UNIVERSIDAD TECNICA DE MANAB

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLINICO
CATEDRA DE BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR
II
Docente: Dra. Mayra Prraga Snchez
Nivel II paralelo A
Periodo acad. Oct. 2015 Feb. 2016

Secuenciacin de ADN
Detencin de cidos nucleicos
Amplificacin de ADN con reaccin
de cadena de
laCedeo
polimerasa
Ruiz
Luisa
e
t
n
a

r
g
e
Int
s:

Marcillo Molina Michael

Meza Barberan Gema
Carranza Cedeo
Asdrubal
Mero Moreira Andrea
Morales Pachay Melany
Villavicencio Gahn
Jefferson
Zambrano Moreira
Pedro

Grupo n
3

Palabras Claves
CEBADOR

SINTTICO
DIDEOXINUCLETIDOS
MARCADOR FLUORESCENTE
ELECTROFORESIS EN GEL
HAZ DE LSER
CLONACIN
GEN
FLUORESCENCIA

DIDEOXINUCLETIDO: Nucletido modificado que en posicin 3' ha

perdido el grupo OH. Se simboliza como ddNTP. Se incorpora en
sntesis de DNA y RNA pero se inhibe el proceso se sntesis posterior.

GEL:Se refiere a la matriz usada para separar las molculas.

ELECTROFORESIS, se refiere a lafuerza electromotrizque es

empleada para desplazar las molculas a travs del gel.

VITRO. Palabra que se utiliza en la locucin adverbial in vitro, que

significa en medio artificial, en laboratorio

REPLICACIN. Proceso por el cual el ADN de una clula se duplica

antes de la divisin celular para que, despus de esta, cada clula
tenga la misma informacin gentica.

EXPRESIN GNICA. Es la transformacin de la informacin del

ADN en protenas o ARN

CLONACIN DE GENES: Es un conjunto de mtodos experimentales

que se utilizan para ensamblar molculas de ADN y lograr un copiado
dentro del organismo receptor.

ADVENIMIENTO: Venida o llegada de un tiempo determinado o de

un acontecimiento importante.

CODIFICAR: Transformar un mensaje mediante las reglas de un

cdigo.

SECUENCIACIN DEL
ADN

LA CLONACION MOLECULAR DE UN FRAGMENTO

INDIVIDUAL DE ADN PERMITE EL AISLAMIENTO DE
LAS GRANDES CANTIDADES DE MATERIAL
GENETICO INCLUYENDO LA DETERMINACION
DE SU SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS..

LA
DE LAS
LAS
LA DETERMINACION
DETERMINACION DE
SECUENCIAS
NUCLEOTIDICAS
UN
SECUENCIAS
NUCLEOTIDICAS
LA DETERMINACION
DE DE
LAS
NUMERO DE
DE GENES
GRAN NUMERO
SECUENCIAS
NUCLEOTIDICAS
DE UN
PERMITE
ESTUIAR LAS
LAS PROPIEDADES
PROPIEDADES
PERMITE ESTUIAR
GRANDE
NUMERO
DE GENES
NO SOLO
DE
LAS SECUENCIAS
DEL
DEL ADN
ADN
QUE REGULAN
LALA
EXPRESION
PERMITE
ESTUDIAR
LECTURA DE
GENETICA.
SUS PRODUCTOS
PROTEINICOS

SINO QUE PERMITE ESTUIDAR LAS

PROPIEDADES
DE LAS SECUENCIAS DEL ADN
QUE REGULAN LA EXPRESION
GENETICA.

La sntesis del ADN se inicia en un punto nico

del ADN clonado a partir de UN CEBADOR
SINTTICO.
La reaccin de la sntesis de ADN incluye los 4
DIDEOXINUCLETIDOS (A, C, G y T)
Cada uno de los dideoxinucletidos estn
marcados por UN MARCADOR FLUORESCENTE
DIFERENTE.
La incorporacin de un dideoxinucletido detiene la
sntesis del ADN PORQUE NO HAY NINGN GRUPO
HIDROXILO en el 3 para adherir al siguiente
nucletido.
Generando as una serie de molculas de ADN cada
uno TERMINANDO EN LA BASE REPRESENTADA por
dideoxinucletido FLUORESCENTE ESPECIFICO.

Estos fragmentos de ADN son

entonces separados en funcin de
su tamao mediante
ELECTROFORESIS EN GEL.
A medida que se resuelven las
bandas de ADN recin sintetizadas
a travs del gel pasan a travs de
un HAZ DE LSER que excita los
marcadores fluorescentes.

La
luz
emitida
resultante
es
detectada
por
un
fotomultiplicador y un ordenador recolecta y analiza los
datos.
El tamao de cada fragmento se determina por su
dideoxinucleotido terminal, marcado por un color especifico
de fluorescencia. De modo que la secuencia de ADN puede
ser leda por el orden de los fragmentos marcados.
Con fluorescencia que migran a travs del gel pasan a
travs de un haz de laser que excita los marcadores
fluorescentes.
La secuenciacin de ADN automtica de
alto rendimiento, que emplea
dideoxinucleotido, ha permitido el anlisis
a gran escala necesario para determinar
las secuencias de genomas completos,
incluido el humano.

EXPRESIN DE GENES
CLONADOS
Permiten la determinacin de
secuencia de nucletidos de los
genes.
La secuencia de aminocidos de
protenas codificadas.
La obtencin de grandes
cantidades de protenas para su
caracterizacin estructural y
funcional.

EXPRESIN DE UN GEN
EUCARITICO
E.

Coli el ADN de inters se clona con

un fago o un plsmido (denominado
vectores
de
expresin)
que
contengan la secuencia que dirigen la
transcripcin y traduccin del gen
insertado en bacterias.

Los

genes insertados suponen el 10%

del total de la produccin de protena
bacteriana.

Expresin en bacterias
de genes clonados
Los vectores de expresin contienen las
secuencias promotoras (pro) que dirigen
la transcripcin del ADN insertado en
bacterias y las secuencias necesarias
para la unin del ARNm a los ribosomas
(SD).
Es posible expresar de forma eficiente
un ADNc eucaritico insertado junto a
estas
secuencias,
obtenindose
protenas eucariticas a partir de
bacterias transformadas.

AMPLIFICACIN DE ADN CON LA

REACCIN EN CADENA E LA
POLIMERASA

La clonacin molecular permite producir y aislar grandes

cantidades de un ADN en particular. La reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR), desarrollada por Kary Mullis en 1988, es un
mtodo alternativo para conseguir un gran nmero de
fragmentos de material gentico a partir de una nica copia de
ADN por medio de reacciones llevadas a cabo completamente in

DETECCIN DE CIDOS
NUCLEDOS Y PROTENAS
La comprensin del papel de los
genes en el interior celular,
requiere del anlisis de la
organizacin intracelular y de la
expresin de los genes
individuales y de las protenas que
codifican.

El advenimiento de la
clonacin molecular
ha permitido el
aislamiento y
caracterizacin de
genes individuales
procedentes de
clulas eucariotas.

El proceso de amplificacin de
ADN por PCR
El material de partida puede ser
bien un fragmento de ADN donado
o una mezcla de molculas de
ADN
El ADN de doble cadena inicial se
calienta para separar las hebras y
despus se enfra para permitir
que los cebadores se unan a cada
hebra de ADN.
A partir de esta mezcla es posible
amplificar una regin especfica
de ADN.
La ADN polimerasa de Thermus
aquaticus
se usa para sintetizar nuevas
hebras de ADN empezando en los
cebadores,
producindose
la
formacin
de
dos
nuevas
molculas de ADN.
El proceso se puede repetir
mltiples veces, consiguindose
en codo ciclo una amplificacin
del doble de ADN.