Facult de mdecine (S.B.

A)
Dpartement de pharmacie

Coprologie parasitaire
Dr Y. Merad

(Cours illustr)

Introduction
Premires observations des parasites

Amibes
La coprologie parasitaire ou lexamen parasitologique des
selles EPS met en vidence et identifie:
Les parasites vivant dans le tube digestif de lhomme
Exemples:
helminthes
-Ascaris lumbricoides:
-Stronguiloides stercoralis
Les parasites pour lesquelles les selles sont un moyen
dlimination de leur forme de dissmination dans le milieu
extrieur Ex Schistosoma mansoni (vit dans le plexus veineux)

Entamoeba histolytica
dans le colon
Flagells

Giardia intestinalis
duodno-jjunum
les formes vgtatives
des amibes et des flagells sont
fragiles dans le milieu extrieur

LEPS mettra en vidence:

une partie du parasite:
Exemple
Anneaux de Taenia saginata qui se dtachent en dehors des selles

uf de Schistosoma
mansoni

une forme volutive du parasite (larve et uf dhelminthe)

Exemple: uf dAncylostoma duodenalis,
la forme dfinitive du parasite
Exemple: adulte dhelminthe: Strongyloides stercoralis

Limites de la coproparasitologie:
Parasites intestinaux peu limins par les selles, exemple:
Enterobius vermicularis dont les ufs restent fixs sur la marge
anale, et on retrouve rarement les femelles dans les selles
Certaines helminthiases exemple: Tnia saginata: les anneaux
forcent le sphincter anal en dehors de la dfcation
Quand le parasite est immature exemple Lors de la phase
tissualire du cycle dAscaris lumbricoides
Phase coprologiquement muette: exemple uf de douves dont
la scrtion est en rapport avec celle de la bile

ufs dankylostomes

Prparation du malade
Rgime alimentaire limit avant de faire lexamen
viter de consommer:
- Les fruits cuticule dure (poires, pommes)
- Fculents et graines enveloppes sches (lentille, fves)
- Foie dovins ou de bovins
Arrter des mdicaments tels que le bismuth, le charbon , l'huile de
paraffine , les suppositoires
Ne pas faire de radiologie digestives utilisant des produits de contraste
comme la baryte

Fiche clinique: ge, sexe, adresse, animaux de compagnie, profession

(vtrinaire, agriculteur), habitudes alimentaires, statut immunitaire

Le prlvement
Le prlvement est recueilli dans un rcipient propre et sec, couvercle
large et fermeture hermtique
les selles ne doit surtout pas tre mlanger aux urines (destruction des
formes vgtatives).
Il faut que la selle parvienne dans les plus brefs dlais au laboratoire afin
dviter la dgnrescence des formes vgtatives des protozoaires qui
sont sensible la variation de tempratures et la dshydratation.
La selle peut tre garde +4C ou on peut la conserver en ajoutant du
formol 5% si elle solide ou 10% si elle est pteuse
Il faut au moins 3 prlvement espacs de quelques jours car
llimination des parasite est intermittante avec des phases muettes.

Lobservation macroscopique
Couleur (verdatre: Giardiase?), consistance (molle, dure, liquide), aspect
(prsence de gras: statorrhe)
Prsence dlments surajouts:
-Parasites: adulte dAscaris, femelle doxuyre, anneau ou chaine de taenia
-glaire(mucus), sang

Lexamen direct
L'examen direct est le seule examen qui permet dapprcier la vitalit
des parasites. Il met en vidence les kystes et les formes vgtatives de
protozoaires ainsi que les ufs et les larves d'helminthes.

Prlever une noisette de selle laide dun agitateur en verre, en effectuant le

prlvement diffrents endroits
Raliser dans un verre pied une suspension homogne avec leau
physiologique 90/00, dposer 2 goutte sur une lame porte objet, recouvrir par une
lamelle et faire une lecture lobjectif x10 puis au x40 du microscope optique.
Parcourir toute la lamelle en zig-zag
On peut rajouter du lugol sur la lame qui fixe et colore les structure nuclaires
Quel que soit le rsultat de lexamen direct on doit obligatoirement le complter
par deux techniques de concentration lune pour les kystes et lautre pour les ufs
Il est impratif de connaitre la dscription des lments parasitaire et de retenir
les possibles faux parasites

lments non parasitaires

(faux parasites)
Cristaux de Charcot Leyden

Exemples de faux parasites

Elments humains
Cristaux de Charcot-Leyden
Cellules pithliale
Macrophage
leucocytes
Globules rouge

Elments non humains

Rsidus digestifs vgtaux

Algues
Spores ou Conidies fongiques
lments vgtales
Poil vgtal
Grains de pollen
Grains de fruits (figues)
Artefact
Poil vgtal

Vaisseau spiral
Bois vgtal

Cellules de fculents

Grain damidon

Placard pidermique
(de nature cellulosique)

Amas de cellules
de poire

Rsidus digestifs animaux

Fibre musculaire mal digre

Gouttelette lipidique

Cristaux

Cristaux
dacide gras

Phosphate
Cristal doxalate
ammoniaco-magnsien

Cristaux de
cholestrol

Les mthodes de concentration

Mthodes physiques
Techniques de flottaison ou de flottation
Cest une technique part du principe que la densit du liquide et suprieur celle
des parasites, ces derniers plus lgers flottent la surface. Elle a cependant
linconvnient daltrer des Larves et les Kystes pour les quels elle est contreindiques, de mme que pour les selles liquides ou riches en lipides
Elle donne de bons rsultats pour les ufs dhelminthes lgers (ufs
dHymenolepis, dAnkylostome et deTnia).
Les principales techniques de flottaison :

Mthode de Faust
Mthode de Willis : simple et utilisable en routine
Diluer une noisette de selle dans la solution sature de NaCl 25%
Remplissez un tube en verre conique jusqu' son bord en formant un mnisque concave
(verre de montre)sur lequel on dpose une lamelle pendant 15 minutes(pas plus pour viter
la cristalisation des ufs), On la dpose ensuite sur une lame porte objet et on observe
lobjectif X10 la recherche des ufs dhelminthes tels que ceux dHymenolepis ou
dAnkylostomes

Techniques de sdimentation
Le diluant a une densit inferieure celle du parasite alors se dernier se
sdimente
Inconvnient: technique longue raliser

Mthodes physico-chimiques ou diphasiques

Technique de Ritchie modifi par Allen et Ridley :
Technique de sdimentation base sur le coefficient de partage des particules
suivent leur densit, les lments dont la balance hygro-hydrophile penche vers les
groupement hydrophiles vont tre dans la phase aqueuse et descendre vers le
culot et les groupement dont la balance penche vers les groupement lipophile vont
se diriger vers l"ther.
Matriel
Verre pied, agitateur en verre extrmit aplatie, tube essai fond conique,
centrifugeuse, ther, formol 10%, couvillon, tamis
Mode opratoire
Prendre une parcelle de selles prleve sur divers zones de la selle, elle peut tre
pralablement passe sur un tamis pour liminer les gros dbris puis la mettre
dans un verre pied la mlanger avec 10x son volume de formol, triturer jusqu'
homognisation
Remplir le tube fond conique et ajouter au volume 1/3 d'ther de manire ce
qu'il y ai 2/3 du mlange selle , formol et 1/3 d'ther en laissant 1 cm pour fermer le
tube, lagiter pendant une minute et enfin Centrifuger 1500/mn pendant 2 3
minutes, on obtiendra:
Une couche suprieure d'ther, Une couche intermdiaire de rsidus bactrie
dbris, Une couche aqueuse
Et le culot qui nous intresse qui contient les lment parasitaires (kystes)

Technique de bailanger
Utilise comme ractif de dilution un tampon acto-actique Ph 5 et comme
solvant des lipides lther

ther
dbris

Phase
aqueuse
Le culot

Mthodes spciales
Scotch test anal (test de Graham la cellophane
adhsive)
Met en vidence les ufs dEnterobius vermicularis ainsi que les
anneaux ou les uf de taenia saginata limins en dehors de la
dfcation.
Le scotch transparent est appliqu au niveau de lanus, le matin
avant toute toilette en position ftale ou genou pectoral on dplisse
les plis radis de lanus et on applique le scotch qui sera ensuite fix
sur une lame porte objet
Lobservation se fera lobjectif grossissement 10
NB: Ce test est gnralement effectu par les parents denfants, il
faudra leur expliquer que la technique devra tre faite avec des gants
ou dfaut bien se laver les mains ensuite pour viter la
contamination par les ufs auto-infestant de loxyure.

Techniques de Kato

Mthode de Kato et Kato-Katz

Principe: confection d'un frottis pais que l'on claircit
Cest la recherche les ufs dhelminthes dans une quantit de selle
de la taille dun petit pois
Laisser simprgner la veille de lexamen des carrs de cellophanes
de 2 sur 5 cm dans une quantit de vert malachite 3% (contre
colorant) et de glycrine, appliquer la bande sur la selle et sur la
lame renverser et appuyer sur la paillasse
Methode de Kato-Katz: quantitative utilise un gabarie pour la selle

Un pois de selle
sur lame

gabarie

Mthode efficace pour la recherche d'ufs dascaris et de

trichocphale mais inutilisable pour les kystes et les larves
ainsi que les ufs d'ankylostome.

Technique de Baerman et Lee

Technique dextraction des larves dAnguillule (Strongyoides
stercoralis) base sur lhygrotropisme e le thermotropisme des
larves
Consiste mettre lchantillon de selles sur un tamis mtallique
tapiss de quelques couches de gaze sur un entonnoir e
Le dispositif implique une tubulure avec robinet faisant suite
lentonnoire ou tout simplement un caoutchouc ferm par une
pince.
on remplit lentonnoir deau strile 45C, la temprature doit
tre constante (utiliser une tuve) , le niveau deau doit frler la
selle sans y tre immerg
NB: leau du robinet ou de source peut contenir des nmatodes
libres qui peuvent fausser le diagnostic, do limprative dutiliser
une eau fiable
Au bout de 2 3 heures, on ouvre la pince pour recueillir 10 ml
de liquide dans un tube centrifuger. On centrifuge 1500 tr/ mn
pendant 3 5 mn puis on examine le culot.
NB: il ne faut jamais oublier que les anguillules pntrent par voie
cutane do les mesures de prcautions manuelles lors de la
manipulation

Cellophane avec
glycrine et vert malachite

Baermann et Lee
T: 45C pendant 2-3h

La coproculture

La culture est plus sensible que lexamen d'tats frais et diminue le besoin
dexamens rpts

Coproculture en protozoologie
Contrairement aux bactries, il est difficile de maintenir des protozoaires en
culture dans un laboratoire de diagnostic
La culture concerne aussi bien les kystes que les formes vgtatives, elle se
fera sur plusieurs tubes et sera incube 37C.
Un repiquage sera de mise si on obtient pas le parasite
Sont indique en cas de:
Suspicion damibiase avec examen direct ngatif.
Pour obtention dun grand nombre damibes pour tude morphologique,
taxonomique ou prparation dantignes.
Il existe 3 types de milieux de cultures classiques ainsi que la culture cellulaire
pour certains opportunistes:
Xnique ou polyxnique: le parasite se dveloppe en prsence dune flore
microbienne
Monoxnique: le parasite est associ une seule espce.
Axnique: le parasite se dveloppe en absence de toute cellule
mtabolisante.
Culture cellulaire pour les microsporides et les cryptosporidies

Exemples de milieux de culture

Milieu de Dobell et Laidlaw:
Milieu diphasique, avec 2 parties.
Support : srum de cheval coagul en plan inclin.
Ampoule : 5 ml de phase liquide compose de 6 parties de liquide de
Ringer, 1 partie de srum de cheval liquide ou liquide ovo-mucoide plus
amidon de riz, ce milieux est intressant pour les Amibes et les flagells

Milieu LMS:
Solution saline, Extrait de foie, Extrait de levures, Srum de cheval
dcomplment, Amidon de riz.

Milieu axnique de Diamond

Milieu LE (Locke-Egg): bon pour la culture dEntamoeba et
Dientamoeba fragilis

Milieu de Robinson :
Le plus utilis pour ltude des isoenzymes ( bon rendement)

Coproculture en helminthologie

La coproculture vise essentiellement tablir

anguillulose et les distinguer des ankylostomiases

le

diagnostic

des

Il faudra manipuler avec prcaution pour viter les contaminations

cutanes

Mthode de culture sur glose: rajouter 2 g de selleau centre dune

glose coule dans une boite de ptri et incuber 25C

Mthode de culture sur charbon vgtal (mthode Brumpt):

20 g de selles mlangs de la poudre de charbon vgtal, ajouter de leau et
mlanger la pte molle et la mettre 25C sur boite de ptri en couche mince.

Mthode de Ho-Thi-Sang: la mme que la prcdente sauf que la pte

est dispose en cne en contact du couvercle de la boite de ptri
La lecture se fait en retournant le couvercle et en recherchant les larves sur les
gouttelettes de condensation.

Mthode de Harada et Mori:

Incuber la culture 25C.
Lecture aprs 48h jusqu 15 jours. Examen quotidien.
Manipuler avec prcautions.
Inconveniant: test une petite quantit de selle
Avantage: larves propres

La coproculture retrouve:
Aprs 48 heures :
Larves rhabditoides dankylostomes
Larves strongyloides danguillules aprs transformation des larves
rhabditoides
Du 2lme au 4me jour :
Larves strongyloides dankylostomes,
larves strongyloides danguillules
Les adultes male et femelle danguillules.
Au bout du 7me jour :
Larves strongyloides enkystes infestantes dankylostomes
ou larves strongyloides infestantes danguillules nes des adultes libres.

Capsule bucale
dAncylostoma duodenale

Les colorations

Mthodes de coloration rapides:

Mthode de Bailenger et Faraggi
Mthode de Sapro, Lawless, et Strome

Mthode au bleu de mthylne tampor

Coloration des frottis humides

Pour bien observer les structures nuclaires et garder des lames de rfrence,
on confectionne un frottis de selles humide et pais, sa fixation et sa
coloration se fait en
3 temps: fixation puis coloration puis diffrentiation ( M de Heidenhain)
2 Temps: fixation puis coloration (M Wheatley)
1Temps: Fixation/colration (M Kohn)

Technique de Zeihl Neelsen modifie par Henriksen et Pohlenz.

Colore le cryptosporidium
Confectionn partir dun culot de RItchie
Schage
Fixation pendant 5mn au Mthanol
coloration dans la Fuchsine phnique pendant 1 heur froid
Rinage leau de robinet
diffrenciation dans un bain dAcide Sulfurique 2% pendant 20 secondes en
agitant
rinage
Contre coloration pendant 5mn dans du Vert Malachite 5%
Rincer scher et lire limmersion X 100
Les Oocytes de Cryptosporidies apparaissent en rouge sur un fond vert.
Coloration des microscporidies

Coloration par le Trichrome de Gomori modifie: microsporidies

Diluer les selles au 1/3 dans du formol.
Confectionner un frottis de selles partir de la dilution.
Colorer pendant 3heures.
Rincer leau actique 0,2%.
Contre colorer 30 secondes par le vert de malachite 1%.
Rincer, scher et lire au grossissement Gx100.

Coloration par Uvitex 2B: Utilise un fluorochrome affinit pour la chitine

Met en vidence les microsporidie par une fluorescence directe.
On obtient une fluorescence bleue pale sur fond noir.