Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
CRECIMIENTO MICROBIANO
I.- DEFINICIONES
La inhibicin y destruccin de microorganismos, hace
posible el control de procesos industriales, la investigacin
microbiolgica, preservacin de alimentos, y la prevencin
de enfermedades.
Para ese fin se utilizan agentes antimicrobianos.
Clula viable. Es aquella que es capaz de reproducirse y
formar colonias.
Muerte microbiana. El nico criterio vlido de muerte
microbiana es su prdida irreversible en la capacidad de
reproduccin.
Desinfeccin: Reduccin del nmero de microorganismos
en un ambiente inanimado
Esterilizacin. Eliminacin de toda forma de vida.
Asepsia: Inhibicin o destruccin de m.o. en la superficie
de un tejido vivo.
(1)
Donde:
N es el nmero de microorganismos viables en cualquiera
de sus formas, (clulas/mL),
kd es la constante cintica de muerte celular.
Grficos de supervivencia
Representando log(N/No)
frente al tiempo para
un microorganismo
determinado, se obtiene
una recta de pendiente
negativa, cuyo valor
depende de un valor Kd,
propio para cada
microorganismo y
condicin dada.
Esta representacin
recibe el nombre de
grfico de supervivencia.
Tiempo (minutos)
100
50 C
10
70 C
60 C
tiempo
CONDICIONES
Bacilo de tuberculosis
58oC, 30 min
Bacilo de tuberculosis
65oC, 2 min
60oC, 60 min
120oC, 15 min
3.1.1.-Agentes fsicos
Calor
Fro
Radiaciones
Filtracin
Desecacin
a. El calor
Es un metodo simple, barato y efectivo. El mejor mtodo en
material no termolabil.
Cada clula microbiana (y suponiendo que el resto de condiciones
ambientales se mantienen constantes) muestra una curva
caracterstica de tasa de crecimiento en funcin de la temperatura,
donde se distinguen tres puntos llamados temperaturas
cardinales:
Despejando se tiene:
En funcin Ln:
Expresando en log decimales ser:
D =t - to
log No- log N
D = -1
pend.
Ejemplo.1
Determinar el valor D116 de un m. o. que sometido a la
accin del calor arroja los siguientes datos de conteo:
Tiempo (min)
N viables (X)
340
10
65
15
19
20
4.5
25
1.3
Log X
3
340
2.5315
2,5
10
65
1.8129
15
19
1.2787
log X
2
1,5
1
0,5
20
4.5
0.6532
0
0
25
1.3
0.1139
10
15
tiempo (min)
20
25
30
2,5
Tiemp
o
logX
Y.est
2.5315
2.477
10
1.8129
1.8775
15
1.2787
1.278
20
0.6532
0.6785
25
0.1139
0.079
log X
2
1,5
1
0,5
0
0
10
15
Tiempo (min)
20
25
30
D=17.2-8.5
D116 = 8.7 minutos
Mtodo analtico
D = (t1 t2)
Log (Xo/Xi)
Con los datos de la ltima tabla. (tiempo de 10 a 20 min)
D116 = _(20- 10)____
(1.8775- 0.6785)
D116 = 8.63 minutos
A la T de 116C, y en las condiciones de ensayo, la
poblacin del m.o. disminuye a la decima parte cada 8.63
min.
Ejemplo 2:
Se desea aplicar tratamiento trmico para reducir una poblacin de
1012 esporas de C. botulinum a 100 (una espora), en latas de
conservas. Si se conoce que el valor D para estas esporas es de 0.204
minutos, a 121 C. Determine el tiempo de tratamiento requerido.
Solucin.
D=
(t to)____
(Log Xo-Log X)
(t-to) = D. (logXo-LogX)
t-to = 0.204min.* 12
Sern necesarios 12D= 12*0,204 = 2,2 min (132seg) para reducir
1012 esporas hasta una espora, calentando a 121C.
Ejercicios .
1.- Hallar el tiempo de reduccin decimal para una muestra,
cuya poblacin bacteriana muestra los siguientes datos de
supervivencia, a 110 C:
T (min):
0
5
10 20 30
X (cel/ml): 2000 1100 750 275 90
40
32
50
11
60
4
c.3.- Valor Z
Constante de resistencia trmica (Z). Nmero de grados centgrados
que debe aumentar la temperatura para que el valor D disminuya a la
dcima parte.
Cambio de temperatura necesario para reducir 10 veces (una unidad
logartmica) el valor D. (Depende de Kd. y del medio)
2,5
2
log D
T
-T
2
1
Z= log D2-log D1
1,5
1
0,5
Ejemplo: Z = 20C
Un tratamiento de 5 min.
a 100C equivale a 0,5
min a 120C
0
90
100
110
120
T(C)
130
140
Ejemplo.3
Para un m.o. determinado, el valor D104.4 es de 113 min y el
D121.1 es de 2.3 min. Calcule su constante de resistencia
trmica.
Datos: D104.4 = 113 min, D121.1 = 2.3 min, Z =?
T2-T1
Z=
log D2-log D1
Solucin:
reemplazando: Z = (121.1-104.4) / log(113/2.3)
Z = 16.7/1.69235
Z = 9.9 C.
Clostridium
botulinum
Clostridium
perfringens (cepa
termorresistente)
Salmonella
Staphylococcus
aureus
Sustrato
Solucin amortiguadora de
fosfato
Medio de cultivo
Pollo a la king
Pollo a la king
Pavo relleno
NaCI al 0.5%
Valor D (C)
en minutos
Valor
z (C)
D121 = 0.204
D90 = 3-5
10
6-8
D60 = 0.39
0.40
D90 = 5.17
5.37
D90 = 15.4
D90 = 2.0-2.5
4.95.1
5.25.8
6.8
5.6
Los valores se han tomado de LF Bryan, 1979, Processes that Affect Survival and Growth of
Microorganismos, Time Temperature Control of Foodborne pathogens, 1979.
Valor F
En ocasiones, el valor F se escribe con un subndice y un
superndice que representan la temperatura y el valor Z del
microorganismo, respectivamente.
Ejemplo 4
Calcular el valor Fo para el tratamiento de una conserva
destinada a reducir 1012 veces el riesgo de presencia de
esporas de Clostridium botulinum, si se conoce que tiene
un D121.1= 0,21 min.
DATOS: Xo/Xf = 1012.,
SOLUCION:
Reemplazando se tiene:
F = 0,21.log(1012)
Fo = 2,52 min
Para reducir en 12 ordenes de magnitud el nmero de m.o. a 121,1
C se debe aplicar un tiempo de 2,52 min.
Ejemplo.5
Se desea esterilizar conservas en envases de 125 ml a 115 C, se
sabe que se pueden encontrar tres tipos de microorganismos
patgenos, cuyos datos de termo resistencia son:
a) microorganismo ms resistente.
El microorganismo ms termorresistente a 115oC, es aquel que
tiene el mayor tiempo de reduccin decimal a dicha temperatura.
Se calcula el tiempo de reduccin decimal a esa temperatura (115
C):
Ejercicios
1.- Se somete un producto a una esterilizacin trmica en escalones segn
la siguiente tabla:
a.4.Procesos
industriales
eliminacin de microorganismos
trmicos
de
a.4.1.- Pasteurizacin
Es el proceso trmico realizado a lquidos (generalmente alimentos) con
el objeto de reducir los agentes patgenos que puedan contener.
Tipos:
LHT, (Low hot temperature). 30 minutos a 63C
HTST, (High temperature short time). 15 segundos a 72C
UHT, (Ultra high temperatura) 140C-150C durante 1 seg.
Destruye patgenos (Coxiella burnetti, Mycobacterium tuberculosis) y
reduce flora de deterioro.
En leche:
Mycobacterium tuberculosis, se destruye en 15 minutos a 60 C.
La pasteurizacin de la leche se realiza: a 62,8 C durante 30 minutos a
71,7 C durante 15 segundos.
Tras la pasteurizacin, el nmero de bacterias viables desciende un 9799%.
Los potenciales patgenos que pueda llevar la leche (Brucella, Salmonella,
M. tuberculosis, Streptococcus, etc) son eliminados fcilmente.
d.3.- Esterilizacin
Se puede realizar por calor hmedo o por calor seco.
En Autoclave, los parmetros de esterilizacin suelen ser:
temperatura 121C y 10-15 min.
En horno: 171C durante una hora
Debido a la cintica de primer orden que sigue la inactivacin
microbiana es prcticamente imposible la obtencin de un
producto estril.
La destruccin completa de formas viables, representara la
destruccin del alimento.
Los tratamientos trmicos adems de inactivar microorganismos,
tambin destruyen algunas vitaminas termolbiles (Tiamina) y
promueven la oxidacin de lpidos.
d.3.- Horno :
Se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y
otros materiales slidos estables al calor.
Aplicaciones del calor seco:
1. El llamado horno de Pasteur, (calentamiento a 160-170C
durante 2-3 horas) permite esterilizar materiales inertes de
laboratorio resistentes al calor: material de vidrio y metlico,
aceites y jaleas, etc.
2.Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas metlicas de
siembra, con las que se inoculan las bacterias.
3. Incineracin de materiales de desecho.
d.4.- Incineracin
Se usan temperaturas de alrededor de 1000C, y la destruccin de los
microorganismos sucede por combustin.
En los laboratorios, las asas de siembra se calientan a la llama de
mecheros Bunsen.
La incineracin se utiliza industrialmente en la eliminacin de residuos
hospitalarios.
Equipo incinerador
1.2. Fro
Refrigeracin: 0- 8 C
1.3. Radiaciones
Se puede definir la radiacin como la propagacin de
energa por el espacio
Baja energa
Alta energa
Dos tipos: Radiaciones - ionizantes
- no ionizantes
Dinococcus
radiodurans
Radiacion UV.
Las protenas tienen dos picos de absorcin: uno a 280 nm, por los
aminocidos aromticos (Trp, Tyr, Phe), y otro a 230 nm, por los
enlaces peptdicos.
El ADN y el ARN absorben a 260 nm, debido al enlace doble entre
las posiciones 4 y 5 de las bases pricas y pirimidnicas.
La luz UV se puede producir artificialmente en lmparas de vapor
de mercurio de baja presin, que emiten el 90% de su radiacin a
254 nm.
La luz UV es efectiva sobre bacterias Gram-positivas y Gramnegativas. La dosis letal para clulas vegetativas suele estar entre
1800 y 6500 wattcm-2, pero las endosporas requieren 10 veces
ms dosis.
El uso prctico de la luz UV como agente esterilizante est
limitado, ya que tiene poco poder penetrante: no entra en objetos
slidos, y adems se ve apantallada por el cristal y penetra poco en
los lquidos.
Usos:
Desinfeccin de agua de consumo.
Desinfeccin de cmaras de laboratorio.
Desinfeccin de aguas residuales.
La polarizacin inica tiene lugar en muestras que contienen iones tales como
electrlitos, los iones positivos experimentan una migracin electrofortica
hacia el polo negativo y los iones negativos hacia el polo positivo, durante este
desplazamiento colisionan con otras molculas e iones y esto genera calor.
Una vez generado el calor se transmite por mecanismos de conduccin y
conveccin trmica.
En los ltimos 20 aos, ha alcanzado auge, debido a sus ventajas frente a los
tratamientos convencionales en cuanto a velocidad, limpieza, calentamiento
selectivo del producto, y ahorro de energa
Se usa en la esterilizacin de suelos contaminados as como del algodn
medicinal para usos quirrgicos.
c.2. Ultrasonido.
Las ondas sonoras audibles para humanos poseen frecuencias entre 9 y 20
kilociclos/segundo. De 20 a 200 Kc/seg son ondas supersnicas, y de 200 hasta
2000 Kc/seg son ultrasonicas.
Su paso a travs de un lquido produce cambios de presin alternantes (por ondas
sucesivas), que a grandes frecuencias originan cavidades (burbujas de gases
disueltos) de unos 10 m de dimetro (cavitacin). Dichas cavidades van
aumentando de tamao y colapsan violentamente, dando lugar a enormes
presiones locales (de hasta 1000 atmsferas o 10 Tm/cm2).
Las consecuencias del colapso son:
La clula se desintegra.
Si existe oxgeno en el lquido de suspensin, se forman perxidos (como el
H2O2)
Despolimerizacin de macromolculas
Cortes en ambas hebras del ADN
En general, son ms sensibles las bacterias Gram-negativas y ms resistentes las
Gram-positivas.
Este mtodo no sirve para esterilizar, por que siempre hay la posibilidad de que
sobrevivan algunos individuos,
En laboratorio se usa para la sonicacin o disrupcin ultrasnica de clulas
para obtener extractos celulares.
1.4.- La filtracin
Los m.o, pueden ser eliminados, no as los
virus.
acero
inoxidable,
1.5.- La desecacin
La desecacin al aire (sin vaco) mata a las clulas vegetativas
bacterianas, pero no a las endosporas. La sensibilidad a la desecacin
vara de una especie a otra. Ejemplos: Mycobacterium tuberculosis, es
muy resistente al aire, de ah que pueda aguantar varios meses a partir
de los esputos de enfermos, en cambio, Vibrio cholerae muere en dos
horas expuesto al aire
Las causas de la muerte son, principalmente:
- el aumento de concentracin intracelular de sales, lo que conlleva
efectos txicos y desnaturalizantes de protenas
- daos por oxidacin
La desecacin, puede ser por evaporacin o sublimacin.
La liofilizacin es la desecacin al vaco de una muestra previamente
congelada. Se elimina el agua mediante sublimacin. (as evita los daos
qumicos causados por el secado con calor). Sin embargo, es un mtodo
caro y tiene un uso industrial limitado.
Coeficiente fenlico
Es un valor experimental para calificar a las sustancias biocidas,
tomando como referencia la capacidad biocida del fenol.
Para obtener el valor del coeficiente fenlico, se toma una serie de
tubos conteniendo cada uno 5 ml de diferentes diluciones del
desinfectante.
A la vez se prepara una segunda serie de tubos que contengan iguales
diluciones de fenol.
Cada tubo de las dos series se inocula con 0,5 ml de un cultivo del
microorganismo de prueba por 24 horas.
A los 5, 10 y 15 minutos se recoge una alcuota de cada tubo que se
inocula en otro tubo que contenga medio de cultivo estril. Estos tubos
se incuban durante 24 a 48 horas y se observa el crecimiento
microbiano (aparicin de turbidez).
La mayor dilucin del desinfectante que mate a los microorganismos
en 10 minutos pero no los mate en 5 minutos se divide por la dilucin
mayor de fenol que d los mismos resultados.
El nmero obtenido es el coeficiente fenlico de ese desinfectante.
Desinfectantes inorgnicos
Desinfectantes orgnicos
a.1.- Cloro
El cloro en el agua se presenta en dos formas: como cido hipocloroso
(HOCl) o in hipoclorito(OCl-), al total se define como Cloro Libre Disponible.
Acido hipocloroso, tiene mayor efecto biocida que el ion hipoclorito, debido
a que es neutro y puede atravesar la membrana celular.
El cloro en agua reacciona dando:
Cl2 + H2O <===> HClO + H+ + Cl-
a.2.- Hipoclorito
Es una sal de base fuerte y de cido dbil, y se hidroliza:
ClO- + H2O <===> HClO + OH- (Barreiro y Ghislieri)
Funciona igual al cloro, pero es menos eficaz.
Se aplica como: hipoclorito de sodio (NaClO), o hipoclorito de calcio
(Ca(ClO)2).
Hipoclorito de calcio: Se ofrece en forma granular y en tabletas,
normalmente con 65% de cloro disponible. Requiere cuidados especiales
de almacenaje para evitar su contacto con orgnicos.
Esta sal al disolverse eleva el pH de la solucin, lo que puede provocar la
precipitacin de carbonato de calcio (CaCO3). Comnmente se usa en
piscinas y pozos.
Hipoclorito de sodio: Se ofrece en soluciones al 15%, 12.5%, 5% (leja) y
1% en el mercado y tambin produce soluciones alcalinas.
Su uso es preferido si no se desea agregar dureza al agua. ClONa + H2O --- HONa + HOCl
a,4.-Dixido de cloro
ClO2 se usa en desinfeccin del agua potable en E.E.U.U.
Elimina formacin de THM (trihalomethanos) del cloro.
Gas explosivo, debe producirse in-situ.
El ClO2 es selectivo, solo reacciona con compuestos de sulfuro
reducidos, aminas secundarias y terciarias, y reactivos orgnicos
reducidos. Esto permite menor dosificacin de ClO2.
Capacidad de matar a esporas, virus y hongos en concentraciones
bajas.
No afecta gusto, olor o aspecto.
b.- Ozono
Es inestable. Agente oxidante ms fuerte y efectivo biocida.
Se genera por descarga elctrica o irradiacin UV de aire con O2
3 O2 ==== 2 O3
Su vida media es de cerca de 20 min. Dosis en agua: 0,5 ppm.
Durante la oxidacin, se divide en O2 y un tomo de O, muy reactivo:
O3 - > O2 + (O)
La ozonizacin eleva la concentracin de oxigeno disuelto del agua.
Efecto bactericida
Efecto viricida Acta oxidando las
protenas de su envoltura y
modificando su estructura
tridimensional.
El virus no
puede anclarse a ninguna clula
hospedadora por no reconocer su
punto de anclaje.
La ozonizacin previa al proceso de
desinfeccin con cloro reduce la
posibilidad de formacin de
trihalometanos.
Potabilizacin de agua
Pre sedimentacin
Pre cloracin
Coagulacin
En esta etapa se aplican
coagulantes y floculantes,
como: Sulfato de Aluminio o
policloruro de aluminio, y
Polielectrolitos y a veces cal.
Decantacin
Los coagulos (FLOCKS) con
mayor peso y volumen se van
al fondo de los sedimentadores
eliminndose por gravedad.
FILTRACIN
Las partculas e impurezas
quedan retenidas en filtros
de arena.
DESINFECCIN
En potabilizacin de aguas, se dosifica
suficiente cloro para satisfacer la
demanda natural de cloro (causada por
presencia de orgnicos) del agua y
alcanzar el nivel deseado de cloro libre
para proteger el sistema.
Un valor 0.2 mg/L de cloro libre (en el
punto ms lejano del sistema) es
suficiente para tener un sistema
limpio. Se echa cloro. Dosis 1 mg/l.
b.- El fenol
Desnaturaliza las protenas, y
desorganiza los lpidos.
En concentraciones superiores al 1%
el fenol es antibacteriano.
Su olor es desagradable, y es muy
irritante.
Compuestos fenlicos:
Los derivados del fenol ms
utilizados son: compuestos difenlicos
(hexaclorofeno, clorhexidina, etc.) y
los alquil fenoles (cresoles).
Los fenoles clorados primero se
adsorben a la pared celular. Despus
se difunden a la clula donde
precipitan las protenas.
Clorhexidina
Triclosn (5-cloro-2-(2,4-diclorofenoxi)fenol)
Mecanismo de accin: inhibe la
sntesis de ARN.
Antibacteriano y fungicida. Es poco
soluble en agua, pero se disuelve
en presencia de bases, por ejemplo
en NaOH 1N y en disolventes
orgnicos.
Aplicacin industrial.
Productos del cuidado personal,
cosmticos, pasta de dientes,
enjuagues bucales, desodorantes,
cremas, tratamiento del cne,
lociones y jabones de tocador.
Como agregado en plsticos,
polmeros, textiles y dispositivos
mdicos de implante.
c.- Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, provocan
modificacin irreversible de enzimas.
Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen
esporas.
Glutaraldehido
Formaldehido
Formaldehido.
Se usa tanto en fase gaseosa como en fase lquida. La
solucin acuosa (formol o formalina) contiene del 34 al
38% de principio activo.
Es bactericida, y esporicida, pero de accin ms lenta que
el Glutaraldehdo.
Su uso como esterilizante y desinfectante est limitado
por ser potencialmente carcinognico.
rgano-Mercuriales
Acidos yodados
Tienen accin sobre bacterias, hongos, virus y esporas.
Su efecto se debe a la yodacin de protenas y cidos
nucleicos.
Se usan como: solucin yodo-yoduradas y iodoforos
En soluciones yodadas (iodo-ioduro de potasio en alcohol);
son altamente efectivas desinfectantes
Presentan los siguientes inconvenientes:
Reacciones de hipersensibilidad .
Irritacin del rea tratada por el componente de alcohol.
Quemaduras en caso de solucin con iodo a ms del 2%.
e.- Colorantes
Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de
malaquita y verde brillante) bloquean la conversin del cido
UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido.
Violeta de Genciana
i.- Quimioterpicos
Las propiedades deseables de un quimioterpico ideal son:
1) Que tenga toxicidad selectiva, es decir, actuar sobre el
microorganismo respetando al hospedador
2) Que sea microbicida, es decir, que mate o inactive
irreversiblemente el microorganismo, provocando la prdida total de
viabilidad. Sin embargo, hay muchos quimioterpicos microbiostticos.
En estos casos, los sistemas de defensa natural del hospedador hacen
el resto, eliminando el agente microbiano previamente inhibido.
3) Los microorganismos susceptibles no deberan desarrollar
resistencias al quimioterpico. Pero esto casi nunca se logra.
4) Que el quimioterpico sea efectivo contra un amplio espectro de
microorganismos. Algunos antibiticos son de amplio espectro, pero
no son eficaces contra todos los microorganismos. Por otro lado, existen
quimioterpicos de espectro estrecho, pero muy selectivos contra
ciertas bacterias que son patgenas importantes.
5) Que no sea alergnico, y que no tenga efectos secundarios.
6) Que permanezca de forma activa en plasma, tejidos, etc. durante
el tiempo necesario. A ser posible, que sea soluble en agua y que
alcance pronto la concentracin teraputica en los tejidos
CMO SE UTILIZAN:
papel
Mercuriales orgnicos,
fenlicos
Cuero
Metales pesados,
fenlicos
Plsticos
Detergentes catinicos
Textiles
Metales pesados,
fenlicos
Madera
Fenlicos
Petrleo
Mercuriales, fenlicos
detergentes catinicos
Aire acondi
cionado
Cloro, fenlicos
Energa
elctrica
Cloro
Nuclear
Cloro
INDUSTRIA: