AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN GAHARU (Aquillaria Microcarpa Baill.) TERHADAP TES TOLERANSI GLUKOSA ORAL, GLIKOGEN HATI DAN HISTOPATOLOGI PANKREAS TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI ALOKSAN

i
AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN GAHARU (Aquillaria microcarpa

Baill.) TERHADAP TES TOLERANSI GLUKOSA ORAL, GLIKOGEN
HATI DAN HISTOPATOLOGI PANKREAS TIKUS PUTIH YANG
DIINDUKSI ALOKSAN
SKRIPSI
untuk memenuhi persyaratan
dalam menyelesaikan program sarjana Strata 1 Farmasi
Oleh :
Ranty Rirung Andrunganyan
NIM. J1E111030
PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT
BANJARBARU
AGUSTUS 2015
ii
ii
iii
iii
iv
ABSTRAK
AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN GAHARU (Aquillaria microcarpa
Baill.) TERHADAP TES TOLERANSI GLUKOSA ORAL, GLIKOGEN HATI
DAN HISTOPATOLOGI PANKREAS TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI
ALOKSAN
(Ranty Rirung Andrunganyan; Pembimbing : Nurlely, Fadlilaturrahmah; 2015; 68
halaman)
Daun gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) secara empiris digunakan sebagai
penurun kadar glukosa darah. Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh
pemberian ekstrak etanol daun gaharu (EEDG) terhadap penurunan kadar glukosa
darah pada tes toleransi glukosa oral (TTGO), peningkatan glikogen hati dan
peningkatan jumlah pulau langerhans tikus yang dibuat diabetes serta menentukan
dosis efektif dari EEDG. Penelitian menggunakan 24 ekor tikus jantan galur Wistar,
dibagi menjadi 6 kelompok yaitu kelompok kontrol normal, kontrol negatif, kontrol
positif (glibenklamid 5 mg/kgBB), serta kelompok EEDG dengan dosis 50, 100 dan
200 mg/kgBB. Semua kelompok kecuali kelompok normal diinduksi aloksan 150
mg/kgBB, sedangkan kelompok normal diinduksi NaCl 0,9%. Hari ke-3 setelah
induksi diperiksa kadar glukosa darah pada hewan uji. Perlakuan dilakukan selama
28 hari setelah pemeriksaan gula darah paska induksi. Hari ke-23 seluruh kelompok
dilakukan TTGO dengan memberikan glukosa 2 g/kgBB. Hari ke-28 dilakukan
pengambilan organ pankreas dan hati melalui pembedahan. Organ hati dianalisis
dengan spektrofotometri UV-Vis untuk melihat kadar glikogennya dan pada organ
pankreas dihitung jumlah pulau langerhans. Hasil penelitian menunjukkan EEDG
mampu menurunkan kadar glukosa darah pada TTGO, meningkatkan kadar glikogen
hati, dan meningkatkan jumlah pulau Langerhans. Oleh karena itu dapat dinyatakan
bahwa dosis EEDG yang efektif adalah 50 mg/kgBB.
Kata kunci : Aquilaria microcarpa Baill., Aloksan, TTGO, Glikogen hati, Jumlah
Pulau Langerhans.
iv
ABSTRACT
THE ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF AGARWOOD LEAF (Aquilaria
microcarpa Baill.) TO ORAL GLUCOSE TOLERANCE TEST, LIVER GLYCOGEN
AND PANCREAS HISTOPHATOLOGY OF WHITE MICE INDUCTED WITH
ALLOXAN
(Ranty Rirung Andrunganyan; Advisors: Nurlely, Fadlilaturrahmah; 2015; 68
pages)
Agarwood leaves (Aquilaria microcarpa Baill.) empirically used as a reducer of
blood glucose level. This study aimed to identify the effect of ethanol extract of
agarwood leaf (EEAL) giving to the reducing of blood glucose level on tolerance test
of oral glucose, the increasing of liver glycogen, as will as number of islet of the
pancreas diabetic rats and to determine the effective dose of EEAL. This study used
24 male Wistar mice, divided into 6 groups: normal control, negative control,
positive control (glibenclamide 5 mg/kgBB), group of EEAL (doses of 50, 100, and
200 mg/kgBB). All groups except normal group induced with alloxan 150 mg / kg,
while the normal group induced with 0.9% NaCl. The third day after the induction
blood glucose level was examined in the tested animals. Treatment was carried out
during the 28 days after the post-induction checks of blood glucose. On the twentythird day the entire group performed oral glucose tolerance test by giving glucose 2
g / kg. On the twenty-eighth day it was done the taking of pancreas and liver organ
through surgery. The liver was analyzed with UV-Vis spectrophotometry to see its
glycogen level and in pancreas organ it was calculated the number of islet of the
pancreas. The study result showed that EEAL was able to reduce blood glucose level
on oral glucose tolerance test, increase glycogen level of liver, and increase number
of islet of the pancreas. Therefore, it can be stated that the effective dose of EEAL is
50 mg/kgBB.
Keywords: Aquilaria microcarpa Baill., alloxan, OGTT, Liver glycogen, Number of

islet
vi
PRAKATA
Puji dan syukur tidak henti-hentinya penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang
Maha Esa atas segala anugrah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian
yang berjudul Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Gaharu (Aquillaria microcarpa Baill.)
Terhadap Tes Toleransi Glukosa Oral, Glikogen Hati dan Histopatologi Pankreas
Tikus Putih yang Diinduksi Aloksan.
Penulis dalam kesempatan ini mengucapkan terima kasih atas segala bantuan
dan dukungan kepada:
1. Kedua orangtua yang tidak henti-hentinya memberikan nasehat, motivasi,
dukungan moril dan materil baik dalam proses perkuliahan ataupun dalam proses
penyelesaian skripsi.
2. Ibu Nurlely, S. Farm., M.Sc (Pharm)., Apt. selaku dosen pembimbing utama dan
Ibu Fadlilaturrahmah, S. Farm., M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing
pendamping yang telah banyak memberikan bimbingan, nasehat dan motivasi
selama penulisan proposal hingga skripsi.
3. Ibu Difa Intannia, S.Farm., M.Farm-Klin., Apt., Ibu Destria Indah Sari, M.Farm.,
Apt dan Bapak Muhammad Ikhwan Rizki, S.Farm, M.Sc., Apt., selaku tim
penguji. Terima kasih atas kritik, saran dan masukan yang telah diberikan selama
penulisan proposal hingga skripsi.
4. Ibu Nani Kartinah, S.Farm., M.Sc., Apt selaku dosen pembimbing akademik
yang telah banyak memberikan bimbingan, nasehat dan motivasi selama proses
perkuliahan yang sudah dijalani.
5. Dwi Juni Saputra yang selalu mendampingi, memberi semangat dan motivasi
selama proses penyelesaian skripsi.
6. Teman-teman angkatan 2011, khususnya Cha-cha, Nada, Nisa, Tiara, Windi dan
Yuni yang mendukung, menemani selama perkuliahan dan proses penyelesaian
skripsi.
7. Semua pihak yang tidak bisa disebutkan satu persatu baik secara langsung
maupun tidak langsung ikut membantu jalannya penyusunan skripsi ini. Penulis
vi
vii
menyadari masih banyak kekurangan dalam penulisan skripsi ini, namun penulis
berharap semoga skripsi ini dapat berguna bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
Banjarbaru, Agustus 2015
Penulis
vii
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL .................................................................................
LEMBAR PENGESAHAN .......................................................................
ii
PERNYATAAN ........................................................................................
iii
ABSTRAK ................................................................................................
iv
ABSTRACT ..............................................................................................
PRAKATA ................................................................................................
vi
DAFTAR ISI .............................................................................................
viii
DAFTAR TABEL .....................................................................................
xi
DAFTAR GRAFIK ...................................................................................
xii
DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................
xiii
BAB I. PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang .............................................................................
1.2. Perumusan Masalah ......................................................................
1.3. Tujuan Penelitian ..........................................................................
1.4. Manfaat Penelitian ........................................................................
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Gaharu ...........................................................................................
2.1.1 Morfologi .............................................................................
2.1.2 Kandungan Kimia ................................................................
2.1.3 Kegunaan Tumbuhan Gaharu ..............................................
2.2 Diabetes Melitus ............................................................................
2.3 Ekstraksi ........................................................................................
2.4 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ...................................................
10
2.5 Spektro UV-Vis .............................................................................
11
2.6 Aloksan ..........................................................................................
12
2.7 Parameter .......................................................................................
13
viii
ix
2.7.1 Pengukuran Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO) ...............
13
2.7.2 Glikogen Dalam Hati ...........................................................
13
2.7.3 Histopatologi Pankreas .........................................................
14
2.8 Hipotesis ........................................................................................
15
BAB III. METODE PENELITIAN
16
3.1 Jenis Penelitian ..............................................................................
16
3.2 Waktu dan tempat Penelitian .........................................................
16
3.3 Alat dan Bahan...............................................................................
16
3.3.1. Alat ......................................................................................
16
3.3.2. Bahan ..................................................................................
17
3.4 Hewan Uji ......................................................................................
17
3.5 Variabel Penelitian ........................................................................
18
3.5.1. Variabel Bebas ...................................................................
18
3.5.2. Variabel terikat ..................................................................
18
3.6 Prosedur Penelitian ........................................................................
18
3.6.1 Pengumpulan Sampel ..........................................................
18
3.6.2 Pengolahan Bahan ...............................................................
18
3.6.3 Ekstraksi ..............................................................................
18
3.6.4 Uji Kandungan Senyawa Daun Gaharu ..............................
19
3.6.5 Uji pendahuluan Orientasi Dosis Aloksan ..........................
21
3.6.6 Penginduksi Aloksan ...........................................................
22
3.6.7 Uji pendahuluan Orientasi Dosis ekstrak ............................
22
3.6.8 Pengujian Aktivitas .............................................................
22
3.6.9 Pengukuran Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO) ..............
24
3.6.10 Analisis Kadar Glikogen Dalam Hati .................................
24
3.6.11 Histopatologi Pankreas .......................................................
25
3.7. Analisis data ..................................................................................
26
ix
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
28
4.1 Pengolahan Elstrak ........................................................................
28
4.1.1 Penyiapan Bahan untuk Ekstraksi ........................................
28
4.1.2 Ekstraksi ...............................................................................
29
4.2 Uji Kandungan Senyawa pada Ekstrak ..........................................
30
4.2.1 Pengujian Skrining Fitokimia ...............................................
30
4.2.2 Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu

dengan Kromatografi Lapis Tipis .........................................
36
4.3 Perlakuan Hewan Uji .....................................................................
38
4.3.1 Uji Pendahuluan Dosis Aloksan ...........................................
38
4.3.2 Uji Pendahuluan Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu ...
39
4.3.3 Pengujian Aktivitas ..............................................................
40
4.3.4
Tes Toleransi Glukosa Oral ...............................................
41
4.5.5 Glikogen Hati .......................................................................
47
4.3.6 Histopatologi Pankreas .........................................................
52
BAB V. PENUTUP
58
5.1 Kesimpulan ................................................................................
58
5.2 Saran ..........................................................................................
58
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
xi
DAFTAR TABEL
Tabel
Halaman
1. Penggolongan Obat Hipoglikemik Oral ...............................................
2. Perlakuan Orientasi Dosis Aloksan ......................................................
21
3. Perlakuan Orientasi Dosis Pemberian ekstrak Gaharu .........................
22
4. Hasil Pengujian Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gaharu ......
31
5. Hasil Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu

dengan Kromatografi Lapis Tipis Dengan Reaksi Penyemprot ...........
36
6. Hasil Uji Pendahuluan Dosis Aloksan .................................................
38
7. Uji Pendahuluan Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu ...................
49
xi
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar
Halaman
1. Tumbuhan Gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) ................................
2. Perbedaan Diabetes melitus tipe I dan Tipe II ......................................
3. Struktur Aloksan ...................................................................................
12
4. Preparat Pankreas .................................................................................
14
5. Skema Pengujian Aktivitas Antidiabetes .............................................
23
6. Reaksi Uji Mayer ..................................................................................
32
7. Reaksi Uji Dragendorff ........................................................................
32
8. Reaksi Terpenoid dengan Pereaksi Lieberman-Burchard ....................
33
9. Reaksi Tanin dan Gelatin .....................................................................
34
10. Reaksi Flavonoid dengan NaOH ..........................................................
35
11. Reaksi Fenol dengan FeCl3 ..................................................................
36
12. Reaksi Antara Polifenol dengan Pereaksi FeCl3 ...................................
38
13. Grafik Tes Toleransi Glukosa Oral .......................................................
43
14. Grafik Rata-rata Total AUC Tiap Kelompok Perlakuan ......................
45
15. Grafik pembacaan panjang gelombang Larutan Standar (Bovine liver

glycogen) yang Direaksikan dengan PHESUL (Phenol dan Asam
Sulfat Pekat) ..........................................................................................
48
16. Grafik Kurva Operating Time Larutan Standar (Bovine liver

Sulfat Pekat) .........................................................................................
49
17. Grafik Kurva Standar (Bovine liver glycogen) yang Direaksikan

dengan PHESUL (Phenol dan Asam Sulfat Pekat) ..............................
50
18. Grafik Rata-rata Kadar Glikogen Hati pada Tiap Kelompok

perlakuan ...............................................................................................
51
19. Grafik Rata-rata Jumlah pulau langerhans pada Tiap Kelompok

perlakuan ...............................................................................................
54
20. Gambar preparat pankreas masing-masing kelompok ........................
57
xii
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
1.
Surat determinasi
2.
Form Ethical clearance
3.
Sertifikat aloksan
4.
Sertifikat hewan uji
5.
Proses ekstraksi daun gaharu
6.
Perhitungan rendemen ekstrak etanol daun gaharu
7.
Hasil pegujian skrining fitokimia ekstrak etanol daun gaharu
8.
Hasil analisi kualitatif senyawa ekstrak daun gaharu dengan kromatografi

lapis tipis dengan reaksi penyemprot
9.
Hasil orientasi dosis aloksan
10.
Hasil orientasi dosis ekstrak
11.
Pembuatan larutan pnginduksi
12.
Pembuatan larutan stok ektrak kering daun gaharu
13.
Skema pengujian aktivitas antidiabet
14.
Dokumentasi uji aktivitas antidiabet
15.
Pengamatan kadar glkosa darah pada TTGO
16.
Hasil rata-rata SEM kadar glukosa daah pada TTGO
17.
Persentase kadar glukosa darah pada TTGO
18.
Hasil persentase rata-rata SEM kadar glukosa daah pada TTGO
19.
AUC tiap kelompok
20.
Hasil AUC total (rata-rata SEM) tiap kelompok
21.
Contoh Perhitugan persentase kadar glukosa darah
22.
Analisis statistik data rata-rata AUC total pada TTGO
23.
Hasil uj post hoc LSD kadar glukosa darah TTGO pada tiap kelompok
perlakuan
24.
Dokumentasi pembacaan glikogen hati
25.
Hasil absorbansi pembacaan panjang gelombang
xiii
xiv
26.
Hasil absorbansi operating time
27.
Hasil absorbansi penetapan kurva standar
28.
Hasil uji regresi kurva standar
29.
Hasil absorbansi sampel hati tikus
30.
Hasil kadar glikogen tikus (/mg) Mean SEM setiap kelompok
31.
Contoh perhitungan penetapan kadar glikogen hati
32.
Analisis statistik data kadar glikogen hati
33.
Hasil uji Mann-Whitney kadar glikogen hati terhadap tiap kelompok

perlakuan
34.
Dokumentasi pembuatan preparat pankreas
35.
Hasil pembacaan jumlah pulau langerhas
36.
Hasil pembacaan jumlah pulau langehans (Mean SEM) pada setiap

kelompok
37.
Analisis statistik data jumlah pulau langerhans pada pankreas
38.
Hasil uji Mann-Whitney jumlah pulau langerhans terhadap tiap kelompok

perlak
xiv
BAB I
PENDAHULUAN
1.1.
Latar Belakang
Diabetes melitus didefinisikan sebagai suatu penyakit kelainan metabolik
kronis secara serius yang memiliki dampak signifikan terhadap kesehatan yang
ditandai dengan tingginya kadar gula dalam darah. Diabetes melitus dapat
disebabkan karena menurunnya hormon insulin yang diproduksi oleh sel beta pada
pulau Langerhans dalam kelenjar pankreas (Reinauer et al. 2002). Berdasarkan data
dari International Diabetes Federation (IDF) Diabetes Atlas, Indonesia termasuk
dalam daftar 10 negara dengan penderita diabetes terbanyak. Di Indonesia pada
tahun 2013 ada sebanyak 8,5 juta penduduk yang mengalami diabetes dan
diperkirakan pada tahun 2035 akan terjadi peningkatan jumlah penderita diabetes
menjadi 14,1 juta penduduk Indonesia (IDF, 2013). Terapi diabetes melitus dapat
dilakukan dengan terapi tanpa obat berupa diet, olahraga teratur dan penurunan berat
badan merupakan komponen penting dari pengobatan diabetes melitus. Apabila
penatalaksanaan terapi tanpa obat (pengaturan diet dan olahraga) belum berhasil
mengendalikan kadar glukosa darah penderita, maka perlu dilakukan langkah
berikutnya berupa penatalaksanaan terapi dengan obat, baik dalam bentuk terapi obat
hipoglikemik oral, terapi insulin, atau kombinasi keduanya (Depkes RI, 2005).
Penggunaan obat herbal sebagai terapi alternatif beberapa penyakit semakin
berkembang luas dan populer. Salah satu tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai
terapi alternatif untuk penurun kadar glukosa dalam darah adalah daun gaharu. Daun
tanaman gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) secara empiris digunakan sebagai
penurun kadar glukosa darah oleh masyarakat Tamiang Layang, dimana daun gaharu
tersebut diseduh dengan air hangat dan diminum. Dari hasil penelitian Prankhon et al
(2011) daun gaharu dengan spesies berbeda yaitu Aquilaria sinensis berpotensi
sebagai agen antidiabetes, dimana dapat menurunkan kadar glukosa darah puasa dan
meningkatkan penyerapan glukosa di jaringan adiposa. Berdasarkan penelitian yang
dilakukan oleh Mega & Swastini (2010) ekstrak metanol daun gaharu mengandung
senyawa metabolit sekunder flavonoid, terpenoid dan senyawa fenol.

Flavonoid merupakan agen antidiabetes yang bekerja dengan cara meningkatkan
pemanfaatan glukosa pada jaringan perifer, menstimulasi sel beta pankreas untuk
meningkatkan sekresi insulin dan bertindak sebagai inhibitor glukosidase (Jadhav &
Puchchakayala, 2012). Flavonoid sebagai salah satu kelompok senyawa fenolik yang
banyak terdapat pada jaringan tanaman dapat berperan sebagai antioksidan, dimana
berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Gomathi et al (2013) bahwa antioksidan
yang terdapat dalam ekstrak Evolvulus alsinoides L. dapat membantu regenerasi dari
pankreas pada tikus yang mengalami diabetes.
Pengujian aktivitas penurun glukosa darah dapat diamati dari beberapa
parameter yaitu kadar glukosa pada tes toleransi glukosa oral, glikogen hati dan
histopatologi pankreas. Parameter ini diambil karena menggambarkan proses
pengendalian kadar glukosa dalam darah. Pengamatan pada histopatologi pankreas
dilakukan dengan menghitung jumlah pulau Langerhans, dimana menurut Adeyemi
et al (2010) kerusakan pada pankreas menyebabkan penurunan jumlah pulau
Langerhans yang mengakibatkan penurunan sekresi insulin dan meningkatnya kadar
glukosa dalam darah. Kadar glukosa pada tes toleransi glukosa oral digunakan untuk
mengukur kemampuan tubuh dalam menggunakan gula jenis glukosa yang
merupakan sumber utama energi tubuh (Islam et al, 2009). Kadar glikogen dalam
hati digunakan untuk melihat penggunaan glukosa pada jaringan, dimana apabila
kadar glukosa darah meningkat (hiperglikemik) maka glukosa akan diubah dan
disimpan sebagai glikogen atau lemak. Glikogenesis (produksi glikogen) akan
menurunkan kadar glukosa darah dan proses ini distimulasi oleh insulin yang
disekresi oleh pankreas (James et al, 2002).
1.2.
Rumusan Masalah
Masalah yang timbul berkaitan dengan judul penelitian ini dan menarik untuk
dipecahkan antara lain:

(1)
Apakah ekstrak etanol daun gaharu memiliki aktivitas terhadap penurunan

kadar glukosa pada tes toleransi glukosa oral, peningkatan kadar glikogen
hati dan peningkatan jumlah pulau Langerhans pada histopatologi dari

pankreas tikus putih jantan yang diinduksi aloksan?
(2)
Berapa besar dosis pemberian ekstrak etanol daun gaharu yang dapat
menurunkan kadar glukosa pada tes toleransi glukosa oral, meningkatkan
kadar glikogen hati dan meningkatkan jumlah pulau Langerhans pada
histopatologi dari pankreas tikus putih jantan yang diinduksi aloksan?
1.3.
Tujuan Penelitian
Penelitian ini bertujuan sebagai berikut:
(1)
Membuktikan aktivitas ekstrak etanol daun gaharu terhadap penurunan kadar

glukosa pada tes toleransi glukosa oral, peningkatan kadar glikogen hati dan
peningkatan jumlah pulau Langerhans pada histopatologi dari pankreas tikus
putih jantan yang diinduksi aloksan.
(2)
Menentukan dosis pemberian ekstrak etanol daun gaharu yang dapat

menurunkan kadar glukosa pada tes toleransi glukosa oral, meningkatkan
kadar glikogen hati dan meningkatkan jumlah pulau Langerhans pada
histopatologi dari pankreas tikus putih jantan yang diinduksi aloksan.
1.4.
Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat menambah data penelitian dalam usaha
pemanfaatan tumbuhan gaharu sebagai salah satu bahan alam untuk penurun kadar
glukosa darah pada manusia.
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1
Gaharu
3.5.1
Morfologi
Daun, bunga dan buah tanaman gaharu mempunyai ciri yaitu; daun lonjong
memanjang dengan panjang 58 cm, lebar 34 cm, berujung runcing, dan berwarna
hijau mengkilat. Bunga berada di ujung ranting atau ketiak atas dan bawah daun.
Buah berada dalam polong berbentuk bulat telur atau lonjong, berukuran panjang
sekitar 5 cm dan lebar 3 cm (Sumarna, 2002). Tumbuhan gaharu dapat dilihat pada
gambar 1. Menurut Tarigan (2004) secara taksonomi tanaman gaharu dapat
diklasifikasikan sebagai berikut :
Kingdom
: Plantae
Divisio
: Spermatophyta
Subdivisi
: Angiospermae
Kelas
: Dicotyledonae
Sub kelas
: Dialypetale
Ordo
: Myrtales
Bangsa
: Thymeleaceae
Genus
: Aquilaria
Species
: Aquilaria microcarpa Baill.
(a)
(b)
Gambar 1. Tumbuhan Gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) (a) batang pohon; (b) daun
(koleksi pribadi)
2.1.2
Kandungan Kimia
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Mega & Swastini (2010)
menunjukkan
bahwa
ekstrak
metanol
daun
gaharu
(Gyrinops
versteegii)
mengandung metabolit sekunder seperti senyawa fenol, flavonoid dan terpenoid

Ketiga senyawa metabolit sekunder tersebut diketahui mempunyai sifat sebagai
senyawa antioksidan atau sebagai agen antikanker. Menurut hasil penelitian yang
telah dilakukan Santosa et al (2013) yang menyatakan bahwa golongan senyawa dari
ekstrak metanol daun gaharu mengandung senyawa triterpen yang mempunyai gugus
fungsi seperti -OH, CH alifatik, C=O, dan C=C alifatik .
2.1.3
Kegunaan Tumbuhan Gaharu

Gaharu mempunyai banyak khasiat seperti anti asmatik, obat sakit perut,
kanker, hepatitis, sirosis dan sebagainya (Santosa et al, 2013). Secara tradisional
tanaman gaharu dipergunakan sebagai obat : penghilang stress, gangguan ginjal,
hepatitis, sirosis, pembengkakan hati dan ginjal, bahan antibiotik untuk TBC,
reumatik, kanker, malaria dan tukak lambung, anti asmatik, antimikroba, stimulant
kerja syaraf, sakit perut, afrodisiak, penghilang rasa sakit, diare, ginjal, tumor dan
paru-paru (Mega & Swastini, 2010).
2.2
Diabetes Melitus
Kata diabetes berasal dari bahasa Yunani yang memiliki arti mengalir,
sedangkan melitus berasal dari bahasa latin yang berarti madu atau manis (Fitriani,
2011). Diabetes melitus (DM) merupakan suatu kelainan metabolik kronis serius
yang memiliki dampak signifikan terhadap kesehatan seseorang atau suatu kondisi
konsentrasi glukosa dalam darah secara kronis lebih tinggi daripada nilai normal
(hiperglikemia) akibat tubuh kekurangan insulin atau fungsi insulin tidak efektif.
(Subroto, 2006). Setelah makan makanan tinggi karbohidrat, kadar glukosa darah
meningkat dari kadar puasa sekitar 80-100 mg/dL ke kadar sekitar 120-140 mg/dL
dalam periode 30 menit sampai 1 jam. Konsentrasi glukosa darah kemudian mulai
menurun kembali ke kadar puasa dalam waktu sekitar 2 jam setelah makan (Marks et
al, 2000). Gejala tipikal yang sering dirasakan penderita diabetes antara lain poliuria
(sering buang air kecil), polidipsia (sering haus), dan polifagia (banyak makan atau
mudah lapar), penglihatan kabur, koordinasi gerak anggota tubuh terganggu,

kesemutan pada tangan atau kaki, timbul gatal-gatal yang seringkali sangat
mengganggu (pruritus), dan berat badan menurun tanpa sebab yang jelas (Depkes
RI, 2005). Penyakit diabetes melitus dapat disebabkan oleh beberapa faktor
diantaranya pola makan, obesitas, faktor genetik, bahan kimia dan obat-obatan, serta
infeksi pada pankreas (Wijayakusuma, 2004).
Menurut Subroto (2006) klasifikasi diabetes melitus adalah sebagai berikut:
(1)
Diabetes melitus Tipe I (Diabetes Melitus tergantung Insulin)

Tipe ini disebabkan oleh kerusakan sel beta pankreas sehingga kekurangan
insulin absolut. Faktor keturunan juga merupakan salah satu penyebab. Penderita
Diabetes melitus Tipe I tergantung pada terapi insulin dan tidak dianjurkan
mengonsumsi obat antidiabetik oral. Penderita Diabetes melitus Tipe I tidak dapat
disembuhkan dan tergantung pada injeksi insulin selama hidupnya.
(2)
Diabetes melitus Tipe II (Diabetes Melitus tidak tergantung Insulin)

Tipe ini disebabkan oleh gangguan sekresi insulin yang progresif karena
resistensi insulin. Diabetes melitus Tipe II dipicu oleh pola hidup yang kurang sehat.
(3)
Diabetes Melitus Kehamilan

Diabetes tipe ini hanya diderita oleh wanita selama kehamilannya dan
umumnya akan kembali normal sesudah hamil. Walaupun demikian, beberapa kasus
yang tidak terkontrol dapat berkembang lebih lanjut pasca-kelahiran. Penanganan
yang kurang baik terhadap penderita akan berakibat buruk pada janin seperti
kelainan bawaan, gangguan pernapasan pada bayi bahkan kematian janin.
(4)
Diabetes melitus tipe lain

Diabetes tipe ini disebabkan oleh keadaan atau sindrom tertentu seperti
penyakit pankreas, penyakit hormonal, keadaan yang disebabkan oleh obat atau zat
kimia, gangguan reseptor insulin, dan sindrom genetik tertentu.
Gambar 2. Perbedaan Diabetes melitus tipe I dan Tipe II (Baradero et al, 2005)
Reaksi biokimia dalam tubuh selalu berubah untuk mengatur dan

mempertahankan nilai kadar glukosa darah. Tujuan mengatur metabolisme
karbohidrat adalah untuk mempertahankan homeostatis dan mengubah reaksi
biokimia sesuai yang dibutuhkan oleh tubuh (Gropper et al, 2005). Kadar glukosa
darah dipertahankan melalui dua reaksi utama, yaitu penambahan glukosa dari
simpanan glukosa hati dan mengambil kelebihan glukosa untuk dibawa ke hati dan
otot (Sizer & Whitney, 2006). Menurut Almatsier (2001) ada beberapa hormon yang
berhubungan dengan pengaturan kadar glukosa darah, yaitu :
(1)
Hormon insulin
Hormon ini dihasilkan oleh sel-sel beta pulau Langerhans pankreas. Hormon
ini berfungsi menurunkan kadar glukosa darah. Mekanisme penurunan kadar glukosa
darah oleh insulin meliputi peningkatan laju penggunaan glukosa melalui oksidasi,
glikogenesis, dan lipogenesis. Efek lain yang ditimbulkan insulin adalah peningkatan
difusi fasilitatif glukosa kedalam sel-sel otot dan sel lemak. Pengeluaran insulin
dirangsang oleh hormon glukagon dan hormon-hormon saluran cerna.
(2)
Hormon glukagon
Hormon ini diproduksi oleh sel alfa pulau Langerhans pankreas dan
mempunyai sifat kebalikan dari hormon insulin. Glukagon meningkatkan glukosa

darah melalui peningkatan glikogenolisis dan glukoneogenesis.
(3)
Hormon epinefrin
Hormon ini diproduksi oleh medula kelenjar adrenal dan mempunyai efek
menaikan kadar glukosa darah melalui peningkatan glikogenolisis dan menurunkan

pengeluaran insulin dari pankreas.
(4)
Hormon Glukokortikoid
Hormon ini diproduksi korteks adrenal yang berfungsi untuk menaikkan
glukosa darah dengan merangsang glukoneogenesis.

(5)
Hormon Tiroksin
Peningkatan produksi hormon ini akan meningkatkan laju absorbsi heksosa
dari usus kecil, glikogenolisis dan glukoneogenesis dalam hati.

(6)
Hormon pertumbuhan
Hormon ini meningkatkan pengambilan asam amino dan sintesis protein oleh
semua sel sehingga menurunkan pengambilan glukosa sel dan meningkatkan

mobilisasi lemak untuk energi.
Berdasarkan Depkes RI (2005) penggolongan obat hipoglikemik oral dapat
dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Penggolongan Obat Hipoglikemik Oral
Penggolongan Obat Hipoglikemik Oral
Golongan
Sulfonilurea
Contoh Senyawa
Mekanisme Kerja
Gliburida atau Glibenklamida
Merangsang sekresi insulin di kelenjar
Glipizida
pankreas, sehingga hanya efektif pada
Glikazida
penderita
Glimepirida
pankreasnya masih berfungsi dengan baik.
diabetes
yang
sel-sel
Glikuidon
Meglitinida
Repaglinid
Merangsang sekresi insulin di

kelenjar pankreas.
Turunan
Nateglinid
Meningkatkan kecepatan sintesis insulin

oleh pankreas.
fenilalanin
Biguanida
Metformin
Bekerja
langsung
pada
hati
(hepar),
menurunkan produksi glukosa hati. Tidak

merangsang sekresi insulin oleh kelenjar
pankreas.
Lanjutan tabel 1. Penggolongan Obat Hipoglikemik Oral

Penggolongan Obat Hipoglikemik Oral
Golongan
Tiazolidindion
Contoh Senyawa
Mekanisme Kerja
Rosiglitazon
Meningkatkan kepekaan tubuh
Troglitazon
terhadap insulin. Berikatan dengan PPAR
Pioglitazon
(Peroxisome
Proliferator
Activated
Receptor-gamma) di otot, jaringan lemak,

dan hati untuk menurunkan resistensi
insulin
Inhibitor -
Acarbose
Menghambat kerja enzim-enzim pencenaan
glukosidase
Miglitol
yang
mencerna
karbohidrat,
sehingga
memperlambat absorpsi glukosa ke dalam

darah.
2.3
Ekstraksi
Ekstraksi adalah proses penarikan komponen/zat aktif suatu simplisia dengan
menggunakan pelarut tertentu. Prinsip ekstraksi adalah melarutkan senyawa polar

dalam pelarut polar dan senyawa non polar dalam pelarut non polar (Robinson,
1995).
Parameter
dasar
yang
mempengaruhi
kualitas
ekstrak
yaitu, bagian tanaman yang digunakan sebagai bahan awal, pelarut yang digunakan
untuk ekstraksi dan
prosedur ekstraksi. Variasi dalam metode ekstraksi yang
berbeda yang akan mempengaruhi komposisi kuantitas dan metabolit sekunder dari
ekstrak tergantung pada jenis ekstraksi, waktu ekstraksi, suhu, sifat pelarut,
konsentrasi pelarut dan polaritas (Pandey & Tripathi, 2014).
Berdasarkan Depkes RI (2000), ekstraksi dengan menggunakan pelarut dapat
dilakukan dengan beberapa cara yaitu :
(1)
Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi adalah proses penyarian simplisia dengan menggunakan pelarut
dengan beberapa kali pengadukan pada temperatur ruangan.
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut sampai sempurna (exhaustive
extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses
10
terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap

perkolasi sebenarnya (penetesan atau penampungan ekstrak).
(2)
Cara Panas
a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,
selama waktu tertentu dan jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya
pendingin balik.
b. Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang umumnya dilakukan
dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut
relatif konstan dengan adanya pendingin balik.
c. Infus
Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia nabati
dengan air pada suhu 90C selama 15 menit.
2.4
Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi lapis tipis didasarkan pada distribusi fase cair-padat. Sebagai
fase diam atau absorbennya berupa lapisan tipis alumina atau silika gel yang
menempel pada permukaan kaca plastik, sedangkan sebagai fase gerak adalah eluen
yang digunakan untuk membawa zat yang dianalisis bergerak melalui fase diam
padat. Fase diam harus mempunyai sifat tidak larut dalam fase gerak maupun dalam
komponen sampel. Fase diam dalam KLT yang biasa digunakan sebagai pelapis plat
adalah silika gel (siO2), selulosa, alumina (Al2O3) dan kieselgur (tanah diatom)
(Gritter et al, 1991). Prinsip KLT adalah adanya adsorbsi dan partisi, yang
ditentukan oleh fase diam (adsorben) dan fase gerak (eluen). Komponen kimia akan
bergerak naik mengikuti fase gerak karena daya serap adsorben terhadap komponenkomponen kimia tidak sama sehingga komponen kimia dapat bergerak dengan
kecepatan yang berbeda berdasarkan tingkat kepolarannya. Hal inilah yang
menyebabkan terjadinya pemisahan (Gandjar & Rohman, 2007). Pelarut sebagai fase
gerak atau eluen merupakan faktor yang menentukan gerakan komponen-komponen
10
11
dalam campuran. Pemilihan pelarut tergantung pada sifat kelarutan komponen

tersebut terhadap pelarut yang digunakan (Sastrohamidjojo, 1992).
2.5
Spektroskopi UV-Vis
Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari
spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan

panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas yang
ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Jadi spektrofotometer digunakan untuk
mengukur energi cahaya secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan,
direflaksikan atau diemisikan sebagai fungsi dari panjang gelombang. Kelebihan
spektrofotometer dibandingkan fotometer adalah panjang gelombang sinar dapat
lebih terseleksi. Hal ini karena sebelumnya sinar diurai dengan alat pengurai seperti
prisma, kisi (grating) ataupun celah optik. Pada fotometer, sinar dengan panjang
gelombang yang diinginkan diperoleh dengan menggunakan filter dari berbagai
warna, yang mempunyai spesifikasi panjang gelombang tertentu. Pada fotometer
filter, tidak mungkin diperoleh panjang gelombang yang benar-benar monokromatis,
melainkan suatu trayek dengan panjang gelombang 30-40 nm. Sedangkan pada
spektrofotometer panjang gelombang yang benar-benar terseleksi dapat diperoleh
dengan bantuan alat pengurai cahaya seperti prisma. Suatu spektrofotometer tersusun
dari sumber spektrum sinar tampak yang sinambung, dan monokromatis. Sel
pengabsorbsi untuk mengukur perbedaan absorbsi antara cuplikan dengan blanko
ataupun pembanding (Prasetyo, 2006).
Prinsip dasar spektrofotometri UV-Vis adalah analisis yang didasarkan pada
pengukuran serapan sinar monokromatis oleh suatu laju larutan berwarna pada
panjang gelombang spesifik dengan menggunakan monokromator prisma atau kisi
difraksi dengan detector fototube (Setiono & Avriliana, 2013). Metode
spektrofotometri UV-Vis banyak diterapkan untuk penetapan senyawa-senyawa
organik yang umumnya dipergunakan untuk penentuan senyawa dalam jumlah yang
sangat kecil. Analisis ini berdasarkan interaksi antara radiasi elektromagnetik ultra
violet dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380-780 nm) dengan memakai
instrumen spektrofotometer dengan suatu materi (senyawa). Metode ini berdasarkan
11
12
penyerapan sinar ultraviolet maupun sinar tampak yang menyebabkan terjadinya

transisi elektron (perpindahan elektron dari tingkat energi yang rendah ketingkat
energi yang lebih tinggi) (Octaviani et al, 2014).
2.6
Aloksan
Gambar 3. Struktur Aloksan (Szkudelski, 2001)

Aloksan
merupakan
diabetogenik
bila
diberikan
secara
intravena,
intraperitoneal atau subkutan. Dosis aloksan diperlukan untuk menginduksi diabetes

tergantung pada spesies hewan, rute pemberian dan status gizi. Dosis (intravena)
aloksan yang paling sering digunakan untuk menginduksi diabetes pada tikus adalah
65 mg/kgBB, ketika aloksan diberikan secara intraperitoneal atau subkutan dosis
efektif harus 2-3 kali lebih tinggi (Szkudelski, 2001). Pemberian aloksan
menyebabkan nekrosa spesifik pada pulau-pulau Langerhans, memiliki efek
sitotoksik pada sel beta pankreas. Saat sel beta dirusak oleh aloksan, sekresi insulin
pun menurun mengakibatkan tubuh tidak dapat menggunakan glukosa. Glukosa
terakumulasi dalam darah (hiperglikemia) hal itu disebut kondisi diabetes. Keadaan
ini ditunjukan oleh meningkatnya kadar glukosa darah tikus kontrol positif. Aloksan
dalam darah berikatan dengan GLUT-2 (Glucose Transport) yang memfasilitasi
masuknya aloksan ke dalam sitoplasma sel beta pankreas (Wibawa et al, 2013).
Aloksan dapat meningkatkan konsentrasi ion kalsium bebas sitosolik pada sel
Langerhans pankreas. Efek tersebut diikuti oleh beberapa kejadian yaitu influks
kalsium dari cairan ekstraseluler, mobilisasi kalsium dari simpanannya secara
berlebihan, dan eliminasinya yang terbatas dari sitoplasma. Influks kalsium akibat
aloksan tersebut mengakibatkan depolarisasi sel Langerhans, lebih lanjut membuka
kanal kalsium tergantung voltase dan semakin menambah masuknya ion kalsium ke
12
13
sel. Pada kondisi tersebut, konsentrasi insulin meningkat sangat cepat, dan secara
signifikan mengakibatkan gangguan pada sensitivitas insulin perifer dalam waktu
singkat. Selain kedua faktor tersebut di atas, aloksan juga diduga berperan dalam
penghambatan glukokinase dalam proses metabolisme energi (Szkudelski, 2001).
2.7
Parameter
2.7.1
Pengukuran Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO)

Tes toleransi glukosa oral (TTGO) digunakan untuk mengukur kemampuan
tubuh dalam menggunakan gula jenis glukosa, yang merupakan sumber utama energi
tubuh (Islam et al, 2009). Hasil TTGO dapat dipengaruhi oleh masuknya karbohidrat
dan durasi puasa sebelum dilakukan tes. TTGO biasanya dijadwalkan pada pagi hari
dan berlangsung selama 2 jam (Phillips, 2012). Tes ini dianggap sebagai tes yang
paling fisiologis, karena melalui rute oral. Glukosa yang masuk kedalam saluran
cerna akan diserap pada saluran usus dan masuk sirkulasi splanknik setelah itu
menuju ke sirkulasi sistemik. Konsentrasi glukosa darah yang meningkat akan
merangsang sel beta pankreas untuk melepaskan insulin, yang akan merangsang
penyerapan glukosa oleh jaringan perifer (Pacini et al, 2013).
2.7.2
Glikogen dalam Hati

Insulin dan glukagon mengatur metabolisme glikogen hati dengan mengubah
status fosforilasi glikogen dalam jalur degradatif dan glikogen sintase dalam jalur
biosintetik. Glikogen hati merupakan cadangan pertama untuk menunjang kadar
glukosa darah, dan defisiensi glikogen fosforilase atau enzim lain pada jalur
degradasi glikogen hati (Marks et al, 2000). Kelebihan glukosa akan disimpan
sebagai glikogen pada manusia dan hewan. Sekitar sepertiga cadangan glikogen
tubuh terdapat pada hati dan dua pertiga pada otot. Hati berperan penting dalam
mempertahankan kadar glukosa darah. Jika kadar glukosa darah meningkat
(hiperglikemik) maka glukosa akan diubah dan disimpan sebagai glikogen atau
lemak. Glikogenesis (produksi glikogen) akan menurunkan kadar glukosa darah dan
proses ini distimulasi oleh insulin yang disekresi oleh pankreas (James et al, 2002).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Suarsana et al (2010), dimana
penurunan aktivitas enzim yang terlibat dalam sintesis glikogen pada keadaan
13
14
diabetes berhubungan dengan resistensi insulin pada berbagai jaringan. Peningkatan

kadar glikogen hati dan otot diduga melalui mekanisme stimulasi sel beta pankreas
meningkatkan sekresi insulin.
2.7.3
Histopatologi Pankreas
Pankreas adalah kelenjar lunak kekuningan dengan panjang 12-15 cm yang
terletak di bawah kulvatura mayor lambung. Pada bagian endokrin sel pankreas
terdiri dari kelompok sel khusus yang disebut pulau Langerhans yang tersebar di
seluruh pankreas. Di dalam pulau ini terdapat sel alfa yang mengeluarkan hormon
glukagon dan sel beta yang mengeluarkan hormon insulin. Glukagon dan insulin
adalah hormon utama yang berperan dalam mengatur glukosa darah (Brooker, 2009).
Kerusakan pada pankreas menyebabkan penurunan jumlah pulau Langerhans yang
mengakibatkan penurunan sekresi insulin dan meningkatnya kadar glukosa dalam
darah (Adeyemi et al, 2010). Pemeriksaan pankreas pada seorang pasien diabetes
secara histologik mengungkapkan adanya hialinasi atau fibrosis dari pulau
Langerhans, dengan destruksi sebagian besar sel beta nya (Bloom & Fawcett, 2002).
Berdasarkan penelitian Kumar et al (2011) histologi pankreas tikus yang
normal, mengalami diabetes serta setelah pemberian ekstrak Dillenia indica dapat
dilihat seperti gambar di bawah ini:
Gambar 4. (A) kontrol normal (B) Kontrol Diabetes (C) DIME (Dillenia
methanolic leaves) 500 mg / kg (Kumar et al, 2011).
indica
Histologi pankreas (Gambar 3) menunjukkan asinus normal (panah merah) dan

normal seluler di pulau Langerhans (panah kuning) di pankreas pada kontrol normal
(A). Pada hewan kontrol diabetes terjadi kerusakan yang luas untuk pulau
Langerhans dan mengurangi dimensi pulau diamati pada tikus diabetes (B). Pada
hewan yang diberikan DIME 500 mg / kg terlihat ukuran populasi sel pulau
kembalinya menjadi normal (C).
14
15
2.8
Hipotesis
Hipotesis untuk penelitian ini yaitu ekstrak etanol daun gaharu dapat
memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar glukosa pada tes toleransi glukosa
oral, peningkatan kadar glikogen hati dan peningkatan jumlah pulau Langerhans
pada histopatologi dari pankreas tikus putih jantan yang diinduksi aloksan.
15
16
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1
Jenis Penelitian
Jenis penelitian yang dilakukan yaitu penelitian eksperimental dengan
menggunakan rancangan acak lengkap (RAL). Penelitian ini untuk membuktikan

aktivitas ekstrak etanol daun gaharu terhadap penurunan kadar gula darah pada tes
toleransi glukosa oral, peningkatan kadar glikogen hati dan peningkatan jumlah
pulau Langerhans pada histopatologi pankreas pada tikus putih jantan galur wistar
yang diinduksi aloksan.
3.2
Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini akan dilaksanakan selama bulan Januari Juli 2015 di
Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Laboratorium Farmakologi-Toksikologi,

Laboratorium Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Lambung Mangkurat Banjarbaru.
3.3
Alat dan Bahan
3.3.1 Alat
Alat yang digunakan adalah alat pemotong daun, timbangan gram kasar,
blender, ayakan, perkolator, waterbath (Smic), vacum rotary ovaporator
(Heidolph), hot plate (Stuart CB 302), neraca analitik (IND GF-3000),
desikator, sendok tanduk, penjepit kayu, pipa kapiler, rak tabung reaksi, magnetic
stirrer, chamber, alat-alat kaca (Pyrex), spuit injeksi (Onemed), timbangan tikus
(Precise), sonde oral, baskom besar, kandang tikus, glukometer (GlucoDr), plat
silika GF254, chamber, spektrofotometer UV-Vis, sentrifuge (Clements GS 150),
lampu UV 254 nm dan 366 nm, oven (Vinco Inc), lemari pendingin, mikroskop
(Olympus CX21), alat bedah ( Pinset, Gunting dan skapel), mortir dan stamper,
flotation bath (Civilab) kaca objek, kaca penutup, corong kaca (Pyrex), pipet
tetes, pipet volume (Pyrex), spektrofotometer UV-Vis, vortex mixer (Jeio Tech),
dan Mikrotom (Microtec).
16
17
3.3.2
Bahan
Bahan yang digunakan daun gaharu, akuades, etanol 70% (Biomed), FeCl3
1% (teknis) , FeCl3 10% (teknis), kloroform (teknis), ammonia (teknis), H2SO4 (p.a),
pereaksi Meyer (p.a), pereaksi Dragendorff (p.a), pereaksi Leibermen-Buchard (p.a),
NaOH (teknis), HCl encer (teknis), larutan klorida (teknis), larutan timbal asetat
(teknis), gelatin (teknis), silika gel F254, asam asetat glasia (teknis), butanol (teknis),
etil asetat (teknis), n-heksana (teknis), asam formiat (teknis), anisaldehid asam sulfat
(teknis), NaCl 0,9% (Otsuka), NaCMC 0,5% , KOH 30% (p.a), etanol (95%) (p.a),
glukosa monohidrat (teknis), reagen fenol 5 % (p.a) , standar glikogen (Sigma),
formalin 10% (teknis), paraffin , pewarna hematoxylin-eosin (HE), larutan haupt,
aloksan (C4H2N2O4) (Sigma), glibenklamid (Indofarma), standar pellet, alkohol
96% (Biomed) , alkohol absolut dan xylol (p.a).
3.4
Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan yaitu tikus jantan galur Wistar dengan berat 200-
260 gram berumur 4-6 bulan. Pembagian jumlah tikus untuk pengujian tiap
kelompok (n = 4) dihitung berdasarkan rumus Federer :
(n-1)(t-1) > 15
Keterangan :
t = jumlah kelompok perlakuan
n = jumlah ulangan dari tiap perlakuan
Rumus Federer untuk Metode Induksi Aloksan
(n-1) (t-1) 15
(n-1) (6-1) 15
n4
berdasarkan perhitungan tersebut, maka jumlah pengulangan yang dilakukan untuk
setiap perlakuan n 4. Pengulangan yang dibutuhkan pada setiap kelompok
sebanyak 4 kali atau 4 ekor tikus sehingga jumlah total tikus yang digunakan
sebanyak 24 ekor tikus putih.
17
18
3.5
Variabel Penelitian
3.5.1
Variabel Bebas
Variabel bebas dari penelitian ini adalah dosis pemberian ekstrak etanol daun
gaharu.
3.5.2
Variabel Terikat
Variabel terikat dari penelitian ini adalah kadar glukosa darah pada tes
toleransi glukosa oral, glikogen hati dan jumlah pulau Langerhanss pada
histopatologi pankreas dari tikus putih yang telah diinduksi dengan aloksan.
3.6
Prosedur Penelitian
3.6.1
Pengumpulan Sampel
Sampel daun gaharu diambil dari daerah Tamiang Layang, Kalimantan
Tengah. Pengambilan dilakukan pada bulan Januari 2015 pada pagi hari. Tanaman
gaharu yang digunakan telah berusia diatas 5 tahun (cukup dewasa) agar didapatkan
kandungan senyawa metabolit sekunder yang maksimal.
3.6.2
Pengolahan Bahan
Daun gaharu yang telah dikumpulkan, dilakukan sortasi basah dan pencucian untuk
memisahkan pengotor dan bagian tanaman lain yang tidak dibutuhkan. Kemudian
dilakukan perajangan agar tanaman mudah dikeringkan. Kemudian dilanjutkan
dengan pengeringan daun gaharu. Pengeringan dilakukan dengan oven suhu 400 C
selama 72 jam hingga diperoleh sampel kering (Ibrahim et al, 2014). Setelah sampel
kering kemudian dilakukan sortasi kering untuk memisahkan bagian tanaman yang
rusak karena pemanasan. Lalu sampel diserbukkan dengan menggunakan blender
hingga terbentuk sampel serbuk dan diayak dengan pengayak no. 30 (Matthew et al,
2013).
3.6.3
Ekstraksi
Serbuk daun gaharu ditimbang sebanyak 100 gram, kemudian dimasukkan
dalam alat perkolator. Sampel ditambahkan pelarut etanol 70%, kemudian direndam
selama 24 jam (Jamshidi et al, 2014). Kecepatan tetesan alat perkolator diatur 45
18
19
tetes setiap menit dan ditambahkan pelarut secara bertahap. Proses ekstraksi sampel
dengan pelarut etanol 70% menggunakan perbandingan 1,5:10 (Nobre et al, 2005).
Filtrat yang diperoleh dipisahkan dari residu dengan menggunakan kertas Whatman
nomor 1. Ekstrak cair yang diperoleh, dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator
dengan suhu 450 C hingga diperoleh ekstrak kental (Chaisawangwong &
Gritsanapan, 2009).
3.6.4
Uji Kandungan Senyawa Daun Gaharu
3.6.4.1 Pengujian Skrining Fitokimia

a.
Senyawa Flavonoid
Ekstrak ditetesi dengan larutan NaOH maka akan terbentuk warna kuning
yang intens, dan apabila ditambahkan asam encer maka warnanya akan menghilang,
menunjukkan adanya flavonoid (Tiwari et al, 2011).
b.
Senyawa Alkaloid
Ekstrak dilarutkan dalam HCL encer dan disaring untuk mendapatkan
filtratnya. Filtrat ditetesi dengan reagen Mayer apabila terbentuk endapan berwarna
kuning menunjukkan adanya alkaloid. Filtrat ditetesi dengan reagen Dragendroff
apabila terbentuk endapan merah menunjukkan adanya alkaloid (Tiwari et al, 2011).
c.
Senyawa Tanin
Ekstrak ditambahkan dengan larutan gelatin 1% mengandung natrium
klorida, apabila terbentuk endapan putih menunjukkan adanya tanin (Tiwari et al,
2011).
d.
Senyawa Terpenoid
Ekstrak kental daun gaharu ditambahkan pereaksi Leibermen-Buchard, jika
terbentuk cincin coklat maka ekstrak positif mengandung terpenoid (Setyowati et al,
2014).
e.
Senyawa Fenolik
Ekstrak ditetesi dengan 3-4 tetes larutan FeCl3 apabila terbentuk warna hitam
kebiruan menunjukkan adanya fenol (Tiwari et al, 2011).
19
20
3.6.4.1 Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu dengan

Kromatografi Lapis Tipis
Fase diam yang digunakan dalam skrining ini adalah Silika gel F254 ukuran
20x20 cm2 yang kemudian dipotong sesuai kebutuhan, sedangkan fase gerak dan
penampak noda yang digunakan sebagai berikut:
a.
Senyawa Golongan Flavonoid

Fase Gerak
: Butanol Asam asetat glasial Air (4 :1:5) Fase gerak ini

biasa disebut BAW (Butanol, Acetic acid, Water) dan
lapisan atas diambil dan dipakai sebagai fase gerak.
Dengan pereaksi : Uap Amonia (Positif mengandung flavonoid jika timbul

warna kuning atau kuning-coklat setelah pemberian uap
amoniak).
Tanpa pereaksi : Bila tanpa pereaksi kimia, di bawah lampu UV 365 nm,
flavonoid akan berfluoresens biru, kuning atau hijau,
tergantung dari strukturnya.
(Marliana, 2007).
b.
Senyawa Golongan Alkaloid

Fase Gerak
: Etil asetat Metanol Air (6:4:2)
Dengan pereaksi : Pereaksi Dragendorff (Positif mengandung alkaloid jika

timbul warna coklat atau jingga setelah penyemprotan
pereaksi Dragendorff.
(Marliana, 2007).
c.
Senyawa Golongan Terpenoid

Fase Gerak
: n-heksan Etil asetat (4:1)
Dengan pereaksi : Anisaldehid Asam Sulfat (Positif mengandung terpenoid

jika timbul warna ungu-merah atau ungu setelah
penyemprotan pereaksi anisaldehid asam sulfat.
(Wagner et al, 1996).
20
21
d.
Senyawa Golongan Tanin

Fase Gerak
: Air Metanol Kloroform (10:35:65)
Dengan pereaksi : FeCl3 1% (Positif mengandung tanin jika timbul warna

biru tua atau hijau kehitaman setelah penyemprotan
pereaksi FeCl3 1%.
(Prameswari & Widjanarko, 2014).
e.
Senyawa Golongan Polifenol

Fase gerak
: Kloroform - etil asetat - asam formiat (0,5 : 9 : 0,5)
Dengan pereaksi : FeCl3 10% (Positif mengandung polifenol jika timbul

warna hitam setelah penyemprotan pereaksi FeCl3 10%.
(Marliana, 2007).
3.6.5
Uji Pendahuluan Orientasi Dosis Aloksan

Pengujian pendahuluan orientasi dosis aloksan menggunakan hewan uji yang
dibagi menjadi 7 kelompok, dimana perlakuan yang diberikan adalah :

Tabel 2. Perlakuan Orientasi Dosis Aloksan
Hewan Uji
Perlakuan Induksi
Normal
NaCl 0,9% sebanyak 5 mL/kg BB
Induksi 1
Aloksan dosis 100 mg/kg BB
Induksi 2
Induksi 3
Induksi 4
Induksi 5
Induksi 6
Pemberian induksi dilakukan secara intraperitoneal. Kemudian diadaptasi selama 7

hari. Setelah adaptasi, tikus dipuasakan selama 12 jam dengan tetap diberikan air
minum. Kadar glukosa darah puasa ditentukan pada hewan uji. Ditentukan dosis
efektif aloksan yang dapat menyebabkan keadaan hiperglikemia, namun tidak
menyebabkan kematian (Fitriani, 2011).
21
22
3.6.6
Penginduksian Aloksan
Hewan uji sebanyak 30 tikus jantan galur wistar sebelum diberi perlakuan
diadaptasikan selama satu minggu sebelum pengujian, setelah itu hewan uji dibagi
menjadi 6 kelompok, dimana masing-masing kelompok terdiri dari 4 tikus. Sebanyak
5 kelompok dipuasakan selama 12 jam kemudian diinduksi dengan senyawa aloksan
secara intraperitonial. Tikus diadaptasikan selama 1 minggu dengan pemberian
standar pellet dan air yang selalu tersedia. Kadar glukosa darah puasa hewan uji
diukur, jika kadar glukosa antara 470 - 530 mg/dL dilakukan pemberian perlakuan
pada hewan uji (Maniyar et al, 2012).
3.6.7
Uji Pendahuluan Orientasi Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu
Hewan uji sebanyak 8 ekor yang telah diinduksi aloksan digunakan untuk uji
pendahuluan orientasi dosis ekstrak daun gaharu. Masing-masing hewan uji
diberikan dosis ekstrak daun gaharu yang berbeda secara oral yaitu:
Tabel 3. Perlakuan Orientasi Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu
Hewan uji
Perlakuan
Hewan Uji 1
Glibenklamid 2,5 mg/kg BB
Hewan Uji 2
Diberikan ekstrak gaharu 10 mg/ kg BB
Hewan Uji 3
Diberikan ekstrak gaharu 100 mg/ kg BB
Hewan Uji 4
Diberikan ekstrak gaharu 1000 mg/kg BB
Pemberian perlakuan dilakukan selama 7 hari, pada hari ketujuh dilakukan pengukuran
kadar glukosa darah puasa untuk mengetahui dosis yang efektif dalam penurunan
glukosa darah puasa namun tidak menyebabkan keadaan hipoglikemik.
3.6.8
Pengujian Aktivitas
Kelompok uji diberikan ekstrak daun gaharu dengan dosis pemberian yang berbeda.
Pemberian perlakuan dilakukan selama 28 hari (4 minggu), dimana setiap hari
kelompok uji diberikan perlakuan (Kumar et al, 2014). Glibenklamid dan ekstrak
terlebih dahulu disuspensi dengan NaCMC 0,5% sebelum diberikan pada hewan uji.
Perlakuan yang diberikan pada hewan uji sebagai berikut :
Hewan Uji kelompok 1 : NaCMC 0,5% pada kelompok normal
22
23
Hewan Uji kelompok 2 : Glibenklamid 2,5 mg/kgBB pada kontrol positif

Hewan Uji kelompok 3 : NaCMC 0,5% pada kontrol negatif
Hewan Uji kelompok 4 : diberikan ekstrak gaharu dosis 50 mg/kgBB
Tahapan pengujian aktivitas pada penelitian disajikan pada Gambar 5 berikut ini:
Hewan Uji
Induksi Aloksan
Tidak Induksi Aloksan
Kelompok
Normal
Kelompok
Kontrol
Positif
Kelompok
Kontrol
Negatif
NaCMC 0,5%
Glibenklamid
2,5 mg/kg BB
NaCMC
0,5%
Kelompok Uji
Kelompok Uji
Kelompok Uji
Ekstrak Daun
Gaharu dosis
50 mg/kgBB
Ekstrak Daun
Gaharu dosis
100 mg/kgBB
Ekstrak Daun
Gaharu dosis
200 mg/kgBB
Diberikan perlakuan dari hari ke 0 28 hari

Pada hari yang ke 23 dilakukan tes toleransi
glukosa oral
Pada hari ke-28 diambil organ dalamnya
Pankreas
Hati
Dilakukan pemisahan glikogen dari hati
Diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer pada panjang
gelombang 490 nm
Diukur kadar glikogen
Diambil preparat pankreas

Dilakukan pewarnaan HE
Diamati di bawah mikroskop

Hasil
Hasil
Gambar 5. Skema Pengujian Aktivitas Antidiabetes
23
24
3.6.9
Pengukuran Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO)

Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Ridwan et al (2012) pengukuran
tes toleransi glukosa oral (TTGO) dilakukan pada hari ke-23 dan dipuasakan selama
18 jam. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Kumar et al (2014) tikus
diberi larutan glukosa 2 g/kg BB secara oral 30 menit setelah diberi perlakuan.
Pemberian larutan glukosa dilakukan menggunakan alat sonde. Selanjutnya, setelah
pemberian glukosa kadar glukosa darah diukur dengan menggunakan alat
glukometer, dimana darah diambil pada vena ekor pada masing-masing kelompok
setelah 0, 30, 60, 90, 120, dan 150 menit. kelompok perlakuan sebagai berikut:
Hewan Uji kelompok 1 : NaCMC 0,5% pada kelompok normal
Hewan Uji kelompok 2 : Glibenklamid 2,5 mg/kg BB pada kontrol positif
Hewan Uji kelompok 3 : NaCMC 0,5% pada kontrol negatif
3.6.10
Analisis Kadar Glikogen Dalam Hati

Metode pengukuran menurut Peungvicha et al (1998) dalam Suarsana et al
(2010), dimana sampel sebanyak 1 g organ hati diambil lalu dikeringkan dalam oven
pada suhu 50C selama satu malam, dilanjutkan dengan penggerusan sampai menjadi
tepung. Masing-masing sampel diambil 25 mg diekstraksi dengan 1 mL larutan KOH
30% dan diinkubasi dalam penangas air mendidih selama 20 menit, diletakkan pada
suhu ruang sampai dingin. Tambahkan 1,5 mL etanol (95%) dingin ke dalam tabung
sampel dan disimpan dalam suhu 4C selama 30 menit. Untuk memisahkan endapan
glikogen dalam sampel dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 2500 rpm selama 20
menit. Menurut Jung et al (2011) masing-masing sampel dan standar (Bovine liver
glycogen) ditambahkan akuadest 0,2 mL reagen fenol 5 %, dan 1 ml H2SO4,
kemudian diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang
490 nm.
24
25
3.6.11
Menurut penelitian yang dilakukan oleh Yunita (2014) untuk melihat
histologi dari pankreas tikus maka dilakukan langkah-langkah sebagai berikut :

a.
Pengambilan Organ Pankreas

Pada akhir perlakuan semua tikus dilakukan pembedahan dengan penyayatan
pada kulit dan otot abdominal hingga rongga perut terbuka. Selanjutnya dilakukan
pengambilan organ pankreas. Pankreas yang telah dipisahkan dari tubuh hewan
dibersihkan dengan larutan NaCl 0,9% lalu difiksasi dengan formalin 10% sampai
tahap pembuatan blok parafin.
b.
Pembuatan Preparat Histologi

Pembuatan preparat histopatologi pada organ pankreas dilakukan dengan
prosedur sebagai berikut;

i.
Fiksasi
Sediaan organ pankreas direndam dengan formalin 10%.
ii.
Dehidrasi
Pankreas yang sudah difiksasi dengan formalin dipindahkan kedalam larutan
alkohol bertingkat (60%, 70%, 80%, 90%, 96%, alkohol absolut) masing-masing
selama 2 jam.
iii.
Penjernihan
Setelah itu organ dimasukkan ke dalam larutan alkohol absolut yang
dicampur xilol (1:1) selama 10 menit. Kemudian organ dipindahkan ke dalam xilol
murni selama 15 menit.
iv.
Penanaman
Organ yang sudah jernih dipindahkan kedalam campuran xilol parafin lunak
(1:1) lalu dimasukan kedalam oven bersuhu 480C selama 30 menit. Setelah itu
dipindahkan kedalam parafin lunak murni lalu dimasukan kembali kedalam oven
480C selama 1 jam. Lalu di pindahkan lagi kedalam parafin keras dan dimasukan
kedalam oven 580C selama 1,5 jam. Setelah itu dilakukan embedding (penanaman
organ blok) dengan ukuran blok 2x1.
25
26
v.
Penyayatan
Setelah pembuatan blok selesai diamkan blok parafin sampai keras dan siap
disayat. Setelah itu masing-masing blok disayat dengan ketebalan 4 (empat) mikron
dengan alat mikrotom, lalu lembaran-lembaran atau pita parafin hasil penyayatan
diletakan diatas object glass yang sudah diberi larutan Haupt dan akuades dan dapat
dilakukan pewarnaan.
c.
Pewarnaan Hemotoksilin Eosin (HE)

Tahapan yang dilakukan dalam pewarnaan HE dimulai dengan proses
deparafinasi, yaitu penghilangan parafin dengan memasukan preparat kedalam seri

larutan xilol III, xilol II, dan xilol I. Proses kemudian dilanjutkan dengan rehidrasi,
yaitu dengan memasukan preparat ke dalam seri larutan alkohol sampai alkohol 70
% secara berurutan. Preparat diwarnai dengan pewarnaan hemotoksilin dilanjutkan
dengan pencucian dalam akuades. Setelah itu preparat diwarnai dengan eosin lalu
preparat dimasukan kedalam alkohol bertingkat mulai alkohol 70% sampai alkohol
absolut setelah itu dilakukan penjernihan dengan xilol murni. Sediaan ditutup dengan
cover glass dan siap untuk dilakukan pengamatan di bawah mikroskop.
d.
Pengamatan
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Masjedir et al (2013) untuk
analisis kuantitatif pada histopatologi pankreas dapat dilakukan dengan menghitung

jumlah pulau Langerhans, dimana perhitungan jumlah pulau Langerhans dilakukan
dengan menggunakan mikroskop dan dilakukan pada sepuluh lapang pandang
dengan perbesaran 100x.
3.7
Analisis Data
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental. Data yang didapat pada
uji Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO), kadar glikogen hati dan histopatologi
pankreas dilakukan pengujian normalitas distribusi data dengan metode ShapiroWilk dan uji homogenitas varians data dengan metode Levenes Test, jika data
terdistribusi normal dan homogen maka dianalisis secara statistik dengan
menggunakan uji ANOVA pada selang kepercayaan 95% dan jika perlakuan berbeda
26
27
nyata (P< 0,05) dilanjutkan dengan Post-Hoc test LSD. Tetapi jika data tidak
terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan Kruskal-Wallis test dan jika perlakuan
berbeda nyata (P< 0,05) dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney.
27
28
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1
Pengolahan Ekstrak
4.1.1
Penyiapan Bahan untuk ekstraksi

Pada penelitian ini bahan uji yang digunakan adalah daun dari tanaman
gaharu (Aquillaria microcarpa Baill.) yang diperoleh dari daerah Tamiang Layang,
Kecamatan Dusun Timur, Kabupaten Barito Timur, Kalimantan Tengah. Tanaman
yang digunakan diuji determinasi terlebih dahulu untuk memastikan bahwa bahan uji
yang diambil sesuai dengan yang diinginkan. Determinasi tanaman dilakukan di
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Cibinong, Bogor. Hasil determinasi
dapat dilihat pada lampiran 4 yang menunjukan bahwa tanaman yang digunakan
dalam penelitian ini adalah Aquillaria microcarpa Baill. dengan suku Thymeleaceae.
Daun gaharu dikumpulkan dengan cara dipetik, menurut Salisbury & Rose
(1995) pengambilan daun dilakukan pada daun yang tidak terlalu muda dan tidak
terlalu tua. Daun muda umumnya mempunyai kemampuan fotosintesis yang masih
rendah, sedangkan daun yang sudah tua mulai mengalami kerusakan klorofil yang
ditandai dengan perubahan warna menjadi kuning. Rusaknya klorofil akan
menurunkan kemampuan fotosintesis. Apabila kemampuan fotosintesis menurun
maka metabolit sekunder yang dihasilkan pun akan menurun juga. Selanjutnya
dilakukan sortasi basah pada daun gaharu yang bertujuan untuk memilih daun yang
tidak rusak dan memisahkan dengan senyawa pengotor.
Daun gaharu yang sudah disortasi dicuci dengan air mengalir untuk
menghilangkan kotoran yang menempel. Daun yang sudah bersih tadi dikeringkan,
proses pengeringan pada daun bertujuan untuk menghentikan reaksi enzimatik,
dimana enzim akan menjadi tidak aktif sehingga tidak terjadinya penguraian bahan
kimia (Krisyanella et al, 2012). Proses pengeringan juga bertujuan untuk mengurangi
kadar air di dalam daun yang menyebabkan berkurangnya aktivitas mikroba
sehingga komponen kimia dalam daun tidak akan rusak. Proses pengeringan
dilakukan dengan oven pada suhu 400C, menurut Hernani & Nurdjanah (2009)
pengeringan dilakukan harus sesuai dengan bahan tanaman yang akan dikeringkan.
28
29
Apabila suhu dan metode pengeringan tidak benar maka akan mengurangi kadar zat
berkhasiat dalam sampel. Daun sendiri dapat dikeringkan dengan kisaran suhu 20400C dan untuk sampel yang mengandung metabolit sekunder (flavonoid)
dikeringkan dengan oven pada suhu 400C karena suhu oven bersifat stabil sehingga
sampel dapat kering dengan merata. Daun gaharu yang sudah kering dihaluskan
dengan menggunakan blender dan kemudian diayak menggunakan pengayak dengan
nomor mesh 30. Penghalusan daun dilakukan untuk mempermudah proses ekstraksi.
Ukuran partikel yang lebih kecil merupakan ukuran yang ideal untuk proses
ekstraksi. Semakin kecil ukuran partikel, luas permukaan semakin besar dan lebih
mudah melepas komponen bioaktif (Syed & Rizvi, 2010).
4.1.2
Ekstraksi
Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstraksi dingin
dengan perkolasi, proses ekstraksi dapat dilihat pada lampiran 5. Perkolasi

merupakan prosedur yang paling sering digunakan untuk ekstraksi bahan aktif dalam
tingtur dan ekstrak cairan. Sebuah perkolat (sempit, kerucut berbentuk kapal terbuka
di kedua ujungnya) umumnya digunakan. Bahan padat yang dibasahi dengan jumlah
penyari yang tepat dan didiamkan dalam wadah tertutup dengan baik, dimana larutan
penyari ditambahkan untuk membentuk lapisan dangkal di atas sampel dan
campuran dibiarkan dalam perkolator tertutup selama 24 jam. Perkolator dibuka dan
cairan yang terkandung di dalamnya dibiarkan menetes perlahan. Penyari
ditambahkan sesuai dengan yang diperlukan (Pandey & Tripathi, 2014). Keuntungan
dari metode ekstraksi perkolasi ini adalah rendemen yang didapatkan lebih banyak
(Perwita, 2011), serta berdasarkan penelitian oleh Sumitra et al (2012) bahwa
metode ini lebih baik untuk menarik senyawa flavonoid dan fenolik dibandingkan
dekokta dan metode maserasi.
Etanol 70% dapat melarutkan senyawa fitokimia lebih maksimal karena
etanol 70% masih mengandung air yang cukup banyak (30%) yang membantu proses
ekstraksi sehingga sebagian senyawa tersebut ada yang tertarik dalam etanol dan ada
pula yang tertarik ke dalam air. Beberapa senyawa fitokimia seperti alkaloid,
flavonoid, glikosida flavonoid serta klorofil terlarut dalam pelarut polar sehingga
29
30
senyawa yang terlarut dalam pelarut etanol 70% cukup banyak (Sani et al, 2014).
Pelarut etanol 70% digunakan berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Bimakr et
al (2011) bahwa pelarut etanol 70% lebih banyak menyari senyawa flavonoid
(katekin, epikatekin, rutin dan apigenin) dibandingkan dengan etanol 99,5%.
Senyawa flavonoid itu sendiri berperan sebagai antidiabetes dimana mekanismenya
bekerja dengan cara meningkatkan pemanfaatan glukosa pada jaringan perifer,
menstimulasi sel beta pankreas untuk meningkatkan sekresi insulin dan bertindak
sebagai inhibitor glukosidase (Jadhav & Puchakayala, 2012).
Ekstrak yang telah diperoleh kemudian dipekatkan menggunakan rotary
vacum evaporator pada suhu 450C dan dihentikan setelah diperoleh ekstrak yang
hampir kental. Pemekatan dengan rotary vacum evaporator merupakan tehnik
pemekatan ekstrak tanpa merusak senyawa yang diisolasi dari ekstrak karena
rangkaian alat ini menggunakan pompa vacum sehingga di dalam evaporator terjadi
pengurangan tekanan yang menyebabkan pelarut dapat menguap di bawah titik
didihnya (Siadi, 2012). Rendemen adalah perbandingan antara ekstrak yang
diperoleh dengan simplisia awal (Depkes RI, 2000). Rendemen dihitung untuk
mengetahui persentasi bagian yang dapat diekstrak dari bahan mentah (Malangngi et
al, 2012). Ekstraksi dengan perkolasi dilakukan sebanyak 4 kali proses ekstraksi, 100
g serbuk dari sampel digunakan pada sekali proses ekstraksi. Dari 400 g serbuk
didapatkan persen rendemen sebesar 9,0295 % (b/b). Sedangkan pada proses
ekstraksi daun gaharu (Gyrinops versteegii) yang dilakukan oleh Mega & Swastini
(2010) dengan menggunakan metode ekstraksi maserasi hanya mendapatkan persen
rendemen sebesar 4%. Hal ini dikarenakan perbedaan proses ekstraksi yang
dilakukan. Besar kecilnya nilai rendemen menunjukan keefektifan proses ekstraksi.
Efektivitas proses ekstraksi dipengaruhi oleh jenis pelarut yang digunakan sebagai
penyari, konsentrasi pelarut, suhu ekstraksi, metode dan waktu ekstraksi (Tiwari et
al, 2011).
30
31
4.2
Uji kandungan Senyawa pada Ekstrak
4.2.1
Pengujian Skrining Fitokimia

Tanaman obat mengandung beberapa senyawa metabolit sekunder,
diantaranya tanin, alkaloid, karbohidrat, terpenoid, sterol dan flavonoid. Senyawa ini
disintesis berlebih oleh organisme hidup melalui metabolisme primer atau sekunder.
Analisis fitokimia yang dilakukan pada ekstrak tanaman untuk mengidentifikasi
adanya konstituen yang dikenal untuk pengobatan serta aktivitas fisiologisnya
(Yadaf & Munin, 2011). Hasil pengujian skrining fitokimia dari ekstrak etanol daun
gaharu ditunjukan pada tabel 4.
Tabel 4. Hasil Pengujian Skreening Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gaharu
No
1.
Uji
Flavonoid
Hasil
Ket.
(+)
Warna larutan kuning intens dan warnanya akan

hilang apabila ditambahkan asam encer
2.
Alkaloid
- reagen Mayer
(-)
Terdapat endapan kuning
- reagen Dragendroff
(-)
Terdapat endapan coklat kemerahan
3.
Tanin
(+)
Terbentuk endapan putih
4.
Terpenoid
(-)
Terbentuk cincin coklat
5.
Fenolik
(+)
Warna larutan hitam kebiruan
Prosedur dan hasil skrining fitokimia dapat dilihat pada lampiran 7. Hasil
skrining fitokimia menunjukan bahwa ekstrak etanol daun gaharu positif
mengandung flavonoid, tanin dan fenolik. Menurut hasil penelitian yang dilakukan
oleh Khalil et al (2013) pada tanaman gaharu dengan spesies yang berbeda Aquilaria
malaccensis, hasil skrining fitokimia menunjukan bahwa daun gaharu mengandung
alkaloid, saponin dan senyawa fenolik (flavonoid, terpenoid dan tanin). Sedangkan
pada penelitian yang dilakukan oleh Mega & Swastini (2010) pada tanaman gaharu
(Gyrinops versteegii) dengan spesies yang berbeda juga menunjukan hasil yang
negatif pada skrining fitokimia untuk alkaloid.
Alkaloid adalah senyawa organik yang terdapat dalam tumbuh-tumbuhan,
bersifat basa, dan struktur kimia mempunyai sistem lingkar heterosiklik dengan
nitrogen sebagai hetero atomnya. Unsur-unsur penyusun alkaloid adalah karbon,
31
32
hidrogen, nitrogen dan oksigen (Sumardjo, 2009). Pada identifikasi alkaloid akan
terbentuk endapan pada uji mayer dan dragendorff berarti menandakan positif
mengandung alkaloid. Pada uji alkaloid dengan pereaksi mayer, nitrogen pada
alkaloid akan bereaksi dengan ion logam K+ dari kalium tetraiodomerkurat(II)
membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap (Setyowati et al, 2014). Uji
alkaloid dengan reagen mayer yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu memberikan
hasil negatif, dimana tidak adanya terbentuk endapan. Hal ini terjadi karena komplek
kalium-alkaloid tidak terbentuk. Reaksi dari uji alkaloid dengan reagen mayer dapat
dilihat pada Gambar 6.
HgCl2 + 2KI
HgI2 + 2KCl
HgI2 + 2KI
k2 HgI4
Kalium tetraiodomerkurat (II)
+ K2 HgI4
+ K2 HgI4
N
K
Kalium Alkaloid
endapan
Gambar 6.
Reaksi Uji Mayer (Marliana et al, 2005)
Hasil positif alkaloid pada uji dragendorff ditandai dengan terbentuknya

endapan coklat muda sampai kuning. Pada uji alkaloid dengan pereaksi dragendorff,
nitrogen digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang
merupakan ion logam (Marliana et al, 2005). Uji alkaloid dengan reagen dragendorff
yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu memberikan hasil negatif, dimana tidak
adanya terbentuk endapan. Hal ini terjadi karena tidak terbentuknya ikatan kovalen
koordinat antara nitrogen dan K+. Reaksi dari uji alkaloid dengan reagen dragendorff
dapat dilihat pada Gambar 7.
32
33
Bi (NO3)3 + 3KI
BiI3 + 3KNO3
coklat
K BiI4
kalium tetraiodobismutat
BiI3 + KI
+ BiI4
+ K BiI4
N
K
kalium-alkaloid
endapan
Gambar 7.
Reaksi Uji Dragendorff (Marliana et al, 2005)
Terpenoid merupakan turunan-turunan terpena atau senyawa-senyawa yang

strukturnya mirip terpena. Molekul terpenoid dapat mengandung gugus karboksil,
hidroksil, formil, atau gugus yang lainnya (Sumardjo, 2009). Identifikasi terpenoid
menggunakan uji Lieberman-Burchard akan memberikan hasil positif jika
terbentuknya cincin coklat pada batas larutan saat ditambahkan dengan H2SO4.
Perubahan warna disebabkan karena terjadinya oksidasi pada golongan senyawa
terpenoid melalui pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi. Reaksi ini diawali
dengan proses asetilasi gugus hidroksil menggunakan asam asetat anhidrat. Gugus
asetil yang merupakan gugus pergi yang baik akan lepas. Sehingga terbentuknya
ikatan rangkap. Selanjutnya terjadi pembentukan gugus hidrogen beserta
elektronnya, mengakibatkan ikatan rangkap berpindah. Senyawa ini mengalami
resonansi yang bertindak sebagai elektrofil atau karbokation. Serangan karbokation
menyebabkan adisi elektrofilik, diikuti dengan pelepasan hidrogen beserta
elektronnya dilepas akibatnya senyawa mengalami perpanjangan konjugasi yang
memperlihatkan munculnya cincin coklat (Setyowati et al, 2014). Uji terpenoid
dengan pereaksi Lieberman-Burchard yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu
memberikan hasil negatif, dimana tidak adanya terbentuk cincin coklat. Hal ini
terjadi karena tidak terjadinya oksidasi pada golongan senyawa terpenoid melalui
pembentukan ikatan rangkap terkonjugasi sehingga tidak terlihatnya cincin coklat.
Gambar reaksi terpenoid dengan pereaksi Lieberman-Burchard dapat dilihat pada
Gambar 8.
33
34
Ac2O H
-HOAc
OH
H
-HOAc
- H
adisi elektrofilik
- H
- H
H
- H
Gambar 8.
Reaksi Terpenoid dengan Pereaksi Lieberman-Burchard (Setyowati et

al, 2014)
Tanin merupakan suatu senyawa fenol yang memiliki berat molekul besar
yang terdiri dari gugus hidroksi dan beberapa gugus yang bersangkutan seperti
karboksil untuk membentuk kompleks kuat yang efektif dengan protein dan beberapa
makromolekul. Tanin terdiri dari dua jenis yaitu tanin terkondensasi dan tanin
terhidrolisis. Kedua jenis tanin ini terdapat dalam tumbuhan, tetapi yang paling
dominan terdapat dalam tanaman adalah tanin terkondensasi (Hayati et al, 2010).
Hasil positif pada identifikasi tanin dengan menggunakan larutan gelatin 1% yang
mengandung natrium klorida akan menunjukan terbentuknya endapan putih (Tiwari
et al, 2011). Pada uji tanin yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu diperoleh
hasil positif, adanya tanin akan mengendapkan protein pada gelatin. Tanin
bereaksi dengan gelatin membentuk kopolimer mantap yang tidak larut dalam
air. Reaksi ini lebih sensitif dengan penambahan NaCl untuk mempertinggi
penggaraman dari tanin-gelatin (Marliana et al, 2005). Gambar reaksi tanin dan
gelatin dapat dilihat pada Gambar 9.
34
35
OH
NH
HO
CH
NH
CH2
NH
CH2
CH2
CH2
CH2
CH2
CH3
OH
O
CH
CH
NH
NH
OH
NH
CH2
O
CH
NH2
C
O
NH2
O
Gelatin
Tanin
OH
HO
OH
HO
OH
OH
O
O
HO
HO
O
O
C
NH
CH
CH 3
CH
O
NH
CH 2
O
CH
O
N
CH 2
CH 2
CH 2
CH 2
CH 2
NH
C
HO
NH2
NH
CH 2
CH
NH2
O
O
HO
OH
OH
Gambar 9.
Reaksi Tanin dan Gelatin (Saadah, 2010)
Golongan flavonoid dapat digambarkan sebagai deretan senyawa C6- C3-C6.

Artinya kerangka karbonnya terdiri atas dua gugus C6 (cincin benzene tersubstitusi)
yang disambungkan oleh rantai alifatik tiga-karbon. Flavonoid mencakup banyak
pigmen yang paling umum dan terdapat pada seluruh dunia tumbuhan mulai dari
fungus sampai angiospermae. Pada tumbuhan tingkat tinggi, flavonoid terdapat baik
dalam bagian vegetatif maupun dalam bunga. Flavonoid terutama berupa senyawa
yang larut dalam air. Bahan aktif tersebut dapat diektraksi dengan etanol 70%
(Yunita et al, 2009). Pada uji flavonoid yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu
diperoleh hasil positif, dimana terjadinya perubahan warna larutan menjadi kuning
intensif setelah ditambahkan larutan NaOH dan warna kuning akan menghilang jika
ditambahkan asam encer. Flavonoid yang bereaksi dengan NaOH akan membentuk
senyawa kuinoid sehingga terjadi perubahan warna menjadi kuning. Warna kuning
tersebut disebabkan karena pembentukan struktur kinoid yang mengandung ikatan
rangkap terkonjugasi yang lebih panjang dan planar sehingga dapat berfluorosensi
(Alfian & Susanti, 2012). Gambar reaksi flavonoid dan NaOH dapat dilihat pada
Gambar 10.
35
36
OH
O
O
NaOH
Kinoid
Gambar 10. Reaksi Flavonoid dengan NaOH (Mulyani & Laksana, 2011)
Fenol adalah senyawa dengan gugus OH yang terikat pada cincin aromatik
(Fessenden & Fessenden, 1986). Fenol sederhana berupa zat padat tanpa warna,
mudah teroksidasi dan warnanya berubah menjadi gelap. Bersifat asam lemah karena
adanya gugus hidroksi (OH) sekurangnya satu gugus hidroksi (Robinson, 1995).
Pada uji fenol yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu diperoleh hasil positif,
dimana terjadinya perubahan warna larutan menjadi hitam kebiruan setelah
ditambahkan dengan pereaksi FeCl3. Gambar reaksi fenol dengan FeCl3 dapat dilihat
pada Gambar 11. Warna hitam kebiruan terbentuk setelah ditambahkan FeCl3 karena
fenol akan bereaksi dengan ion Fe3+ membentuk senyawa kompleks (Arum et al,
2012). Senyawa kompleks adalah senyawa yang pembentukannya melibatkan
pembentukan ikatan kovalen koordinasi antara ion logam atau atom logam dengan
atom non logam (Effendy, 2007).
O-
OH
3+ FeCl3
Fe3+
+ 3Cl- + 6H+
Gambar 11. Reaksi Fenol dengan FeCl3 (Arum et al, 2012).

4.2.2
Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu dengan

Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi lapis tipis (KLT) digunakan untuk uji identifikasi senyawa
untuk meyakinkan identifikasi dapat digunakan lebih dari 1 fase gerak dan jenis
pereaksi semprot (Gandjar & Rohman, 2007). Hasil pengujian analisi kualitatif
senyawa ekstrak etanol daun gaharu dengan
ditunjukan pada tabel 5.
36
KLT menggunakan penyemprotan
37
Tabel 5. Hasil Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu Dengan
Kromatografi Lapis Tipis Dengan Reaksi Penyemprot
No
Uji
Pereaksi
1.
Flavonoid
Uap ammonia
2.
Alkaloid
Dragendorff
3.
Tanin
FeCl3 1%
4.
Terpenoid
5.
Polifenol
Fase Gerak
FeCl3 10%
Ket.
Butanol Asam asetat glasialWarna kuning atau kuning Air (4 :1:5)

Etil asetat Metanol Air
coklat
timbul warna coklat atau
(6:4:2)
Air Metanol
Kloroform (10:35:65)
Anisaldehid Asam
Sulfat
Hasil
n-heksan Etil asetat (4:1)
jingga
(+)
(-)
Warna biru tua atau hijau

kehitaman
(+)
Warna ungu-merah atau
Kloroform - etil asetat - asam

formiat (0,5 : 9 : 0,5)
ungu
Warna hitam
(-)
(+)
Prosedur dan hasil analisis kualitatif ekstrak etanol daun gaharu dapat dilihat
pada lampiran 8. Pada analisis KLT senyawa flavonoid ekstrak etanol daun gaharu
menggunakan fase gerak Butanol : Asam asetat : Air (BAA) (4:1:5), dimana
berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Suhendi et al (2011) bahwa fase gerak
BAA baik digunakan untuk memisahkan senyawa flavonoid. Berdasarkan hasil uji
pendahuluan yang sudah dilakukan sebelumnya, maka uji KLT dilakukan untuk
identifikasi flavonoid. Uji flavonoid diperoleh hasil positif dengan timbulnya warna
kuning atau kuning-coklat. Hal ini karena terjadi reaksi flavonoid dengan uap
ammonia membentuk garam dan membentuk struktur kinoid pada cincin B yang
akan membuat ikatan rangkap terkonjugasi menjadi lebih panjang sehingga akan
meningkatkan intensitas warnanya (Robinson, 1995). Analisis KLT flavonoid
dengan uap amonia yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu memberikan hasil
positif, dimana timbulnya warna kuning atau kuning-coklat.
Pada analisis KLT senyawa alkaloid menggunakan pereaksi dragendorff
untuk menampakkan noda atau bercaknya. Setelah lempeng disemprot dengan
pereaksi dragendorff terdapat bercak berwarna jingga yang dapat dilihat secara
langsung. Bercak berwarna jingga ini menandakan adanya senyawa golongan
alkaloid (Marliana, 2007). Analisis KLT alkaloid dengan reagen dragendorff yang
37
38
dilakukan pada ekstrak daun gaharu memberikan hasil negatif, dimana tidak
timbulnya warna coklat atau jingga.
Pada analisis KLT senyawa terpenoid menggunakan pereaksi anisaldehid
asam sulfat untuk menampakkan noda, jika timbul warna ungu-merah atau ungu
setelah penyemprotan pereaksi anisaldehid asam sulfat menunjukkan adanya
terpenoid dalam ekstrak (Wagner, 1996). Penggunaan pereaksi semprot anisaldehida
asam sulfat untuk mengetahui adanya senyawa terpenoid dan bercak (awalnya tidak
berwarna) setelah disemprot akan menjadi berwarna ungu, biru, merah, abu-abu atau
hijau. Anisaldehid dapat memperpanjang sistem kromofor pada senyawa (Irianti et
al, 2011). Analisis KLT terpenoid dengan pereaksi anisaldehid asam sulfat yang
dilakukan pada ekstrak daun gaharu memberikan hasil negatif, dimana tidak
timbulnya warna ungu-merah atau ungu.
Pada analisis KLT senyawa tanin dengan menggunakan FeCl3 tampak warna
biru tua atau hijau kehitaman bila positif mengandung tanin (Prameswari &
Widjanarko, 2014). Tanin merupakan senyawa polifenol sehingga adanya gugus
fenol ditunjukkan dengan warna hijau kehitaman atau biru tua setelah ditambahkan
dengan FeCl3. Analisis KLT tanin dengan FeCl3 yang dilakukan pada ekstrak daun
gaharu memberikan hasil positif, dimana tidak timbulnya warna coklat atau jingga,
dimana timbulnya warna hijau kehitaman.
Uji positif senyawa polifenol ditunjukkan dengan terbentuknya bercak warna
merah bata setelah disemprot FeCl3. Penambahan FeCl3 hanya dapat menunjukkan
keberadaan senyawa fenolat secara umum, namun tidak dapat membedakan
golongan polifenolnya (Chasani et al, 2013). Analisis KLT polifenol dengan FeCl3
yang dilakukan pada ekstrak daun gaharu memberikan hasil positif, dimana tidak
timbulnya warna coklat atau jingga, dimana timbulnya warna hitam. Reaksi antra
senyawa polifenol dan FeCl3 dapat dilihat pada Gambar 12.
Gambar 12. Reaksi Antara Polifenol dengan Pereaksi FeCl3 (Chasani et al, 2013)
38
39
4.3
Perlakuan pada Hewan Uji
4.3.1
Uji Pendahuluan Dosis Aloksan

Aloksan
merupakan
diabetogenik
bila
diberikan
secara
intravena,
intraperitoneal atau subkutan (Szkudelski, 2001). Aloksan menyebabkan nekrosa

spesifik pada pulau-pulau Langerhans dan memiliki efek sitotoksik pada sel beta
pankreas. Sekresi insulin pun menurun akibat rusaknya sel beta yang mengakibatkan
tubuh tidak dapat menggunakan glukosa sehingga menyebabkan terjadinya
hiperglikemia hal itu disebut kondisi diabetes (Wibawa et al, 2013). Rentang dosis
yang diberikan kepada hewan uji sangat sempit dan hasil uji pendahuluan dosis
aloksan dapat dilihat pada tabel 6.
Tabel 6. Hasil Uji Pendahuluan Dosis Aloksan
Kadar Gula Darah Puasa (mg/dL) (Mean
SEM)
kelompok
Jumlah
Hewan Uji
Sebelum induksi
Sesudah induksi
Kontrol Normal
99,5 2,48
98,5 6,72
Dosis 100 mg/kgBB
103,5 1,06
109 7,78
Dosis 120 mg/kgBB
73 1,41
117 8,49
Dosis 130 mg/kgBB
109 7,07
305 54,45
Dosis 140 mg/kgBB
112 1,41
338,5 71,06
Dosis 150 mg/kgBB
100 0,71
505,5 29,93
Dosis 160 mg/kgBB
105 3,54
>600
Berdasarkan hasil uji pendahuluan dosis aloksan pada tabel 6. dan lampiran
9, terlihat bahwa kelompok hewan uji yang mengalami keadaan hiperglikemik pada
hari ke-3 paska induksi adalah kelompok dengan dosis aloksan lebih dari 120
mg/KgBB yaitu, kelompok D3, D4, D5 dan D6. Namun pada tikus D6 gula darah
yang didapat melebihi dari 600 mg/dL sehingga tidak bisa terbaca pada alat
glukometer. Berdasarkan pengamatan yang dilakukan untuk tikus dengan gula darah
setelah induksi antara 200-300 mg/dL memiliki sifat reversibel, dimana nilai gula
darahnya dapat kembali ke keadaan normal dalam waktu beberapa minggu. Oleh
karena itu, dipilih dosis aloksan 150 mg/KgBB sebagai dosis yang dipakai untuk
induksi aloksan, dimana dosis ini tidak menyebabkan kematian pada hewan uji dan
menurut Harahap (2015) bahwa dosis aloksan 150 mg/KgBB dapat mengakibatkan
diabetes melitus pada tikus wistar yang bersifat irreversibel.
39
40
4.3.2
Uji Pendahuluan Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu

Uji pendahuluan dosis pemberian ekstrak dilakukan untuk menentukan dosis
ekstrak yang akan dipilih untuk perlakuan. Hasil uji pendahuluan dosis pemberian
ekstrak daun gaharu dapat dilihat pada tabel 7.
Tabel 7. Uji Pendahuluan Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu
Dosis
Kadar Gula Darah (mg/dL) (Mean SEM)
Jumlah
Hewan
Uji
Sesudah induksi
NaCMC 0,5%
Ekstrak dosis 10
mg/kgBB
Ekstrak dosis 100
mg/kgBB
Ekstrak dosis 1000
mg/kgBB
484,00
Sesudah pemberian
Ekstrak
391,00
Persentasi
penurunan (%)
19,22
356,00 21,57
83,00 14,85
73,67 6,30
505,50 27,93
144,00 1,41
71,31 1.87
593,00 4,24
156,50 15,20
73,64 2.38
Dosis 10, 100, dan 1000 mg/kgBB dipilih dalam orientasi dosis karena
mewakili dosis yang rendah, sedang, dan dosis tinggi, sehingga dapat dipilih dosis
yang tepat untuk perlakuan dalam penelitian. Berdasarkan hasil uji pendahuluan
dosis pemberian ekstrak daun gaharu (lampiran 10), terlihat bahwa penurunan kadar
glukosa darah terjadi pada semua dosis yaitu dosis 10 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan
1000 mg/kgBB. Berdasarkan data di atas dapat terlihat pada dosis tinggi yaitu, antara
dosis 100 mg/KgBB dan 1000 mg/KgBB tidak memberikan perbedaan yang terlalu
bermakna. Sedangkan pada Dosis 10 mg/KgBB sudah memberikan penurunan
terhadap kadar glukosa darah, maka dari itu dipilih tiga dosis untuk perlakuan, yaitu
dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB, dimana diharapkan dosis ini
dapat memberikan penurunan kadar glukosa darah yang bermakna terhadap tikus
yang diinduksi aloksan.
4.3.3
Pengujian Aktivitas
Diabetes melitus merupakan gangguan klinis dan genetik yang ditandai
dengan tingginya kadar glukosa dalam darah. Hiperglikemia disebabkan karena

defisiensi sekresi insulin atau resistensi dari sel tubuh terhadap aksi insulin, atau
kombinasi keduanya. (Leroit et al, 2004). Insulin dihasilkan oleh sel pankreas
untuk mengantar glukosa masuk kedalam sel. Apabila terjadi kerusakan sel
40
41
pankreas, maka transport glukosa ke dalam sel akan terganggu sehingga

mengakibatkan penumpukan glukosa dalam darah (Tjay & Rahardja, 2007).
Hewan uji digunakan pada penelitian ini adalah tikus putih galur wistar, umur
4-6 bulan dengan bobot 200-260 gram. Batasan umur dan bobot pada tikus ini
dilakukan supaya memperkecil terjadinya variabilitas sehingga diharapkan respon
yang diberikan tiap hewan uji tidak berbeda jauh. Tikus digunakan pada penelitian
ini karena lebih mudah pengambilan sampel darahnya untuk diukur kadar glukosa
darah dan mempermudah pengambilan organ untuk pemeriksaan glikogen hati dan
pembuatan preparat pankreas. Tikus yang digunakan adalah tikus dengan jenis
kelamin jantan karena tikus jantan tidak terpengaruh hormonal dan kehamilan
sedangkan tikus betina bisa mengalami fase estrus. Hal ini dikarenakan hormon
estrogen dan progesteron pada tikus betina dapat meningkatkan sekresi insulin yang
mempengaruhi kadar glukosa darah sehingga dapat mengganggu proses penelitian
(Santi, 2013).
Pengujian aktivitas diabetes dilakukan dengan mengelompokan hewan uji
menjadi 6 kelompok. Kelompok pertama adalah kelompok kontrol normal, dimana
hewan uji tidak dibuat menjadi diabetes. Kelompok kedua adalah kelompok kontrol
negatif, dimana hewan uji mengalami diabetes dan hewan uji diberi larutan Na-CMC
0,5%. Kelompok ketiga adalah kelompok kontrol positif, dimana hewan uji
mengalami diabetes dan hewan uji diberikan larutan glibenklamid. Kelompok
keempat sampai keenam adalah hewan uji yang mengalami diabetes dan diberikan
ekstrak kering daun gaharu yang disuspensikan dengan Na-CMC 0,5% dengan dosis
ekstrak yang berbeda-beda yaitu, dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200
mg/kgBB. Tiga kelompok ini dipilih untuk melihat dosis yang tepat digunakan untuk
menurunkan kadar glukosa darah pada hewan yang diinduksi aloksan. Pembuatan
larutan stok ekstrak kering daun gaharu dapat dilihat pada lampiran 12, skematis
pengujian aktivitas antidiabetes dapat dilihat pada lampiran 13 dan dokumentasi uji
aktivitas antidiabetes dapat dilihat pada lampiran 14.
41
42
4.3.4
Tes toleransi glukosa oral

Pengukuran tes toleransi glukosa oral (TTGO) dilakukan untuk melihat
kemampuan tubuh dalam menggunakan glukosa yang merupakan sumber energi bagi
tubuh (Islam et al, 2009).
Glukosa yang diberikan pada saat TTGO dapat
meningkatkan kadar gula darah. Puncak kadar glukosa darah terjadi dalam atau 1
jam dan akan kembali normal 2-3 jam. Pengukuran tes toleransi glukosa oral
(TTGO) dilakukan pada hari ke-23 dan sebelum dilakukan pengukuran terlebih
dahulu hewan uji dipuasakan selama 18 jam (Ridwan et al (2012). Hewan uji
dipuasakan terlebih dahulu untuk menghindari variasi kadar glukosa darah karena
perbedaan masuknya makanan pada setiap hewan uji (Lidia, 2013).
Tikus diberi larutan glukosa 2 g/kgBB secara oral 30 menit setelah diberi
perlakuan. Pemberian larutan glukosa dilakukan menggunakan alat sonde. Kadar
glukosa darah diukur setelah pemberian glukosa dengan menggunakan alat
glukometer, dimana darah diambil pada vena ekor pada masing-masing kelompok
setelah 0, 30, 60, 90, 120, dan 150 menit (Kumar et al, 2014). Larutan glukosa
diberikan sebanyak 2 g/kgBB karena berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh
Pertiwi et al (2012) dosis glukosa 2 g/kgBB menunjukan peningkatan kadar glukosa
darah yang lebih tinggi dibandingkan 1 g/kgBB. Dilakukan pengamatan setiap 30
menit untuk mengetahuai kemampuan tubuh mentoleransi pemberian larutan glukosa
sehingga dapat diketahui ada tidaknya pengaruh pemberian ekstrak daun gaharu
terhadap kemampuan tubuh mentoleransi glukosa.
Kadar glukosa darah diukur dengan alat glukometer. Prinsip kerja dari alat
ini yaitu, sampel darah akan masuk kedalam test strip melalui aksi kapiler. Glukosa
yang ada dalam darah akan bereaksi dengan glukosa oksidase dan kalium ferisianida
yang ada dalam strip dan akan dihasilkan kalium ferosianida. Kalium ferosianida
yang dihasilkan sebanding dengan konsentrasi glukosa yang ada dalam sampel
darah. Oksidasi kalium ferosianida akan menghasilkan muatan listrik yang akan
diubah oleh glukometer untuk ditampilkan sebagai konsentrasi glukosa pada layar.
-D-Glukosa + kalium ferisianida
Kalium ferosianida
Oksidasi
Glukosa oksidase
as.glukonat + kalium ferosianida
kalium ferisianida + e-
(Raja, 2009).
42
43
Pada TTGO ini menggunakan 6 kelompok tikus yaitu kelompok normal

(NaCMC 0,5%), kelompok kontrol positif (Glibenklamid 2,5 mg/kg BB), kelompok
kontrol negatif (NaCMC 0,5% ), kelompok ekstrak gaharu dosis 1 (50 mg/kgBB),
kelompok diberikan ekstrak gaharu dosis 2 (100 mg/kgBB) dan kelompok diberikan
ekstrak gaharu dosis 3 (200 mg/kgBB). Hasil uji TTGO dapat dilihat pada Gambar
13 dan 14.
Gambar 13. Grafik Tes Toleransi Glukosa Oral

Data grafik TTGO pada Gambar 13 secara umum dapat terlihat kelompok
hewan uji kontrol negatif memiliki kadar gula darah yang paling tinggi dibandingkan
kelompok lainnya. Pada kelompok hewan uji kontrol negatif dapat terlihat bahwa
tidak terjadi perubahan yang signifikan dari 30 menit pertama sampai menit ke-150.
Sedangkan untuk kelima kelompok lainnya yaitu kontrol normal, kontrol positif,
ekstrak dosis 50 mg/kgBB, ekstrak dosis 100 mg/kgBB dan ekstrak dosis 200
mg/kgBB mengalami perubahan kadar glukosa darah dari menit ke-0 sampai menit
ke-150. Terlihat pada kelompok hewan uji kontrol normal, kontrol positif, ekstrak
dosis 50 mg/kgBB, ekstrak dosis 100 mg/kgBB dan ekstrak dosis 200 mg/kgBB
kadar puncak glukosa darah pada masing-masing kelompok terjadi pada menit ke-30
dan setelah menit ke-30 terjadi penurunan sampai menit ke-150. Hal ini bisa terjadi
pada kelompok kontrol normal karena kelompok kontrol normal tidak mengalami
diabetes, dimana tidak adanya gangguan pada sekresi insulin dan sensitivitas reseptor
insulin. Insulin akan menstimulasi glukosa menuju hati dan otot dimana di jaringan
ini terdapat banyak reseptor insulin (Amalia, 2013) sehingga terjadi penurunan kadar
43
44
glukosa darah pada pemberian glukosa oral. Sedangkan untuk kontrol positif terjadi
penurunan kadar glukosa darah karena mekanisme dari glibenklamid dalam
menurunkan kadar glukosa darah dengan cara merangsang sekresi insulin di kelenjar
pankreas (Depkes RI, 2005). Pemberian ekstrak memberikan penurunan kadar
glukosa darah karena ekstrak mengandung senyawa flavonoid dan tanin yang
berperan dalam penurunan kadar glukosa darah (Coman et al, 2012).
Kenaikan kadar glukosa darah pada tes toleransi glukosa oral (TTGO) yang
terjadi pada menit ke-30 sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Kumar et al
(2014) dan penelitian yang dilakukan oleh Islam et al (2009), pada kedua penelitian
tersebut terlihat bahwa kadar puncak glukosa darah terjadi pada menit ke-30 dan
kadar glukosa darah akan turun dimenit berikutnya. Hal ini menunjukan bahwa pada
kelompok kontrol normal, kontrol positif, dosis 50 mg/kgBB dan dosis 100mg/kgBB
dapat membuat kadar glukosa darah kembali normal setelah 2-3 jam pembebanan
glukosa oral.
Kno
Kne
KP
D1
D2
D3
Keterangan : (* p<0,05; berbeda bermakna dengan Kne, KP, D1, D2, D3), (** p<0,05; berbeda bermakna dengan
Kno, KP, D1, D2), (*** p<0,05; berbeda bermakna dengan Kno, Kne, D3), (# p<0,05; berbeda
bermakna dengan Kno, Kne, D3), (## p<0.05; berbeda bermakna dengan Kno, Kne, D3), (###
p<0,05; berbeda bermakna dengan Kno, KP, D1, D2)
Gambar 14. Grafik Rata-rata Total AUC Tiap Kelompok Perlakuan

Data diagram batang yang terdapat pada Gambar 14. Menunjukan nilai ratarata total AUC dari masing-masing kelompok. Nilai rata-rata total AUC dari yang
terendah sampai tertinggi berturut-turut adalah kontrol normal, dosis 50 mg/kgBB,
44
45
dosis 100 mg/kgBB, kontrol positif, dosis 200 mg/kgBB, dan yang terakhir ialah
kontrol negatif. Analisis uji statistik dilakukan, dimana pada uji normalitas dan
homogenitas nilai signifikan tiap kelompok perlakuan lebih dari 0,05. Analisis data
dilanjutkan dengan analisis one way ANOVA. Hasil analisis statistik menunjukkan
adanya perbedaan bermakna (p 0,05) pada tiap kelompok. Dilanjutkan dengan uji
post hoc LSD untuk melihat perbedaan antar kelompok. Analisis statistik dapat
dilihat pada lampiran 22. Hasil uji post hoc LSD terhadap tiap kelompok dapat
dilihat pada lampiran 23.
Hasil data yang terdapat pada gambar 13 dan 14 menunjukan kelompok
kontrol normal berbeda bermakna (p 0,05) dengan kelompok kontrol negatif. Hal
ini menunjukan bahwa penginduksian aloksan dapat menyebabkan diabetes pada
kelompok kontrol negatif. Kelompok kontrol positif berbeda bermakna (p 0,05)
dengan kelompok kontrol normal dan kontrol negatif, hal tersebut menunjukan
bahwa pemberian glibenklamid pada kelompok kontrol positif dapat menurunkan
kadar glukosa darah, tetapi belum mampu menurunkan kadar glukosa darah pada
hewan uji yang diabetes menjadi normal. Kelompok dosis ekstrak 50 dan 100
mg/kgBB dibandingkan dengan kontrol normal yang memberikan perbedaan
bermakna (p 0,05), dan apabila dibandingakan dengan kontrol positif tidak
memberikan perbedaan yang bermakna (p0,05). Hal tersebut menunjukan bahwa
pemberian ekstrak etanol daun gaharu dengan dosis 50 dan 100 mg/kgBB dapat
menurunkan kadar glukosa darah yang penurunannya hampir sama dengan kontrol
positif tetapi belum mampu menurunkan kadar glukosa darah pada hewan uji yang
diabetes menjadi normal.
Ekstrak gaharu dosis 200 mg/kgBB tidak menunjukan aktivitas antidiabetes
karena penurunan kadar glukosa darah yang diberikan tidak berbeda bermakna
(p0,05) dengan kontrol negatif. Hal ini terjadi seperti pada penelitian yang
dilakukan oleh Pasaribu et al (2012), dimana ekstrak etanol kulit buah manggis
dengan dosis 200 mg/kgBB tidak mampu memberikan penurunan kadar glukosa
darah yang lebih baik dibandingkan dosis 100 mg/kgBB. Peningkatan dosis obat
seharusnya akan meningkatkan respon yang sebanding dengan dosis yang
ditingkatkan, namun dengan meningkatnya dosis peningkatan respon pada akhirnya
45
46
akan menurun, karena sudah tercapai dosis yang sudah tidak dapat meningkatkan
respon lagi. Hal ini sering terjadi pada obat bahan alam karena komponen senyawa
yang dikandungnya tidak tunggal melainkan terdiri dari berbagai macam senyawa
kimia, dimana komponen-komponen tersebut saling berinteraksi untuk menimbulkan
efek. Adapun peningkatan dosis, jumlah senyawa kimia yang dikandung semakin
banyak, sehingga terjadi interaksi merugikan yang menyebabkan penurunan efek
(Pasaribu et al, 2012). Ekstrak gaharu dosis 200 mg/kgBB tidak menunjukkan
aktivitas antidiabetes terjadi karena perbedaan kekentalan ekstrak yang diberikan
pada masing-masing kelompok percobaan, dimana suspensi ekstrak daun gaharu
yang diberikan untuk hewan uji kelompok dosis 200 mg/kgBB lebih kental
dibandingkan dengan hewan uji lainnya. Hal ini dapat menyebabkan ekstrak yang
diberikan keluar lagi melalui mulut sehingga dosis ekstrak yang masuk ke dalam
tubuh hewan uji semakin berkurang dan menyebabkan penurunan efek. Selain itu
ekstrak yang terlalu kental dapat menyebabkan stres. Stres emosional dapat
meningkatkan kadar gula darah dan glukosuria melalui peningkatan stimulus
simptoadrenal. Stres meningkatkan produksi hormone hipofisis, katekolamin,
kortikosteroid, dan menekan pelepasan insulin sehingga kadar glukosa dalam darah
meningkat (Putranto & Mudjadid, 2003).
Kontrol positif (Glibenklamid 2,5 mg/kg BB) memberikan penurunan kadar
glukosa darah dikarenakan mekanisme kerja dari glibenklamid yang hanya
merangsang sekresi insulin di kelenjar pankreas (Depkes RI, 2005). Sedangkan untuk
ekstrak daun gaharu dengan dosis 50 dan 100 mg/kgBB mampu memberikan
penurunan kadar glukosa darah yang tidak berbeda bermakna (p0,05) dengan
kelompok kontrol positif . Hal ini karena berdasarkan hasil uji senyawa fitokimia
ekstrak kering daun gaharu mengandung senyawa flavonoid dan tannin yang
bertindak sebagai antidiabetes.
Terdapat beberapa golongan senyawa flavonoid yang bertindak sebagai
antidiabetes yaitu antosianidin, antosianin, flavon, isoflavon, flavan-3-ols dan
isoflavon. Senyawa polifenol, khususnya flavonoid terbukti memiliki sifat sebagai
antidiabetes atau untuk mengurangi risiko penyakit diabetes. Mekanisme flavonoid
sebagai antidiabetes yaitu mencegah apoptosis sel-, meningkatkan proliferasi sel
46
47
dan sekresi insulin sehingga aktivitas insulin meningkatkan. Secara farmakologi

flavonoid memiliki kemampuan mempengaruhi aktivitas insulin dan resistensi
insulin pada diabetes tipe 2. Senyawa flavonoid dapat menurunkan glukosa darah,
lipidemia, konsentrasi serum insulin, dan aktivitas heksokinase. Flavonoid efektif
dalam mengaktivasi reseptor PPAR- (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor),
meningkatan sensitivitas insulin di otot dan meningkatkan aktivitas reseptor insulin
GLUT4 (GLUT4 dikenal sebagai reseptor glukosa 4, merupakan reseptor yang
berperan dalam penyerapan glukosa yang dirangsang oleh insulin pada otot dan selsel jaringan adipose). Flavonoid juga bertindak sebagai modulator sekresi insulin,
dimana
mekanisme
aksinya
terlibat
aktivasi
CAMP
(cyclic
Adenosine
Monophosphate) atau PKA (protein kinase A) yang menyebabkan peningkatan

intraseluler Ca2 +, yang mengarah ke stimulasi sekresi insulin (Coman et al, 2012).
Tanin sendiri memiliki mekanisme yang hampir sama dengan flavonoid
sebagai antidiabetes. Tanin bekerja menurunkan kadar glukosa darah dengan
memperkuat mekanisme pemasukan glukosa melalui pengaktifan mediator-mediator
pada jalur sinyal translokasi GLUT4 yang diinduksi oleh insulin, seperti mediator
PI3K (phosphatidilinositol-3-kinase) (Kumari, 2012). Menstimulasi fosforilasi dari
protein-protein mediator pada transpor glukosa yang diinduksi insulin dan
menginduksi translokasi GLUT4 seperti insulin, menghambat diferensiasi adiposit
melalui penghambatan ekspresi gen PPAR- pada proses adipogenesis. Selain itu,
tanin juga dapat berperan dalam penghambatan penyerapan glukosa di saluran cerna,
bahkan hingga menginduksi regenerasi dari sel pankreas, serta memperkuat
aktivitas insulin di adiposit (Liu et al, 2005).
4.3.5
Glikogen Hati
Hati dapat menghasilkan cadangan energi melalui perombakan glikogen
menjadi glukosa yang tersimpan di otot dan hati. Hati berfungsi sebagai glikogenik
yaitu sel hati dapat menghasilkan glikogen karena dirangsang oleh enzim tertentu.
Glikogen disimpan sementara di hati dan otot selanjutnya diubah kembali menjadi
glukosa oleh kerja enzim bila diperlukan oleh jaringan tubuh, selain itu hati juga
47
48
mengubah zat buangan dan bahan racun agar mudah untuk diekskresikan ke empedu
dan urin (Hatta et al, 2009).
Glukosa yang dialirkan melalui darah adalah sumber energi utama untuk selsel tubuh. Kadar gula darah diatur melalui umpan balik negatif untuk
mempertahankan keseimbangan di dalam tubuh. Pankreas berperan dalam
pengaturan kadar glukosa dalam darah. Apabila konsentrasi glukosa menurun, maka
pankreas melepaskan glukagon yang akan mengubah glikogen menjadi glukosa,
proses ini disebut glikogenolisis. Glukosa dilepaskan ke dalam aliran darah, sehingga
kadar gula darah meningkat. Apabila kadar gula darah meningkat, maka hormon
insulin dilepaskan dari sel beta pankreas. Hormon ini menyebabkan hati mengubah
lebih banyak glukosa menjadi glikogen (Utami et al, 2009).
a.
Penetapan Panjang Gelombang Maksimum

Penetapan panjang gelombang maksimal bertujuan untuk mengetahui
besarnya panjang gelombang yang dibutuhkan larutan standar (Bovine liver

glycogen) untuk mencapai serapan maksimal (Prastiwati et al, 2010). Berdasarkan
hasil pengukuran serapan larutan standar (Bovine liver glycogen) yang direaksikan
dengan PHESUL (phenol dan asam sulfat pekat) menggunakan spektrofometer uvvis. Panjang gelombang maksimum dapat dilihat pada gambar 15.
Gambar 15. Grafik pembacaan panjang gelombang Larutan Standar (Bovine liver
Sulfat Pekat)
Pembacaan panjang gelombang dilakukan meskipun panjang gelombang
tersebut sudah diketahui dalam literatur. Hal ini dikarenakan panjang gelombang
48
49
suatu senyawa dapat berbeda bila ditentukan pada kondisi dan alat yang berbeda
(Sirait, 2009). Berdasarkan hasil pembacaan panjang gelombang menunjukan bahwa
larutan standar ataupun sampel yang mengandung glikogen dapat dibaca nilai
absorbansinya pada panjang gelombang 489 nm. Data pembacaan panjang gelomang
dapat dilihat pada lampiran 24.
b.
Penetapan Operating Time

Operating time adalah waktu yang tepat untuk pembacaan serapan larutan
yang diperiksa pada saat serapannya stabil pada kurva operating time. Kurva
operating time dapat dilihat pada gambar 16.
Gambar 16. Grafik Kurva Operating Time Larutan Standar (Bovine liver glycogen)
yang Direaksikan dengan PHESUL (Phenol dan Asam Sulfat Pekat)
Sampel yang digunakan adalah yang berwarna sehingga dapat diketahui pada
menit keberapa terjadi kestabilan (Prastiwati et al, 2010). Waktu operasional
ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu pengukuran dengan absorbansi
larutan. Pada awal terjadinya reaksi, absorbansi senyawa yang berwarna ini akan
meningkat sampai waktu tertentu hingga diperoleh waktu yang stabil (Gandjar &
Rohman, 2007). Penetapan waktu operating time pada penelitian ini menggunakan
larutan standar dengan konsentrasi 200 ppm. Berdasarkan hasil penetapan operating
time larutan standar (Bovine liver glycogen) menunjukan bahwa serapan stabil pada
menit ke-15 sampai menit ke- 30. Absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer
hendaknya berkisar antara 0,2 -0,8 supaya mengurangi kesalahan pada pembacaan
(Gandjar & Rohman, 2007). Pada pembacaan ini absorbansi yang dihasilkan
melebihi 0,8 dikarenakan larutan standar yang dipakai memiliki konsentrasi yang
49
50
besar dan warna yang lebih pekat sehingga ditakutkan terdapat pengaruh terhadap
hasil pembacaan absorbansi pada waktu operating time yang didapatkan.
c.
Penetapan Kurva Standar

Penentuan kurva standar bertujuan untuk menentukan persamaan yang
nantinya akan digunakan untuk untuk menghitung konsentrasi glikogen hati pada
hewan uji. Kurva standar dibuat dengan melihat korelasi konsentrasi larutan standar
dan absorbansi larutan standar. Dari hubungan keduanya dapat dilihat pada Gambar
17.
Gambar 17. Grafik Kurva Standar (Bovine liver glycogen)

Data lampiran 28 dapat dilihat bahwa nilai sig p 0,05 yang berarti adanya
pengaruh nyata variabel konsentrasi terhadap variabel absorbansi. Pada penetapan
kurva standar menggunakan larutan standar dengan konsentrasi 10, 20, 30, 40, 50,
dan 60 ppm. Konsentrasi tersebut dipakai karena pada pembacaan absorbansi
konsentrasi tersebut menghasilkan nilai absorbansi yang berkisar antara 0,2 0,8.
Hal ini dikarenakan absorbansi yang terbaca pada spektrofotometer hendaknya
berkisar antara 0,2 -0,8 supaya mengurangi kesalahan pada pembacaan (Gandjar &
Rohman, 2007). Sehingga diharapkan persamaan kurva standar yang didapatkan
tidak memiliki kesalahan yang besar dan tidak mempengaruhi hasil pembacaan kadar
glikogen hati pada sampel.
d.
Penetapan kadar glikogen

Data diagram batang yang terdapat pada Gambar 18. Menunjukan nilai rata-
rata glikogen hati dari masing-masing kelompok. Nilai rata-rata glikogen hati dari
yang terendah sampai tertinggi berturut-turut adalah kontrol negatif, dosis 200
50
51
mg/kgBB, kontrol positif, dosis 100 mg/kgBB, dosis 50 mg/kgBB dan yang terakhir
adalah kontrol normal. Analisis uji statistik dilakukan, dimana data terdistribusi
normal (p 0,05) namun tidak homogen (p 0,05) sehingga analisis data dilanjutkan
dengan analisis uji Kruskal Wallis. Hasil analisis statistik menunjukan adanya
perbedaan bermakna ( p 0,05) pada tiap kelompok. Untuk melihat perbedaan antar
kelompok dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney. Analisis statistik dapat dilihat pada
lampiran 32.
Kno
Kne
KP
D1
D2
D3
Keterangan : (* p<0,05; berbeda bermakna dengan kelompok KNe, KP, D1, D2, D3), (** p<0,05; berbeda
bermakna dengan kelompok KNo, KP, D1, D2, D3), (*** p<0,05; berbeda bermakna dengan
kelompok KNo, KNe, D1, D3), (# p<0,05; berbeda bermakna dengan kelompok KNo, KNe, KP,
D2, D3), (## p<0.05; berbeda bermakna dengan kelompok KNo, Kne, D1, D3), (### p<0,05;
berbeda bermakna dengan kelompok KNo, KNe, KP, D1, D2)
Gambar 18. Grafik Rata-rata Kadar Glikogen Hati pada Tiap Kelompok perlakuan
Hasil uji Mann-Whitney dapat dilihat pada lampiran 33. Hasil uji MannWhitney menunjukan kelompok kontrol normal berbeda bermakna (p 0,05) dengan
kelompok kontrol negatif. Hal ini menunjukan bahwa penginduksian aloksan dapat
menyebabkan diabetes pada kelompok kontrol negatif sehingga kadar glikogen
dalam hati menjadi rendah dibandingkan kontrol normal. Hewan uji kelompok
kontrol normal tidak mengalami diabetes, dimana tidak adanya gangguan pada
sekresi insulin dan sensitivitas reseptor insulin. Insulin akan menstimulasi glukosa
menuju hati dan otot dimana di jaringan ini terdapat banyak reseptor insulin.
Selanjutnya glukosa akan disimpan dalam hati dan otot dengan cara difusi fasilitatif
51
52
dan diubah menjadi glikogen. Hal ini yang menyebabkan tingginya kadar glikogen
dalam hati hewan uji kelompok kontrol normal (Amalia, 2013). Sedangkan untuk
kontrol negatif memiliki nilai dari kadar glikogen hati yang terendah. Hal ini dapat
dilihat seperti hasil penelitian yang dilakukan oleh Suarsana et al (2010), dimana
tikus normal memiliki kadar glikogen yang paling tinggi dan tikus diabetes memiliki
kadar glikogen yang paling rendah. Hal ini disebabkan karena aloksan yang
digunakan untuk membuat tikus menjadi diabetes menyebabkan kerusakan sel beta
pankreas. Akibatnya, tubuh kurang mampu menghasilkan insulin. Selain itu juga bisa
disebabkan karena terjadi penurunan aktivitas enzim yang terlibat dalam sintesis
glikogen, dimana pada tikus diabetes enzim glikogen sintase fosfatase dalam bentuk
aktif menjadi defektif sehingga aktivitasnya berkurang. Pada keadaan diabetes
berhubungan dengan resistensi insulin pada berbagai jaringan sehingga glukosa
dalam darah tidak bisa masuk kedalam jaringan dan menyebabkan berkurangnya
kadar glikogen dalam hati (Suarsana et al, 2010).
Kelompok kontrol normal berbeda bermakna (p 0,05)
dengan kontrol
positif. Hal ini berarti bahwa kontrol positif mampu meningkatkan kadar glikogen
hati, tapi belum mampu meningkatkan kadar glikogen hati pada hewan uji yang
diabetes menjadi sama dengan kadar glikogen hati pada kelompok kontrol normal.
Hal ini bisa terjadi karena mekanisme kerja dari kontrol positif hanya merangsang
sekresi insulin di kelenjar pankreas (Depkes RI, 2005). Sedangkan untuk kelompok
dosis ekstrak 50 dan 100 dan 200 mg/kgBB dibandingkan dengan kontrol normal
yang memberikan perbedaan bermakna (p 0,05). Hal ini berarti bahwa pemberian
ekstrak etanol daun gaharu dengan dosis 50, 100, dan 200 mg/kgBB dapat
meningkatkan kadar glikogen hati pada hewan uji yang mengalami diabetes. Akan
tetapi belum mampu meningkatkan kadar glikogen hati pada hewan uji yang diabetes
menjadi sama dengan kadar glikogen hati pada kelompok kontrol normal. Untuk
kelompok kontrol positif, dosis 50, 100 dan 200 mg/kgBB memberikan perbedaan
bermakna (p 0,05) antar masing-masing kelompok. Semua kelompok dapat
meningkatkan kadar glikogen hati tapi peningkatan kadar glikogen hati paling
signifikan ditunjukan oleh kelompok dosis 50 mg/kgBB.
52
53
Dosis 50 mg/kgBB menunjukkan peningkatan paling signifikan dalam

peningkatan kadar glikogen hati dibandingkan dengan kontrol positif. Hal ini terjadi
karena mekanisme kerja dari kontrol positif hanya merangsang sekresi insulin di
kelenjar pankreas (Depkes RI, 2005). Sedangkan mekanisme kerja ekstrak etanol
daun gaharu dapat meningkatkan kadar glikogen hati diduga melalui mekanisme
stimulasi sel beta pankreas meningkatkan sekresi insulin dan meningkatan
sensitivitas insulin di otot dan meningkatkan aktivitas reseptor insulin GLUT4.
GLUT4 dikenal sebagai reseptor glukosa 4, merupakan reseptor yang berperan
dalam penyerapan glukosa yang dirangsang oleh insulin pada otot dan sel-sel
jaringan adiposa. Hal ini dikarenakan ekstrak etanol daun gaharu mengandung
flavonoid dan tanin yang bertindak sebagai antidiabetes. Ekstrak dengan dosis 50
mg/kgBB memberikan nilai kadar glikogen yang lebih tinggi dibandingkan dengan
ekstrak dosis 100 dan 200 karena telah jenuhnya reseptor yang berikatan dengan
senyawa kimia dan terjadinya interaksi dengan senyawa kimia yang terkandung di
dalam ekstrak etanol daun gaharu. Jika reseptor telah jenuh, maka peningkatan dosis
tidak bisa mencapai efek maksimumnya (Pasaribu et al, 2012).
4.3.6
Pembedahan dilakukan pada hari yang ke-28. Setelah dilakukan pembedahan
pada tikus, organ pankreas diambil dan dicuci dengan larutan fisiologis (NaCl 0,9%).
Setelah itu difiksasi dengan formalin minimal 24 jam. Tujuan dari fiksasi yaitu untuk
mencegah perubahan post mortal (otolisis), mempertahankan morfologi sel dan
jaringan agar sedapat mungkin sama dengan saat terakhir jaringan tersebut diambil
dari tubuh hewan atau manusia selama hidup dan mengeraskan jaringan agar dapat
diproses lanjut dengan mengubah konsistensi sel dari semi-cair menjadi semi-padat
(Miranti, 2010). Selanjutnya jaringan didehidrasi dengan menggunakan alkohol
bertingkat dari konsentrasi rendah ke konsentrasi tinggi (60%, 70%, 80%, 90%,
96%, alkohol absolut) masing-masing selama 2 jam. Proses dehidrasi dilakukan bila
jaringan dalam cairan fiksatif telah benar-benar masuk, yang ditandai dengan
perubahan warna merah menjadi coklat keabuan. Tujuan dari tahap ini adalah untuk
53
54
menarik atau mengeluarkan air dalam jaringan dengan bahan dehidran yang umum
digunakan (Miranti, 2010).
Apabila proses dehidrasi selesai maka dilanjutkan dengan proses penjernihan,
dimana organ dimasukkan ke dalam larutan alkohol absolut yang dicampur xilol
(1:1) kemudian dipindahkan lagi kedalam larutan xilol murni (Yunita, 2014). Proses
ini dilakukan untuk menghasilkan suatu jaringan yang transparan (Miranti, 2010).
Kemudian dilanjutkan dengan proses penanaman organ dengan parafin, penanaman
ini dilakukan supaya tahapan pemotongan organ dapat dilakukan. Setelah organ
dipotong dengan ketebalan 5 mikron dengan mikrotom, kaca objek yang berisi
preparat tadi dipanaskan supaya paraffin menjadi cair dan dapat dilanjutkan dengan
proses pewarnaan. Proses pewarnaan dilakukan supaya jaringan menjadi kontras dan
dapat diamati dengan mikroskop. Pewarnaan hematoksilin eosin digunakan pada
penelitian ini. Pewarnaan ini untuk mengamati karakteristik dan morfologi dari
jaringan dan sel secara umum, meliputi struktur dan bentuk sel (Kiernan, 1990).
Preparat yang sudah jadi diamati jumlah pulau Langerhans dengan menggunakan
mikroskop binokuler dengan perbesaran 100 kali. hasil jumlah pulau Langerhans
pada tiap kelompok dapat dilihat pada gambar 19.
Kno
Kne
KP
D1
D2
D3
Keterangan : (* p<0,05; berbeda bermakna dengan kelompok KNe, KP, D1, D2, D3), (** p<0,05; berbeda
bermakna dengan kelompok KNo, D1, D2, D3), (*** p<0,05; berbeda bermakna dengan kelompok
KNo, D1, D2), (# p<0,05; berbeda bermakna dengan kelompok KNo, KNe, KP, D3), (## p<0.05;
berbeda bermakna dengan kelompok KNo, Kne, KP, D3), (### p<0,05; berbeda bermakna dengan
kelompok KNo, KNe, D1, D2)
Gambar 19. Grafik Rata-rata Jumlah pulau Langerhans pada Tiap Kelompok
perlakuan
54
55
Data diagram batang yang terdapat pada Gambar 19. Menunjukan nilai ratarata jumlah pulau Langerhans pada preparat pankreas per 10 kali lapang
pandang dari masing-masing kelompok. Jumlah rata-rata pulau Langerhans dari yang
paling banyak sampai paling sedikit berturut-turut adalah kelompok kontrol normal,
dosis 50 mg/kgBB, dosis 100 mg/kgBB, dosis 200 mg, kontrol positif dan kontrol
negatif. Analisis uji statistik dilakukan, dimana data tidak terdistribusi normal namun
data homogen sehingga analisis data dilanjutkan dengan analisis uji Kruskal Wallis.
Hasil analisis statistik menunjukan adanya perbedaan bermakna (p 0,05) pada tiap
kelompok. Untuk melihat perbedaan antar kelompok dilanjutkan dengan uji MannWhitney. Analisis statistik dapat dilihat pada lampiran 36.
Hasil uji analisis Mann-Whitney dapat dilihat pada lampiran 37 menunjukan
kelompok kontrol normal berbeda bermakna (p 0,05) dengan kelompok kontrol
negatif. Hal ini menunjukan bahwa penginduksian aloksan dapat menyebabkan
kerusakan pada pankreas dan terjadi penurunan jumlah pulau Langerhas pada
kelompok kontrol negatif. Pada kelompok kontrol normal menunjukan jumlah pulau
Langerhans yang paling banyak. Hal ini dikarenakan kelompok kontrol normal tidak
diinduksi dengan senyawa diabetogenik yaitu aloksan. Pemberian aloksan dapat
menyebabkan diabetes melalui kemampuannya untuk menginduksi pembentukan
ROS (Lenzen, 2008) menyebabkan nekrosa spesifik pada pulau-pulau Langerhans,
memiliki efek sitotoksik pada sel beta pankreas (Wibawa et al, 2013). Sedangkan
untuk kontrol negatif menunjukan jumlah pulau Langerhans yang paling sedikit. Hal
ini disebabkan karena penginduksian senyawa diabetogenik pada hewan uji. Pada
tikus diabetes terjadi inflamsi di pulau Langerhans pankreas akibat dari kehancuran
sel , hal inilah yang menyebabkan penurunan jumlah pulau Langerhans pada
pankreas yang diamati (Masjedi et al, 2013).
Kelompok kontrol normal berbeda bermakna (p 0,05)
dengan kontrol
positif. Kontrol positif belum mampu memperbaiki kerusakan yang terjadi pada
pankreas sehingga tidak terjadi peningkatan jumlah pulau Langerhans hewan uji
yang diabetes menjadi normal. Hal ini dikarenakan mekanisme kerja dari
glibenklamid hanya merangsang sekresi insulin di kelenjar pankreas (Depkes RI,
2005). Pemberian glibenklamid sebagai obat diabetes tidak menunjukan perubahan
55
56
morfologi ataupun peningkatan jumlah pulau Langerhans yang signifikan pada

perlakuan diabetes dengan perlakuan pemberian ekstrak gaharu. Hal ini dikarenakan
pemberian glibenklamid hanya untuk memperbaiki fungsi sel yang memproduksi
insulin tetapi tidak memperbaiki bentuk ataupun morfologi pulau-pulau Langerhans
yang mengandung sel-sel beta. Namun tidak efektif dalam pencegahan kerusakan
organ yang diperantai ROS (Dewanti et al, 2015). Hal ini didukung juga oleh
penelitian yang dilakukan oleh Erejuwa et al (2011), dimana pemberian
glibenklamid pada hewan uji yang mengalami diabetes tidak menunjukan perbaikan
pada pankreas hewan uji. Pada kelompok dosis ekstrak 50, 100, dan 200 mg/kgBB
memberikan perbedaan bermakna (p 0,05) dibandingkan dengan kontrol normal.
Hal ini menunjukan bahwa pemberian ekstrak etanol daun gaharu dengan dosis 50,
100 dan 200 mg/kgBB dapat meningkatkan jumlah pulau Langerhans pada hewan
mengalami diabetes. Akan tetapi belum mampu meningkatkan jumlah pulau
Langerhans pada hewan diabetes menjadi sama dengan jumlah pulau Langerhans
pada kelompok kontrol normal.
Pemberian antioksidan dan komponen senyawa polifenol menunjukkan
dapat menangkap radikal bebas, mengurangi stres oksidatif, menurunkan ekspresi
TNF-. Senyawa fitokimia ternyata mampu memanipulasi dengan berbagai
mekanisme sehingga dapat mengurangi komplikasi diabetes melalui pengurangan
stres oksidatif, ROS dan TNF-. Antioksidan golongan fenol dapat menghambat
proses Maillard. Reaksi Maillard browning terjadi, dimana pada penderita diabetes
AGEs (Advanced Glycation End Products) juga dijumpai pada LDL (Low Density
Lipoprotein) dalam sirkulasi dan lesi aterosklerotik (atheroclerotic lesion).
Pembentukan AGEs diduga berperan dalam kerusakan sel endothelial. Ikatan
glukosa pada gugus amino LDL akan memfasilitasi oksidasi dan pembentukan
aldehid sitotoksin seperti 4-HNE yang dapat memodifikasi apoliprotein B. Produkproduk AGEs juga dapat terbentuk langsung pada apoliprotein B. Pembentukan
AGEs cara lain dengan mengoksidasi glukosa kemudian produk oksidasi bereaksi
dengan protein. Monosakarida dapat dioksidasi dan dikatalisis oleh ion Fe dan Cu
menghasilkan O2*- , H2O2, *OH dan karbonil toksik yang dapat merusak protein
(Widowati, 2008). Karena terhambatnya reaksi Maillard browning maka tidak terjadi
56
57
kerusakan pada protein dan jumlah pulau Langerhans pada ekstrak dosis 50
mg/kgBB pun mendekati dengan jumlah pulau Langerhans pada kelompok kontrol
normal.
Pulau Langerhans adalah mikroorgan endokrin multi hormon dari pankreas,
tampak sebagai kelompok sel-sel berbentuk bulat yang terpendam dalam jaringan
eksokrin pankreas. Pada umumnya pulau Langerhans berdiameter antara 100 200
m dan mengandung beberapa ratus sel. Setiap pulau terdiri dari sel-sel bulat atau
poligonal pucat disusun dalam tumpukan yang dipisahkan oleh jalinan kapiler darah
bertingkap (Junqueira & Carneiro, 2005). Pankreas tikus diabetes yang diinduksi
aloksan pada pengamatan histopatologis menunjukkan terjadi nekrosis dan
degenerasi sel yang cukup parah, dengan banyak terdapat ruang kosong pada pulau
Langerhans. Terjadinya disebabkan oleh adanya induksi aloksan pada tubuh tikus
yang merupakan radikal bebas yang dapat merusak biomakromolekul seperti lipid,
fosfolipid, dan karbohidrat yang merupakan komponen dinding sel, serta DNA yang
berada dalam inti sel. Aktivitas radikal bebas tersebut akan menyebabkan dinding sel
menjadi rusak dan mengalami degenerasi hingga nekrosis dengan sitoplasma yang
pucat dan inti sel yang rusak. Kerusakan sel beta pankreas ditandai dengan
perubahan progresif pada pulau Langerhans, termasuk perubahan deplesi atau
berkurangnya sekretori granul insulin pada sel beta pankreas, lepasnya pertautan sel
pulau Langerhans, dan pergantian sel-sel eksokrin oleh jaringan ikat, fibrosis
(Dewanti et al, 2015).
57
58
Gambar 19. Gambar preparat pankreas masing-masing kelompok. (A) Kelompok

kontrol normal; (B) kelompok kontrol negatif; (C) kelompok kontrol
positif; (D) kelompok ekstrak dosis 50 mg/kgBB; (E) kelompok ekstrak
dosis 100 mg/kgBB; (F) kelompok ekstrak dosis 50 mg/kgBB.
Lingkaran hitam menandakan pulau Langerhans. Perbesaran 100x.
Pada gambar 19 dapat dilihat pada kelompok kontrol normal terlihat bahwa
pulau Langerhans yang ada pada pankreas tidak mengalami kerusakan yang ditandai
dengan tidak banyaknya ruang kosong pada pulau Langerhas. Pulau Langerhans
pada kontrol negatif terdapat ruang kosong yang menandai terjadinya kerusakan
pada pulau Langerhans. Pada dosis 50 dapat terlihat sel pada pulau Langerhans
mendekati bentuk normal, sedangkan dosis 100 mg/kgBB dapat terlihat perbaikan
yang ditandai dengan banyaknya sel-sel yang terdapat pada pulau Langerhans yang
menunjukan adanya perbaikan setelah diinduksi aloksan. Pada dosis 200 mg/kgBB
dapat dilihat bahwa pada pulau Langerhans terdapat ruang kosong yang menandakan
terjadinya kerusakan dan kematian sel. Sama seperti kelompok dosis 200 mg/kgBB
untuk kelompok kontrol positif juga terlihat pulau Langerhans yang mengalami
kerusakan dimana hanya terdapat sedikit sel dalam pulau Langerhans. Pada
kelompok kontrol positif hanya bisa meningkatkan sekresi insulin tanpa
memperbaiki kerusakan sel yang disebabkan oleh ROS (Dewanti et al, 2015).
58
59
BAB V
PENUTUP
5.1
Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian ini adalah sebagai berikut :
1)
Ekstrak etanol daun gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) memiliki aktivitas

terhadap penurunan kadar glukosa pada tes toleransi glukosa oral dengan cara
meningkatkan kemampuan tubuh dalam mengendalikan kadar glukosa darah,
dapat meningkatan kadar glikogen hati dan dapat meningkatan jumlah pulau
Langerhans.
2)
Dosis efektif ekstrak etanol daun gaharu yang digunakan adalah dosis 50
mg/kgBB.
5.2
Saran
Perlunya dilakukan penelitian lanjutan untuk melihat dosis toksik dari ekstrak
daun gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.).
59
60
DAFTAR PUSTAKA
Adeyemi, D. O., O.A. Komolafe, O. S. Adewole & E. M. Obuotor. 2010.
Histomorphological and Morphometric Studies of the Pancreatic Islet Cells
of Diabetic Rats Treated with Extracts of Annona muricata. Folia Morphol,
69 (2): 92-100.
Alfian, R.& H. Susanti. 2012. Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Metanol
Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus sabdariffa Linn) dengan Variasi
Tempat Tumbuh Secara Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah Kefarmasian,
2(1): 73 80.
Almatsier, S. 2001. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. PT. Gramedia Pustaka. Jakarta.
Amalia, I., W.Christijanti & R. S. Iswari. 2013. Peranan Perempuan Penjual Jamu
Gendong dalam Meningkatkan Kehidupan Sosial Ekonomi Keluarga.
UNNES Journal of Life Science 2(1): 110-115.
Arum, Y. P., Supartono & Sudarmin. 2012. Isolasi dan Uji Daya Antimikroba
Ekstrak Daun Kersen (Muntingia calabura). Jurnal MIPA 35 (2): 165-174.
Baradero, M., M.W. Dayrit & Y. Siswadi. 2005. Seri Asuhan Keperawatan : Klien
Gangguan Endokrin. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Bimark, M., R. A. Rahman, F. S.Taip, A. Ganjloo, L. M. Salleh, J. Selamat, A.
Hamid & I. S. M. Zaidul. 2011. Comparison of Different Extraction
Methods for the Extraction of Major Bioactive Flavonoid Compounds from
Spearmint (Mentha spicata L.) Leaves. Food and Bioproducts Processing
(2011), 89: 67-72.
Bloom & Fawcett. 2002. Buku Ajar Histologi, Edisi 12. Penerbit Buku Kedokteran
EGC. Jakarta.
Broker, C. 2009. Ensiklopedia Keperawatan. Penerbit Buku Kedokteran EGC.
Jakarta.
Chaisawangwong, W. & W. Gritsanapan. 2009. Extraction Method for High Free
Radical Scavenging Activity of Siamese neem Tree Flowers.
Songklanakarin Journal of Science and Technology. 31(4): 419-423.
Chasani, M., R. B. Fitriaji & Purwati. 2013. Fraksinasi Ekstrak Metanol Kulit Batang
Ketapang (Terminalia catappa Linn.) Dan Uji Toksisitasnya dengan
Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test). Molekul, 8 (1): 89 100.
Coman, C., O. D. Rugina & C. Socaciu. 2012. Plants and Natural Compounds with
Antidiabetic Action. Not Bot Horti Agrobo 2012, 40(1):314-325.
60
61
Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Cetakan
Pertama. Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Republik Indonesia.
Jakarta.
------------. 2005. Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Diabetes Melitus.
Departemen Kesehatan dan Kesejahteraan Republik Indonesia. Jakarta.
Dewanti, T. W., N. Wijayanti & N. Rachmawanti. 2015. Efek Hipoglikemik Ekstrak
Cincau Hitam (Mesona palustris BL) pada Tikus Wistar Diabetes yang di
Induksi Alloxan. Jurnal Kedokteran Brawijaya, 28 (3): 202-207.
Effendy. 2007. Perspektif Baru Kimia Koordinasi. Bayumedia Publishing. Malang.
Erejuwa, O. O., Sulaiman. S. A., Wahab M. S., Sirajudeen K.N.S., Salleh M.S., &
Gurtu S. 2011. Effect of Glibenclamide alone versus Glibenclamide and
Honey on Oxidative Stress in Pancreas of Streptozotocin-Induced Diabetic
Rats. International Journal of Applied Research in Natural Products, 4(2):
1-10.
Fessenden & Fessenden. 1986. Kimia Organik, Edisi ketiga. Erlangga. Jakarta.
Fitriani, S. W. 2011. Pengaruh Pemberian Sari Buah Mengkudu (Morinda citrifolia
Linn.) terhadap Glibenklamid Dalam Menurunkan Kadar Glukosa Darah
Tikus Putih Jantan yang dibuat Diabetes. Skripsi Program Pasca Sarjana,
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Indonesia,
Jakarta.
Gandjar, I. G., & A. Rohman. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar.
Yogyakarta.
Gomathi, D., G. Ravikumar, M. Kalaiselvi, K. Devaki & C. Uma. 2013. Efficacy Of
Evolvulus Alsinoides (L.) L. On Insulin And Antioxidants Activity In
Pancreas Of Streptozotocin Induced Diabetic Rats. Journal of Diabetes &
Metabolic Disorders 2013, 12(39) : 1-6.
Gritter, R.J., J.M. Bobbit & A.E. Schawarting. 1991. Pengantar Kromatografi. ITB.
Bandung.
Gropper, S. S., J. L. Smith & J. L. Groof. 2005. Advanced Nutrition and Human
Metabolism. Thompson Wadsworth. USA.
Harahap, A. S. & Rahmatin B., Herman & E. Yerizel. 2015. Gambaran Glukosa
Darah Setelah Latihan Fisik pada Tikus Wistar Diabetes Melitus yang
Diinduksi Aloksan. Jurnal Kesehatan Andalas, 4(1): 23-29.
61
62
Hayati, E. K., A. G. Fasyah & L. Saadah. 2010. Fraksinasi dan Identifikasi Senyawa
Tanin pada Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.). Jurnal Kimia,4
(2): 193-200.
Hatta, U., Rusdi & R. Arief. Penggunaan Tepung Duckweed (Lemnaceae spp)
Dalam Ransum Terhadap Berat Relatif Hati dan Pankreas Ayam Pedaging.
J. Agroland 16(1): 85-90.
Hernani & R. Nurdjanah. 2009. Aspek Pengeringan dalam Mempertahankan
Kandungan Metabolit Sekunder pada Tanaman Obat. Perkembangan
Teknologi TRO, 21 (2): 33-39.
IDF. 2013. IDF Diabetes Atlas, Sixth edition. International Diabetes Federation.
Europe.
Irianti, T., A. Puspitasari & E. Suryani. 2011. Aktivitas Penangkapan Radikal 2,2Difenil-1 Pikrilhidrazil Oleh Ekstrak Etanolik Batang Brotowali (Tinospora
crispa (L.) Miers) dan Fraksi-Fraksinya. Majalah Obat Tradisional, 16(3):
138 144.
Islam, MD. A., M. A. Akhtar, MD. R. I. Khan, MD. S. Hossain, A. H. M. K. Alam,
M. I. I. Wahed, MD. S. Amran, B. M. Rahman & M. Ahmed. 2009. Oral
Glucose Tolerance Tes (Ogtt) In Normal Control And Glucose Induced
Hyperglycemic Rats With Coccinia Cordifolia L. And Catharanthus Roseus
L. Pak. J. Pharm. Sci., 22(4) : 402-404.
Jadhav, R. & G. Puchchakayala. 2012. Hypoglycemic and Antidiabetic Activity of
Flavonoids: Boswellic Acid, Ellagic Acid, Quercetin, Rutin on
Streptozotocin Nicotinamide Induced Type 2 Diabetic Rats. International
Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 4 (2): 251-256.
James, J., C. Baker, & H. Swain. 2002. Prinsip-Prinsip Sains untuk keperawatan.
Penerbit Erlangga. Surabaya.
Jamshidi, M., E. Shabani, Z. Hashemi & M. A. Ebrahimzadeh. 2014. Evaluation of
three methods for the extraction of antioxidants from leaf and aerial parts of
Lythrum salicaria L. (Lythraceae). International Food Research Journal,
21(2): 783-788.
Juncqueira, L dan Carneiro. 2005. Histologi Dasar. EGC. Jakarta.
Jung, J. Y., Y. Lim, M. S. Moon, J. Y. Kim & O. Kwon. 2011. Onion Peel Extracts
Ameliorate Hyperglycemia and Insulin Resistance in High Fat Diet/
Streptozotocin-Induced Diabetic Rats. Nutrition & Metabolism, 8(18) : 1-8.
62
63
Khalil, A. S., Rahim, A. A., Taha, K. K. & abdallah, K. B. 2013. Characterization of

Methanolic Extracts of Agarwood Leaves. Journal of Applied and
Industrial Sciences 2013, 1 (3): 78-88.
Kiernan, J.A. 1990. Histological &Histochemical Methods: Theory & Practice. 2nd
ed. Pergamon Press. England.
Krisyanella, Dachriyanus, dan Marlina. 2012. Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak
serta Isolasi Senyawa Aktif Antibakteri dari Daun Karangmunting
(Rhodomyrtus tomentosa (W.Ait) Hassk). Artikel Program Master.
Universitas Andalas, Padang.
Kumar, S., V. Kumar & O. Prakash. 2011. Antidiabetic, Hypolipidemic and
Histopathological Analysis of Dillenia indica (L.) Leaves Extract on
Alloxan Induced Diabetic Rats. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine
(2011)347-352.
Kumar, V., F. Anwar, D. Ahmed, A. Verma, A. Ahmed, Z. A. Damanhouri, V.
Mishra, P. W. Ramteke, P. C. Bhatt & M. Muieeb. 2014. Paederia foetida
Linn. leaf extract: an antihyperlipidemic, antihyperglycaemic and
antioxidant activity. BMC Complementary and Alternative Medicine 2014,
14(76) : 1-16.
Kumari. M & Jain S. 2012. Tannins: an Antinutrient with Positive Effect to Manage
Diabetes. Research Journal of Recent Science, 1 (12): 70-73.
Lenze, S. 2008. The Mechanisms of Alloxan- and Streptozotocin-Induced Diabetes.
Diabetologia (2008) 51: 216-226.
Leroit, D., S. I. Taylor & J. M. Olefsky. 2004. Diabetes Mellitus : A Fundamental
and Clinical Text. Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia.
Lidia. 2013. Pengaruh Infusa Buah Mengkudu (Morinda Citrifolia, L.) terhadap
Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar yang Dibebani
Glukosa. Jurnal Penelitian Sains, 16(1): 14-20.
Liu, X., J.K. Kim, Y. li, J. Li, F. Liu & X. Chen. 2005. Tannic Acid Stimulates
Glucose Transport and Inhibits Adipocyte Differentiation in 3T3-L1 Cells.
The Journal of Nutrition, 2005 : 165-170.
Malangngi, L. P., M. S. Sangi & J. J. E. Paendong. 2012. Penentuan Kandungan
Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea
americana Mill.). Jurnal MIPA UNSRAT Online, 1(1): 5-10.
Maniyer, Y. A., M. S. Umamageswari & T. M. Karthikeyan. 2012. Evaluation of
Antihyperglycemic Activity of Aqueous Extract of Leaves of Solanum
63
64
Nigrum in Alloxan Induced Diabetic Rats. International Journal of

Pharmacy and Biological Sciences, 2 (4): 312-319.
Marks, D. B., A. D. Marks & C. M. Smith. 2000. Biokimia Kedokteran Dasar :
Sebuah Pendekatan Klinis. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.
Marliana, E. 2007. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dari Batang Spatholobus
ferrugineus (Zoll & Moritzi) Benth yang Berfungsi Sebagai Antioksidan.
Jurnal Penelitian MIPA. 1(1): 23-29.
Marliana, E. 2007. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Batang Spatholobus
ferrugineus (Zoll & Moritzi) Benth yang Berfungsi Sebagai Antioksidan.
Jurnal Penelitian MIPA, 1 (1): 23-29.
Masjedi, F., A. Gol & S. Dabiri. 2013. Preventive Effect of Garlic (Allium sativum
L.) on Serum Biochemical Factors and Histopathology of Pancreas and
Liver in Streptozotocin- Induced Diabetic Rats. Iranian Journal of
Pharmaceutical Research (2013), 12 (3): 325-338.
Matthew, S., D. Singh, S. Jaiswal, M. K. B. Jayakar & D. Bhowmik. 2013.
Antidiabetic Activity of Kalanchoe pinnata (LAM.) Pers In Alloxan
Induced Diabetic Rats. Journal of Chemical and Pharmaceutical Sciences.
6(1): 1-7.
Mega, I. M., & D. A. Swastini. 2010. Screening Fitokimia Dan Aktivitas Antiradikal
Bebas Ekstrak Metanol Daun Gaharu (Gyrinops versteegii). Jurnal Kimia,
4 (2) : 187-192.
Mulyani, S. & T. Laksana. 2011. Analisis Flavonoid dan Tannin Dengan Metoda
Mikroskopi-mikrokimiawi. Majalah Obat Tradisional, 16(3): 109 114.
Nobre, C. P., F. N. Raffin & T. F. Moura. 2005. Standardization of Extracts from
Momordica charantia L. (Cucurbitaceae) by Total Flavonoids Content
Determination. Acta Farmaceutica Bonaerense. 24(4): 562-566.
Octaviani, T., Any G. & Hari S. 2014. Penetapan Kadar -Karoten pada Beberapa
Jenis Cabe (Genus Capsicum) dengan Metode Spektrofotometri Tampak.
Pharmaciana, 4 (2): 101-109.
Pacini, G., B. Omar & B. Ahren. 2013. Methods and Models for Metabolic
Assessment in Mice. Journal of Diabetes Research. Article ID 986906.
Pandey, A. & S. Tripathi. 2014. Concept of Standardization, Extraction and pre
Phytocemical Screening Strategies for Herbal Drug. Journal of
Pharmacognosy and Phytochemistry 2014, 2 (5): 115-119.
64
65
Pasaribu, F., P. Sitorus & S. Bahri. 2012. Uji Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis
(Garcinia mangostana L.) Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah.
Journal of Pharmaceutics and Pharmacology, 2012. 1 (1): 1-8.
Pertiwi, A. P., L. mustika E. Mothiek & Yusella B. P. 2012. Penentuan Kandungan
Kimia dan Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Daun Dadangkak (Hydrolea
spinosa L.) Tumbuhan Rawa Asal Kalimantan Selatan. Prestasi, 1(2): 118126.
Perwita, F. A. 2011. Teknologi Ekstraksi Daun Ungu (Graptophyllum pictum) dalam
Etanol 70% dengan metode Perkolasi. skripsi, Universitas Sebelas Maret.
Surakarta.
Phillips, P.J. 2012. Oral Glucosa Tolerance Tesing. Reprinted from Australian
Family Physician, 41(6): 391-393.
Prameswari, O. M., & S. B. Widjanarko. 2014. Uji Efek Ekstrak Air Daun Pandan
Wangi Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Dan Histopatologi Tikus
Diabetes Melitus. Jurnal Pangan dan Agroindustri, 2(2) : 16-27.
Pranakhon, R., P. Pannangpetch & C. Aromdee. 2011. Antihyperglycemic Activity
of Agarwood Leaf Extracts in STZ-Induced Diabetic Rats and Glucose
Uptake Enhancement activity in rat adipocytes. Songklanakarin Journal of
Science and Technology. 33(4): 405-410.
Prasetyo, P. H. 2006. Penentuan Ion Logam Cr Dalam Air Tangki Reaktor
Menggunakan Metode Spektrofotometri Uv-Vis. Skripsi. Universitas
Sebelas Maret. Surakarta.
Prastiwati, R., W. S. Rahayu & D. Hartanti. 2010. Perbandingan Daya Antioksidan
Ekstrak Metanol Daun Tembakau (Nicotiana tabacum L) dengan Rutin
terhadap Radikal Bebas 1,1-Diphenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH). Pharmacy
7(1): 1-10.
Putranto, R., & Mudjadid, E. 2003. Aspek Psikosomatik Pasien Diabetes Mellitus.
Fakultas Kedokteran Universitas Katolik Indonesia Atmajaya. Jakarta.
Raja, L. L. 2009. Uji Efek Ekstrak Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahagon Jacq)
terhadap penurunan Kadar Gula Darah Tikus Putih. Skripsi. Universitas
Sumatra Utara. Medan.
Reinauer H, Philip D. H., Ariyur S. K., Claus C.H. 2002. Labolatory Diagnosis and
Monitoring of Diabetes Melitus. Geneva:WHO.
Ridwan, A., R. T. Astrian & A. Barlian. 2012. Pengukuran Efek Antidiabetes
Polifenol (Polyphenon 60 ) Berdasarkan Kadar Glukosa Darah dan
65
66
Histologi Pankreas Mencit (Mus musculus L.) S.W. Jantan yang

Dikondisikan Diabetes Melitus. Jurnal Matematika & Sains, Agustus 2012,
17 (2) : 1-5.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi Edisi VI. ITB. Bandung.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. ITB. Bandung.
Saadah, L. 2010. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Tanin dari Daun Belimbing
Wuluh (Averrhoa bilimbi L.). Skripsi. Universitas Islam Negeri Malang.
Malang.
Salisbury, F. B & C.W. Rose. 1995. Plant Physiology. Wadsworth Publishing
Company. California.
Sani, R. N., F. C. Nisa, R. D. Andriani & J. M. Maligan. 2014. Analisis Rendemen
dan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Laut Tetraselmis chuii.
Jurnal Pangan dan Agroindustri, 2 (2): 121-126.
Santi, D. A. 2013. Efek Jus Buah Jambu Biji( Psidium guajava Linn.) Terhadap
gangguan Toleransi Glukosa pada Tikus Putih Jantan Akibat Efek Samping
Deksametason. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya, 2 (1): 119.
Santosa,I. N. M. A., I. A. R. A. Asih, & A. A. I. A. M. Laksmiwati. 2013. Isolasi
Dan Identifikasi Senyawa Toksik Pada Ekstrak Metanol Daun Gaharu
(Gyrinops versteegii). Jurnal Kimia, 7 (2): 163-171.
Sastrohamidjojo, H. 1992. kromatografi. Liberty. Yogyakarta.
Setiono, M & Avriliani, D. A. 2013. Penentuan Jenis Solven dan pH Optimum pada
Analisis Senyawa Delphinidin dalam Kelopak Bunga Rosela dengan
MetodeSpektrofotometri UV-Vis. Jurnal Teknologi Kimia dan Industri
2013, 2 (2): 91-96.
Setyowati, W. A. E., S. R. D. Ariani, Ashadi, B. Mulya & C. P. Rahmawati. 2014.
Skrining Fitokimia dan Identifikasi Komponen Utama Ekstrak Metanol
Daun Durian (Durio zibethinus Murr.) Varietas Petruk. Seminar Nasional
Kimia dan Pendidikan Kimia VI, PMIPA FKIP UNS. Surakarta.
Siadi, K. 2012. Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropha curcas) Sebagai
Biopestisida yang Efektif dengan Penambahan Larutan NaCl. Jurnal MIPA
35 (1): 76-83.
66
67
Sirait, R. A. 2009. Penerapan Metode Spektrofotometri Ultraviolet pada Penetapan

Kadar Nifedi Dalam Sediaan Tablet. Skripsi. Universitas Sumatra Utara.
Medan.
Sizer,F. S & E. Whitney. 2007. Nutrition Concepts and Controversies. Thompson
Wadsworth. USA
Suarsana, I. N., B. P. Priosoeryanto, T. Wresdiyati & M.Bintang. 2010. Sintesis
Glikogen Hati dan Otot pada Tikus Diabetes yang Diberi Ekstrak Tempe.
Jurnal Veteriner,11(3) : 190-195.
Subroto M. A. 2006. Ramuan Herbal untuk Diabetes Melitus. Penebar Swadaya.
Jakarta.
Suhendi, A., L. R. Sjahid & D. Hanwar. 2011. Isolasi dan Identifikasi Flavonoid Dari
Daun Dewandaru (Eugenia uniflora L.). Pharmacon, 12 (2): 73-81.
Sumarna, Y. 2002. Budidaya Gaharu. Seri Agribisnis. PT. Gramedia. Jakarta.
Sumitra, V. Chandra, Mital J & Kaneria. 2012. Optimization of Conditions for the
Extraction of Antioxidants from Leaves of Syzygium cumini L. Using
Different Solvents. Food Anal, Methods (2012), 5: 332-338.
Syed, S & H. Rizvi. 2010. Separation, Extraction and Concentration processes in
the food, beverage and nutraceutical industries. Woodhead Publishing
Limited.Philadelphia.
Szkudelski, T. 2001. The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in B
Cells of the Rat Pancreas. Physiol. Res. 50 : 536-546.
Tarigan K. 2004. Profil Pengusahaan (Budidaya) Gaharu. Pusat Bina Penyuluhan
Kehutanan, Departemen Kehutanan. Jakarta
Tiwari, P., B. Kumar, M. Kaur, G. Kaur & H. Kaur. 2011. Phytochemical screening
and Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia, 1 (1) :
98-106.
Tjay, T. H., dan K. Rahardja. 2007. Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan dan
Efek-Efek Sampingnya, Edisi Keenam. PT. Elex Media Komputindo.
Jakarta.
Utami,E. T., R. Fitrianti, Mahriani & S. Fajariyah. 2009. Efek Kondisi
Hiperglikemik terhadap Struktur Ovarium dan Siklus Estrus Mencit (Mus
musculus L). Jurnal Ilmu dasar 10(2): 219-224.
Wagner, H., S. Bladt & EM. Zaganiski. 1996. Plant drug analysis, 2nd Edition.
Spinger Verlag. Berlin.
67
68
Wibawa, P. A. S., M. S. Antara & O. Dharmayuda. 2013. Identifikasi Senyawa

Kimia Ekstrak Buah Naga Putih dan Pengaruhnya Terhadap Glukosa Darah
Tikus Diabetes. Indonesia Medicus Veterinus, 2013 2(2) : 151 161.
Widowati, W. 2008. Peran Antioksidan sebagai Antidiabetes. JKM, 7(2): 1-11.
Wijayakusuma H. 2004. Atasi Diabetes Melitus dengan Tanaman Obat. Puspa Sehat.
Jakarta.
Yadaf, R. N. S. & Munin. A. 2011. Phytocemical Analysis of Some Medicinal
Plants. Journal of Phytology2011, 3 (12): 10-14.
Yunita, A. Irwan & R. Nurmasari. 2009. Skrining Fitokimia Daun Tumbuhan
Katimaha (Kleinhovia hospital L.). Sains dan Terapan Kimia, 3 (2): 112
123.
Yunita, F. 2014. Pengaruh Maserat Lidah Buaya (Aloe Vera) Terhadap Histologi
Pankreas Mencit (Mus musculus Swis Webster) Jantan yang Diinduksi
Aloksan. Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, UPI.
Jakarta.
68
69
LAMPIRAN
69
70
Lampiran 1. Surat Determinasi
70
71
Lampiran 2. Form Ethical Clearance
71
72
Lampiran 3. Sertifikat Aloksan
72
73
Lampiran 4. Sertifikat Hewan Uji
73
74
Lampiran 5. Proses ekstraksi daun gaharu
D
C
E
F
Keterangan :
A.
B.
C.
D.
E.
F.
Menimbang serbuk
Ekstraksi dengan etanol 70%
Penyaringan ekstrak cair
Penguapan dengan rotary evaporator
Penguapan dengan waterbath
Ekstrak Kering daun gaharu
74
75
Lampiran 6. Perhitungan rendemen ekstrak etanol daun gaharu

1. Dik : Bobot serbuk kering daun gaharu = 100 gram
Bobot ekstrak 1 = 8.965 gram
Dit : Rendemen ekstrak
Jawaban :
Rendemen 1
=
Rendemen 2
Rendemen 3
Rendemen 4
Total rendemen
= R1 + R2 + R3 + R4
=
= 9.0295 %
75
76
Lampiran 7. Hasil uji Hasil Pengujian Skreening Fitokimia Ekstrak Etanol

Daun Gaharu
No
Uji
1.
Flavonoid
Gambar
Hasil
Ket.
(+) Warna larutan kuning intens dan

warnanya akan hilang apabila
ditambahkan asam encer
2.
Alkaloid
- reagen Mayer
(-)
Terdapat endapan kuning
- reagen Dragendroff
(-)
Terdapat endapan coklat

kemerahan
3.
Tanin
4.
Terpenoid
5.
Fenolik
(+) Terbentuk endapan putih
(-)
Terbentuk cincin coklat
(+) Warna larutan hitam kebiruan
76
77
Lampiran 8. Hasil Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu

Dengan Kromatografi Lapis Tipis Dengan Reaksi Penyemprot
No
Uji
1.
Flavonoid
Pereaksi
Fase Gerak
Uap ammonia Butanol Asam asetat

glasial Air (4 :1:5)
Gambar
Hasil
Ket.
Warna kuning
atau kuning- (+)
coklat
2.
Alkaloid
Dragendorff
Etil asetat Metanol

Air (6:4:2)
timbul warna
(-)
coklat atau
jingga
3.
Tanin
FeCl3 1%
Air Metanol
Kloroform (10:35:65)
Warna biru tua

atau hijau
(+)
kehitaman
4.
Terpenoid
Anisaldehid
Asam Sulfat
n-heksan Etil asetat

(4:1)
Warna ungumerah atau (-)

ungu
77
78
No
Uji
Pereaksi
Fase Gerak
5.
Polifenol
FeCl3 10%
Kloroform - etil asetat asam formiat (0,5 : 9

: 0,5)
78
Gambar
Hasil
Warna hitam
Ket.
(+)
79
Lampiran 9. Hasil orientasi dosis aloksan

kelompok
Replikasi
Kadar Gula Darah Puasa (mg/dL)

Sebelum induksi
Sesudah induksi
103
89
96
108
rata-rata
99.5
98.5
SEM
2.474873734
6.717514421
105
120
102
98
rata-rata
103.5
109
SEM
1.060660172
7.778174593
71
129
75
105
rata-rata
73
117
SEM
1.414213562
8.485281374
119
228
99
382
rata-rata
109
305
SEM
7.071067812
54.44722215
114
439
110
238
rata-rata
112
338.5
SEM
1.414213562
71.06423151
101
466
99
545
100
505.5
KN
D1
D2
D3
D4
D5
rata-rata
0.707106781
27.93071786
100
>600
110
>600
SEM
D6
Rata-rata
105
SEM
3.535533906
Keterangan: KN
= Kelompok kontrol Normal (diinduksi NaCl 0,9%)

D1 = Kelompok dosis 1 (diinduksi aloksan monohidrat dengan dosis 100 mg/KgBB)
79
80
Lampiran 10. Hasil orientasi dosis ekstrak dan perhitungan persentase

penurunan kadar glukosa darah
Dosis
NaCMC 0,5%
rata-rata
SEM
Ekstrak dosis 10
mg/kgBB
rata-rata
SEM
Ekstrak dosis 100
mg/kgBB
rata-rata
SEM
Ekstrak dosis 1000
mg/kgBB
rata-rata
SEM
Replika
si
Kadar Gula Darah (mg/dL)

Persentas
e
Sesudah
Sesudah
Penuruna
induksi
pemberian ekstrak
n (%)
484
391
93
484
391
93
1
2
1
2
1
2
0
356
295
325,5
21,57
545
466
505.5
27,93
599
587
593
4,24
0
62
104
83
14,85
142
146
144
1,41
178
135
156.5
15.20
0
82,58
64,75
73,665
6,30
73,95
68,67
71,31
1,87
70,28
77
73,64
2,38
Perhitungan persentase penurunan kadar glukosa darah pada kelompok ekstrak dosis
10 mg/kgBB
Dik : KGD sesudah induksi
= 356 mg/dL
KGD sesudah pemberian ekstrak
= 62 mg/dL
Dit : % Penurunan
jawaban :
% Penurunan =
% Penurunan =
% Penurunan = 82,58 %
80
81
Lampiran 11. Pembuatan larutan penginduksi

Dik : Dosis aloksan
BB tikus
= 150 mg/kgBB
= 260 gr
Larutan stok dibuat 5 mL dengan volume pemberian maksimal 0,5 mL

Dit :
jawaban :
Dosis =
Larutan stok dibuat 5 mL, sehingga konsentrasi larutan stok :

= 5 mL/ 0,5 mL 39 mg
= 390 mg/ 5 mL
Jadi larutan stok dibuat dengan melarutkan 390 mg aloksan dalam 5 mL NaCl
0,9%
81
82
Lampiran 12. Pembuatan larutan stok ekstrak kering daun gaharu

Dosis yang digunakan adalah 50, 100 dan 200 mg/kgBB, dibuat sebanyak 10 mL
dengan volume pemverian maksimal 1 mL
1)
Dosis 50 mg/kgBB
Dosis tikus = 50 mg/ 1000 gr 260 = 13 mg untuk 260 gr tikus
larutan stok dibuat 10 mL, sehingga konsentrasi larutan stok :
= 10 mL/1 mL 13 mg = 130 mg/ 10 mL
Jadi, larutan stok dibuat dengan melarutkan 130 mg ekstrak kering daun gaharu
dalam 10 mL Na-CMC 0,5%
2)
Dosis 100 mg/kgBB

= 10 mL/1 mL 26 mg = 260 mg/ 10 mL
3)
Dosis 200 mg/kgBB

= 10 mL/1 mL 52 mg = 520 mg/ 10 mL
82
83
Lampiran 13. Skema pengujian aktivitas antidiabet
Tahapan pengujian aktivitas pada penelitian disajikan pada Gambar 5 berikut ini:
Hewan Uji
Induksi Aloksan
Tidak Induksi Aloksan
Kelompok
Normal
Kelompok
Kontrol
Positif
Kelompok
Kontrol
Negatif
NaCMC 0,5%
Glibenklamid
2,5 mg/kg BB
NaCMC
0,5%
Kelompok Uji
Kelompok Uji
Kelompok Uji
Ekstrak Daun
Gaharu dosis
50 mg/kgBB
Ekstrak Daun
Gaharu dosis
100 mg/kgBB
Ekstrak Daun
Gaharu dosis
200 mg/kgBB
Diberikan perlakuan dari hari ke 0 28 hari

Pada hari yang ke 23 dilakukan tes toleransi
glukosa oral
Pada hari ke-28 diambil organ dalamnya
Pankreas
Hati
Dilakukan pemisahan glikogen dari hati
Diukur absorbansinya dengan
spektrofotometer pada panjang
gelombang 490 nm
Diukur kadar glikogen
Diambil preparat pankreas

Dilakukan pewarnaan HE
Diamati di bawah mikroskop

Hasil
Hasil
83
84
Lampiran 14. Dokumentasi uji aktivitas antidiabet
Keterangan :
A.
B.
C.
D.
E.
F.
Menimbang aloksan
Menginduksi tikus melalui rute i.p
Pemeriksaan kadar glukosa darah
Penimbangan ekstrak kering daun gaharu
Pemberian ekstrak gaharu melalui rute oral
Pembedahan pada tikus
84
85
Lampiran 15. Pengamatan kadar glukosa darah pada TTGO

Kelompok
Kontrol
Normal
Kontrol
Negatif
Kontrol
Positif
Dosis 50
mg/kgBB
Dosis 100
mg/kgBB
Dosis 200
mg/kgBB
Replikasi
Kadar glukosa darah (mg/dL) pada menit keAwal
30
60
90
120
150
109
110
219
201
120
94
99
110
118
210
187
112
110
90
108
109
125
177
117
106
98
115
116
203
190
105
99
88
295
494
599
595
598
599
597
287
498
592
596
599
599
597
275
495
599
599
599
593
598
298
497
599
595
598
599
597
162
170
294
345
240
170
160
120
172
315
297
161
191
87
156
140
290
294
143
218
146
139
161
303
271
258
184
166
136
167
208
224
153
129
126
176
178
414
311
240
169
181
146
158
395
276
230
162
96
162
198
485
309
266
192
138
156
179
383
241
252
111
76
176
177
382
378
292
149
115
152
231
408
366
260
133
128
162
153
390
337
253
214
147
199
308
461
420
358
273
257
180
325
433
354
306
317
304
202
353
479
484
374
316
318
208
387
499
496
427
399
386
85
86
Lampiran 16. Hasil rata-rata SEM kadar glukosa darah pada TTGO
Kadar glukosa darah (mg/dL) (rata-rata SEM) pada menit ke-
Kelompok
30
60
90
120
150
Kontrol Normal
113.252.21
189.2521.67
188.754.94
113.53.28
102.257.12
93.752.78
Kontrol Negatif
4960.91
597.251.75
596.250.95
598.50.29
597.51.5
597.250.25
Kontrol Positif
160.757.32
300.55.55
301.7515.54
200.528.58
190.7510.08
139.7518.08
Dosis 50
mg/kgBB
Dosis 100
mg/kgBB
Dosis 220
mg/kgBB
175.258.62
375.559.09
28020.32
222.2524.29
16313.02
135.2517.62
18516.43
390.756.02
330.531.05
264.259.42
151.7522.16
116.515.01
343.2517.28
46814.01
438.532.38
366.2524.91
326.2526.33
316.2526.69
86
87
Lampiran 17. Persentase kadar glukosa darah pada TTGO

Kelompok
Kontrol
Normal
Kontrol
Negatif
Kontrol
Positif
Dosis 50
mg/kgBB
Dosis 100
mg/kgBB
Dosis 200
mg/kgBB
Replikasi
Persentase Kadar Glukosa Darah (%) pada menit ke0
30
60
90
120
150
100.917
200.917
184.404
110.092
86.2385
90.8257
107.273
190.909
170
101.818
100
81.8182
100.926
115.741
163.889
108.333
98.1481
90.7407
100.87
176.522
165.217
91.3043
86.087
76.5217
167.458
203.051
201.695
202.712
203.051
202.373
173.519
206.272
207.666
208.711
208.711
208.014
180
217.818
217.818
217.818
215.636
217.455
166.779
201.007
199.664
200.671
201.007
200.336
104.938
181.481
212.963
148.148
104.938
98.7654
143.333
262.5
247.5
134.167
159.167
72.5
89.7436
185.897
188.462
91.6667
139.744
93.5897
115.827
217.986
194.964
185.612
132.374
119.424
114.384
142.466
153.425
104.795
88.3562
86.3014
101.136
235.227
176.705
136.364
96.0227
102.841
108.219
270.548
189.041
157.534
110.959
65.7534
122.222
299.383
190.741
164.198
118.519
85.1852
114.744
245.513
154.487
161.538
71.1538
48.7179
100.568
217.045
214.773
165.909
84.6591
65.3409
151.974
268.421
240.789
171.053
87.5
84.2105
94.4444
240.741
208.025
156.173
132.099
90.7407
154.774
231.658
211.055
179.899
137.186
129.146
180.556
240.556
196.667
170
176.111
168.889
174.752
237.129
239.604
185.149
156.436
157.426
186.058
239.904
238.462
205.288
191.827
185.577
87
88
Lampiran 18. Hasil Persentase rata-rata kadar glukosa darah SEM

Kelompok
Persentase Kadar Glukosa Darah (%) pada menit ke- (Mean SEM)
0
30
60
90
120
150
Kontrol
Normal
102. 49
1.59
171.02
19.09
170.88
4.69
102.89
4.25
92.618
3.75
84.98
3.52
Kontrol
Negatif
171.94
3.08
207.04
3.75
206.71
4.07
207.48
38.5
207.10
3.78
207.04
3.83
Kontrol Positif
113.46
11.30
211.97
18.71
210.97
13.23
139.89
19.40
134.06
11.23
96.07
9.64
Dosis 50
mg/kgBB
111.94
4.49
236.91
34.10
177.48
8.61
140.72
13.37
103.46
6.87
85.02
7.59
Dosis 100
mg/kgBB
115.43
12.90
242.93
10.53
204.52
18.11
163.67
3.17
93.85
13.24
72.25
9.52
Dosis 200
mg/kgBB
174.04
6.82
273.31
2.026
221.45
10.57
185.08
7.43
165.39
11.87
160.26
11.87
88
89
Lampiran 19. AUC tiap kelompok

Kelompok
Replikasi
Kontrol Normal
1
2
3
4
rata-rata
SEM
Kontrol Negatif
rata-rata
SEM
Kontrol Positif
rata-rata
SEM
Dosis 50mg/kgBB
rata-rata
SEM
Dosis 100mg/kgBB
rata-rata
SEM
Dosis 200mg/kgBB
rata-rata
SEM
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
AUC tiap kelompok pada menit ke- (gr.min/dL)

0-30
4.52752
4.47273
3.25
4.16087
4.10278
0.2955
5.55763
5.69686
5.96727
5.51678
5.68464
0.10179
4.2963
6.0875
4.13462
5.00719
4.8814
0.44446
3.85274
5.04545
5.68151
6.32407
5.22594
0.52692
5.40385
4.7642
6.30592
5.02778
5.37544
0.33678
5.79648
6.31667
6.17822
6.38942
6.1702
0.13205
30-60
5.77982
5.41364
4.19444
5.12609
5.1285
0.33887
6.07119
6.20906
6.53455
6.01007
6.20621
0.11709
5.91667
7.65
5.61538
6.19424
6.34407
0.45107
4.43836
6.17898
6.89384
7.35185
6.21576
0.63973
6
6.47727
7.63816
6.73148
6.71173
0.34402
6.6407
6.55833
7.15099
7.17548
6.88138
0.16367
89
60-90
4.41743
4.07727
4.08333
3.84783
4.10647
0.11725
6.0661
6.24564
6.53455
6.00503
6.21283
0.11877
5.41667
5.725
4.20192
5.70863
5.26306
0.36073
3.87329
4.69602
5.19863
5.32407
4.773
0.32917
4.74038
5.71023
6.17763
5.46296
5.5228
0.29996
5.86432
5.5
6.37129
6.65625
6.09796
0.25796
90-120
2.94495
3.02727
3.09722
2.66087
2.93258
0.09577
6.08644
6.26132
6.50182
6.02517
6.21869
0.10682
3.7963
4.4
3.47115
4.76978
4.10931
0.2924
2.89726
3.4858
4.0274
4.24074
3.6628
0.3006
3.49038
3.75852
3.87829
4.32407
3.86282
0.17382
4.75628
5.19167
5.12376
5.95673
5.25711
0.25205
120-150
2.65596
2.72727
2.83333
2.43913
2.66392
0.08332
6.08136
6.25087
6.49636
6.02013
6.21218
0.10656
3.05556
3.475
3.5
3.77698
3.45188
0.14878
2.61986
2.98295
2.65068
3.05556
2.82726
0.11201
1.79808
2.25
2.57566
3.34259
2.49158
0.3254
3.99497
5.175
4.70792
5.66106
4.88474
0.35471
total
AUC
20.3257
19.7182
17.4583
18.2348
18.9342
0.65943
29.8627
30.6638
32.0345
29.5772
30.5346
0.55035
22.4815
27.3375
20.9231
25.4568
24.0497
1.44409
17.6815
22.3892
24.4521
26.2963
22.7048
1.85483
21.4327
22.9602
26.5757
24.8889
23.9644
1.12143
27.0528
28.7417
29.5322
31.8389
29.2914
0.99422
90
Lampiran 20. Hasil AUC total (rata-rata SEM) tiap kelompok

Kelompok
Total AUC (gr.min/dL)
Kontrol Normal
18.63 0.659
Kontrol Negatif
30.35 0.55
Kontrol Positif
24.05 1.444
Dosis 50mg/kgBB
22.7 1.855
Dosis 100mg/kgBB
23.96 1.121
Dosis 200mg/kgBB
29.29 0.994
Lampiran 21. Contoh perhitungan persentasi kadar glukosa darah dan AUC
a.
Perhitungan persentasi kadar glukosa darah terhadap kadar awal

Rumus:
Keterangan :
Cn
= kadar gula darah pada waktu tertentu
C0
= kadar glukosa awal

Pn
= persentase kadar glukosa darah pada waktu tertentu terhadap kadar

glukosa awal
1) Dik : data kelompok kontrol normal menit ke-30

Cn
= 219 mg/dL
C0
= 109 mg/mgdL
Dit : Pn = ?
Jawab:
2) Dik : data kelompok kontrol negatif menit ke-30

Cn
= 599 mg/dL
C0
= 295 mg/mgdL
Dit : Pn = ?
Jawab:
90
91
b.
Perhitungan AUC dilakukan dengan rumus trapezium untuk masing-masing

perlakuan
Rumus :
Keterangan :
t1 = waktu penelitian, tindakan sebelum n ( menit)
tn = waktu penelitian, tindakan n (menit)
P1

glukosa awal, tindakan sebelum n
Pn

glukosa awal, tindakan n
AUC = Area Under Curve/ daerah dibawah kurva
1) Dik : data kelompok kontrol negatif menit ke- 0 dan 30

t1 = 0 menit
tn = 30 menit
P1
= 167.458
Pn
= 203.051
Dit : Pn = ?
Jawab:
= 5557.63 mg.min/dL = 5.55763 gr.min/dL
2) Dik : data kelompok kontrol normal menit ke-0 dan 30
t1 = 0 menit
tn = 30 menit
P1 = 100.917
Pn = 200.917
Dit : Pn = ?
Jawab:
= 4527.52 mg.min/dL = 4.52752 gr.min/dL
91
92
Lampiran 22. Analisis statistik data rata-rata AUC total pada TTGO
a. Uji Normalitas
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova
kelompok
Statistic
df
Shapiro-Wilk
Sig.
Statistic
df
Sig.
kontrol normal
.224
.942
.668
kontrol negatif
.229
.914
.501
kontrol positif
.206
.961
.784
dosis 50 mg/kgBB
.216
.950
.718
dosis 100 mg/kgBB
.173
.985
.930
dosis 200 mg/kgBB
.202
.987
.939
AUC
a. Lilliefors Significance Correction
Data normal bila nilai sig. p > 0.05

b. Uji Homogenitas
Test of Homogeneity of Variances
AUC
Levene Statistic
1.558
df1
df2
5
Sig.
18
.222
Data homogen bila nilai sig. p > 0.05
c. Uji one way ANOVA

ANOVA
AUC
Sum of Squares
df
Mean Square
Between Groups
396.442
79.288
Within Groups
102.241
18
5.680
Total
498.682
23
Bila nilai sig < 0.05, maka ada perbedaan bermakna
92
F
13.959
Sig.
.000
93
d.
Uji Post Hoc LSD
Multiple Comparisons
Dependent Variable: AUC
LSD
(I) kelompok
kontrol normal
kontrol negatif
kontrol positif
dosis 50 mg/kgBB
(J) kelompok
Std. Error
kontrol negatif
Mean
Difference (IJ)
-12.1202872*
1.6852362
.000
-15.660837
-8.579737
kontrol positif
-5.1154768*
1.6852362
.007
-8.656027
-1.574927
dosis 50 mg/kgBB
-3.7705192*
1.6852362
.038
-7.311069
-.229969
dosis 100 mg/kgBB
-5.0301201*
1.6852362
.008
-8.570670
-1.489570
dosis 200 mg/kgBB
-10.3571413*
1.6852362
.000
-13.897691
-6.816591
kontrol normal
12.1202872*
1.6852362
.000
8.579737
15.660837
kontrol positif
7.0048104*
1.6852362
.001
3.464260
10.545360
dosis 50 mg/kgBB
8.3497680*
1.6852362
.000
4.809218
11.890318
dosis 100 mg/kgBB
7.0901670*
1.6852362
.001
3.549617
10.630717
dosis 200 mg/kgBB
1.7631459
1.6852362
.309
-1.777404
5.303696
Sig.
95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound
kontrol normal
5.1154768
1.6852362
.007
1.574927
8.656027
kontrol negatif
-7.0048104*
1.6852362
.001
-10.545360
-3.464260
dosis 50 mg/kgBB
1.3449576
1.6852362
.435
-2.195592
4.885508
dosis 100 mg/kgBB
.0853566
1.6852362
.960
-3.455193
3.625907
dosis 200 mg/kgBB
-5.2416645*
1.6852362
.006
-8.782214
-1.701115
kontrol normal
3.7705192*
1.6852362
.038
.229969
7.311069
kontrol negatif
-8.3497680*
1.6852362
.000
-11.890318
-4.809218
kontrol positif
-1.3449576
1.6852362
.435
-4.885508
2.195592
dosis 100 mg/kgBB
-1.2596010
1.6852362
.464
-4.800151
2.280949
dosis 200 mg/kgBB
-6.5866221*
1.6852362
.001
-10.127172
-3.046072
5.0301201*
1.6852362
.008
1.489570
8.570670
kontrol negatif
-7.0901670*
1.6852362
.001
-10.630717
-3.549617
kontrol positif
-.0853566
1.6852362
.960
-3.625907
3.455193
dosis 50 mg/kgBB
1.2596010
1.6852362
.464
-2.280949
4.800151
dosis 200 mg/kgBB
-5.3270212*
1.6852362
.005
-8.867571
-1.786471
10.3571413*
1.6852362
.000
6.816591
13.897691
kontrol negatif
-1.7631459
1.6852362
.309
-5.303696
1.777404
kontrol positif
5.2416645*
1.6852362
.006
1.701115
8.782214
dosis 50 mg/kgBB
6.5866221*
1.6852362
.001
3.046072
10.127172
dosis 100 mg/kgBB
5.3270212*
1.6852362
.005
1.786471
8.867571
dosis 100 mg/kgBB kontrol normal
dosis 200 mg/kgBB kontrol normal
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
93
94
Lampiran 23. Hasil uji Post Hoc LSD kadar glukosa darah TTGO terhadap
tiap kelompok perlakuan
Kelompok
KNo
KNe
KP
D1
D2
D3
KNo
BN
BN
BN
BN
BN
KNe
BN
BN
BN
BN
BTN
KP
BN
BN
BTN
BTN
BN
D1
BN
BN
BTN
BN
BN
D2
BN
BN
BTN
BN
BN
D3
BN
BTN
BN
BN
BN
Perlakuan
Keterangan :
BN
: Berbeda nyata (p < 0.05)
BTN
: Berbeda tidak nyata (p > 0.05)
KNo
: Kontrol normal Na-CMC 0,5%
KNe
: Kontrol negatif Na-CMC 0,5%
KP
: Kontrol positif glibenklamid
D1
: Dosis 50 mg/kgBB
D2
: Dosis 100 mg/kgBB
D3
: Dosis 200 mg/kgBB
94
95
Lampiran 24 . Dokumentasi pembacaan glikogen hati
E
F
Keterangan :
G.
H.
I.
J.
Menimbang serbuk hati tikus

Inkubasi dalam penangas air mendidih selama 20 menit
Disimpan dalam suhu 4C selama 30 menit
Disentrifugasi dengan kecepatan 2500 rpm selama 20 menit Penguapan dengan
waterbath
K. Diinkubasi selama 15 menit
L. Dibaca absorbansi dengan spektrofotometer uv-vis
95
96
Lampiran 25 . Hasil absorbansi pembacaan panjang gelombang

Panjang gelombang
Absorbansi
450
0.194
453
0.215
456
0.238
459
0.262
462
0.287
465
0.323
468
0.363
471
0.413
474
0.463
477
0.505
480
0.544
483
0.576
486
0.589
489
0.596
492
0.584
495
0.543
498
0.468
501
0.392
504
0.314
507
0.252
510
0.192
513
0.147
516
0.112
519
0.083
522
0.066
525
0.053
528
0.046
531
0.041
534
0.034
537
0.029
96
97
97
98
Lampiran 26 . Hasil absorbansi operating time

Waktu (menit)
Absorbansi
Replikasi 1
1.749
Replikasi 2
1.907
1.756
1.911
10
1.754
1.903
15
1.753
1.901
20
1.753
1.901
25
1.753
1.901
30
1.753
1.901
35
1.752
1.903
40
1.752
1.904
98
99
Lampiran 27 . Hasil absorbansi penetapan kurva standar

Konsentrasi (ppm)
Absorbansi
Rata-rata
SEM
Replikasi 1
Replikasi 2
10
0.199
0.185
0.192
0.005
20
0.247
0.387
0.317
0.049
30
0.473
0.509
0.491
0.013
40
0.607
0.69
0.648
0.029
50
0.768
0.782
0.775
0.005
60
0.954
0.956
0.955
0.001
99
100
Lampiran 28 . Hasil uji regresi kurva standar

a.
Nilai korelasi/ hubungan r

Model Summary
Model
R Square
.999a
Adjusted R
Std. Error of the
Square
Estimate
.998
.997
.015087
a. Predictors: (Constant), konsentrasi
b.
Nilai uji regresi

Coefficientsa
Model
Unstandardized Coefficients
Standardized
Sig.
Coefficients
B
Std. Error
(Constant)
.028
.014
konsentrasi
.015
.000
Beta
2.027
.113
42.361
.000
1
a. Dependent Variable: absorbansi
Ada pengaruh nyata bila nilai sig. p > 0.05
100
.999
101
Lampiran 29 . Hasil absorbansi sampel hati tikus

kandungan
glikogen
(mg/50mg)
kandungan
glikogen
(g/mg)
Kelompok
Replikasi
Absorbansi
x (ppm)
Kontrol Normal
0.889b
56.3356
0.563356
11.267
0.904
57.3176
0.573176
11.464
0.764
48.1527
0.481527
9.631
0.931
59.0851
0.590851
11.817
52.2768
0.0522768
1.046
53.7825
0.0537825
1.076
3
4
Kontrol Negatif
Kontrol Positif
0.827
0.85
0.887a
56.2047
0.0562047
1.124
0.894a
56.6629
0.0566629
1.133
0.305
18.1049
0.181049
3.621
0.347b
20.8545
0.208545
4.171
0.421
25.6987
0.256987
5.139
0.384
23.2766
0.232766
4.655
0.757
47.6944
0.476944
9.539
4
Dosis 50 mg/kgBB
Dosis 100
mg/kgBB
Dosis 200
mg/kgBB
40.0352
0.400352
8.007
0.796
50.2475
0.502475
10.049
0.583b
36.3038
0.363038
7.261
0.351
21.1163
0.211163
4.223
0.384
23.2766
0.232766
4.655
0.347
20.8545
0.208545
4.171
0.433b
26.4843
0.264843
5.297
0.231
13.2607
0.132607
2.652
0.208
11.755
0.11755
2.351
0.29
17.123
0.17123
3.425
0.897a
56.859
0.05686
1.137
0.64
keterangan : a (faktor pengenceran 1 kali)

b (Faktor pengenceran 10X)
Lampiran 30 . Hasil kadar glikogen tikus (mikro/mg) Mean SEM setiap

kelompok
Kelompok
kadar glikogen (g/mg) Mean SEM
Kontrol Normal
11.04475 0.48
Kontrol Negatif
1.09475 0.02
Kontrol Positif
4.3965 0.28
Dosis 50 mg/kgBB
8.714 0.65
Dosis 100 mg/kgBB
4.5865 0.26
Dosis 200 mg/kgBB
2.39125 0.48
101
102
Lampiran 31. Contoh perhitungan penetapan kadar glikogen hati

a. Dik : Data kelompok kontrol normal sampel 1
Absorbansi = 0.889
y
= 0.0153x + 0.0285
Faktor pengenceran = 10 kali
Bobot sampel = 50 mg
Dit : kadar glikogen
Jawaban
y = 0.0153x + 0.0285
0.889
= 0.0153x + 0.0285
x = 56.3356 ppm
Kadar sampel = x faktor prngenceran
= 56.3356 ppm 10
= 563.356 ppm
kandungan glikogen dalam 50 mg hati
= kadar sampel pelarut
= 563.356 ppm 0.001 L
= 0.563356 mg/50mg
= 11.267 g/mg
b. Dik : Data kelompok kontrol negatif sampel 1
Absorbansi = 0.827
y
= 0.0153x + 0.0285
Faktor pengenceran = 1 kali
Bobot sampel = 50 mg
Dit : kadar glikogen
Jawaban
y = 0.0153x + 0.0285
0.827
= 0.0153x + 0.0285
x = 52.2768 ppm
Kadar sampel
= x faktor prngenceran
= 52.2768 ppm 1
= 52.2768 ppm
kandungan glikogen dalam 50 mg hati
= kadar sampel pelarut
= 52.2768 ppm 0.001 L
= 0.0522768 mg/50mg
= 1.046 g/mg
102
103
Lampiran 32. Analisis statistik data kadar glikogen hati

e. Uji Normalitas
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova
Kelompok
Statistic
df
Shapiro-Wilk
Sig.
Statistic
df
Sig.
Kontrol Normal
.341
.836
.183
Kontrol Negatif
.262
.910
.484
Kontrol Positif
.154
.994
.977
Dosis 50 mg/kgBB
.237
.929
.588
Dosis 100 mg/kgBB
.257
.878
.332
Dosis 200 mg/kgBB
.233
.971
.847
Glikogen
Data normal bila nilai sig. p > 0.05

f. Uji Homogenitas
Glikogen
Levene Statistic
df1
3.199
df2
5
Sig.
18
.031
Data homogen bila nilai sig. p > 0.05

g. Uji Kruskal-Wallis
Test Statisticsa,b
Glikogen
Chi-Square
13.787
df
Asymp. Sig.
3
.003
a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable:
Kelompok
103
104
h. Uji Mann-whitney
Kontrol Normal Kontrol Negatif
Test Statisticsa
Glikogen
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
-2.309
Asymp. Sig. (2-tailed)
.021
Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]
.029b
a. Grouping Variable: Kelompok

b. Not corrected for ties.
Lampiran 33. Hasil uji Mann-Whitney kadar glikogen hati terhadap tiap
kelompok perlakuan
Kelompok
Perlakuan
KNo
KNe
KP
D1
D2
D3
KNo
KNe
KP
D1
D2
D3
0,021
0,021
0,043
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,559
0,021
0,043
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,559
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
0,021
-
Keterangan :
BN
: Berbeda nyata (p < 0,05)
BTN
: Berbeda tidak nyata (p > 0,05)
KNo
KNe
KP
D1
: Dosis 50 mg/kgBB
D2
: Dosis 100 mg/kgBB
D3
: Dosis 200 mg/kgBB
104
105
Lampiran 34 . Dokumentasi pembuatan preparat pankreas
G
H
Keterangan :
M.
N.
O.
P.
Q.
R.
S.
T.
Fiksasi
Dehidrasi
Penanaman di blok parafin
Pemotongan blok parafin
Perendaman hasil potongan
Melelehkan paraffin pada preparat
Pewarnaan
Pengamatan di mikroskop
105
106
Lampiran 35 . Hasil pembacaan jumlah pulau Langerhans

Kelompok
Kontrol Normal
Kontrol Negatif
Kontrol Positif
Dosis 50 mg/kgBB
Dosis 100
mg/kgBB
Dosis 200
mg/kgBB
Replikasi
Jumlah Pulau Langerhans
13
17
10
11
106
107
Lampiran 36 . Hasil pembacaan jumlah pulau Langerhans (Mean SEM)

pada setiap kelompok
Kontrol Normal
Jumlah Pulau Langerhans (Mean

SEM)
12.75 1.55
Kontrol Negatif
1.5 0.56
Kontrol Positif
2.5 0.32
Dosis 50 mg/kgBB
8.5 0.29
Dosis 100 mg/kgBB
6.75 0.85
Dosis 200 mg/kgBB
3.75 0.48
Kelompok
Lampiran 37. Analisis statistik data jumlah pulau Langerhans pada pankreas
i. Uji Normalitas
Tests of Normality
Kolmogorov-Smirnova
kelompok
Statistic
df
Statistic
df
Sig.
.218
.920
.538
Kontrol Positif
.307
.729
.024
Kontrol Positif
.151
.993
.972
Dosis 50 mg/kgBB
.307
.729
.024
Dosis 100 mg/kgBB
.192
.971
.850
Dosis 200 mg/kgBB
.283
.863
.272
Data terdistribusi normal bila nilai sig. p > 0.05

j. Uji Homogenitas
JumlahPulauLangerhans
2.508
Sig.
Kontrol Normal
JumlahPulauLangerhans
Levene Statistic
Shapiro-Wilk
df1
df2
5
Sig.
18
.068
Data terdistribusi homogen bila nilai sig. p > 0.05
107
108
k. Uji Kruskal Wallis

Test Statisticsa,b
JumlahPulauLa
ngerhans
Chi-Square
13.254
df
Asymp. Sig.
.004
a. Kruskal Wallis Test

b. Grouping Variable: kelompok

l. Uji Mann-Whitney
1)
Kontrol Normal Kontrol Negatif

Test Statisticsa
JumlahPulauLa
ngerhans
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
-2.337
.019
.029b

a. Grouping Variable: kelompok
2)
Kontrol Normal Kontrol Positif

Test Statisticsa
JumlahPulauLa
ngerhans
Mann-Whitney U
.000
Wilcoxon W
10.000
-2.309

.021
.029b
a. Grouping Variable: kelompok

108
109
Lampiran 38. Hasil uji Mann-Whitney jumlah pulau langerhans terhadap tiap
kelompok perlakuan
Kelompok
Perlakuan
KNo
KNe
KP
D1
D2
D3
KNo
KNe
KP
D1
D2
D3
0,019
0,021
0,019
0,021
0,020
0,019
0,225
0,018
0,019
0,019
0,021
0,225
0,019
0,021
0,180
0,019
0,018
0,019
0,137
0,019
0,021
0,019
0,021
0,137
0,028
0,020
0,019
0,180
0,019
0,028
-
Keterangan :
BN
: Berbeda nyata (p < 0.05)
BTN
: Berbeda tidak nyata (p > 0.05)
KNo
KNe
KP
D1
: Dosis 50 mg/kgBB
D2
: Dosis 100 mg/kgBB
D3
: Dosis 200 mg/kgBB
109
110
RIWAYAT HIDUP
Ranty Rirung Andrunganyan dilahirkan di Haringen,
Kecamatan Dusun Timur, Kabupaten Barito Timur,
Provinsi Kalimantan Tengah pada tanggal 22 Januari
1994. Penulis merupakan anak ketiga dari
tiga
bersaudara dari pasangan Ariun dan Sainitha. Penulis

menamatkan pendidikan dasar di SDN 1 Haringen pada
tahun 2005 dan menamatkan pendidikan menengah
pertama di SMPN 1 Tamiang Layang pada tahun 2008
serta menyelesaikan pendidikan menengah atas di
SMAN 1 Tamiang Layang pada tahun 2011. Penulis
terdaftar sebagai mahasiswa Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Lambung Mangkurat pada tahun akademik
2011/2012 dan lulus tahun 2015. Penulis pernah menjadi anggota paduan suara Avi
cenna choirs periode 2013-2014, pernah menjadi Asisten Kimia Farmasi Analisis I,
Kimia Farmasi Analisis II dan Farmakokinetika. Alamat orang tua saat ini adalah
Haringen RT.01, RW.01, Kecamatan Dusun Timur, Kabupaten Barito Timur,
Kalimantan Tengah. Penulis bisa dihubungi melalui kontak HP 082245680340 atau
alamat email: rantyrirung@gmail.com atau rantyrirung@yahoo.com
110

AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN GAHARU (Aquillaria Microcarpa Baill.) TERHADAP TES TOLERANSI GLUKOSA ORAL, GLIKOGEN HATI DAN HISTOPATOLOGI PANKREAS TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI ALOKSAN

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Originaltitel

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN GAHARU (Aquillaria Microcarpa Baill.) TERHADAP TES TOLERANSI GLUKOSA ORAL, GLIKOGEN HATI DAN HISTOPATOLOGI PANKREAS TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI ALOKSAN

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

i

AKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN GAHARU (Aquillaria microcarpa

PROGRAM STUDI FARMASI

Keywords: Aquilaria microcarpa Baill., alloxan, OGTT, Liver glycogen, Number of

Banjarbaru, Agustus 2015

LEMBAR PENGESAHAN .......................................................................

DAFTAR ISI .............................................................................................

DAFTAR TABEL .....................................................................................

DAFTAR GRAFIK ...................................................................................

DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................

1.1. Latar Belakang .............................................................................

1.2. Perumusan Masalah ......................................................................

1.3. Tujuan Penelitian ..........................................................................

1.4. Manfaat Penelitian ........................................................................

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Gaharu ...........................................................................................

2.1.1 Morfologi .............................................................................

2.1.2 Kandungan Kimia ................................................................

2.1.3 Kegunaan Tumbuhan Gaharu ..............................................

2.2 Diabetes Melitus ............................................................................

2.3 Ekstraksi ........................................................................................

2.4 Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ...................................................

2.5 Spektro UV-Vis .............................................................................

2.6 Aloksan ..........................................................................................

2.7 Parameter .......................................................................................

2.7.1 Pengukuran Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO) ...............

2.7.2 Glikogen Dalam Hati ...........................................................

2.7.3 Histopatologi Pankreas .........................................................

2.8 Hipotesis ........................................................................................

BAB III. METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian ..............................................................................

3.2 Waktu dan tempat Penelitian .........................................................

3.3 Alat dan Bahan...............................................................................

3.3.1. Alat ......................................................................................

3.3.2. Bahan ..................................................................................

3.4 Hewan Uji ......................................................................................

3.5 Variabel Penelitian ........................................................................

3.5.1. Variabel Bebas ...................................................................

3.5.2. Variabel terikat ..................................................................

3.6 Prosedur Penelitian ........................................................................

3.6.1 Pengumpulan Sampel ..........................................................

3.6.2 Pengolahan Bahan ...............................................................

3.6.3 Ekstraksi ..............................................................................

3.6.4 Uji Kandungan Senyawa Daun Gaharu ..............................

3.6.5 Uji pendahuluan Orientasi Dosis Aloksan ..........................

3.6.6 Penginduksi Aloksan ...........................................................

3.6.7 Uji pendahuluan Orientasi Dosis ekstrak ............................

3.6.8 Pengujian Aktivitas .............................................................

3.6.9 Pengukuran Tes Toleransi Glukosa Oral (TTGO) ..............

3.6.10 Analisis Kadar Glikogen Dalam Hati .................................

3.6.11 Histopatologi Pankreas .......................................................

3.7. Analisis data ..................................................................................

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Pengolahan Elstrak ........................................................................

4.1.1 Penyiapan Bahan untuk Ekstraksi ........................................

4.1.2 Ekstraksi ...............................................................................

4.2 Uji Kandungan Senyawa pada Ekstrak ..........................................

4.2.1 Pengujian Skrining Fitokimia ...............................................

4.2.2 Analisis Kualitatif Senyawa Ekstrak Etanol Daun Gaharu

4.3 Perlakuan Hewan Uji .....................................................................

4.3.1 Uji Pendahuluan Dosis Aloksan ...........................................

4.3.2 Uji Pendahuluan Dosis Pemberian Ekstrak Daun Gaharu ...

4.3.3 Pengujian Aktivitas ..............................................................