CITOGENTICA

DOCENTE:
Lopez

MSc.Jhon

Garca

ALUMNOS:
Pisfil Colchado Katheryn
Esqun Bayona Dmaris
Bazan Carrasco Pilar
CICLO:

2014-II

Lambayeque, Marzo 2015

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
. Cariotipo del sapo comn, Bufo
spinulosa (anura: bufonidae) de
Lambayeque, Per

Resumen

El sapo comn Bufo spinulosa es una especie de anfibio que abunda en el

continente Americano. La especie tiene importancia biolgica, ecolgica y
econmica. Sin embargo, pocos son los estudios de biologa y gentica
bsica de la especie en, Per. El objetivo del estudio fue el de establecer por
primera ocasin para la entidad el cariotipo del sapo comn, empleando la
metodologa convencional para obtencin y clasificacin de cromosomas. Se
procesaron 4 especmenes adultos (dos hembras y dos machos) de los cuales
fue posible analizar 10
modal

de

campos cromosmicos en mitosis. El nmero

2n=22 cromosomas result similar al obtenido para otras

especies de la familia Bufonidae. Mientras que la clasificacin del cariotipo

sugiere la presencia de siete pares de cromosomas birrmeos metacntricossubmetacntricos

(msm)

cuatro

subtelocntricos- telocntricos (stt).

1. Introduccin

pares

de

tipo

monorrmeos

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
El sapo comn es considerado como uno de los anfibios ms abundantes
en el continente Americano. Es una especie con hbitos nocturnos y
pocas veces diurno. Por su alimentacin es considerada insectvora y
carnvora, por ello, es importante para el equilibrio de los ecosistemas
acuticos y terrestres. Puede llegar a pesar alrededor de un kilo y hasta
22 cm de largo (De los Santos y Figueroa, 2001).
En Per, el sapo ha sido objeto de muy pocos estudios cientficos,
encontrndose entre los ms frecuentes, los trabajos sobre distribucin
poblacional y abundancia. Sin embargo, los estudios de gentica no
existen para la especie. Por dicha razn se realiza por primera ocasin,
la caracterizacin del cariotipo del sapo comn a partir de la poblacin
de esta especie que habita en las llanuras de Ucupe. Distrito: Lagunas;
Provincia: Chiclayo; Regin: Lambayeque.

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
2. Marco terico
El gnero Bufo (Bufonidae), se encuentra en el Departamento de
Lambayeque (Per); cuya diversidad de especies registradas estn
constituidas por 9 especies muchas de las cuales son de amplia distribucin
como Bufo spinulosus y Bufo marinus.
Los bufnidos (Bufonidae) son una familia del orden Anura, perteneciente a
la clase de los anfibios. Muchas de sus especies se conocen con el nombre
comn de sapos; no obstante, numerosas especies pertenecientes a otras
familias tambin son comnmente denominados sapos. Esto es as porque
las caractersticas que popularmente se utilizan para distinguir a las ranas
de los sapos no son las mismas que se utilizan en la clasificacin cientfica.
Segn la cultura popular, se diferencian en que las ranas tienen la piel lisa y
hmeda, mientras que los sapos tienen la piel spera y seca y son ms
caminadores que saltadores, de ah que sus patas sean ms cortas.
La especie Bufo spinulosus a ms de ser de amplia distribucin, de acuerdo
a Vellard (1959), se trata de una especie politipica, constituida por 6
subespecies, cuyas formas fueron descritas citogenticamente por algunos
autores extranjeros y nacionales en sendas localidades de Sudamrica.
La inexistencia de datos citogenticos, para las poblaciones naturales de la
regin de Lambayeque y el inters por caracterizar citogenticamente las
poblaciones locales, nos condujo a desarrollar el presente trabajo en el que
nos avocamos a la determinacin del nmero y morfologa cromosmica de
esta especie, cuyos resultados son descritos y contrastados con los datos
existentes en la bibliografa sobre este tema.
El sapo comn Chaunus marinus es una especie de anfibio que abunda en
el continente Americano. La especie tiene importancia biolgica, ecolgica y
econmica. Sin embargo, pocos son los estudios de biologa y gentica
bsica de la especie en Lambayeque, Peru. El objetivo del estudio fue el de

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
establecer por primera ocasin para la entidad el cariotipo del sapo comn,
empleando la metodologa convencional para obtencin y clasificacin de
cromosomas. Se proces un especmen joven

de los cuales fue posible

analizar 26 campos cromosmicos en mitosis. El nmero modal de 2n=22

cromosomas result similar al obtenido para otras especies de la familia
Bufonidae. Mientras que la clasificacin del cariotipo sugiere la presencia de
siete pares de cromosomas birrmeos metacntricos-submetacntricos
(msm) y cuatro pares de tipo monorrmeos subtelocntricostelocntricos
(stt).
La tcnica citogentica empleada, fue una adaptacin de la recomendada
por Arias-Rodriguez et al. (2008, 2009). En el que se recolectaron 15
especmenes adultos, estos especmenes fueron inyectados con 30 g/g
de peso con colchicina y durante doce horas. Despus del sacrificio de
los animales, fue removido el tejido de la mdula sea para ser hidratado
con una solucin de citrato de sodio al 2.0% durante dos horas a 27 1.0
C. Posteriormente, el tejido fue fijado con metanol y cido actico (4:1) y
las preparaciones cromosmicas fueron elaboradas por goteo sobre
portaobjetos fros, secados con mechero de alcohol y tincin con giemsa al
10%.
El anlisis de las preparaciones cromosmicas se realiz con el objetivo de
40x y 100x de un microscopio ptico, luego fueron fotografiadas las
mejores dispersiones cromosmicas y el cariotipo fue clasificado de
acuerdo a Levan et al. (1964).
En estudios anteriores El cariotipo, se construy considerando la proporcin
de brazos r=q/p, ndice centromrico i=100(p/p+q) y la diferencia entre
brazos d=r-1(10/r+1) (Levan et al. 1964). El ideograma en meiosis, se traz
con el programa Microsoft Office Excel 2003 y basado en las longitudes
promedio en m de p+q de cada par cromosmico.se observaron en
cariotipos de ambos especmenes y con baja frecuencia variaciones en los
conteos

del

nmero

cromosmicos.

de

cromosomas

de

13,

14

24

elementos

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
A partir de las observaciones microscpicas, se logr observar dos
estndares de dispersiones cromosmicas en Los cromosomas meiticos de
la rana arborcola Smilisca baudinii (Anura: Hylidae) meiosis II. La primera,
se caracteriz por mostrar cromosomas bivalentes en forma de anillo en
profase temprana, tpico de la ovognesis (Fig. 3A) y la segunda por la
presencia de cromosomas bivalentes en metafase II, que caracteriza la
espermatognesis

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
Faivovich et al. (2005) seala, que los datos citogenticos disponibles
para miembros de la familia Hylidae, se integran por el clado que agrupa
a Scarthyla, Scinax, Sphaenorhynchus, "pseudidos, y las Hyla, especies
con 30 cromosomas en condicin mittica. Sin embargo, en dicho
trabajo, no fueron considerados para el anlisis filogentico, los gneros
con cariotipo de 2n=24 cromosomas y su inclusin, probablemente
permitira reagrupar los clados y relaciones filogenticas desde la
perspectiva citogentica en grupos ms acordes con el origen y
dispersin de los Hylidae.
Las variaciones del nmero de elementos cromosmicos sealados en la
Fig. 1, son un atributo que ha sido observado nicamente en Hyla sp. (aff.
circumdata) (Baldissera-Junior et al. 1993). La presencia de uno o dos
cromosomas adicionales al complemento cromosmico haploide en
meiosis, se ha interpretado como cromosomas supernumerarios o
cromosomas

tipo

"B"

(Jones

&

Rees

1982).

Los

cromosomas

supernumerarios, observados en S.baudinii, son los elementos ms

pequeos (1.050.15) del cariotipo tpico de la rana arborcola. Por otro
lado, la morfologa fue diferente a la del resto de elementos lo que hace
suponer su condicin univalente en las clulas meiticas como se ha
observado en otras especies (Jones & Rees 1982, Beukeboom 1994,
Palestis et al. 2004).
Dichos atributos, ratifican que se trata de cromosomas tipo "B", lo que
implica, que su presencia sea de carcter natural y normal en algunas
especies de la familia Hylidae. Los cromosomas "B" supernumerarios,
tienen

implicaciones

importantes

durante

la

historia

evolutiva

formacin de nuevas especies, dado que la ganancia o prdida de

fragmentos de ADN incluyen cambios importantes en la reestructuracin
del contenido y funcionamiento del genoma de las especies (White 1954,
Jones & Rees 1982, Beukeboom 1994, Camacho et al. 2000, Fagundes et
al. 2004, Granado et al. 2004, Palestis et al. 2004). Lo anterior,
probablemente ha sido un mecanismo importante durante la especiacin

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
en la familia Hylidae, por ello la ampliacin de los estudios de
citogentica en otras especies de ranas del sureste de Mxico permitir
mayor comprensin del valor biolgico y evolutivo de los cromosomas
supernumerarios.
La morfologa cromosmica, del cariotipo tpico de S. baudini en meiosis,
se

estableci

birrmeos

de

para
tipo

el

complemento

haploide

como

metacntrico-submetacntrico

cromosomas

(msm)

que

se

caracterizaron por presencia de doce pares de cromosomas bivalentes.

Los cromosomas birrmeos (m y msm), es una condicin

El estudio de los cariotipos es posible debido a la tincin. Usualmente

un colorante adecuado es aplicado despus de que las clulas hayan sido
detenidas durante la divisin celular mediante una solucin de colchicina.
Para Bufo spinulosus (sapo) se extrajo el material gentico de los huesos
largos

3. Objetivos

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
El objetivo fue el de observar el nmero de cromosomas del sapo
comn, as como la de establecer la estructura cromosmica de la
especie en Lambayeque.
4. Materiales y mtodos
4.1 Materiales

A.

Laboratori
Colchicina al 0.5%
Solucin hipotnica (KCl al 0.4%)
Colorante Giemsa u Orseina
Carnoy
Agua destilada
Mechero
Bageta
Pipeta Pasteur
Porta objetos
Estuche de diseccin
Centrifuga
Microscopio

B. BIOLOGICO

Bufo spinulosus (sap

5. Mtodos
1 Inyectar colchicina al 0.5%
2 Luego de 12 horas se sacrifica al
espcimen
3 Extraer la mdula sea, removerlo y
exponerlo

una

solucin

Hipotnica(KCl al 0.4%) durante 30 minutos

4 Con una bageta de vidrio desmenuzar y con una pipeta pasteur
combinar repetitivamente (3 veces), hasta obtener una fina
solucin celular
5 Luego centrifugar la solucin celular a 4000 rpm/ min , durante 8
minutos.

Cariotipo del sapo comn, Bufo spinulosa (anura:

bufonidae) de Lambayeque, Per.
6 El sobrenadante se extrae y se le agrega Carnol (cido actico
helado), homogenizar y volver a centrifugar a 4000 rpm/min
durante 8 minutos; eliminar el sobrenadante.
7 Lo que an queda en el falcom, se le agrega Carnol hasta 3 ml, se
congela por media hora.
8 Sobre un porta objeto limpio y previamente enfriado , se deja caer
una gota de la suspensin celular

formando un ngulo de 45 a

una altura de 30cm

9 Secar al ambiente
10 Colorear con Giemsa durante 5 minutos, luego lavar con agua
destilada
11 Observar a microscopio con objetivo de 40 y con objetivo de
inmersin.
12 El anlisis de las preparaciones cromosmicas se realiz con el
objetivo de 40x y 100x de un microscopio ptico, luego fueron
fotografiadas las mejores dispersiones cromosmicas y el cariotipo.

6 .Resultado
Del anlisis de 10 campos cromosmicos del tejido procedente de mdula
sea, se obtuvo el nmero modal diploide de 2n=22 cromosomas,
representando este el 92.2 % del total de campos analizados; otros
campos cromosmicos con 2n=18 (3.5%) y 2n=26 (4.3%) fueron observados
debido al procedimiento empleado (Tabla 1). El
comn,

mostr

catorce

cromosomas

cariotipo

birrmeos

del

sapo

metacntricos-

submetacntricos (msm) y ocho cromosomas subtelocntricos-telocntricos

(stt), mismos que integraron la frmula cromosmica de 14 sms + 8 stt.
Tabla 1. Frecuencia del nmero de cromosomas en el sapo comn con
moda (M).
Nmero de
cromosomas
18
22

Clulas
contabilizadas
4
106

Porcentaje

26

4.3

3.5
92.2 (M)

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7. Discusiones
El resultado obtenido de 2n=22 cromosomas es similar a otros estudios
realizados en sapos pertenecientes a la familia Bufonidae, siendo diferentes
entre ellos la estructura cromosmica del cariotipo. Debido a que no existen
estudios de la caracterizacin cariotpica del sapo comn de acuerdo con
Manzanilla y Pfaur (2000), no es posible realizar la comparacin con
estudios previos en esta especie, por lo que se requieren estudios de
citogentica adicionales para observar el comportamiento de la composicin
cromosmica en varias poblaciones de Ucupe, Lambayeque. Al trmino de la
investigacin realizada en el laboratorio de biologa general con la
supervisin y gua del Ph.D. Luis Alberto Rodrguez Delfn verificamos el
protocolo realizado para extraer el cariotipo de un sapo utilizando la medula
sea de los huesos largos, observando los 22 cromosomas en el microscopio
8. Conclusiones
Al trmino de la investigacin realizada en el laboratorio de biologa general
con la supervisin y gua del profesor verificamos el protocolo realizado para
extraer el cariotipo de un sapo utilizando la medula sea de los huesos
largos, observando los 22 cromosomas en el microscopio
El nmero de cromosomas en el sapo comn fue de 2n=22 con frmula de
catorce

metacntricos-submetacntricos

ocho

subtelocntricos-

telocntricos, que demuestra la presencia de cromosomas birrmeos y

monorrmeos en las especies de la familia Bufonidae. Esto permite definir
que los estudios de gentica clsica en las especies de anfibios tienen
importancia para la determinacin cariotpica de especies comunes y nativas
de cupe.

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9. Referencias bibliogrfcas
De los Santos, D. y Figueroa, I. 2001. Exportaciones de Rana
catesbeiana y Bufo marinus durante el perodo del 10 de enero de
1994 al 7 de octubre de 1999. Ciencia y Sociedad. 27: 240-254.
Levan, A., Fredga, K. and Sandberg, A.A. 1964. Nomenclature for
centromeric position on chromosomes. Hereditas. 52: 201-220.
Manzanilla, J. y Pfaur, J.E. 2000. Consideraciones sobre mtodos y
tcnicas de campo para el estudio de anfibios y reptiles. Revista
Ecolgica Latinoamericana. 7: 17-30.
Rodrguez-Piazze, M.E. 1995. Cariotipo y patrones de bandas C en Bufo
spinulosus

arequipensis

Latinoamericana. 2:

(Amphibia:

Anura).

Revista

Ecolgica

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CARIOTIPO DEL SAPO

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