanhamentodoprocessopatolgico,diferenciaoentredoenainflamatriaenoinflamatriaeestimativadeseurespectivoprognstico.
Quadro1.Caractersticascinticasdasprotenasdefaseaguda
Protenasdefaseaguda
Tempoderespostaentreestmulo
eelevaodosnveisplasmticos
Pesomolecular(kDa)
48-72horas
48-72horas
48-72horas
132
180
206
24horas
10horas
10horas
24horas
24horas
41
54
68
86
340
6-10horas
2-10horas
110
180
Grupo1:aumentamenosdeumavez
Ceruloplasmina
C3
C4
GrupoII:aumentadeduasaquatrovezes
a-1-glicoprotenacida
a-1-antitripsina
a-1-antiquimotripsina
Haptoglobina
Fibrinognio
GrupoIII:aumentaacimadecincomilvezes
ProtenaCreativa
Encefalitesvirticas,citomegalia,
herpessistmicaetuberculose
AmiloidesricoA
Ostestessorolgicostambmsoutilizadosparaselecionardoadores e receptores de sangue e de rgos, no s no contexto de quem

desempenha a determinao de grupos sanguneos ou antgenos de
histocompatibilidade,comotambmparaquemsecomprometenadeteco
eprevenodedoenasinfecciosastransmissveispormeiodatransfuso
sangunea e hemoderivados, como tecidos e rgos transplantados. No
Brasil,oMinistriodaSadeestabeleceuestratgiasdecontroleapoiadas
natriagemclnica,epidemiolgicaesorolgicaparaprevenodasdoenas
transfusionais,queincluemadoenadeChagas,asfilis,ashepatitesBe
C,asndromedeimunodeficinciaadquirida(SIDA/AIDS),ovrusda
leucemiaTdoadulto(HTLV-IeII),emtodooterritrionacional,ea
malria,emregiesendmicas.Ascondiesqueconstituemcontraindicao
absolutaparadoaodergos,relacionadassdoenasinfecciosas,alm
dasempregadasnaprevenodedoenastransmissveispormeiodatransfu-
Imunologia | 75
sosanguneaehemoderivados,incluemavaliaolaboratorialdesepticemiabacterianaoufngica,ativa.
As molculas liberadas pelo parasito e os anticorpos correspondentes
encontrados no hospedeiro so chamados de marcadores sorolgicos. Estes
marcadorespodemserutilizadosparaavaliaroprognsticodedoenasealguns
marcadoresindicamevoluoparacura,enquantooutroagravamento.Baseandosenestesprincpios,pode-seavaliaraeficciateraputica.
Os anticorpos protetores, induzidos por parasitos em processos
infecciosos ou por vacinas, podem ser pesquisados e utilizados como
marcadoresparaavaliaraimunidadeespecfica,naturalmenteadquirida
ouartificialmenteinduzidaporvacinas.Ostestessorolgicosrealizados
em paciente pr-natal so de fundamental importncia na pesquisa de
doenascongnitas,comoatoxoplasmose,asfilis,acitomegalia,entre
outras;enaavaliaodaimunidadeespecfica,principalmenteparadoenasimunoprevinveiscomaaplicaodevacinas(hepatiteB,rubola,
difteria,ttano).
10.3.Aimportnciadodiagnsticocoletivo
A aplicao dos testes sorolgicos em inquritos epidemiolgicos

denomina-se soroepidemiologiaeserveparaestimara soroprevalncia,
que corresponde ao nmero de indivduos positivos em um perodo de
tempodeterminado,semdistinguiroscasosnovosdosantigos.Comoa
soroprevalnciaestintimamenterelacionadacomataxadeinfecoea
permannciadosanticorposcirculantes,esteindicadorauxilianosseguintes
propsitosemrelaosdoenasinfectoparasitrias:estabelecerprevalncia
sorolgica,identificarosprincipaisproblemassanitrios,estabelecerprioridadesdevacinao,demarcaradistribuioeverificaraerradicaode
doenas,verificarareintroduodedoenasemreasconsolidadas,determinaraperiodicidadedasepidemias,avaliarascampanhasdevacinao,
investigarenfermidadesdescobertasrecentemente(doenasemergentes)e
estimarasperdaseconmicasatribudasenfermidade.
Testes sorolgicos tambm so aplicados na anlise do contedo
intestinaldeinsetoshematfagos,paraidentificaodasfontesalimentares
dosvetoresenvolvidosnatransmissodedoenas.Estabeleceropadro
alimentardosinsetoshematfagosdegrandeimportnciaparaoentendimentodesuabiologia,almdepossuirvalorfundamentalparaaSade
Pblica, no delineamento de estratgias de controle de vrios agravos
geradosporessesvetores.
11. Fundamentos gerais do imunodiagnstico
Apesquisalaboratorialdarespostaimunepodeserempregadapara
a verificao da resposta humoral e da resposta celular. A pesquisa da
respostahumoralpodeserrealizadadeduasmaneiras.Umadessasmaneiras refere-se ao emprego de anticorpos especficos para identificar um
antgenoparasitrioououtrassubstnciasquedesempenhamopapelde
antgenos na reao, tais como drogas, hormnios, cidos nuclicos,
citocinas,receptoresdeclulas,etc.Umaoutramaneiraadetecode
anticorposespecficosnaamostraasertestada,passveldedeterminarse
umindivduofoiexpostoaumorganismoespecfico.Amedidadasinteraes
entre antgeno-anticorpo com o propsito de diagnstico conhecida
comoimunosorologia.
As tcnicas imunossorolgicas fundamentam-se na natureza da
interaoantgeno-anticorpo,nasquaispodemexpressar-sededuasformas
distintas,emdecorrnciadautilizaodeimunorreagenteslivresdemarcao ou de reagentes marcados. As tcnicas em que no se empregam
marcadoresdemonstram-seporfenmenosvisveis.Portanto,aosecombinar anticorpos com antgenos solveis, os complexos resultantes podem
Imunologia | 77
formarprecipitadosinsolveis.Seosantgenossoparticulados(bactrias,
protozorios,hemcias),osanticorpososaglutinam.Seoanticorpopode
ativaraviaclssicadosistemacomplementoeoantgenoseencontraem
uma superfcie celular, o resultado pode ser a citlise. As tcnicas que
empregamimunorreagentesmarcadoscaracterizam-sepelasimplescombinaodoantgenocomoanticorpo,necessitandoqueumdelesestejamarcadoconvenientemente.Oimunorreagentepodesermarcadocomcorantes
fluorescentes ou quimioluminescentes, radioistopos, enzimas, ouro ou
pratacoloidais,entreoutrosmarcadores.
11.1Reaesdeprecipitao
Asreaesdeprecipitaoocorrementreantgenossolveiseseus
anticorposcorrespondentes,comformaodeagregadosinsolveisquese
precipitam.Osdeterminantesmaisimportantesdasreaesdeprecipitao
consistemnasconcentraesrelativasdeantgenoeanticorpo.Estarelao
ilustradaesquematicamentenaFigura19.Ocorreprecipitaomxima
quandoaquantidadeseantgenosedeanticorpossoequivalentes(zona
deequivalncia),comquantidadesdecrescentesnaszonasdeexcessode
antgenoouexcessodeanticorpo.Ofenmenode prozonarefere-se
precipitaosubtima,invisvelaosnossosolhos,queocorrenaregiode
excessodeanticorpo.Portanto,necessrioquediluiesdeantissoros
reajamcomquantidadesfixasdeantgenoafimdeobteromximodelinha
deprecipitao.Ofenmenodeprozonapodeserresponsvelpeloaparecimentoderesultadosfalso-negativosemoutrostestessorolgicos,alm
dos testes de precipitao, como nas reaes de aglutinao. Existem
vriossistemasdisponveisparaaprticadareaodeprecipitao,dentre
estes,destacam-seaprecipitaoemmeioslquidos,meiossemisslidos,
comogarouagarose,eoutrossuportes,taiscomooacetatodecelulose.
Figura19.Curvadeformaodeimunocomplexosvisveis
11.2.Reaodeprecipitaoemmeiolquido
Conhecidatambmcomotcnicadaprecipitinaoutcnicadoanel,
a reao de precipitao em meio lquido (Figura 20) consiste em se
colocaremtubosdeensaioouemtuboscapilaresumasoluodeanticorpos
conhecidos(sorohiperimune)esobreelaseadicionar,cuidadosamente,a
soluoantignicaquesedesejapesquisar,demodoaconstituir-seuma
interfaceentreambas.Asmolculasdasoluoantignicairodifundir-se
atravs da outra soluo, formando um gradiente de concentrao. Ao
nvelemqueaequivalnciaantgeno/anticorpoforaideal,seformaruma
faixadeprecipitadovisvel(umaneldeturvaobrancoleitosonainterface).
Imunologia | 79
Figura20.Imunodifusoemmeiolquido(TestedePrecipitina)
11.3.Reaodeimunodifusosimplesemmeiosemisslido
Nestesistema,tambmchamadoimunodifusounidirecionaloutcnica
deOudin,asoluoantignicasobrepostaaumacolunadegar,emum
tubode35a45mmdealturacontendoosorohiperimune.Asmolculasde
antgenopenetramnogelesedifundemcomvelocidadecaractersticapara
cadaespciemolecular(coeficientededifuso)influenciadapelaconcentrao
dogel.Aofinaldecertotempodedifuso,queemgeraldeumasemana,
cadaantgenoterformado,comoseuanticorpocorrespondente,umdisco
ouzonadeprecipitao.
11.4.Reaodeimunodifusodupla
(imunodifusodeOUCHTERLONY)
Emumadelgadacamadadegelsobreumalminadevidroescavam-se
pequenos orifcios. Em um deles, coloca-se soro ou plasma e, em outro
orifcio,coloca-seoantgeno.Umdifundeemdireoaooutro,formando
precipitados brancos em forma de linhas ou arcos, tambm chamados de
bandasdeprecipitao(Figura21).Quandoaconcentraodeantgenose
anticorposmuitopequena,asbandasnosovisveis,necessitando,nesse
caso,queseusesoluocoranteparaprotenas.Quandonecessrio,coraro
gelparavisualizarasbandasdeve-seretirardogelosimunorreagentesqueno
formaramimunocomplexos(imunorreagentessolveis)porprocessosdelavagem com soluo fisiolgica. O imunocomplexo (agregado insolvel), em
funo do seu tamanho efetivo, fica retido nas malhas do gel, onde, em
seguida,submetidoaocoranteadequado,oquepossibilitaavisualizao
dasbandasquandoformadas.Avelocidadededifusodecadaimunorreagente
regidapelasleisdadifusoedependedaconcentraoedotamanhodos
porosdogel,datemperatura,daconcentraodogaredesuapureza.
Figura 21. Representao esquemtica da reao de imunodifuso dupla
Ouchterlony.
Imunologia | 81
11.5.Reaodeimunodifusoradialsimples
(imunodifusodeMANCINI)
Nestatcnica,oanticorpoespecficoparadeterminadoantgenoincorporadoaogeledistribudosobreumalminadevidroouplacadePetri.
Emposiesadequadas,sofeitosorifciosondesecolocamsoluesantignicas
aseremtestadas,bemcomosoluespadro,compelomenostrsconcentraesconhecidasdoantgeno.Apartirdessemomento,ocorredifusoradial
doantgeno,resultandonaopacificaoemformacircular(haloouanel)em
tornodoorifcio.Odimetrodesteaneldeprecipitaoproporcional
concentraodoantgenoe,destemodo,aquantidadedestepodeserdeterminadaporcomparaocomosdimetrosobtidosporpadresconhecidos
pormeiodeumacurvadereferncia.
11.6.Reaodeimunoeletroforese(mtodode
GRABAReWILLIAMS)
Aimunoeletroforeseumatcnicadeimunoprecipitaoemmeiogelatinoso que combina a eletroforese com a imunodifuso radial. A tcnica

realizada em duas etapas: na primeira, os antgenos so fracionados por
eletroforese, enquanto na segunda etapa, ocorre a difuso dos antgenos
contraoantissoroespecfico,presentenascanaletasabertasnogel.Areao
antgeno-anticorpo nesse sistema evidenciada pela formao de linhas ou
bandasdeprecipitaonogel,correspondendocadabandaaumcomplexo
imuneespecfico.
11.7.Reaodeimunoeletroforeseunidimensionalsimples
Tambm conhecida como eletroforese de foguete ou tcnica de

Laurell,aimunoeletroforeseunidimensionalutilizaantissoroespecficopara
oantgeno,ouoanticorpoquesequerquantificar,incorporadoaogelde
agarose,quecolocadoemlminasdevidro.Assimcomonatcnicade
GrabareWilliams,opHdogeldeterminadodemodoqueamolculaa
ser analisada fique com carga negativa, migre para o polo positivo e a
substnciaincorporadanomigreaogel.Asamostrasaseremquantificadas,
bemcomooscontroles,sodistribudosempequenosorifciosdogele
submetidoseletroforese.Apartirdosorifciosdeaplicao,formam-se
conesdeprecipitao,cujasextensesvariamdeacordocomasconcentraesdassubstnciaspesquisadas.Opadrodeprecipitaoseassemelha
a um foguete, por se formar nas margens laterais do curso da migrao
eletrofortica, at que se esgote a substncia em anlise, resultando na
convergnciadasmargenslateraisemformadeponta.
11.8.Reaodecontraimunoeletroforese
Tambmchamadadeeletroimunodifusoduplaunidimensional.Nesta
tcnica,antgenoseanticorposmigramporeletroforese,simultaneamente,emdireesopostas,apartirdeorifciosseparadosdogel,nomesmo eixo, resultando na precipitao no ponto de encontro dos
imunorreagentes entre os orifcios. Para a realizao deste mtodo,
antgenos e anticorpos devem apresentar diferentes mobilidades
eletroforticas.Osanticorpospossuempropriedadesdemigrarparao
polonegativo(ctodo)emumcampoeltrico,enquantoosantgenos
devemserpreviamentetratadoscomsoluotampodepHadequado
paraotimizarosefeitoseletroendosmticosqueorientemsuamigrao
paraopolopositivo(nodo).Estefenmenopodeserinduzidocomo
usodetampesalcalinos(Figura22).Estemtodopermitearealizao
devriasanlisesemumanicalmina,forneceresultadosmaisrpidose
maissensveisqueaimunodifusoconvencionalepodeserrealizadoem
outrossuportes,comooacetatodecelulose.
Imunologia | 83
Figura22.Representaoesquemticadareaodecontraimunoeletroforese
11.9.Reaesdeaglutinao
Aaglutinaoaformaoderedesdeclulasoupartculasinertes
(ltexougelatina),interligadasporpontesmolecularesdeanticorpos,quese
combinamsimultaneamentecomdoisdeterminantesantignicosnassuperfcies
declulasoupartculasadjacentes.
11.10.Reaodeaglutinaodireta
Aaglutinaodiretaaformaodeagregadossuficientementegrandes
queocorreentrepartculasinsolveis,emsuaformantegraoufragmentada,
contendo antgenos naturais de superfcie. Hemcias, bactrias, fungos e
protozorios podem ser aglutinados diretamente por anticorpos, os quais,
sendobivalentes,formampontes,ligandodeterminantesantignicosnassuperfciesdepartculasvizinhas.Parasedetectaranticorposespecficos,diluies
seriadasdasamostrassopostasparareagirjuntoaumaquantidadeconstante de antgeno. Aps um perodo de incubao, a reao se concretiza
(Figura23)eoresultadogeralmenteexpressocomottulodaamostra,ou
seja,amximadiluioemqueocorreaglutinao.
Figura23.Representaoesquemticadareaodeaglutinaodireta
11.11.Reaodeinibiodaaglutinao
diretadehemciasporantgenosvirais
Diversos antgenos virais encontram receptores na superfcie de

hemcias,principalmentehemciasavirias,einduzemsuaaglutinao.Esta
propriedadeparticulardemuitosvrusaproveitadaparaatitulaode
anticorposproduzidoscontraessesantgenosvirais,navignciadosprocessosinfecciososounaconvalescena,parafinsdiagnsticosedesegmentoevolutivo.
Todasasreaesdeinibiobaseiam-senacompetio,sejadedois
determinantesantignicossemelhantesporummesmostiodecombinao
oudedoisanticorposdiferentesporummesmodeterminanteantignico.
Areaoseefetuaentreosimunorreagentesqueformamocompostomais
estvel.Nestecaso,osorodopaciente,contendoanticorposespecficos,
emdiluioseriada,misturadoaquantidadesfixasdeantgenoviralpadronizado,sendoincubadoa37 0Ce,emseguida,ashemciassoadicionadas(Figura24).Verifica-seatqualdiluiohouveneutralizao,ou
seja,inibiodapropriedadeaglutinanteparahemcia.
Imunologia | 85
Figura24.Representaodainibiodaaglutinaoviraldashemcias
11.12.Reaodeaglutinaopassivade
hemciasesuportesinertes
Areaosebaseianaaglutinaodehemciasoudepartculasinertes
(ltex, gelatina) que funcionam como suporte, recobertas por um antgeno
especficosolvel,empresenadeamostradesoroouplasmacontendoos
anticorpos correspondentes. A formao de pontes de anticorpos entre as
partculasadjacentesindicaaocorrnciadareao(Figura25).
Figura25.Esquemadareaodeaglutinaopassivadehemciasesuportesinertes
11.13.Reaodeinibiopassivadepartculasinertes(ltex)
Partculasdeltextendoantgenosancoradossuasuperfciepodem
seraglutinadaspelaformaodeponteanticrpica,domesmomodoquea
aglutinaodiretadehemcias,comojfoiexposto.Noentanto,aose
misturarantgenossolveisaossoroscontendoanticorpos,haverbloqueio
dos stios de combinao das molculas de anticorpo e inibio da
aglutinao.
11.14.Reaodefixaodocomplemento
A fixao do complemento ocorre aps a interao antgenoanticorpo.Oconsumodecomplemento invitropodeserutilizadocomo

umtesteparadetectaremedirconcentraesdeanticorposeantgenos.A
reaosemanifestaemtrsmomentos:noprimeiro,oantgenosecombina
comoanticorpo.Nosegundo,seosimunocomplexosestiverempresentes,oscomponentesdosistemacomplementoligam-se,sendoassimconsumidos.Finalmente,adiciona-seosistemareveladorqueconsistedehemcias
decarneirosensibilizadascomhemolisina(anticorpoantieritrocitrio).Aps
umperododeincubao,observa-seseocorreuounolisedashemcias
sensibilizadaseaatividadehemolticapodeentosermedida,afimdese
determinaraquantidadedoimunorreagentepesquisado(Figura26).
Aosepesquisarapresenadeanticorposemfludosbiolgicos,a
ausnciadelisedosistemahemolticoindicaasuapresenanaamostra,
pois como os principais componentes do sistema complemento foram
consumidos na lise do imunocomplexo inicial, no estaro disponveis
paraalisedosistemahemolticoeareaoserpositiva.
Tantoosanticorposcomoosantgenosdevemserdestitudosde
atividade anti-complementar para no ativar o complemento, independentementedoimunocomplexo.Ocomplementoobtidodesorode
cobaia,colhidoeestocadodemaneiraapropriadaparapreservaraatividadehemoltica.
Imunologia | 87
Figura26.Representaodareaodefixaodecomplemento
11.15.Reaesdeimunofluorescncia
Atcnicadeimunofluorescnciafoidescritapelaprimeiravezpor
AlbertH.Coonseseuscolaboradores,em1941.Estespesquisadores
objetivavam empregar corantes em tcnicas sorolgicas e utilizaram para
isso,almdoscorantescomuns,radicaisfluorescentes.
Nesteperodo,jeraconhecidaacapacidadedosanticorposdese
ligaremaradicaisqumicossemperdersuacaractersticadereconhecimento
eligaoaosantgenos.Jhaviamsidodescritostrabalhosutilizandoconjugadosdeanticorposecorantesemtcnicasdeaglutinao.Oproduto
resultantedestaconjugaonosmantinhasuaspropriedadesaglutinantes
originaiscomoaindacoloriaosgrumosaglutinados.Porm,estacolorao
foiconsideradadefracaintensidade,oquelevouCoonsaoptarpelos
corantesfluorescentes.
Umadasgrandesvantagensdatcnicaaintensaluminosidadeemitidaporquantidadesmuitopequenasdecorantesfluorescentes,permitin-
doidentificarestruturasfluorescentesentrevriasoutrasestruturaspresentesemcortesdetecidosouesfregaos.
A tcnica de imunofluorescncia representou um grande avano no
imunodiagnstico,principalmentenoquedizrespeitosorologia.Ataelaboraodestemtodo,asreaesocorridasentreantgenoeanticorpospodiam
ser evidenciadas atravs de reaes secundrias, como a precipitao ou a
aglutinao,quegeramfenmenosdecorrentesdaformaodeimunocomplexos
emgrandequantidadeouutilizandopartculasrelativamentegrandes.Umadas
vantagensdaimunofluorescnciafoiofatodetermaiorsensibilidadequeos
mtodosexistentesnaocasio,permitindodistinguirumanicaclulabacteriana
coradaporfluorescenaentre107bactriasnocoradas.
S foi possvel o desenvolvimento da tcnica de imunofluorescncia
devidoacaractersticasespeciaisquealgumassubstnciaspossuemdearmazenarenergialuminosaeliber-lamaistarde.Aestefenmenofoidadoonome
deluminescncia.Seasubstnciacapazdearmazenareemitirluminescncia
porperodosmaislongos,chama-seentofosforescncia;seoperodode
emissodaluminosidademaiscurto,chama-seaissofluorescncia.Entreos
corantesfluorescentesmaisutilizadosdestacam-searodamina(isotiocianatode
tetrametilrodaminaTRICT)eafluorescena(isotiocianatodefluorescena
FITC),estaltimasuperaaprimeiraporpossuirmaioreficinciaquntica,ou
seja,maiorcapacidadedeabsoroedeemissodeluminosidade.Porm,
comamodernizaodosequipamentos,nosdemicroscpioscomotambmdecitmetros,foramfeitasmodificaesparaaumentaraeficinciaquntica
dosdemaiscorantesparautiliz-losemtestesquebuscammaisdeummarcador
emsuperfciescelulares.
Aintensidadedaluzemitidaporestecorantesofregrandeinterferncia
domeioemqueeleseencontra.OpHumdosfatoresquemaisinterfere,
poishummnimodefluorescnciaempHcidoemximafluorescnciaem
Imunologia | 89
pHalcalino,porissoomaterialdevesermontadoemglicerinatamponada
alcalinaantesdaobservaoemmicroscpiodefluorescncia.
Para se obter bons resultados com as tcnicas imunofluorescentes,
fundamentalautilizaodeumbommicroscpioticoequipadocomacessrios e filtros que permitam a boa visualizao e captao da fluorescncia.
Atualmente,existemvriosmodelosdevariadasprocedncias.Paraaescolha
doequipamentoquemaisseadaptesnecessidadesdolaboratrio,deve-se
teremmentequaloobjetivodoteste,quetipodematerialserutilizado
comoantgenooucomoamostra(paraquesejafeitaaescolhadasobjetivase
oculares),qualocoranteoucorantesqueseroutilizados(paraquesejam
definidos os filtros do equipamento), quantos exames sero realizados em
mdiaequantasvezesporsemana,umavezquetalescolhairinterferirnavida
tileescolhadalmpadaaserutilizada,entreoutrosfatores.
Aligaoqumicadeanticorposacorantesdorigemaumcomposto
chamadoconjugado,queassociaacapacidadedereconhecimentoeligao
doprimeirospropriedadescorantesdosegundo,semqueocorranenhum
tipodeprejuzoparaambos.Apesardeprocessodeconjugaoserrelativamentesimples,humasriedecuidadosqueprecisamserseguidosdevidos
variaesquepodemocorreremcadaumdosreagentesacadaassociao.
Umdoscuidadosprincipaisaimunizaodosanimaiscomosantgenosmais
purificadospossveisparaevitarareatividadecruzadacomoutrosantgenos.
Atualmenteexistemnomercadocompostosconjugadosdeextremapurezae
altaespecificidade,direcionadoscontraosmaisvariadosantgenosequeatendemperfeitamentesnecessidadesdagrandemaioriadoslaboratrios.
ApartirdomtododescritoporCoonseseuscolaboradores,sugiram
numerosasvariaes,dasquais,aimunofluorescnciadiretafoiamaissimples
eaprimeiraaserdescrita.Nestatcnica,oconjugadoreagediretamentecom
antgenospresentesnasuperfciedeclulas(Figura27).Comoestatcnicase
prestapesquisadesubstnciasqueatuamcomoantgenosparaoconjugado,
torna-senecessria,acadaprocuradeumantgenodiferente,aproduode
umconjugadodiferente.Almdisso,detodasasvariaesdaimunofluorescncia,
estaamenosespecfica,jqueprincipalmenteemtecidosouesfregaos,
devidograndequantidadedematerialnaamostra,podeocorrerapresena
deantgenoshomlogosaoqueseestpesquisando.Quandosetratade
clulasntegras,hcertafacilidadenoreconhecimento,pormemfragmentos
celularesouestruturasmuitopequenasnecessriograndeconhecimentoe
intensotreinamentoparadiminuirainespecificidade.
Estavariaodomtodoaindabastanteaplicadanodiagnsticode
infecespor Chlamydiatrachomatisemesfregaoscervicaiseuretrais.Este
mtodo tambm foi largamente utilizado na identificao de antgenos do
MHCenatipagemdelinfcitosBelinfcitosT.
Figura27.Esquemadareaodeimunofluorescnciadireita
Outravariedadedomtodoaimunofluorescnciaindireta.Nesta
modalidade,pode-serealizarapesquisadeanticorposcontraosmaisvariados
antgenos. O conjugado uma imunoglobulina que reconhece a outra
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imunoglobulinacomoantgeno,ouseja,umaanti-imunoglobulinaouanticorpo
secundrio(Figura.28).Avantagemdestemtodoqueoanticorpopode
estarancoradosuperfciedequalquerantgenoeaindaassimserreconhecidopeloconjugado.Assim,umnicoconjugadopodeserutilizadonapesquisadeanticorposcontravriasinfecesdiferentes,tornandoomtodomais
barato.Umavezqueoreconhecimentodeumaimunoglobulinaporoutrase
d pela regio estvel do fragmento cristalizvel (poro Fc), a ligao
espcieespecfica,conferindoaomtodograndeespecificidade.Eletambm
maissensveldoqueomtododireto,porqueexistemnormalmentemais
epitoposnaimunoglobulinaparaoconjugadoseligar.Quantomaioraquantidadedeconjugadomaiorseraemissodefluorescncia.
Figura28.Esquemadareaodeimunofluorescncia
Estamodalidadedomtodoauxiliaodiagnsticodevriasdoenase
permite a pesquisa de diferentes isotipos de imunoglobulinas, sendo que,
neste caso, h a necessidade de utilizar um conjugado para cada um dos
isotipos.Destaforma,omtodoutilizadonoacompanhamentodadoenae,
emalgunscasos,podesertambmutilizadocomocritriodecura.
Deumamaneirageral,atcnicadeimunofluorescnciaapresentanveis
desensibilidadequevariamde70%a90%,eespecificidadequevariade
85%a99%.Porserummtodocomperfilmaisespecfico,estemais
utilizado em confirmaes sorolgicas. Deve-se utilizar o mtodo de
imunofluorescnciasemprealiadoaoutromtodomaissensvelparaarealizaodatriagemefornecerosdoisresultadosemcombinao.Asuautilizao
pesquisandoIgMeIgGsricaspodeaumentarasensibilidade,umavezquea
primeiraaparecemaisprecocemente.
11.16.Ensaiosimunoenzimticos-Enzyme-linked
immunosorbentassay-ELISA
Osestudospreliminaresquetornarampassveisdeexecuoosmtodosimunoenzimticosforamrealizados,simultaneamente,em1966,porNakane
e Pierce, nos Estados Unidos, e por Avrameas e Uriel, na Frana, com a
utilizaodaperoxidase(horseradishperoxidase-HRP)paraaconfecode
conjugados proteicos, tendo como precursor o processo de marcao de
protenascomcorantesfluorescentes,criadoporCoons,em1941.
Em1971,doisgruposdepesquisadores,umholands,formadopor
VanWeemeneSchurs,eumsueco,formadoporEngvallePerlmann,idealizarameintroduziram,pioneiramente,omtodoimunoenzimticoparadeteco
equantificaodeantgenosouanticorposespecficos.Estesgruposobservaram que protenas poderiam ser imobilizadas em uma superfcie slida de
poliestirenoeareaoimune,serreveladapelaformaodeprodutoscoloridosdareaoenzima-substrato,napresenadeumcomponentedoadorde
eltrons,denominadocromgeno.
O mtodo ELISA, quando efetuado em timas condies (enzimas
altamenteativas,antgenospuros,substratosdealtaqualidade,anticorpoe
conjugado),apresentasensibilidadesemelhanteaoradioimunoensaio,coma
vantagemdenosernecessrioutilizarmaterialradioativo.Entretanto,esse
Imunologia | 93
mtodoapresentaalgumasdesvantagens,poisalgunssubstratosusadosnessas
reaessoteratognicoseapresenadeenzimasendgenasinterferemnos
resultadosquandoseusaclulasinteirascomoantgenos.
A reao desenvolvida frequentemente em placas plsticas de
microdiluio(suporte),contendosriesdeorifcios,ondesodepositadosos
imunorreagentes,antgenosouanticorpos,dependendodoobjetivodomtodo.Oprocessoderevestimentodaplacacomoimunorreagenteadequado
denomina-se sensibilizao. Para sensibilizar a placa deve-se tratar o
imunorreagentecomsoluoalcalina,deixando-ocomcargaefetivanegativa,e
assimpromover,passivamente,aadsoroplacaporinteraeseletrostticas
(foras coulmbicas), as quais ocorrem em virtude das cargas positivas do
poliestirenooupolivinil(polyvinylchloride-PVC)utilizadoparaconfeccionlas.Almdasplacasdemicrodiluiode96cavidades,tambmsoutilizados
outrossuportes,entreosquais,esferasdesefarose,esferasdepoliestirenoou
de PVC, ou tubos de poliestireno ou PVC, que possibilitam a adsoro
adequadadamaioriadosimunorreagentes.
Asetapasdelavagemdasplacasdemicrodiluiointerpem-sesdemais
etapasdeexecuodomtodoeservempararetirarexcessosdeimunorreagentes
noligados.Podemserusadosprocedimentosmanuaisouautomticos,quevo
desdeousodejorradeirascontendoasoluodelavagem,oudepentemulticanal
adaptadoaumsistemadevcuo(lavadorasemiautomtica),atautilizaode
lavadorasdeplacasautomticas,quereduzemotempoderealizaodotestee
proporcionammaioruniformidadeaoprocesso.
OrevestimentodasuperfcieinternadaplacadeELISA,pelomenos
noplanoterico,noabsolutoe,portanto,algumasregiespermanecem
livresdeligao.Estesespaosdevemserocupadoscomqualquermolcula
alheiaaosistemareacional,nosentidodereduzir,oumesmoevitar,aligao
inespecfica,noimune,decomponentesdaamostra,geradoresdereaes
indesejveisquepossibilitamfalsasinterpretaes.Acoberturadestesespaos
vazioschamadadebloqueio.Entreasprotenasmaisempregadasnestaetapa
destacam-seasoroalbuminabovina(BSA),aovalbuminaeacasena,almde
umcomplexoproteico,comoosorodecobaia.
Dependendodomaterialaserpesquisado,pode-seconjugarantgenos
comenzimas(Ag-E)eanticorposouantianticorposcomenzimas(Ac-E).
Enzimassomacromolculasdenaturezaproteica,comfunobiolgica
dealtopodercatalticodereaesqumicaseelevadaespecificidadeao
substrato correspondente. As mais usadas nestes testes so a fosfatase
alcalinaeaperoxidase.
Pararevelarapresenadaenzimanocomplexoformado,utiliza-seuma
soluoreveladora,queconsisteemumtampoadequado,ondeseadicionam
osubstratocorrespondenteenzimaconjugadaeumcomponentedoadorde
eltrons(cromgeno).Aenzimaconjugadaquebraosubstratoeseusprodutosatuamnocromgeno,alterandoacoloraodosistema(Figura29).
Figura29.EsquemadoensaioimunoenzimticoELISAindireto,parapesquisa
deanticorposespecficos
Aleituradareaoemcondiesdetrabalhodecampopodeserfeita
deformavisual,simplesmentepelaobservaodaalteraodacolorao.Em
condiolaboratorialutiliza-seespectrofotmetroapropriadoparaleiturados
Imunologia | 95
orifciosdasplacas,quetransformaaintensidadedecoremnmeros.Quanto
maior a leitura, maior ser a concentrao de enzima conjugada e,
consequentemente,maiorseraconcentraodasubstnciapesquisadaem
tcnicasnocompetitivas.
OmtodoELISApodeserclassificadodeacordocomsuaatividade
deamplificao,ouseja,pormtodosdiretosnocompetitivos,oubaseados
emsuaatividademoduladora,quesomtodoscompetitivos.
OELISAdiretomaisusadoemimuno-histoqumica.Seufundamento
consistenautilizaodeanticorposprimriosmarcadoscomenzima,quese
combinamespecificamenteaosantgenospresentesemcorteshistolgicos.A
aplicaodasoluoreveladoradestacaomaterialpesquisado.
OELISAindiretoempregadoparaapesquisadeanticorpos,onde
amostrasdesoroouplasmasocolocadasparareagircomantgenosimobilizadosemumafaseslida(placasdeELISA).Posteriormente,soreveladoscom
auxliodeconjugadoenzimticoespecficolevandoaformaodeumproduto
corado ao agir sobre substratos cromognicos. Para pesquisa de antgenos
presentesemmaterialbiolgico,aamostrapostaparareagircomanticorpos
especficosimobilizadosnafaseslida.
O ELISA competitivo consiste na pesquisa de antgeno, onde o
anticorpomobilizadonafaseslidaeoantgenocorrespondentecompete
comumaquantidadepadronizadaemarcadoparastiosdecombinaodisponvel.Nessecaso,areduodareaoindicamaiorquantidadedeantgeno
nasoluo.Parapesquisaranticorpos,oantgenoimobilizadoepoderse
ligar ao anticorpo da amostra ou ao j conhecido e marcado (conjugado
enzimtico),para,assim,decresceraintensidadedecoloraodareao.Em
ambososmtodoscompetitivos(Figura30),doisprocedimentospodemser
seguidos: a competio simultnea, cujo antgeno ou anticorpo marcado
adicionadojuntocomaamostra;ouasaturaosequencial,ondeoantgeno
ou anticorpo adicionado primeiro, seguido de uma incubao com o

imunorreagentemarcado.
Figura30.Modelodemtodocompetitivo,ondeantgenosmarcadoseantgenos
nomarcadosdeumaamostracompetempelosstiosdeligaodosanticorpos
imobilizadosemumsuporte
11.17.Westernblotting-WB
Atcnicade WesternBlotting,tambmchamadade immunoblotting

ou imunoeletrotransferncia, uma ferramenta de grande utilidade para a
caracterizaodeantgenos,ouparapesquisadeanticorposespecficospara
umdeterminadocomponenteantignico.
Atcnicade WBbaseia-senumacombinaodetrsmtodosmuito
aplicadosembiologiamolecular:aseparaodemacromolculasatravsde
eletroforese em gel de poliacrilamida, na presena de duodecil-sulfato de
Imunologia | 97
sdio(SDS-PAGE);suatransfernciaeletrolticaparamembranas(geralmente
denitrocelulose);eoensaioderevelao,utilizandoanticorposouprotena
A,marcadosporenzimas,radionucldeos,fluorocrmos,metaiscoloidaisou
complexobiotinina-avidina-peroxidase.
Assim,asprotenasdeumdadoantgenososeparadas,transferidas
eletroliticamenteparamembranasdenitroceluloseepostasareagircomanticorpos
marcados. No final, a reao antgeno-anticorpo revelada por meio de
imunocomplexosformadoscomprotenasdefinidas,efacilmenteidentificadas
pelosseuspesosmolecularescaractersticos.
AorigemdonomeWesternBlottingpartiudeumabrincadeiraacadmicabaseadanonomeSouthern,doautordeummtododeeletrotransferncia
defragmentosdecidosnucleicos(DNA),querecebeuonomedeSouthern
Blot.Poucotempomaistarde,AlwineecolsconseguiramfazerumaadequaonatcnicadeSouthernBlotting,queseconsistiunaeletrotransfernciade
cido ribonucleico (RNA), o qual, por sua vez, foi analisado atravs de
sondasdeDNA.Assim,seguindooprincpiodabrincadeirainicial,resolveusechamaranovatcnicadeNorthernBlotting.Poucomaistarde,em1979,
Towbin,StaehelineGordondesenvolveramomtododeeletrotransferncia
deprotenas.Paraseguirajentotradicionalformadereferir-seaomtodo
resolveu-sebatizaranovatcnicadeWesternBlotting.
Arazoparatransferirem-seprotenas,apartirdeumgeldepoliacrilamida
paraumamembranasinttica,estnapossibilidadedemanuseiocontnuodo
materialparaanlise,almdesepodertrabalharcomvriosreveladoresao
mesmotempo,oucomsondasdeelevadopesomolecular,umavezquea
poliacrilamidanoummaterialmuitoadequadoparaquemolculasdegrandetamanhosejamdifundidas.
As membranas mais utilizadas para o blotting so derivadas da
nitrocelulose.Apesardisso,elassofrgeiseapresentamumabaixacapacidadedeligaosmacromolculaseletrotransferidas.Asmembranasde nylon
so muito mais resistentes e ligam-se muito fortemente s protenas. Sua

capacidadedeligaoseisvezesmaiorqueadasmembranasdenitrocelulose.
Sualimitaoestrelacionadaanoimpregnaoporcorantes,comumente
empregados na revelao de protenas (azul de Comanssie e negro de
amido),egrandequantidadedereaesinespecficas,requerendo,assim,
um bloqueio muito bem feito antes de se desenvolver o ensaio
imunoenzimticoparaarevelaodoWesternBlotting.Outroaspectomuito
importante a porosidade da membrana. Recomenda-se a utilizao de
membranas com 0,45mm para o uso genrico e com dimetros bastante
menores(0,2mm)paraestruturasproteicas,compesosmolecularesinferioresa20kDa.Asmelhoresmembranas,emborasendobastantecaras,soas
dedifluoretodepolivinilideno(PVDF).Elascombinamaexcelentecapacidadeliganteearesistnciamecnicamanipulaonecessriaparaaelaboraodasfitas,contendoprotenaseletrotransferidas.
11.18.Testeimunocromatogrfico
Odispositivodeimunocromatografiacompostodeumamembrana
porosadecelulosemodificadaemembranasabsorventesacessriasdefibrade
vidro,contendooselementosdereao,ajustadasemuminvlucroplstico
apropriadocomumajanelaparaseacrescentaraamostradetesteeoutrapara
leitura do resultado da reao. O princpio de funcionamento do teste
imunocromatogrfico baseia-se na reao especfica antgeno-anticorpo e se
constitui por uma fase slida (membrana porosa), onde esto imobilizados
elementosdecaptura,eporumafasemvel,ondeestosuspensosoconjugado(quepodeseraprotenaA,ligadaaoourocoloidalououtrosconjugados
disponveis)eamolculaalvodaamostra.
A fase mvel migra sobre a fase slida por efeito de capilaridade,
conduzindoocomplexoformadoentreamolculaalvoeoconjugado,que,
por sua vez, ser retido na linha de captura da fase slida, formando um
Imunologia | 99
complexomacromolecularcoloridovisvelaoolhohumano.Casoaamostra
no contenha a molcula alvo, esta linha de reao no se formar. Uma
segundalinhadereao,denominadalinhadecontrole,seformapelacaptura
do conjugado livre, que permite a confirmao da migrao da fase mvel
(Figura31).
Figura31.PrincpiodoTesteImunocromatogrfico
11.19.Imuno-histoqumica
Aimuno-histoqumica(IHQ)reneainteraoantgenoanticorpo in
vitro,tcnicashistolgicasereaesqumicas,emummtodoquepermite
detectardiferentesestruturasdetecidos,reveladospordiversostiposdeprocessosdevisualizao.utilizadanodiagnsticoanatomopatolgicodevrias
doenasdegenerativasouparasitrias,bemcomonaidentificaodeestruturas
normaisemestudosdehistologiabsica.AstcnicasdeIHQpermitema
localizaodeprotenasnasclulasdeumaseodetecido,fixadosemformol
ouincludoemblocosdeparafina.Existe,atualmente,adisponibilidadedeum
nmerocrescentedeanticorposparausoemIHQ,oquevempossibilitado
umamaiorprecisodiagnstica.
Existemdoistiposdetcnicasdeimuno-histoqumica:
TcnicadiretaOsanticorposprimriossoligadosaummarcador
apropriado,eocortedetecido,quecontmantgenosespecficos,
incubadocomoanticorpodurantealgumtempo.Apsainterao
entreosanticorposeasprotenas,osanticorposquenoseligaram
soremovidosporlavagem.Dependendodomarcadorutilizado,a
leitura da reao ser realizada pela microscopia adequada; para
marcadores fluorescentes, por exemplo, o corte observado por
microscopiadeimunofluorescncia,enquantoparaoutrosmarcadores,
utiliza-seamicroscopiaticaconvencional.
TcnicaindiretaNestatcnica,seutilizaoanticorpoprimrio
especficoparaumadeterminadaprotenaeparaoanticorposecundrio, uma anti-imunoglobulina marcada que reconhece o

anticorpoprimrio.Ocortedetecidoincubadocomoanticorpo
especficoparadeterminadaprotena.Depoisdelavado,incubadocomoimunoconjugado,quesevailigaraoanticorpoprimrio.
Emseguida,haobservaopormicroscopiaadequada,dependendodomarcadorutilizado.
A tcnica de IHQ pode tambm estar associada a um processo
enzimtico de colorao, como ao complexo avidina-biotina-enzimacromgeno (Figura 32).O complexo formado pela ligao de uma
molculadeestreptavidinacomvriasdebiotinaassociadasaumaenzima
(peroxidaseoufosfatasealcalina),quetemcomofunoaconversode
umcromgenoincoloremumprodutofinalcolorido.Ocromgenomais
utilizadooDAB(diaminobenzidina),queconferecormarrom-ferruginosa
aoprecipitadopermanente.
Imunologia | 101
Figura32.Amplificaodesinaldevidoaomaiornmerodemolculasde
enzimasbiotinaladasligadasavidina
Oanticorpomarcadocomaperoxidasepodeseligarastiosteciduais
inespecficos,prejudicandoaresultadodoexame.Autilizaodeprotenas
inertesalheiasaosistemareacional,taiscomosorofetalbovino,soroalbumina
bovina ou casena, ao competirem com os stios de ligao inespecficos,
reduzemareaoinespecfica.Aperoxidaseendgena,encontradaemdiferentes tecidos, tambm pode mascarar uma reao e deve ser inibida pela
incubaoprviadocortecomperxidodehidrognio.Afosfatasealcalina
est amplamente distribuda nos tecidos humanos e encontrada em altas
concentraes na mucosa intestinal e nos tbulos proximais dos rins, entre
outrostecidos.Abiotinaendgena,assimcomoasoutrasprotenasutilizadas
naIHQ,tambmencontradaemtecidos,particularmentenofgado,pulmo,bao,tecidoadiposo,glndulamamria,rimecrebro.Aatividadeda
biotinapodesersuprimidapelousodetampesalcalinos,pelapr-incubao
comavidinaoucomleitedesnatado.
AavidinaumaglicoprotenabsicacomPMdeaproximadamente
68mil,obtidaapartirdaclaradoovodevriasespciesdeaves.Amolcula
deavidinaquadrivalenteesimtrica,ondecadaladodamolculacontmum
pardereceptoresparaabiotina.Aestreptavidina,obtidaapartirdoStreptomyces
avidinii,possuipontoisoeltricoprximoaoneutroemantmaspropriedades
deligaodaavidinasemapresentarprejuzosaoresultadofinal.Osistema
avidina-biotinapermiteaamplificaodesinal,poismuitasmolculasdebiotina
podemseligaraumanticorpo.Eaadiodaavidinamarcadacomcorantes
fluorescentes,oucomenzimas,resultamemumaamplificaodareao,facilitandoavisualizaodocortecorado.
11.20.Citometriadefluxo
Acitometriadefluxoumatcnicautilizadaparacontar,examinare
classificarpartculasmicroscpicassuspensas,emfluxo,emummeiolquido.
Permiteaanlisedevriosparmetrossimultaneamente,sendoconhecidatambmporcitometriadefluxomultiparamtrica.Aversomaisaplicadada
citometriadefluxodenominadaFACS(fluorescence-activatedcellsorter,
separadordeclulaativadoporfluorescncia),quefoiprojetadaparaautomatizar
aanliseeaseparaodasclulascoradascomanticorpofluorescente.O
FACSutilizaumfeixede laser eumdetectordeluzparacontarasclulas
intactas nicas em suspeno. Atravs de um aparelho de deteco ticoeletrnicosopossveisanlisesdecaractersticasfsicase/ouqumicasdeuma
simplesclula.
Emsistemascelulares,asprincipaispropriedadesanalisadassootamanhorelativo,agranulosidaderelativa,acomplexidadeinternadaspartculasea
intensidaderelativadafluorescncia.Essascaractersticassodeterminadaspor
meiodeumsistemadeacoplamentoptico-eletrnicoqueregistraaforma
como a clula, ou partcula, dispersa a luz do laser incidente, emitindo
fluorescncia(Figura33).
Imunologia | 103
Figura33.DetecodelinfticosBfluorescente,porcitometriadefluxo
Ofundamendodacitometriadefluxoconsistenaemissodeumfeixe
deluz(normalmentelaser),denicocomprimentodeonda(cor),direccionado
aummeiolquidoemfluxo.Umnmerodedectoresapontadoaolocal
ondeofluxopassaatravsdofeixedeluz.Umnalinhadofeixe(Forward
ScatterouFSC)evriosperpendicularesaeste( SideScatterouSSC),alm
deumoumaisdetectoresfluorescentes.Cadapartculasuspensapassando
atravsdofeixedispersaaluzdeumaforma,eoscorantesqumicosfluorescentesencontradosnapartcula,oujuntospartcula,podemserexcitados,
emitindoluzdemenorfrequnciadoqueodafontedeluz.
Esta combinao de luz dispersa e fluorescente melhorada pelos
dectetorese,analisandoasflutuaesdebrilhodecadadetector(umapara
cadapicodeemissofluorescente),possvelexplorarvriostiposdeinformaosobreaestruturafsicaequmicadecadapartcula,individualmente.
FSCcorrelaciona-secomovolumecelulareSSCdependedacomplexidade
internadapartcula(Ex:formadoncleo,quantidadeetipodosgrnulos
citoplasmticoserugosidadedamembrana).Atualmente,algunscitmetrosde
fluxotmeliminadoanecessidadedafluorescnciaeusadosomentedisperso
deluzparasuamedio.Outroscitmetrosdefluxoformamimagensdecada
fluorescnciadaclula,dispersodeluzetransmissodeluz.
Ocitmetrodefluxodivididofundamentalmenteemcincosistemas:
SistemafluidoLocalondeocorreraintroduoeoalinhamento
dasclulaspordiferenadepresso,equeserointerceptadaspela
luzdolaser.
SistemapticoContmafontedeluzdo laser.Normalmente
so usadas lmpadas de mercrio ou xenon, lasers de alto poder

(argnio, kripton), lasers de poder baixo (argnio-488nm, redHeNe-633nm,green-HeNeeHeCd-UV)e lasers diodo(azul,
verde,vermelhoevioleta).
SistemaeletrnicoResponsvelporconverterossinaisticos
detectadosemsinaiseletrnicosproporcionais,atravsdeumsistema
analgicoparadigital(ADC),gerandoFSCeSSC,assimcomo
sinaisfluorescentes.
Sistema de amplificao Codifica e processa as informaes
recebidasemescalalinearouescalalogartimica.
SistemacomputacionalResponsvelpelaanlise,processamento
dossinaiseemissodoresultado,utilizando softwares especficos.

Existeaindaumfiltroeumsistemadetectorquecaptaaluzprovenientedasclulas.Aemissodeluzfrontalmedeotamanhodaclula
ealuzlateralavaliaasuagranulosidadeecomplexidadeinterna.
Modernoscitmetrosdefluxosocapazesdeanalisarvriaspartculasemcadasegundo,emtemporeal,epodemseparareisolarpartculas
compropriedadesespecficas.Osparmetrospossveisdemedirso:volumeecomplexidademorfolgicadasclulas,pigmentoscelulares(comoa
Imunologia | 105
clorofila),DNA,RNA,anliseeclassificaodecromossomas,protenas, antgenos superfcie celular (marcadores CD) e antgenos

intracelulares,entreoutrasmolculas.
Ahematologiafoiumadasprimeirasmodalidadesbiomdicasase
beneficiardasaplicaesclnicasdacitometriadefluxo.Algumasdestas
aplicaessoutilizadasregularmenteparaodiagnsticoouoacompanhamentoteraputicodediferentesafeces.Emcancerologia,adetecoda
clula tumoral a aplicao mais desenvolvida. Esta deteco repousa
essencialmentesobreamediodecontedoanormaldeDNAnoncleo
daclulatumoraledaexpressoproteicadosantgenostumorais.
Atualmente,aimunologia,abiologiamoleculareasanlisesclnicas
soasreasdacinciaquemaisutilizamacitometriadefluxoparaadeteco
ouidentificaodesubtiposdeclulasimplicadasnaimunidade.Acontagem
delinfcitosTconsisteemclassificarequantificarassubpopulaesdesses
linfcitos,pelapesquisaimunofenotpicadosCDs,pormeiodeconjugados
fluorescentesespecficos.Dependendodosfluorocromosqueestaroligadosaosanticorposmonoclonais,asfluorescnciasemitidasporeles,quando
excitados pelo laser , tero comprimentos de ondas diferentes e,
consequentemente, cores diferentes. H diversos tipos de fluorocromos,
comooisotiocianatodefluorescena(FITC),aficoeritrina(PE),aprotena
Clorofilperidinina(PerCP)eoTexasRed.
Ossinaiseletrnicossousadosparaanalisarasclulasdeacordo
comseusmarcadoresdesuperfcie,eestaanliseinterpretadaatravsde
umgrficodeseparaodivididoemjanelas(gates)(Figura34).Ocitmetro
forneceonmeroabsolutodelinfcitos,porexemplo,linfcitosTCD3+/
CD4+edelinfcitosTCD3+/CD8+,porqueemcadatubodeamostraexisteumnmeroconhecidodepartculasderefernciaconjugadascom
fluorocromos(valorpadro).
Figura34.AnlisedolinfticofeitapeloCitmetrodeFluxomostrandoos
GateseaspopulaesmarcadascomFITC,PEePerCP
11.21.Testesdehipersensibilidadecelularcutneatardia
Emboraexistammtodosinvitroparaoexamedaimunidadecelular,
como,porexemplo,alinfoproliferaoeacitometriadefluxo,aresposta
celular tambm pode ser verificada in vivo por meio de testes de
hipersensibilidadecelularcutneatardia.Estestestessomuitosimplese
podemserempregadosnaavaliaogeraldaimunidadecelularemestudos
de deficincia imunolgica e na verificao da exposio a determinados
agentesinfectoparasitriosindividuaisoueminquritosepidemiolgicos.
importanteressaltarqueumtestepositivoparaumagenteinfecciosono
significanecessariamentediagnsticodedoenaativaouinfecoporeste
agente,masapenasapresenadeclulasTh1dememria,cujaorigemfoi
induzidaporumainfecoprimriaassintomticaoudeumadoenacurada.
Otestenegativoindicaqueoindivduonodevetertidocontatocomo
agentequeseinvestiga.
Imunologia | 107
Estes testes, alm de representarem o principal exame complementar

para o diagnstico e acompanhamento do curso de vrias enfermidades
infectoparasitrias,soindicadostambmparaaavaliaodadiminuioda
imunidadecelularTh1,ouanergia,queseconfigurapelaausnciaderesposta
a uma bateria de antgenos comuns, determinada por fatores genticos ou
ambientais.Comoocorre,porexemplo,emindivduoscominfecesrecorrentes,cominfecescausadaspormicrorganismosquenormalmentenoso
patognicos, indivduos em uso de imunossupressores, indivduos com
imunodeficinciasprimriasoucomdoenasquelevamimunodeficincia
secundria,comoaAIDS,neoplasias,doenasautoimunes,etc.Nasuspeita
de anergia, feita a aplicao na pele, de certos produtos qumicos que
reagemcomprotenasqueinduzemsensibilizaosistmicaavriosmetablitos
doagentesensibilizante.Odinitroclorobenzeno(DNCB)umagenteque
temsidoutilizadodestamaneira,comafinalidadedetestaraimunidadecelular
empacientescomsuspeitadeanergia.Estenodeveserumprocedimentode
rotina,edeveserreservadoapacientesqueapresentaramausnciaderesposta
celularaosantgenoscomumentetestados.
Dentreosantgenosmaisutilizados,paraaavaliaodarespostacelular
dehipersensibilidadetardia,figuramosseguintes:atuberculina,tambmchamadadePPD(derivadoproteicopurificado),empregadanotestedeMantoux,
queutilizadoparaaavaliaodaexposioaoMycobacteriumtuberculosis;
alepromina,ouantgenodeMitsudaoumitsudina,queutilizadadianteda
suspeita de hansenase; o extrato de Leishmania contido no teste de
Montenegro, utilizado no diagnstico complementar e em inquritos
epidemiolgicosdeleishmaniosetegumentar;osantgenosdeCandidaalbicans,
candidina ou oidiomicina, empregados diante da suspeita de candidase; a
tricofitina,paraasdermatofitosescausadasporfungos;aparacoccidioidina,
utilizadasobaformadefiltradodeculturanaavaliaodarespostacelularao
Paracoccidioidesbrasiliensis,eoutros.
Otesteseprocedepeloinculo,apsantissepsiadapelecomlcool,
de0,1mLdeantgenoespecfico,porviaintradmicanafaceanteriordo
antebrao,usandoseringasde1mLcomagulhasnG8x0,25mm,estreise
descartveis. Como controle, deve-se injetar o mesmo volume de soluo
salinaemoutropontodoantebrao.Aformaodeumappulapequenae
uniformeindicainjeocorreta.Ainjeosubcutnealevadiluiodoantgeno
epodegerarresultadosfalso-negativos.Aleiturarealizadapormediodos
maioresdimetrosdoeritemaedaenduraoaps48-72horasnamaioria
dosprocedimentos.Enduraomaiorque5mmdedimetrogeralmenteindica
respostapositiva.
12. Alguns parmetros utilizados no controle
de qualidade do diagnstico sorolgico
Ocontroledequalidadeparaodiagnsticosorolgicodasdoenas
infectoparasitrias,damesmamaneiraqueparatodososoutrosprocedimentos
laboratoriais,devesercriteriosaemtodasasetapasdoprocesso.Comeando
pelafasepr-analtica,queincluiaindicaoesolicitaocorretasdoteste
adequado,coletadaamostradopacienteconvenientementepreparado,alm
dotransporteemanuseiodaamostraemcondiesapropriadasatolaboratriodeanlise.Afaseanalticacompreendeaescolhadomtodoadequado,
a realizao do teste de acordo com as recomendaes do fabricante e o
registrodoresultadoobtido.Afaseps-analticaincluioseventuaisclculose
aapresentaodoresultadoemformadelaudofinal.Apartirdestafase,deve
serfeitaainterpretaodoresultado,emconjuntocomosdadosclnicose
demaisexameslaboratoriais,paraquesejadefinidaamelhorconduta.
12.1.Construodebancodesoros
Obancodesorosumacoleocatalogadadeamostrasrepresentativas
deumapopulaoquesemantmparapreservarsuascaractersticasimunolgicas.
Imunologia | 109
Paraaadequadaconstituio,necessrioainclusodeamostrasprovenientesdepessoasinfectadasedepessoasnoinfectadas.Asamostrasde
pessoasinfectadas,chamadascontrolespositivos,devemserpertencentes
sreasendmicas(seadoenapossuirtalcaracterstica)evircomdiagnsticoconclusivoquedemonstreoparasitoouporprovasquedeemtais
indicaes,como,porexemplo,ostestesintradrmicosdehipersensibilidade
celular,reaodehibridizaoouareaopolimersicaemcadeia( Polymerase
ChainReaction-PCR).Asamostrasdeindivduosnoinfectados,consideradosnormaisechamadosdecontrolesnegativos,soselecionadas
medianteaapresentaoderesultadosnegativosobtidoscomasmesmas
provas utilizadas para seleo das amostras positivas e, se possvel for,
provenientesdereasnoendmicasdamodalidadeestudada.Sehouver
ainclusodesorosprovenientesdeindivduoscomoutrasdoenas,paraa
verificaoderespostascruzadas,asmesmasprovasdiagnsticasdecerteza
devemserrealizadas.Todobancodeamostrasnecessitadaaprovaode
comissodeticaempesquisaenvolvendosereshumanos,bemcomoda
aprovaodecomissodeticaparausodeanimais(CEUA),quando
envolveamostrasnohumanas.
12.2.Avaliaodosmtodossorolgicos
Aoanalisarocomportamentosorolgicodeduaspopulaes,onde
umadelassejaconstitudaporamostrasprovenientesdepessoasinfectadas
eaoutradepessoasnoinfectadas,aosecompararosresultadossorolgicos
obtidosemambas,comfrequnciarelativaemporcentagem,encontram-se
duascurvasgaussianasbemdefinidas(Figura35).
Figura35.Distribuiodefrequnciasdosttulossorolgicosdeduaspopulaeshipotticas,umanormalAeoutrainfectadaB,encontradascomumteste
sorolgicohipoteticamenteideal
Entretanto, estes dados hipotticos ideais no refletem o que se

observaemumarotinadediagnsticosorolgico.Osresultadosdostestes
sorolgicosseagrupamemquatrocategorias,deacordocomaexistncia
ounodadoenaeapositividadeounodoteste.Paraqualquerinfeco
queseanalise,observa-sesobreposioentreascurvasdedistribuioda
populaonormal(A)eadeinfectados(B),comosemostranaFigura
36,ondeossoros,comresultadospositivosaotesteeprovenientesde
pacientesnosquaisodiagnsticodecertezaerapositivo,denominam-se
verdadeiros-positivos.Soroscomresultadosnegativosobtidosdecontroles normais so chamados verdadeiros-negativos. Soros com resultados
negativosprovenientesdepacientesinfectadossodenominados falsosnegativos e aqueles com resultado positivo ao teste sorolgico, porm
obtidosdecontrolesnormais,soosfalsos-positivos.
Imunologia | 111
Figura36.Distribuiodefrequnciasdosttulossorolgicos,semelhantesao
queseencontrahabitualmente:umanormalAeoutrainfectadaB,obtidas
comumtestesorolgicohipoteticamenteideal
Nesteexemplohipottico,asobreposiodascurvassimtricaea
linhadecorte(cutoff)encontra-semarcadaaocentro,fornecendoassim,igual
quantidadederesultadosfalsos-negativos(C)efalsos-positivos(D).Osdadoscomqueseobtmascurvaspodemserextradosdeumquadrodedupla
entrada,comoapresentadonoQuadro2.
Quadro2Demonstraodepopulaesdeindivduosinfectadoseno
infectados, onde: a = Verdadeiros-positivos, b = Falsos-positivos, c =
Falsos-negativos,d=Verdadeiros-negativoseP=Prevalncia.
INDIVDUOS
TESTE
INFEC]O
PRESENTEAUSENTE
TOTAL
POSITIVO
ab
NEGATIVO
cd
a+b
c+d
TOTAL
a+c(P)b+d
Apesardetestessorolgicosproduziremmuitosresultadosverdadeiros, alguns resultados falsos, como j mencionado, podem ser gerados,

sejamelespositivosounegativos;e,porconseguinte,comumdizerque
os testes sorolgicos so presuntivos, ou seja, de valor probabilstico.
Estestestes,obrigatoriamente,devemseravaliadosparadefinirparmetros
importantesquantossuasqualidadesfixas(sensibilidade,especificidadee
acurcia),umavezqueestesvaloresindependemdaprevalnciadainfecoestudadanapopulao.
Umtestedetriagemsorolgicaidealdevesercapazdeidentificar
todososindivduoscomacondioestudadaedeexcluirtodososindivduosquenoapresentemestacondio.Aprobabilidadedotesteem
identificarcorretamente,emumapopulao,osindivduosqueapresentem
ainfeco,denomina-sesensibilidade(S)epode,tambm,serconceituadacomoacapacidadedeumtestesorolgicoproporcionarresultados
positivosnosindivduosinfectadosou,ainda,comoacapacidadedomtodosorolgicoemdetectarquantidadesmnimasdomaterialdesejado.
Calcula-seasensibilidadecomaseguinterelao:
Sensibilidade=a:(a+c)
Deacordocomosdadosdoquadro3
Sensibilidade=300:400=0,75ou75%
Osresultadospodemserapresentadosemumaescalade0a1,mas
normalmentesoexpressosemporcentagem.
Acapacidadedotesteparaexcluiraquelesquenosoafetados
chamada especificidade (E), que tambm pode ser conceituada como a
qualidadequeumtesteapresentaemdistinguirmolculasdiferentes,porm,
comelevadograudehomologia.AproveitandoosdadosdoQuadro3,a
especificidadecalcula-sepor:
Imunologia | 113
Especificidade=d:(b+d)onde Especificidade=540:600=0,9ou90%
Quadro3Resultadossorolgicoshipotticosencontradosemduaspopulaesdeindivduosinfectadosenoinfectados
INDIVIDUOS
TESTE
INFECeO
PRESENTEAUSENTE
TOTAL
POSITIVO
300a60b
360a+b
NEGATIVO
100c540d
640c+d
TOTAL
400a+c(P)600b+d
1000n
Aacurcia(A),tambmchamadadeconfiabilidadeoueficinciado
teste,refere-seaosomatriodosresultadosverdadeirospositivosenegativos
emrelaopopulaoestudada.
Acurcia=(a+d):n
onde Acurcia=(300+540):1000=0,84ou84%
Ocoeficientedeprevalncia(P)podeserconceituadocomoaporcentagemdeindivduosinfectados,parasitologicamentecomprovadosemuma
populao. Esse conceito difere da soroprevalncia, (SP) que considera a
porcentagemdeindivduossoropositivosnapopulaoestudada.
Prevalncia=(a+c):nondePrevalncia=400:1.000=40%
Soroprevalncia=(a+b):n
onde Soroprevalncia=360:1.000=36%
Adeterminaodasqualidadesfixasdeumtestesorolgico,porsis,
no satisfaz suficientemente s necessidades do controle sob os resultados
sorolgicos,umavezqueaocorrnciaderesultadosfalsospodealterar,em
funodaprevalnciadeinfeco.Comoastcnicassorolgicassoutilizadas
em diversos lugares do mundo em reas com diferentes coeficientes de
prevalncia,importanteconheceraprobabilidadedequeosresultados
positivos segundo a tcnica empregada sejam realmente positivos, bem
comoosresultadosnegativossejamrealmentenegativos.Estasprobabilidadessoosvaloresdepredio(VP)datcnica.Oparmetromaisfrequentementeutilizadoovalordeprediodepositividade(VPP),que
permite identificar os doentes em um grupo de indivduos considerados
soropositivos.Ovalordeprediodenegatividade(VPN)conceituado
comoaprobabilidadedequeadoenaestudadanoexistaemumgrupo
de indivduos considerados como soronegativos. Disto deduz-se que o
valordeprediopodeserdadopeloteoremadeBayes:
VPP=(PxS):(PxS)+(1-P)x(1-E)
VPN=Ex(1-P):Ex(1-P)+(1-S)xP
Por outro lado, os clculos podem expressar-se de uma forma mais
simples,medianteosvaloresdoQuadro3apresentadoanteriormente:
VPP=a:(a+b)
VPN=d:(c+d)
ondeVPP=300:360=0,83(83%)
ondeVPN=540:640=0,84(84%)
feitaaaplicaodomesmotestesorolgico,comsensibilidadee
especificidadeinvariveis,emduasreasendmicasparaumadeterminada
doena,ondeanicadiferenaentreestaspopulaessejaaprevalncia
deinfecoencontrada,representadaporumapopulao(A)debaixa
prevalnciaeuma(B)dealtaprevalncia.Aalteraonocomportamento
dotesteseverificapelamodificaodosvaloresdeprediodepositividade
edenegatividade.Apartirdosvaloresapresentadosnoquadro4,podeseverificartaismodificaes.
Imunologia | 115
Quadro4-Quadroexplicativoparaosclculosdovalordeprediode
positividadeemduaspopulaeshipotticas:populaoA=baixaprevalncia
epopulaoB=altaprevalncia,paraumadeterminadainfeco.
Resultado (A)Prevalnciadeinfeco=1% (B)Prevalnciadeinfeco=10%
doteste InfectadosNoinfectadostotal
InfectadosNoinfectadostotal
Positivo9809901970980090010700
Negativo2098010980302008910089300
Total1000990001000001000090000100000
P=1%S=98%SP=99%
P=10%S=98%SP=99%
VPP=980/1970X100=49,7%
VPP=9800/10700X100=91,6%
Conformedemonstrado,emboraotestesorolgicotenhasensibilidade
eespecificidadeelevadas,98%e99%respectivamente,suaaplicaoem
readebaixaprevalnciagerouvalordeprediodepositividadeinferiora
50%.Contrariamente,emreadealtaprevalnciaovalordeprediode
positividadeelevou-seacimade90%.
OQuadro5ilustra,commaioresdetalhes,comoovalordepredio
depositividadedostestessorolgicos,comdiferentesnveisdesensibilidadee
de especificidade, sofrem alteraes em funo dos valores crescentes do
coeficiente de prevalncia. Via de regra, o teste sorolgico no deve ser
empregado em reas de baixa prevalncia em consequncia da gerao de
numerososresultadosfalsos-positivos.
Emtcnicasparasitolgicasdificilmenteocorremresultadosfalso-positivos,como,porexemplo,aidentificaodehemoparasitosemexamesmicroscpicospelaextensosanguneaemlmina,ouenteroparasitosemfezes,
definitivoparacomprovarumainfeco.Poroutrolado,nopodemserutiliza-
dosparaestimaraprevalnciarealdeinfeco,porapresentaremresultados
falso-negativos.
Quadro 5 - VPP de testes com diferentes ndices de sensibilidade e
especificidadeparadiversastaxasdeprevalncia
VARIAXODOVALORDEPREDIXODEPOSITIVIDADE
especificidade=99%
sensibilidade=99%
Prevalncia%
sensibilidade%
7080909599
especificidade99%
7080909599
0,5
1,0
5,0
10,0
20,0
225933
3591750
1521345184
2735526992
4555718396
2629312233
4145484950
7981838384
8990919192
9595969696
Valoresdeprediodepositividade
Osresultadosdostestessorolgicostambmpodemserconfrontados
paraaverificaodacopositividade,daconegatividadeedaconcordncia
bruta. Estes parmetros podem ser obtidos em funo da distribuio dos
resultadosdostestessorolgicos,comorepresentadosnoQuadro6demaneirasemelhantesensibilidade,especificidadeeconfiabilidade.AconcordnciaajustadaKappa(K)umparmetroquesebaseianacomparaodo
ndicedeconcordnciaesperadacomondicedeconcordnciaobservada.
Imunologia | 117
Quadro6-QuadroexplicativoparaosclculosdaCopositividade,eda
Conegatividade,ConcordnciabrutaeConcordnciaajustadaKappa(K.)
TESTE1(Testedereferncia)
TESTE2
PRESENTEAUSENTE
TOTAL
POSITIVO
ab
NEGATIVO
cd
a+b(p1)
c+d(q1)
TOTAL
a+c(p2)b+d(q2)
a+b+c+d
Copositividade=a:(a+c)
Conegatividade=d:(b+d)
Concordnciabruta=(a+d):(a+b+c+d)
Kappa=[2(ad+bc):(p1q2+p2q1)]
Pode-seutilizaroseguintecritrioparaconceituarosresultados
docontroledequalidade:valores 40,0%soconsideradospobres,de
40,1at79,9%regulares,valores"80,0a89,9%soconsideradosbons
e"90%soconsideradosexcelentes.
Resumo do captulo
O sistema imunitrio, assim como os demais sistemas do organismo,

possuisuasprpriasclulas,tecidos,rgosemolculas.Aprincipalclula
dessesistemaolinfcito.Oslinfcitossoasnicasclulasdoorganismo
que expressam receptores altamente diversificados para o antgeno, o que
permiteoreconhecimentodeumagrandevariedadedesubstnciasestranhas.
Aativaodosistemaimuneadaptativodependedaapresentaode
antgenos.Umantgenoqualquersubstnciaquepodeserreconhecidapor
umanticorpoouporumreceptordeclulaT.Osantgenospossuemduas
propriedades:aimunogenicidadeeaantigenicidade.Osquenosocapazes
de induzir uma resposta imune so chamados de haptenos e precisam ser
acoplados s molculas carreadoras para adquirirem tal capacidade. O
determinante antignico, ou epitopo, a menor poro da molcula e
responsvelpelapropriedadedeestimularumarespostaimune.Assuperfcies
celulares,incluindoosmicrorganismos,geralmentepossuemumagrandequantidadededeterminantesantignicos.
Osanticorposatuamnarespostaimuneligando-seespecificamenteao
agente patognico ou seu subproduto, ativando o sistema complemento,
opsonizandoparaaumentarafagocitoseeacitotoxicidadedependentede
anticorpo,epermitindo,assim,quemicrorganismoseparasitossejamdestrudos
pelasclulasdosistemaimune.
Osanticorposseencontramdistribudosportodooorganismo,pois
osagentesinfecciosospodemvencerasdiversasbarreirasnaturaiseestabelecerumainfecoemqualquerpartedocorpo.Osprimeirosanticorposa
seremproduzidosnumarespostaimunesoasIgMetendemaserdebaixa
afinidade,massomuitopotentesnaativaodosistemacomplemento.A
IgGoprincipalisotiponosangueefluidosextracelulares,etransportada
atravsdaplacentadiretamenteparaacorrentecirculatriadofetodurantea
vidaintrauterina.AIgAtempapelimportantenaproteodassuperfcies
Imunologia | 119
mucosascontrapatgenosouseussubprodutos.AIgEtemcomoprincipal
funoorecrutamentodeclulasinflamatriasatravsdaativaodemastcitos
ebasfilos,comotambmpodeestarenvolvidanaeliminaodeparasitose
processosalrgicos.
Existemvriossistemasproteicosdereaoemcadeianoplasmasanguneo, dentre estes, o sistema complemento, que um complexo sistema
constitudopormolculastermolbeisetermoestveis,equetemcomofuno
aeliminaodeumagenteestranho,facilitandoafagocitose,quandoalgumas
protenasativadasdocomplementoopsonizamasuperfciedopatgeno;por
reao Inflamatria, quando os pequenos fragmentos de protenas recrutam
fagcitosaolocaldaatividadeinflamatria;ouporlisedireta,quando,uma
vezdesencadeadaacascata,oscomponentesterminaisdocomplementolesam
amembranadosmicrorganismos.
Todoorganismomulticelularpossuialgumsistemadedefesaquedistingueospatgenoseelimina-osdohospedeiro.Avantagemdetalimunidade
especficaqueosistemaimunepoderapidamenteadaptar-sequelespatgenos
quesomaisfrequentementeencontradosnomeioambientelocal.Estacapacidadeconseguidaatravsdocomplexoprincipaldehistocompatibilidade,
cujosprodutosdesempenhamumpapelnoreconhecimentointercelularena
discriminaoentreoprprioeonoprprio.
Didaticamente,aimunidadeadaptativaseorganizaemimunidadehumoral
eimunidadecelular.Aimunidademediadaporclulassedesenvolveporuma
rede de interaes que resulta em defesa contra microrganismos, os quais
sobrevivemdentrodefagcitosoudeoutrasclulas.Arespostainiciada
peloreconhecimentodoantgenodemicrorganismosintracelularesporclulas
Tatravsdocomplexoprincipaldehistocompatibilidade(MHC).NarespostaviaCD8,somenteaclulaalvoqueporteoantgenoassociadoclasseI
podeserlisadaouinduzidaaentraremapoptose.Emoutromecanismoda
respostacelular,asclulasTCD4+Th1ativam,porexemplo,macrfagos
infectadosatravsdecitocinascomooIFN-g.Quandoumpatgenoresiste
aosefeitosdosmacrfagosativados,pode-sedesenvolverumainfecocrnica. J a resposta imune humoral conduz destruio dos microrganismos
extracelulareseprevineoudiminuiadisseminaodasinfecesintracelulares,
pormeiodaneutralizao,opsonizaoeativaodosistemacomplemento.
A ativao das clulas B e sua diferenciao em clulas secretoras de
imunoglobulinassodeflagradaspeloantgenoespecficoerequeraparticipaodeclulasCD4+Th2,quetambmcontrolamamudanadeisotipoe
desempenhampapelimportantenahipermutaosomtica,oquenecessrio
paraamaturaodaafinidadedosanticorpos.
Em algumas infeces, o sistema imunitrio no consegue eliminar o
parasito, mas reage isolando o agente com clulas inflamatrias. Na
esquistossomose,aformaodogranulomaumexemplodareaodohospedeirocontraoparasito.Amaioriadosparasitosdesenvolvemecanismosde
escapedosistemaimuneparagarantirsuasobrevivnciaealgunscomprometem
tantoasrespostasmediadasporanticorposcomoasmediadasporclulas.
Amedidadasinteraesentreantgeno-anticorpocomopropsitode
diagnsticoconhecidacomoimunossorologia.Astcnicasimunossorolgicas
fundamentam-senanaturezadainteraoantgeno-anticorponasquaispodem
expressar-se em duas formas distintas, em decorrncia da utilizao de
imunorreagenteslivresdemarcaooudereagentesmarcados.Astcnicasque
noempregammarcadoresdemonstram-seporfenmenosvisveis.Portanto,
aosecombinaranticorposcomantgenossolveis,oscomplexosresultantes
podemformarprecipitadosinsolveis.Seosantgenossoparticulados(bactrias,protozorios,hemcias),osanticorpososaglutinam.Seoanticorpopode
ativaraviaclssicadosistemacomplementoeoantgenoseencontraemuma
superfciecelular,oresultadopodeseracitlise.Astcnicasqueempregam
imunorreagentesmarcadoscaracterizam-sepelasimplescombinaodoantgeno
comoanticorpo,necessitandoqueumdelesestejamarcadoconvenientemente.
Imunologia | 121
O imunorreagente pode ser marcado com corantes fluorescentes ou

quimioluminescentes,radioistopos,enzimas,ourooupratacoloidais,entre
outrosmarcadores.
Apesardetestessorolgicosproduziremmuitosresultadosverdadeiros,
algunsresultadosfalsospodemsergerados,sejamelespositivosounegativos
e,porconseguinte,comumdizerqueostestessorolgicossopresuntivos,
ou seja, de valor probabilstico. Estes testes, obrigatoriamente, devem ser
avaliadosparadefinirparmetrosimportantesquantossuasqualidadesfixas
(sensibilidade,especificidadeeacurcia),umavezqueestesvaloresindependem
daprevalnciadainfecoestudadanapopulao.
Questes
1)DescrevaoprocessodematuraodasclulasT,notimo.
2)Comentesobreaimportnciadasmolculasdeadesonarespostaimune.
3)Definaimunogenicidadeeespecificidade.
4)Definaadjuvanteesuafunonarespostaimune.
5)DescrevaasprincipaispropriedadesdascincoclassesdeImunoglobulinas.
6)ComovocpreparariaumanticorpocontraIgGhumana?
7)Descrevaoprocessodeativaodaviaclssicaedaviaalternativado
complemento.
8)Descrevaosprincipaismecanismosdeatuaodosistemacomplementona
eliminaodepatgenos.
9) Descreva o processamento e apresentao de um antgeno intracelular
presentenocitoplasmadaclula.
10)Descrevaoprocessamentoeapresentaodeumantgeno,oriundode
umabactriaextracelular,quefoiativamentefagocitadaporummacrfago.
11)Descrevaosprincipaismecanismosdeatuaodarespostahumoral.
12)DescrevaosmecanismosdeaoexercidospelasclulasCD8naresposta
celular.
13)Descrevaosprincipaismecanismosdeimunidadeinataeadaptativacontra
vrus.
14)Descrevaosprincipaismecanismosdeimunidadeadaptativaeespecfica
contrabactriasextracelularesebactriasintracelulares.
15)Comooshelmintosparasitasdolumeintestinalsoexpulsosdoorganismo?
16)Semprequeencontramosumareaoimunolgicapositiva,eladetermina
apresenadoagenteetiolgico?Justifique.
17)Oqueconversosorolgica?
18)Expliqueofenmenoprozonaecomofazemossuaneutralizao.
19)Oquecausareaocruzadaemprovassorolgicas?Ovocsugerepara
impediressefenmeno?
20)Quaisaprovassorolgicasrealizadasembancodesangueparaprevenodedoenastransmissveis?
21)Quaisasvantagensedesvantagensdousodeanticorposmonoclonaisem
provassorolgicas?
22)Comoseprocessamasreaesdeaglutinaodireta?Dumexemplode
testecomumenteusadoparafinsdediagnsticos.
23)Qualofundamentodareaodeimunofluorescnciaindireta(RIFI)?
24)FalesobreareaoImunoenzimtica(ELISA),quantoaoseumodode
ao,suasvantagensedesvantagens.
Imunologia | 123
25) Na etapa de sensibilizao das placas plsticas de microdiluio, da

reao imunoenzimtica ELISA, utilizamos tampes com pH elevado (por
voltade9,6)paraprepararosantgenosproteicos.Porqu?
26)Comquepropsitoutilizamoscasena(protenadoleite)nodesenvolvimentodoELISA?
27)Falesobreofundamentodotestedeimunoeletrotransferncia(Westernblotting).
28)Conceitue:
a)Sensibilidade;b)Especificidade
Bibliografia consultada
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| 19

Os eosinfilos parecem ser importantes, principalmente na resposta

adaptadas para detectar antgenos derivados de protenas estranhas ou

A maioria dos linfcitos virgens possui uma sobrevida muito curta,

Coletivamente, estima-se que o sistema imune de mucosa contenha

OslinfcitosTrespondemaosantgenospeptdicos,quesoexpostospelasclulasapresentadorasdeantgenos(APCs).Oinciodestaresposta requer o reconhecimento especfico do antgeno pelas clulas T, a

da resposta imune que, frequentemente, resultam em anular a ao de

encontrada em grandes concentraes nas regies mucosas do organismo.

5.4. Anticorpos monoclonais

a bactrias, opsonizando-as para ingesto pelos fagcitos portadores de

7. Complexo principal de histocompatibilidade

As molculas do MHC de classe II tambm se ligam a peptdeos

endoplasmtico. Essa molcula de classe II , ento, direcionada para os

Se a resposta inata for suficiente para anular a ao de um agente

Alguns microrganismos como Mycobacterium spp so patgenos

Muitasbactriasimportantesnasdoenasinfecciosashumanassemultiplicam nos espaos extracelulares do organismo, e a maior parte dos

Nesta resposta, a ativao das clulas B e sua diferenciao em clulas

9. Resposta imune aos agentes infectoparasitrios

O ambiente em que vivemos povoado por muitas espcies de

Os principais mecanismos de imunidade inata aos vrus envolvem a

mecanismos T-independentes tambm podem ativ-los. Neste caso, clulas

Arespostaimunecontra Trypanosomacruzi dependenoapenasdas

AIgEdasinfeceshelmnticaspodepromoverdesdeefeitosbrandosreaesseverasnohospedeiro,pormeiodaliberaodemediadores pelos mastcitos, caracterizados por pruridos, eritemas, dificuldades

Os testes sorolgicos vm sendo constantemente empregados para

Ostestessorolgicostambmsoutilizadosparaselecionardoadores e receptores de sangue e de rgos, no s no contexto de quem

A aplicao dos testes sorolgicos em inquritos epidemiolgicos

Aimunoeletroforeseumatcnicadeimunoprecipitaoemmeiogelatinoso que combina a eletroforese com a imunodifuso radial. A tcnica

Tambm conhecida como eletroforese de foguete ou tcnica de

Diversos antgenos virais encontram receptores na superfcie de

A fixao do complemento ocorre aps a interao antgenoanticorpo.Oconsumodecomplemento invitropodeserutilizadocomo

ou anticorpo adicionado primeiro, seguido de uma incubao com o

Atcnicade WesternBlotting,tambmchamadade immunoblotting

so muito mais resistentes e ligam-se muito fortemente s protenas. Sua

especficoparaumadeterminadaprotenaeparaoanticorposecundrio, uma anti-imunoglobulina marcada que reconhece o

so usadas lmpadas de mercrio ou xenon, lasers de alto poder

dossinaiseemissodoresultado,utilizando softwares especficos.

clorofila),DNA,RNA,anliseeclassificaodecromossomas,protenas, antgenos superfcie celular (marcadores CD) e antgenos

Estes testes, alm de representarem o principal exame complementar

Entretanto, estes dados hipotticos ideais no refletem o que se

Apesardetestessorolgicosproduziremmuitosresultadosverdadeiros, alguns resultados falsos, como j mencionado, podem ser gerados,

O sistema imunitrio, assim como os demais sistemas do organismo,

O imunorreagente pode ser marcado com corantes fluorescentes ou

25) Na etapa de sensibilizao das placas plsticas de microdiluio, da

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