INTRODUCCION: Regularmente en el área de Parasitología, las muestras más analizadas para demostrar la presencia de parásitos intestinales del hombre

son las heces fecales; sin embargo, existen otros parásitos cuya presencia se puede evidenciar en muestras biológicas como: bilis, jugo duodenal, esputo, secreción, biopsia o frotis perianal, no obstante estas pruebas se harán tomando en cuenta los antecedentes clínicos específicos del paciente. A continuación, se hará referencia a los diversos aspectos con los cuales deberán proceder las muestras a analizar con fines parasitológicos para obtener resultados reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al médico en el diagnostico pronostico, y tratamiento del paciente.

PRACTICAS N° 1 Tema: ´Técnica del examen coproparasitario para el diagnostico de parasitosis intestinalµ Objetivos:
1. 2. 3. 4. Aprender a realizar un examen coprológico de forma práctica en el laboratorio. Diferenciar y conocer la importancia de las técnicas de tinción para la observación en el microscópico Interpretar los resultados de lo que se observa en las heces de forma macroscópica y microscópica. Identificar organismos unicelulares en distintos estados y aprender la forma reconocerlos.

Materiales
1. Biológico: a) 2. Muestra de heces fecales.

Equipos: a) b) c) d) e) f) g) h) i) Portaobjetos: varios Cubreobjetos: varios Microscopio Aplicador Recipiente estéril para recolectar muestra Centrífuga Vaso de precipitados de 50 ml Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado Tubos de ensayo cónicos de 15 ml

3.

Colorantes y reactivos a) b) c) d) e) f) Lugol parasitológico Solución salina fisiológica Formaldehído al 10% Éter Pipeta Pasteur con bulbo Embudo

Métodos y Técnicas de Tinción
En la actualidad se cuenta con 3 métodos para detectar parasitosis y se efectúan de acuerdo al procedimiento y el tipo de parásitos, según sus síntomas y signos. Los parásitos se encuentran de 3 formas trofozoitos, prequiste y quiste. MÉTODOS DIRECTOS

EXAMEN COPROPARASITARIO SERIADO Examen directo Enriquecimiento (Ritchie, Faust, Sheather) Coloraciones temporarias (Lugol, Clorazol, Tionina) Coloraciones permanentes (Frotis): Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun para diagnóstico de coccidiosis intestinales (Criptosporidiosis, Isosporosis, Ciclosporosis) Hematoxilina Férrica para amibiasis Tricrómica y Gram Cromotrope para microsporidiosis Examen macroscópico Nuevos equipos desechables que facilitan la tarea en el laboratorio Método de la espátula adhesiva para diagnóstico de oxiurosis

Sondeo duodenal (giardiasis) Biopsia de intestino delgado (giardiasis)
MÉTODOS INDIRECTOS EN HECES: coproantígenos (E.histolytica, G.lamblia, Cryptosporidium parvum) por IFI, ELISA, IEC EN SUERO: anticuerpos séricos (Eh en casos de amibiasis invasiva) MÉTODOS COPROPARACITOSCOPICOS MÁS UTILIZADO Método directo: Es el más antiguo que se conoce y fue el primero utilizado por Antonio Van Lewenhooke en el siglo XVIII observando trofosoitos de Giargia Lambía. TÉCNICA: En un extremo de un porta objetos se colocan 1 o 2 gotas de solución salina, en otro extremo del porta objetos se colocan 1 o 2 gotas de lugol, después se colocan una pequeña muestra de materia fecal y luego se esparcen hasta dejarla semilíquida y se observa en el microscopio. Concentración o de faust: Este es el método más usado y efectivo, en este se precipitan los parásitos por centrifugación después de haber filtrado la muestra. TÉCNICA: Se desmenuza una porción de materia fecal en un tubo de ensaye y se le agrega ¾ partes de agua de la medida del tubo, se agita y se filtra a través de una gasa. Después se centrifuga a 1500 revxmin durante 5 min. Después se decanta y el sobrante del sedimento se le agrega sulfato de zinc y con un agitador se mezcla bien y se vuelve a centrifugar a 1500 revxmin durante 5 min. Después se coloca una gota de lugol en un porta objetos y se toma una muestra de materia fecal en seco débil y seco fuerte. Método de raspado anal o gram Este método se realiza en la región perianal para obtener huevecillos de los siguientes parásitos de Enterobius Vermicularis, Ascaris Lumbricoides, Tenia Solium, Tenia Saginata, Himenolepis nana y diminuta además de Trichuris Trichuria.

TÉCNICA: y La muestra se toma de un paciente que no se haya bañado o defecado. y Se toma un abatelenguas y se le coloca cinta adhesiva con el pegamento hacia fuera. y Se coloca al paciente en posición genupectoral, se le abre la región perianal y se le coloca el abatelenguas alrededor, se coloca la muestra en un porta objetos con lo que se recolecto hacia abajo y se observa al microscopio.

Desarrollo de la práctica
Indicaciones por la docente sobre la técnica a utilizarse para la realización de la práctica. Colocarse material de laboratorio como guantes, mascarilla y mandil. En un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocan separadamente, una gota de solución salina y otra de lugol. Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces 8 en muestras con sangre y moco elegir esa parte para estudiar) y se mezcla con la solución, con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos, procurando hacer una suspensión no un frotis. Colocar el cubreobjetos. Repetir estas operaciones en la gota de lugol. Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. No es recomendable usar objetivo de inmersión (100 x), pues se puede ensuciar el microscopio. Recorrerla lamina siguiendo un sentido direccional, ejemplo: de derecha a izquierda, o de arriba abajo. Observar en el microscopio, estructuras presentes en las heces. NOTA: Con el suero fisiológico, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forman natural, y con lugol, las estructuras internas, núcleos y vacuolas.

Gráficos:

Cuestionario
1.- ¿Qué elementos se identifica en las heces cuando hay protozoarios?
Entre los protozoos destacan, por su relativa frecuencia de observación en heces humanas, las amebas, los flagelados del tipo de las lamblias, Trichomonas y Chilomastix, y los ciliados, como el Balantidium coli. Pueden aparecer las formas activas o sus quistes, que no deben confundirse con las levaduras existentes normalmente en toda deposición. Es discutible la capacidad patógena de cualquiera de los protozoos señalados, y antes de admitir la importancia etiológica de tal hallazgo en las heces deben excluirse otras causas del cuadro, y sólo serán inculpados aquellos si además su presencia es abundante.

2.- ¿Qué es un quiste y un Trofozoito?
Giardia lamblia, es un protozoo flagelado patógeno perteneciente al orden Diplomonadida que parasita el tracto digestivo de humanos y otros mamíferos, produciendo una patología denominada giardiosis, giardiasis o lambliasis, tiene dos formas de vida en su ciclo vital: Trofozoíto: presenta un tamaño en torno a 20 m de longitud y 15 m de ancho con una morfología piriforme y una simetría bilatral. Proyectada en un plano se asemeja a una pera. Posee 8 flagelos, 2 anteriores, 2 posteriores, 2 ventrales y 2 caudales, cuya función es la motilidad celular. En la cara ventral presenta una estructura con forma de disco bilobulado, cuya función es permitir la fijación del parásito a la superficie del epitelio intestinal. En la cara dorsal y coincidiendo en posición con el disco bilobulado se sitúan dos núcleos ovalados con grandes endosomas. A lo largo de la superficie ventral se disponen unos elementos denominados cuerpos mediales, cuya función aún permanece desconocida. El trofozoito es la forma vegetativa que se alimenta y se reproduce. Quiste: presenta un tamaño en torno a 15 m de longitud y 10 m de ancho con una morfología ovalada. Posee 4 núcleos que siempre aparecen dispuestos en alguno de los polos. No presenta flagelos aunque se pueden apreciar los axonemas flagelares (restos de los flagelos) y los cuerpos mediales duplicados con respecto al trofozoito. La pared es transparente y muy resistente tanto a factores físicos como químicos. El quiste es la forma vegetativa infectante y de resistencia.

3.- ¿Qué elementos se identifica en las heces y que relaciona con Helmintos?
Helmintos: gusanos del tipo Ascaris, o de la Tenia o "lombriz solitaria". Protozoos: como la Giardia lambria y las ameba. Oxiuros: las "lombrices", muy frecuentes en niños pequeños. Se los relaciona por que los helmitos se los ve a simple vista y no se necesita de hacer un estudio microscópico para saber que existe en una muestra de heces.

4.- Para que se utiliza el suero fisiológico y lugol para el examen coproparasitario?
Con el suero fisiológico, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forman natural, y con lugol, las estructuras internas, núcleos y vacuolas.

Resultados
Se informará detalladamente aquellas características macroscópicas observadas durante el análisis coproparasitoscopico así como se deberá hacer referencia en su caso el aislamiento de algún gusano durante el tamizado especificando su especie. MACROCOSPICO Permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados así como los cambios en las características organolépticas de las heces eliminadas (color, presencia de sangre, y/o moco, consistencia etc.).

MICROSCÓPICO:

En general se emplean dos métodos: Método directo: Este método permite observar formas vegetativas de protozoarios (trofozoitos de amebas) y ooquistes de coccideas. Es útil en las necropsias, para analizar el contenido intestinal. Cuando al agregado se le agrega 1 gota de lugol débil, se destruyen los trofozoitos y se observa los quistes. Método de enriquecimiento o concentración: Sirve para concentrar las formas parasitarias (huevos, larvas) en las heces, de manera que puedan ser diagnosticadas, aún cuando existan pequeñas cantidades de huevos. Pueden ser: Cualitativos (métodos de flotación, métodos de sedimentación) o cuantitativos (Método de cámara de Mc Master, Método de Stoll). Elementos que se pueden observar en un análisis coprológico Pseudoparásitos: Û Residuos vegetales: gránulos de almidón y espículas, granos de polen, esporas de hongos, células vegetales. Û Grasas y cristales. Û Burbujas de aire. Û Huevos y larvas de parásitos de vida libre. Parásitos: Û Huevos de parásitos. Û Ooquistes y quistes de protozoarios. Û Larvas de parásitos.

Conclusiones:
Aprendí a preparar una muestra de heces para realizar su estudio macroscópico y microscópico con solución salina (suero fisiológico). Observe las características físicas de las heces, teniendo en cuenta que estas eran líquidas, de olor fétido y de coloración marrón, no tenían sangre ni moco. Observe al microscopio estructuras como una entoameba hystolítica en estado de prequiste, diferenciándola por su presencia de varios quistes en su interior.

Distinguí y diferencie luego una Giardia lamblia por su forma ovoide y con una prolongación hacia atrás. Reconocí además estructuras anexas de la muestra como materia fecal condensada.

Recomendaciones
Estar atentos a las indicaciones generales para que al momento del reconocer las placas no confundamos unas estructuras de otras, teniendo en cuenta diferencias entre estas. Tomar la muestra ya preparada con cuidado y con el afán de no romper el porta y el cubreobjetos. No mover las placas luego de haber sido enfocadas y diferenciado su contenido, en especial si se identifican estructuras importantes en la muestra. Al observar con el lente de mayor aumento, evitar el choque de la placa con este para no romper el portaobjetos, ni contaminar el microscopio. Para una mejor observación utilizar únicamente el tornillo micrométrico. Observar con los dos ojos para tener una mejor apreciabilidad de la muestra. Colocarse correctamente el mandil y material de protección dentro del laboratorio.

Bibliografía:
Laboratorio de Microbiología: Instrumentación y principios básicos/ José González Alfaro, Boris González González, Rosa T. Barrial González. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 2004. MANUAL DE TÉCNICAS EN MICROBIOLOGÍA CLÍNICA. M. V. Álvarez, E. Boquet, I. De Fez. AEFA. 1990. http://www.tuotromedico.com/temas/parasitos_en_heces.htm http://www.sepeap.org/archivos/libros/NEFRO/ORINA/VARIOS.pdf http://www.medicentro.com.co/Laboratorio.htm http://www.scribd.com/doc/22029852/fasciculo27-los-parasitos http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/?_c11_BlogPart_pagedir=Next&_c11_BlogPart_ha ndle=cns!204AC1C68E772D5!2111&_c11_BlogPart_BlogPart=blogview&_c=BlogPart

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