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Escherichia coli
Familia Enterobactericeae
Tribu Escherichia
Bacilo Gram Negativo
Anaerobio facultativo predominante en colon
Escherich 1884
Serotipificación Kauffman 1944
Tamaño de su genoma 4 X 109 pb
Escherichia coli Patogénica
Síndromes clínicos
Meningitis/sepsis
CFA/III fimbriae of ETEC (5-7 nm) CFA/I fimbriae of ETEC (5-7 nm) P pili of UPEC (10 nm)
CS3 fibrillar structure of ETEC (2-3 nm) BFP of EPEC (>10 µm) Thin, coiled aggregative curli fibres
Virulencia
Estrategia de E. coli
•Colonización de la mucosa
•Evasión de las defensas del huésped
•Multiplicación
•Daño a los tejidos del huésped
Tomado de: M.M. Levine and M.B.Sztein. Chapter 12 in Effects of Microbes on the inmune system
Lippincott Williams and Wilkins
Factores de Virulencia de E. coli
(1/2)
Factores de Virulencia de E. coli
(2/2)
ETEC
•Elabora al menos un miembro de los dos grupos de
enterotoxinas conocidas como ST y LT (termoestable y
termolábil), estimulan al intestino y provoca excesiva
secreción de fluidos.
*http://www.cdc.gov
Factores de Colonización de ETEC
ETEC
Células Células
de las absorbentes
criptas
Fosforilación
A de proteínas
B
Cinasa A
NAD
ATP cAMP
Proteínas G ADPr
GDP β GTP
α γ
α adenilato ciclasa
GTP “activada”
Toxina termoestable (ST)
enterotóxicidad
•Incrementa niveles de GMPc STa
Receptor/
Guanilate
cyclase C
•STb: Encontrada solo en ETEC
GTP cGMP G-kinase
•Induce daño histológico
Enterocito
Pruebas en ETEC
Detección de LT Detección de ST
LEE
Cromosoma escRSTU escCJ escV escN tir orfU eae espADB
EPEC EAF
bfp A G B C U perA B C EAF probe
pilin OMP
Modelo de patogénesis de EPEC
1. Adherencia localizada
• EAF, BFP
2. Transducción de señales
3. Adherencia intima
Adherencia localizada de EPEC
Isla de patogenicidad LEE
Secreción:
Secreta cinco proteínas: EspA, EspB, EspD y EspF
(sistema tipo III)
Están codificadas en una isla de patogenicidad de 35.6
kb llamada LEE
Tir (receptor para intimina), adhesina de EPEC,
codificada dentro de LEE
EspA, EspD y EspB forman un translocón
Sistema de secreción tipo III en
EPEC
Señales de transducción EPEC
Proteína EspC
Auto transportadoras, sistema de secreción
Tipo IV
MUTACION EN GEN NO AFECTA 1998
Señales de transducción
Daño A/E
Cualquier otro fenotipo patogénico
Proteína EspC
•espC marco de lectura abierta con 3,924 pb.
MNK GGDSGSG
espC
pJML174
d
e
r
Regulación de factores de
virulencia de EPEC
EHEC
Colitis hemorrágica (HC)
•Dolor abdominal, diarrea acuosa, diarrea con sangre y
fiebre escasa.
•Brote de enfermedad por alimentos en 1983 asociado
con hamburguesas mal cocidas.
Sindrome urémico hemolítico (HUS)
•Diarrea inicial aguda indistinguible de HC.
•Falla renal aguda, trombocitopenia, anemia hemolítica
Escherichia coli O157:H7
•SLT (Shiga like toxin) “SLTEC”
•Verotoxina “VTEC”
•Lesion A/E
EHEC
Genes de patogenicidad
Cromosoma
EHEC
Stx
EAST1
Enterohemolisina
OMP intimina 94 a 97 kDa
Plasmido
60 MDa
Genoma de EHEC secuenciado
Shiga like toxin
Principal factor de virulencia de EHEC
•Stx1 y Stx2
•Toxina identica a Stx1 de S. dysenteriae I
•Estructura A-B clásica de la familia de toxinas Shiga
•Subunidad B se une a un receptor glicolipido (Gb3).
Subunidad A
•Peptido A1 contiene la actividad enzimática.
•Se trasloca a el citoplasma, actua en la subunidad
ribosomal 60S (N-glicosidasa adenina de 28s rRNA).
Efectos
•Hemorragia y edema en la lamina propia.
•Necrosis focal e infiltración de neutrófilos.
•Se infiltra en torrente sanguíneo.
•Inflamación de células endoteliales glomerulares y
deposición de plaquetas y fibrina.
EHEC citotoxicidad in vivo e in
vitro
Transmisión
Periodo de incubación de 3 a 4 días.
•Alimentos y bebidas.
•Persona a persona.
Diagnóstico
•Aislamiento de la bacteria en agar SMAC.
•Serotipificación
•ELISA
•Detección de stx, fliC, eae, pO157
EAEC
Definición
•No secreta enterotoxina LT o ST.
•Patrón de adherencia agregativo (AA).
Patogénesis
•Aumenta la secreción de moco.
•Localización de la bacteria entre el moco y la célula.
•Toxina PET (plasmid encoded toxin).
•Fimbrias AAF/I y AAF/II
Modelo
•Colonización y localización inicial.
•Aumento en la secreción de moco.
•Elaboración de citotoxina PET.
Detección y Diagnóstico
Plásmido
•Sondas de DNA.
•PCR.
Adhesión de EAEC en intestino
Structural subunit of the fimbria
Role of the fimbria on the adhesion to
intestinal mucosa
Daño a celulas epiteliales
por EAEC
Factores tóxicos EAEC
Cleavage Cleavage
RGD motif
Serine protease
Extended N- active site Walker
terminal signal (GDSGSP) RGD motif A box
sequence
(AXB)
C-terminal motif
Signal peptidase ([Y/W/V/I/f]-X-[F/W])
recognition site
Autoproteolysis antiparallel β-sheet structure
Role in virulence
Outer
membrane
β-barrel
formation
Translocation of α-domain
Periplasm
Cleavage of signal
sequence
Inner
membrane
Cytoplasm
GSP machinery
Polyprotein
Fernando Navarro Garcia
Morphologic effect of Pet protein on
epithelial cells
203
116
Pet
83
48
33
28
C
60I
60I
eP
1.6
S2
S2
tiv
N ativ e Pe t p ro te in
t
t
Na
Pe
Pe
1.2
proteinase K
0.8
0.6
Pe t p rotein
0.4
0.2
0.0
Fractio n N o .
3
A
Pet
∆PD (mv)
-1
200 B
∆Isc (µA/cm 2)
100
PetS260I
0
1
0I
t
RT
Pe
26
PO
tS
Pe
pS
1 h in
30 in
1 hmin
30 in
m
m
m
M
4h
4h
6h
8h
8h
2h
2h
6h
10
10
W
C
C
250
0
0
150
100
75
50
37
25
B SDS-PAGE Immunoblot C
Inmunocolocalization of Pet, fodrin
and actin within HEp-2 cells
A B C D
E F G H
20 µm
Portada mostrando la interacción de Pet y
fodrina dentro de células epiteliales
Pet
Efectos enterotóxicos
•En preparaciones de yeyuno de rata
4Incremento en la secreción de iones por las células
epiteliales (cámara de Ussing, ↑ ISC y ↑ PD)
4 Acortamiento de las vellosidades
4 Exfoliación de células
4 Liberación de moco
Efectos citotóxicos
4 Liberación de los contactos focales
4 Redondeamiento de la célula
Invasividad
•Mediada por pInv 140 MDa
•Locus cromosomal mxi y spa aparato de secreción tipo
III.
•IpaA,B,C,D necesarias para el fenotipo de invasividad.
•VirG provoca nucleación de los filamentos de actina y
movimiento a través del citoplasma.
EIEC genes de virulencia
EIEC
Cromosoma
Plasmido
140 MDa
SS tipo III
EIEC modelo de patogénesis
•Penetración de la célula
epitelial.
•Lisis de la vacuola endocítica.
•Multiplicación intracelular.
•Movimiento direccional a
travéz del citoplasma.
•Traslocación a células
adyacentes.
Polimerización de actina por
bacterias
Diagnóstico EIEC
Prueba de Sereny.
Sonda pMR17 derivado
pInv.
Sonda ial derivada pInv.
PCR ial.
ELISA para detectar
ipaC.
Fimbrias de adhesión