Macromolculas de la levadura

A. F. Bermdez, S.A. Garca, M.A Giraldo

Programa acadmico de Biologa, Facultad de Ciencias,
Universidad del Valle, Cali (Colombia)
24 de abril de 2016
RESUMEN
En esta prctica se obtuvieron datos cualitativos referentes a la presencia de macromolculas en
la levadura de panadera, ya que esta al igual que todas las clulas eucariotas, presentan una
estructura qumica compleja, en base a esto la posibilidad de obtener pruebas a partir de la
precipitacin de protenas, la separacin por densidad del glucgeno (al igual que la prueba del
almidn y el glucgeno con Lugol) y la comparacin entre las muestras mediante el orcinol con
ADN, ARN y los cidos nucleicos obtenidos en la prctica, pudieron evidenciar que las
macromolculas cumplen una funcin estructural en las clulas.
INTRODUCCION
En esta prctica se logr identificar cualitativamente los diferentes tipos de macromolculas,
presentes en las clulas eucariotas, tambin se conocieron algunos mtodos de identificacin
(coloracin de compuestos especficos). Las macromolculas tienen masas moleculares elevadas
(gran grupo de tomos), las cuales forman polmeros. Pueden ser tanto orgnicas como
inorgnica, un ejemplo de estos en forma sinttica son los plsticos. Es necesario la inclusin de
fuerzas de van der Waals, puentes de hidrogeno, interacciones hidrofbicas y enlaces covalentes.
Las macromolculas ms importantes y comunes en los sistemas vivos son: polisacridos
compuestos por subunidades de azcar, protenas formadas por cadenas lineales de aminocidos,
cidos nucleicos formados por bases nucleotidicas y lpidos formados por glicerol cidos grasos
o colesterol.
El organismo utilizado para llevar a cabo el proceso es la levadura, hongos microscpicos
unicelulares con organizacin eucariota, que presentan caractersticas especficas que facilitan
ser objeto de estudio como es su fcil y rpida reproduccin, fcil de modificar genticamente,
adaptabilidad y versatilidad para crecer en ambientes controlados adems de sus pocas
necesidades nutricionales. Estas caractersticas especficas son tenidas en cuenta para poder
realizar la prctica ya que se acopla al objetivo principal.
Una de las pruebas que se utiliz para obtener resultados cualitativos es la reaccin de biuret,
prueba que detecta la presencia de enlaces peptdicos. El sulfato de cobre es el reactivo utilizado,
este reacciona con el enlace peptdico y cambia de color cuando entra en contacto. El color
verde, es el color positivo para la prueba.
METODOLOGA
La primera parte de la prctica inicio con la trituracin de la levadura de panadera con cido
tricloroactico, posteriormente se dej reposar durante algunos minutos y se agregaron
exactamente 20g de la suspensin de protenas a la centrifuga. Luego se obtuvieron sedimentos

con protenas y cidos nucleicos que fueron agregados en un bao hielo, mientras el
sobrenadante fue decantado y luego precipitado con alcohol etlico, nuevamente se agregaron
20g de esta suspensin y se pas a la centrifuga, por ltimo se realiz la prueba del Lugol que
consisti en comparar la coloracin entre el sedimento de glucgeno obtenido de la
centrifugacin y una solucin de almidn.
La siguiente parte consisti en la separacin de las protenas y los cidos nucleicos, y esto se
realiz mediante la adicin de una solucin de NaCl y un bao de agua hirviendo, luego se
pasaron 20g de esta sustancia a la centrifuga, el sobrenadante con cidos nucleicos fue decantado
a otro tubo y el precipitado de protenas fue dejado en un bao de hielo.
La precipitacin del cido nucleico se llev a cabo mediante alcohol etlico y la utilizacin de la
centrifuga, posteriormente se realiz la prueba con el orcinol, en la cual se agregaban 3 mL de
esta sustancia, 2 mL de amortiguador salino pH 7 a tres tubos de ensayo con ADN, ARN y los
cidos nucleicos obtenidos de la levadura de panadera, y finalmente se realizaba un bao de
agua hirviendo hasta el cambio en la coloracin de estas sustancias.
La parte final del laboratorio consisti en la prueba de Biuret, donde se tom el sedimento de
protenas anteriormente obtenido y se le agregaron 2 mL de solucin NaCl, finalmente se agreg
1mL de sulfato cprico y 2mL de hidrxido de sodio, al realizar esto, se observ un cambio en la
coloracin de la muestra para las protenas.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Para la prueba realizada sobre las protenas, denominada prueba de Biuret, se hizo uso de
protenas provenientes de clulas maceradas de levadura de panadera (Saccharomyces spp), y
CuSO4 en solucin salina de NaOH, las protenas se obtuvieron por el tratamiento con cido
tricloroactico, centrifugado de las clulas maceradas, y finalmente una resuspensin en una
solucin de NaCl para centrifugarse nuevamente; despus de esto fue aadido el CuSO4 lo que
dio como resultado una solucin de color violeta, Lo que indica el positivo de esta prueba 1;
tambin se observaron algunos grumos blancuzcos como precipitado, esto no ocurri para el tubo
de ensayo que contiene solucin salina sola , a la que tambin se le aadi CuSO4.
Teniendo en cuenta lo anterior, se puede afirmar que la reaccin ocurre debido a las protenas de
la solucin, y no a las sales presentes en ella, en este caso las sales nicamente desestabilizan las
fuerzas elctricas dbiles de las protenas para que adquieran una forma no globular y menos
soluble en agua; de aqu se tiene tambin que la solucin cambia de color debido a la formacin
de un complejo coordinado entre los electrones de los Nitrgenos del enlace peptdico de las
protenas y el ion Cu+2 liberado por la disociacin del sulfato cprico.
Esta prueba funciona nicamente para molculas que contengan 2 o ms enlaces peptdicos ya
que el Cu+2, requiere de 4 interacciones coordinadas de Nitrgenos de este tipo para estabilizarse.
CONCLUSIONES

Para la extraccin de las diferentes macromolculas presentes en la levadura es necesario

modificar el medio de reaccin como la temperatura, rompimiento mecnico de molculas,
reaccin con otros reactivos, etc.

La prueba para determinar cuantitativamente la presencia de cidos nucleicos dio

positiva, aunque no con un resultado completamente optimo, una probable causa del
fracaso de esta prueba se puede deber a que los reactivos se encontraban contaminados
por errores en la manipulacin o perdida en la cantidad de la macromolcula en cada
etapa de la prctica.

REFERENCIAS
[1]Guarnizo, A y Martnez, P. 2009. Experimentos de qumica orgnica con enfoque
en ciencias de la vida. Ediciones Elizcom. Armenia.