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Introducción
CONTROL MICROBIOLÓGICO
DE MATERIAS PRIMAS Y PRODUCTOS
Objetivo FARMACÉUTICOS NO ESTÉRILES
Fundamento
Materiales
Procedimiento
Resultados
Conclusiones
OBJETIVO
FUNDAMENTO
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
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LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – CONTROL MICROBIOLÓGICO DE MATERIAS PRIMAS Y
PRODUCTOS FARMACÉUTICOS NO ESTÉRILES
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5. Con una pipeta estéril, transferir porciones de 1 mL de la dilución 10-2 a cada una
de 2 placas de Petri estériles.
6. Con una pipeta estéril, transferir porciones de 1 mL de la dilución 10-3 a cada una
de 2 placas de Petri estériles.
7. Verter en cada una de las placas, 15 mL de agar soya caseína, fundido y enfria-
do a 45ºC, mezclando cuidadosamente las muestras con el agar. Dejar solidificar
e incubar en posición invertida a 37ºC por 48 horas.
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RESULTADOS
Número promedio de colonias (seleccionar las placas que tengan entre 30 y 300
CONCLUSIONES
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MATERIALES
PROCEDIMIENTO
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RESULTADOS
Número promedio de colonias (seleccionar las placas que tengan entre 30 y 300
CONCLUSIONES
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MATERIALES
Pipetas de 10 mL y de 1 mL
Propipetas
Placas estériles
Caldo lactosado (90 mL)
Caldo tetrationato
Caldo selenito cistina
Agar verde brillante
Agar desoxicolato
Agar sulfito bismuto
Agar triple azúcar hierro (TSI)
Agar MacConkey
Agar Levine
Asa y filamento
Mechero
Equipo para coloración de Gram
Estufa
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PROCEDIMIENTO
Aislamiento de Salmonella
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Agar sulfito-bismuto:
Marrones o negras, algunas veces con brillo metálico alrededor de la colonia (S.
typhi). Algunas cepas producen colonias verdes con poco o ningún oscurecimiento
del medio.
6. Los cultivos típicos de Salmonella en agar TSI presentan la parte inferior del
medio amarilla (formación de ácido) y el bisel rojo (alcalino), con o sin oscure-
cimiento, generalmente con formación de gas.
Bisel
Lactosa
negativo
Taco
H2S positivo
Glucosa positivo
Agar TSI Salmonella en agar TSI
(sin inocular)
7. Hacer una coloración de Gram: los miembros del género Salmonella, son baci-
los Gram negativos no esporulados.
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Aislamiento de E. coli.
2. Las colonias de coliformes en agar MacConkey son de color rojo ladrillo, even-
tualmente rodeadas de zonas de bilis precipitada.
E. coli
6. Los cultivos típicos de E. coli en agar TSI presentan el bisel amarillo, sin oscu-
recimiento y con formación de gas.
Lactosa positivo
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MATERIALES
Pipetas de 10 mL
Propipetas
Placas estériles
Caldo Soya Caseína (90 mL)
Agar Vogel-Johnson (o Baird Parker o manitol sal)
Agar nutritivo inclinado
Plasma EDTA (para coagulasa)
Caldo cerebro corazón
Agar cetrimide
Papel de filtro
Reactivo N,N-dimetil-p-fenilen diamonio dicloruro
Asa y filamento
Mechero
Equipo para coloración de Gram
Estufa
PROCEDIMIENTO
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1. Mediante un asa hacer aislamiento del caldo soya caseína a agar cetrimide.
Incubar a 35ºC por 24 horas.
4. Si hay colonias típicas, transferir a agar nutritivo inclinado. Incubar a 35ºC por
24 horas.
5. A partir del agar nutritivo hacer una coloración de Gram: la Ps. aeruginosa es un
bacilo Gram negativo no esporulado.
En una placa de Petri colocar un disco de papel de filtro. Impregnar con el reac-
tivo N,N-dimetil-p-fenilen diamonio dicloruro y dejarlo secar en la estufa.
Con una pipeta Pasteur estéril con la punta cerrada, transferir una pequeña
cantidad del cultivo del tubo de agar inclinado, al papel de filtro.
El desarrollo de un color rosado, casi púrpura, se considera una prueba de oxi-
dasa positiva.
Oxidasa positiva
Oxidasa
negativa
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RESULTADOS
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CONCLUSIONES
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ACTIVIDADES ADICIONALES
1. Escoja un medio selectivo de los que Ud. utilizó en el trabajo asignado. Ex-
plique porqué fue seleccionado ese medio.
2. Qué significa el test del IMViC y cuáles microorganismos nos permite iden-
tificar.
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5. Señale si existe alguna (s) diferencia (s) entre el método del recuento en
placa por incorporación y el método del recuento en superficie.
BIBLIOGRAFÍA
Brock T.D. Madigan M.T. Martenko J.J. y Parker J. (Eds) Biología de los microor-
ganismos. 8ª Edición. Prentice Hall International. (1999).
The Official Compendia os Standards USP 24 NF. The United States Pharmaco-
peia. The National Formulary. Pharmacopeial Convention Inc. Rockville MD
(1999).
www.bact.wisc.edu/bact102/102bactid2.html
Norma De Castro
María Luisa De Curtis
Enero 2002
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