Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
CUZA IAI
FACULTATEA DE FIZIC
-Iai, 2013-
Cuprins
Mulumiri...........................................................................................4
Rezumat..............................................................................................5
Capitolul I. Stadiul actual al cercetrilor privind metodele de
sintez i utilizare practic a sistemelor nanodimensionale n livrarea
de medicamente..................................................................................6
I.1Nanotehnologia.......................................................................6
I.2Stadiul actual al cercetrilor sistemelor nanoparticulate........8
I.3Metode de sintez a sistemelor nanostructurate...................12
I.3.1Metoda coprecipitrii.................................................13
I.3.2Metoda microemulsiilor.............................................14
I.3.3 Metoda sol gel........................................................14
I.3.4 Metoda hidrotermal.................................................15
I.4Aplicaii ale nanoparticulelor n medicin Transportul intit
de medicamente........................................................................15
I.4.1Principiul livrrii magnetice a medicamentelor.........18
I.4.2Grupe de nanoparticule i medicamente utilizate n
livrarea magnetic..............................................................22
I.5Concluzii...............................................................................28
Referine....................................................................................29
Capitolul II.Metode de caracterizare i funcionalizare a
nanoparticulelor magnetice............................................................. 34
II.1Tehnici de caracterizare......................................................34
II.1.1Metoda difractometrului de radiaii X..................... 34
II.1.2Microscopia electronic de transmisie (TEM) i
spectroscopia cu dispersia radiaiei X dup energii
(EDX)................................................................................37
II.1.3mprtierea dinamic a luminii (DLS)....................40
II.1.4Metoda de analiz particul cu particul (NTA).......42
II.1.5Metoda de determinare a zeta potenialului zeta.......44
II.1.6Spectroscopia de infrarou cu transformat
Fourier................................................................................45
II.1.7Magnetometria cu prob vibrant (VSM).................46
II.2Metode de funcionalizare a nanoparticulelor pentru
aplicaii medicale.....................................................................47
II.2.1Metoda strat cu strat (LbL).......................................49
Referine............................................................................53
Introducere
Standardul de aur n tratamentul neoplaziilor la ora actual
este triada reprezentat de chimioterapie, radioterapie i chirugie, la
care se adaug pentru doar cteva tipuri de cancere terapia intit
reprezentat de anticorpii monoclonali. n ciuda acestui variat
arsenal terapeutic mortalitatea prin cancer este nc ridicat ceea ce
justific cercetarea continu a noi modaliti terapeutice.
Sistemele de livrarea medicamentelor sunt create pentru a
mbunti proprietile terapeutice i farmacologice ale
medicamentelor, medicamentele fiind plasate n zona de interes i
activate doar de anumii stimuli specifici.
Scopul acestei teze de doctorat a fost focalizat pe sinteza i
caracterizarea unor sisteme magnetice nanodimensionale (ZnxCo1xFe2O4i ZnxMn1-xFe2O4, (x = 0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 i 1),
funcionalizarea acestora prin metoda strat cu strat (LbL) cu ajutorul
a doi polielectrolii (PAH i PAA), precum i testarea lor n mediul
sangvin (testul de hemoliz). Interesul pentru studiul acestor
materiale este justificat de aplicaiile numeroase raportate n
literatur n domenii medicale precum transportul intit de
medicamente, rezonana magnetic nuclear dar i hipertermia.
Capitolul I al acestei lucrri prezint cteva noiuni generale cu
privire la: stadiul cercetrilor nanoparticulelor magnetice, principiul
transportului intit de medicamente precum i a grupelor de
nanoparticule magnetice utilizabile n livrarea de medicamente. n
capitolul II este prezentat o scurt descriere a tehnicilor de studiu
ale proprietilor structurale i magnetice utilizate de noi n
caracterizarea nanoparticulelor. Aici am descris i posibilele metode
de funcionalizare a nanoparticulelor magnetice punnd accent pe
metoda de depunere strat cu strat (layer-by-layer deposition). n
Capitolul III sunt expuse detalii despre metoda de sintez a
nanoparticulelor din seriile ZnxCo1-xFe2O4 i ZnxMn1-xFe2O4 (0 < x <
1) utilizat precum i rezultatele obinute n urma msurtorilor de
XRD, TEM i EDX, DLS, NTA, potenial zeta i VSM. Capitolul
IV este dedicat funcionalizrii nanoparticulelor magnetice prin
metoda LbL cu cei doi polielectrolii, PAH i PAA, i verificrii
eficienei acestei metode prin testul de hemoliz.
Capitolul I
Stadiul actual al cercetrilor privind metodele de sintez i
utilizare practic a sistemelor nanodimensionale n livrarea de
medicamente
I.1 Nanotehnologia
Nanotehnologia reprezint un domeniu tiinific
multidisciplinar ce implic cunotiine att de fizic i chimie, ct i
de biologie i inginerie, cu privire la fenomenele care se petrec la
scal de ordin nanometric. Aplicaiile imediate au fost n tehnologia
semiconductorilor i nformaiilor, dar i n medicin [1].
I.2 Stadiul actual al cercetrilor sistemelor nanoparticulate
Majoritatea studiilor cu scopul de a obine nanoparticule
utilizate pentru transportul magnetic de medicamente au fost
dedicate magnetitei sau maghemitei, datorit proprietilor toxice
sczute ale fierului. S-au ntreprins cercetri i pe alte tipuri de
nanoparticule precum MgFe2O4, MnFe2O4, FePt, CoFe2O4, .a [2],
acest domeniu fiind in continu dezvoltare.
I.3 Metode de sintez a sistemelor nanostructurate
Cercetrile n domeniu au artat c metoda de sintez ct i
formele nanoparticulelor obinute stabilete domeniul de
aplicabilitate a acestora.
Pentru un control mai bun a dimensiunilor i a distribuilor
acestora, forma i gradul de aglomerare a cristalitelor nanometrice,
metodele de sintez pe cale umed sunt net superioare comparativ
cu cele fizice. S-a dovedit c metoda de sintez influeneaz i
proprietile magnetice ale particulelor de ferit. Printre cele mai
utilizate tehnici de sintez bazate pe reacii n mediu apos pentru
prepararea particulelor de ferite nanocristaline, se afl microemulsia,
tehnica sol-gel, metoda hidrotermal i coprecipitarea.
I.3.1 Metoda coprecipitrii
n ceea ce priveste simplitatea dar i preul sczut,
coprecipitarea reprezint cea mai des utilizat tehnic de sintez pe
cale umed. Pe parcursul acestui proces, se prepar oxizi metalici
micti cu proprieti magnetice, de tipul MFe2O4, unde M2+= Mn,
Fe, Co, Cu, Zn, este un metal divalent. Natura agentului de
10
Tabel III.2.1 Diametrul de cristalit (dXRD), constanta de reea experimental (aexp) i teoretic (ath), distribuia de cationi,
parametrul poziional de oxigen, parametrul de inversie (i), raza poziiei tetraedric (r A) i raza poziiei octaedrice (rB),
distana legturii cation-oxigen pentru poziia tetraedric (RA), repectiv octaedric (RB) pentru seria ZnxCo1-xFe2O4
dXRD (nm)
aexp()
ath()
CoFe2O4
15
8.351
8.322
Zn0.2Co0.8Fe2O4
12
8.361
8.340
Zn0.4Co0.6Fe2O4
10
8.364
8.362
Zn0.6Co0.4Fe2O4
10
8.371
8.391
Zn0.8Co0.2Fe2O4
8.414
8.417
ZnFe2O4
8.434
8.439
Distribuia de cationi
(
)[
)[
)[
(
)[
)[
(
]
)[
u()
RA()
RB()
0.3835
0.5900
1.884
1.970
0.5080
0.5945
1.888
1.974
0.81
0.5089
0.6022
1.888
1.982
0.3822
0.90
0.5010
0.6175
1.881
1.997
0.3816
0.92
0.4988
0.6284
1.878
2.008
0.6355
1.881
2.015
rA()
rB()
0.80
0.5040
0.3835
0.80
0.3832
0.3814
0.90
0.5010
11
)[
)]
(III.5)
12
CoFe2O4
ZnFe2O4
41.5 1.8
45.4 2.3
49.8 2.5
39.9 0.1
45.2 3.0
41.2 0.4
13
-44.1 12.0
7.06
Zn0.6Co0.4Fe2O4
Zn0.8Co0.2Fe2O4
ZnFe2O4
-49.3 0.5
-51.8 1.4
-51.2 4.4
7.09
6.97
6.91
14
15
575
565
392
1.42105
0.97105
411
1.07105
1.4510
16
CoFe2O4
Zn0.2Co0.8Fe2O4
Zn0.4Co0.6Fe2O4
Zn0.6Co0.4Fe2O4
Zn0.8Co0.2Fe2O4
ZnFe2O4
Ms(emu/g)
Hc(Oe)
MA
MB
nB
(th)
nB
(exp)
YK
(grade)
62.4
58.8
54.1
34.8
25.2
20.7
250.16
49.96
-
4.60
4.30
4.20
4.50
4.60
4.45
8.40
8.10
7.60
6.70
6.00
5.55
3.800
3.800
3.400
2.200
1.400
1.100
2.726
2.587
2.403
1.607
1.212
1.01
29.29
31.76
29.68
24.29
14.38
10.33
17
18
Tabel III.4.1Diametrul de cristalit (dXRD), constanta de reea experimental (aexp) i teoretic (ath), distribuia de cationi,
parametrul poziional de oxigen, parametrul de inversie (i), raza poziiei tetraedric (r A) i raza poziiei octaedrice (rB),
distana legturii cation-oxigen pentru poziia tetraedric (RA), repectiv octaedric (RB) pentru seriaZnxMn1-xFe2O4
dXRD (nm)
aexp()
ath()
MnFe2O4
22
8.460
8.461
Zn0.2Mn0.8Fe2O4
14
8.440
8.443
)[
Zn0.4Mn0.6Fe2O4
13
8.420
8.426
)[
Zn0.6Mn0.4Fe2O4
10
8.400
8.411
Zn0.8Mn0.2Fe2O4
8.390
8.412
ZnFe2O4
8.430
8.431
Distribuia de cationi
(
)[
)[
rA()
rB()
RA()
RB()
0.3913
0.05
0.652
0.557
2.032
1.937
0.3908
0.06
0.639
0.558
2.019
1.938
0.3901
0.08
0.625
0.559
2.005
1.939
0.3893
0.12
0.610
0.562
1.990
1.942
0.3867
0.36
0.572
0.585
1.952
1.965
0.3823
0.80
0.512
0.626
1.892
2.006
)[
(
)[
u()
]
]
19
MnFe2O4
ZnFe2O4
20
dhidro (nm)
99.5 2.9
MnFe2O4
47.8 0.6
Zn0.2Mn0.8Fe2O4
38.5 0.5
Zn0.4Mn0.6Fe2O4
41.1 2.3
Zn0.6Mn0.4Fe2O4
44.1 2.5
Zn0.8Mn0.2Fe2O4
41.2 0.4
ZnFe2O4
Diferena relativ mare de dimensiune nregistrat ntre
tehnicile XRD, TEM i DLS pentru nanoparticulele noastre
magnetice poate fi explicat prin faptul c dispersia acestora n ap
favorizeaz formarea de agregate care duc la o cretere a
dimensiunii determinate.
III.4.3.2 Metoda analizei particul cu particul (NTA)
Analiznd rezultatele am constatat c dimensiunile obinute
n urma aplicrii metodei de analiz particul cu particul au fost
mai mici, intervalul distribuiei de dimensiuni fiind apropiat de
21
22
569
412
1.44105
1.01105
0.90105
Zn0.6Mn0.4Fe2O4
571
390
1.4910
Zn0.8Mn0.2Fe2O4
568
407
1.47105
1.01105
ZnFe2O4
565
411
1.40105
1.07105
23
III.4.6
Influena
compoziiei
chimice
asupra
proprietilor magnetice ale nanoparticulelor din seria de ferite
ZnxMn1-xFe2O4
Analiznd curbele de magnetizare se constat c particulele
sintetizate cu x = 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 i 1 nu prezint magnetizare
remanent i nu sunt caracterizate de histerezis. Aceste rezultate au
confirmat c particulele prezint comportare superparamagnetic.
Pentru x = 0, ferita de Mn, s-a nregistrat o valoare a cmpului
coercitiv egal cu 49.89 Oe, fapt ce denot caracterul ferimagnetic al
acestor particule. Analiznd forma curbelor de magnetizare se
observ c proprietile magnetice ale feritelor componente seriei
Zn-Mn sunt dependente de coninutul de Zn din eantion.
n Tabelul III.4.9 sunt prezentate valorile magnetizaiei de
saturaie, acestea scznd o dat cu creterea coninutului de zinc.
24
MnFe2O4
Zn0.2Mn0.8Fe2O4
Zn0.4Mn0.6Fe2O4
Zn0.6Mn0.4Fe2O4
Zn0.8Mn0.2Fe2O4
ZnFe2O4
Ms(emu/g)
Hc(Oe)
MA
MB
nB
(th)
nB
(exp)
YK
(grade)
67.7
60.06
50.02
33.47
20.64
20.73
49.89
-
5.00
4.10
3.25
2.50
2.75
4.00
10.00
9.90
9.75
9.50
8.25
6.00
5.00
5.80
6.50
7.00
5.50
2.00
2.82
2.53
2.16
1.58
1.00
1.01
38.57
47.93
56.28
64.55
62.96
33.38
25
(PAH/PAA/PAH) CoFe2O4
(PAH/PAA/PAH) MnFe2O4
26
(PAH/PAA/PAH) ZnFe2O4
MNP
(nm)
PAH MNP
(nm)
(PAH/PAA)
MNP (nm)
(PAH/PAA/PAH
) MNP(nm)
CoFe2O4
Zn0.2Co0.8Fe2O4
Zn0.4Co0.6Fe2O4
Zn0.6Co0.4Fe2O4
Zn0.8Co0.2Fe2O4
ZnFe2O4
41.5 1.8
45.4 2.3
49.8 2.5
39.9 0.1
45.2 3.0
41.2 0.4
63.4 0.2
66.9 0.9
65.2 0.5
67.7 0.3
66.8 1.3
62.1 1.1
105.1 1.6
113.5 0.4
80.5 0.4
90.4 0.8
88.8 1.5
91.3 0.3
144.1 0.8
136.2 0.6
138.8 0.4
121.6 0.2
117.9 0.6
136.1 0.2
MNP
(nm)
99.5 2.9
47.8 0.6
38.5 0.5
41.1 2.3
44.1 2.5
41.2 0.4
PAH
MNP (nm)
135.5 0.7
72.9 1.4
67.7 1.9
66.6 2.1
83.6 1.8
62.1 1.1
(PAH/PAA)
MNP (nm)
173.9 1.8
105.3 2
87.9 0.4
88.9 1
90.4 2.4
91.3 0.3
b.
MnFe2O4
Zn0.2Mn0.8Fe2O4
Zn0.4Mn0.6Fe2O4
Zn0.6Mn0.4Fe2O4
Zn0.8Mn0.2Fe2O4
ZnFe2O4
(PAH/PAA/PAH)
MNP(nm)
202.9 8.2
124.3 4.5
119.9 2.2
119.6 0.4
137.4 2.3
136.1 0.2
27
28
29
30
31
32
Concluzii generale
Scopul acestei lucrri a constat n sinteza i caracterizarea
unor sisteme magnetice pe baz de ap, ZnxCo1-xFe2O4 i ZnxMn1xFe2O4 (0 < x < 1), cu posibile aplicaii n medicin, precum i
prezentarea
rezultatelor
studiilor
experimentale
privind
funcionalizarea lor i nfluena acestora asupra hemoglobinei.
Aceste nanoparticule magnetice au fost sintetizate prin metoda
coprecipitrii din cloruri metalice corespunztoare n soluie de
hidroxid de sodiu. Stabilitatea nanoparticulelor a fost obinut cu
ajutorul ionilor de citrat de sodiu la un pH de aproximativ 7.
Probele de nanoparticule magnetice sintetizate au fost
caracterizate din punct de vedere dimensional, structural i magnetic
punnd n eviden caracteristicile necesare aplicaiei lor n
transportul intit de medicamente.
Am studiat, de asemenea, funcionalizarea nanoparticulelor
corespunztoare celor dou serii aplicnd metoda de depunere stratcu-strat (LbL). Analizele au relevat faptul c metoda de
funcionalizare aleas de noi este valid i poate constitui un punct
de plecare pentru cercetari ulterioare. n plus, msurtorile prin
metoda NTA au relevat faptul c nanoparticulele funcionalizate,
corespunztoare celor dou serii Zn-Co, respectiv Zn-Mn, i
pstreaz aceeai tendin a distribuiei de dimensiuni la trei
intervale de timp diferite fa de momentul sintezei i
funcionalizrii. Acest fapt confirm ideea conform creia aceste
nanoparticule prezint un comportament stabil n timp.
Am analizat interaciunea nanoparticulelor pre- i post
funcionalizare cu mediul sangvin. Am estimat gradul de hemoliz
indus de prezena nanoparticulelor magnetice nainte si dup
funcionalizare utiliznd spectroscopia UV-VIS.
33
Bibliografie selectiv
[1]Coey J.M.D., Magnetism and magnetic materials, Ed. Cambridge
University Press, New York (2010)
[2]Prijic S, Sersa G, Magnetic nanoparticles as targeted delivery
systems in oncology, Radiol Oncol 45(1), 1-16 (2011)
[3]Langer R, Folkman J, Polymers for the sustained release of
proteins and other macromolecules, Nature (London) 263, 797-800
(1976)
[4]Leserman L.D, Barbet J, Kourilsky F, Weinstein J.N, Targeting
to cells of fluorescent liposomes covalently coupled with monoclonal
antibody or protein A, Nature 288, 602-604 (1980)
[5]Goodwin D.A, Meares C.F, Advances in pretargeting
biotechnology. Biotechnol Adv 19, 435-450 (2001)
[6]Alexiou C, Arnold W, Klein R.J, et al. Locoregional cancer
treatment with magnetic drug targeting, Cancer Res 60(23), 6641-8
(2000)
[7]Ahamed M, Akhtar M.J, Siddiqui M.A, et al, Oxidative stress
mediated apoptosis induced by nickel ferrite nanoparticles in
cultured A549 cells, Toxicology 283(23), 101-8 (2011)
[8]Baldi G, Bonacchi D, Franchini M.C, et al. Synthesis and coating
of cobalt ferrite nanoparticles: a first step toward the obtainment of
new magnetic nanocarriers, Langmuir 23(7), 4026-8 (2007)
[9]Gherca D, Pui A, Ciornei M, Cojocariu A, Nica V, Caltun O.F,
Synthesis, characterization and magnetic properties of MFe 2O4
(M=Co, Mg, Mn, Ni) nanoparticles using ricin oil as capping agent,
J Magn Magn Mater 324, 39063911(2012)
[10]Le Guvel X. et al., Synthesis and characterization of
superparamagnetic nanoparticles coated with fluorescent gold
nanoclusters, J Nanopart Res 14, 727(2012)
[11]Caruso F, Caruso R.A, Mhwald H, Nanoengineering of
inorganic and hybrid hollow spheres by colloidal templating,
Science 282, 11111114 (1998)
[20]Doaga A, Cojocariu A.M, Amin W, Heib F, Bender P,
Hempelmann R, Caltun O.F, Synthesis and characterizations of
manganese ferrites for hyperthermia applications, trimis spre
publicare la Mat Chem Phys (2013)
34
35
Anexa 1
Grupe
NH3+
N-H
2896
2008
1607
NH3+
1505
NH3+
1455
CH2
1381
C-H
1188
1001
855
Tipul vibratiei
vibraie de legtur
vibraie de legtur
vibraie de legtur
simetric
overtone
vibraie de
deformare simetric
i asimetric
vibraie scissoring
vibraie de
deformare
C-C
vibraie de legtur
NH3+
vibraie de oscilaie
Grupe
O-H
Tipul vibraiei
vibraie de legtur
vibraie de legtur
simetric i
asimetric din
gruparea metilen
CH2
vibraie de legtur
vibraie de
deformare
vibraie de legtur
vibraie de
deformare n afara
planului
C-H
1704
C=O
1408
CH2-CO-
1166
C-C
915
C-H
36
37