ENCB-IPN

5QV1, Seccin 3
Prctica: Determinacin de Riboflavina por fluorometria
Fundamento:
La espectrometra de fluorescencia (tambin llamada fluorometra o
espectrofluorimetra) es un tipo de espectroscopia electromagntica que analiza la
fluorescencia de una muestra. Se trata de utilizar un haz de luz, por lo general luz
ultravioleta, que excita los electrones de las molculas de ciertos compuestos y
provoca que emitan luz de una menor energa, generalmente luz visible (aunque
no necesariamente). Una tcnica complementaria es la espectrometra de
absorcin.
Los dispositivos que miden la fluorescencia se llaman fluormetros o fluormetros.
Su fundamento es la fluorescencia que es la emisin de radiacin por electrones
excitados. En el fenmeno de fluorescencia, una molcula absorbe radiacin
electromagntica y debido a ello los electrones pasan de un estado basal a otra
fase de excitacin.
Objetivos:

Determinar el efecto del pH sobre el disolvente

Elegir el mejor disolvente para la riboflavina

Resultados:
Tabla 1. Resultados de Curva de Calibracin de riboflavina en diferentes medios
Intensidad de Emisin

Riboflavina
(ppm)

Agua

HCl 0.1M

CH3COOH
0.9M

NaOH 0.1M

4.98

4.98

5.91

5.08

5.65

4.99

6.74

4.96

6.27

7.53

5.26

6.88

5.01

8.27

5.44

7.4

5.02

8.83

5.13

8.01

5.04

10

11.86

5.74

10.16

5.05

50

17.52

6.63

14.09

5.1

pH

5.5

13

Curva Tipo de los diferentes disolventes

10

f(x) = 0.77x + 5.12

Linear (Agua )
R = 0.99

Agua
8

Intensidad de Emisin

HCl

Linear (HCl)

NaOH

Linear (NaOH)

f(x) = 0.6x + 5.04

R = 1

6
cido Actico

Linear (cido Actico)

f(x) = 0.06x + 4.99
f(x)
0.01x + 4.98
R ==0.39
R = 0.98

Figura 1. Curva tipo de emisin de riboflavina donde se incluyen los 4 diferentes disolventes
Concentracin (ppm)
contra la concentracin de 0 a 5 ppm.

Curva Tipo de los diferentes disolventes

20
18
16
14

Intensidad de Emisin

12
10
8
6
4

10

20

30

40

50

concentracin (ppm)
Agua

HCl

cido Actico

NaOH

Figura 2. Curva tipo de emisin de riboflavina donde se incluyen los 4 diferentes disolventes
contra la concentracin de 0 a 50 ppm.

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Discusin
La fluorescencia es un proceso de emisin en el cual las molculas son excitadas por la
absorcin de radiacin electromagntica. Las especies excitadas se relajan al estado
fundamental, liberando su exceso de energa en forma de fotones.
En la figura 1 se observa la intensidad de emisin de la riboflavina con diferentes
disolventes. La riboflavina posee un grupo aromtico, por lo que la estructura de la
molcula se ver afectada con el pH, siendo el pH alcalino el que afecta ms a la
estructura y lo podemos observar en la figura 1, donde el valor de la pendiente para recta
para NaOH es la ms baja, esto nos indica que es menos exacto. El agua presenta el
valor ms alto de m, nos indica que es el mejor disolvente y que es ms exacto.
En la figura 2 se graficaron todas las concentraciones de riboflavina (0-50 ppm). A
concentraciones altas la energa emitida es absorbida por otras molecular por eso se
observa ese comportamiento en la diferentes rectas.

Conclusiones:

El pH cido y fuerte no es buen disolvente para la riboflavina

El mejor disolvente es el agua

Preguntas:
1. Por qu se deben conocer las longitudes de onda de mxima exitacin y
de mxima emisin?
Debido a la diferente configuracin electrnica de los fluorocromos cada
uno presenta un espectro de excitacin y de emisin caracterstico y nico.
Los fabricantes dan el pico de mxima excitacin y el pico de mxima
emisin o bien los espectros de excitacin y emisin.
2. Diga cules son las formas coenzimticas de la riboflavina y cul es su
papel en el metabolismo molecular.
Dinucletido de flavina y adenina (FAD), coenzima que transfiere tomos
de hidrgeno; interviene en las oxidorreducciones, para la produccin de
energa.
Flavina Mononucletido (FMN): Requerida en reacciones de xidoreduccin catalizadas por las deshidrogenasas ligadas a la flavina.
Bibliografa:

Espectroscopia de fluorescencia molecular. [En Lnea] [Disponible

en: http://www.ugr.es/~decacien/Planes/Quimica/Plan
%201997/temarios/671111d-archivos/fundamentos/SEMINARIO
%203.PDF]
Microscopa de fluorescencia y epifluorescencia. Universidad de Alicante. [En
Lnea] [Disponible en: http://ssyf.ua.es/es/formacion/documentos/cursosprogramados/2011/especifica/microscopia-optica/microscopia-optica-y-laserconfocal-2a-ed/tema-5.pdf]