PRCTICA DE ESTERILIZACIN

METODOLOGA CIENTFICA I
Profesores: Jos ngel Lara Vzquez, Luis Barbo Hernndez Portilla
OBJETIVOS
Conocer y manejar apropiadamente la autoclave.
Manejar diferentes tcnicas de sembrado
Verificar la eficiencia de un campo estril.
MATERIALES
1 Parrilla

1 Asa de siembra

1 Autoclave

1 Pizeta con agua destilada

1 Trip

1 Gradilla

2 Mecheros Fisher

1 Caja petri

2 Mangueras

*1 Pinzas de diseccin

1 T o Y de vidrio

*1 Bistur o navaja de 1 filo

2 Mangueras

*10 cajas Petri desechables estriles

2 Matraz Erlenmeyer de 250 ml

*Muestras biolgicas (pan o tortillas con

2 Matraz Erlenmeyer de 125 ml

hongos)

2 Pipetas graduadas de 10 ml

Medio PDA (papa, dextrosa y agar)

1 Probeta de 100 ml

Caldo nutritivo

1 Balanza vernier

Agar nutritivo.

5 tubos de ensaye con tapa de rosca de

*Material por equipo

15X200 mm
1 Vaso de precipitados de 250 ml

PROCEDIMIENTO
1.- En un matraz Erlenmeyer de 250 ml, calentar 120 ml de agua y posteriormente
adicionarle la cantidad adecuada de medio PDA.
2.- En un matraz Erlenmeyer de 125 ml adicionar 50 ml de agua y posteriormente
adicionarle la cantidad adecuada de caldo nutritivo. Disolver el caldo nutritivo y tomar 10
ml de ste en los tubos de ensaye con tapa de rosca.
3.- En un matraz Erlenmeyer de 250 ml, calentar 120 ml de agua y posteriormente
adicionarle la cantidad adecuada de agar nutritivo.
4.- Una vez realizados los puntos anteriores esterilizar en autoclave. (Nota: si son las 19:30
hrs y no se ha metido el material a esterilizar ABORTAR LA PRACTICA, con el
consecuente cero de calificacin)
5.- Paralelo al ciclo de esterilizado, formar un campo estril en la mesa para poder vaciar
los agares en las cajas Petri (se lava con agua y jabn, y posteriormente se limpia con un
poco de alcohol).
6.- Terminando el ciclo de esterilizacin verter en 5 cajas Petri 20 ml por caja de medio
PDA. Y en otras 5 cajas verte 20 ml de agar nutritivo. Dejar enfriando hasta la gelificacin
de los medios. (Verificar que haya las menos corrientes de aire posibles)
7.- Sembrar en 4 cajas con medio PDA cuatro diferentes hongos (pan o tortilla
contaminado) dejar una caja como control sin sembrar.
8.- Contaminar 2 cajas con agar nutritivo, (con una gota de agua, con los dedos, con saliva
o como quieran); en otras 2 cajas sembrar la bacteria proporcionada por los profesores en
forma de estra y otro por espatulado y dejar una caja como control sin contaminar.
9.- En los tubos con caldo nutritivo sembrar, 10, 20, 30 y 40 l de caldo con bacterias
(proporcionado por los profesores), dejar un tubo sin sembrar como control.
10.- Adicionalmente esterilizar una caja Petri de vidrio y una pipeta de 10 ml.
Resultados
Se observarn las diferentes cajas Petri y se realizaran las siguientes anotaciones: Forma de
las colonias, color de las colonias, nmero de colonias, de los tubos se observar si se
forma un gradiente de concentracin. Verificar que los tubos y caja que no se contaminaron
continen as.