2010

ROJAS MORALES ALBERTO

Pruebas Bioquímicas

Equipo 6

Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Laboratorio de Microbiología I
1651
 SIM, Medio
UTILIDAD DEL MEDIO FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
2
Es un medio semisólido El triptófano es un aminoácido A partir de un cultivo de Durante 24 horas, Cepas móviles: producen turbidez del
destinado a verificar la constituyente de muchas peptonas, y 18-24 horas en medio a 35-37 °C, en medio, que se extiende mas allá de la
movilidad, producción particularmente de la tripteína, que sólido, sembrar por aerobiosis. línea de siembra.
de indol y de sulfuro de puede ser oxidado por algunas punción profunda con Luego de la Cepas inmóviles: el crecimiento se
hidrógeno en un mismo bacterias para formar indol. En el aguja de inoculación incubación, observa solamente en la línea de
tubo. proceso interviene un conjunto de recta (no usar ansa con agregar 3-5 gotas siembra.
Es útil para diferenciar enzimas llamadas triptofanasa. El anillo). Se debe inocular de reactivo de Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a
miembros de la familia indol producido se combina con el el centro del tubo, y la Kovac´s o de Erlich. lo largo de la línea de siembra o en todo
Enterobacteriaceae. aldehido del reactivo de Kovac´s o de punción debe abarcar 2 el medio.
Erlich, para originar un compuesto de tercios de profundidad Cepas SH2 negativas: el medio
color rojo. Las cepas móviles pueden del medio de cultivo permanece sin cambio de color.
apreciarse en este medio, por la desde la superficie. Es Cepas indol positivas: desarrollo de
turbidez que producen alrededor de importante que la color rojo luego de agregar el reactivo
la punción de siembra, mientras que siembra se realice en de Kovac´s o de Erlich.
aquellas cepas productoras de línea recta. Cepas indol negativas: sin cambio de
sulfhídrico se distinguen por la color.
formación de un precipitado negro de
sulfuro de hierro a partir del
tiosulfato siempre que el medio se
mantenga a un pH mayor a 7.2.

Limitaciones
-En las bacterias aerobias estrictas, que sólo crecen en
superficie, la movilidad puede ser difícil de observar.
-Algunas bacterias productoras de melanina como M.
morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe
confundirse con el color negro debido a la producción de
ácido sulfhídrico.
 3

Bacteria (medio ácido) + tiosulfato de sodio --------------- gas SH2

SH2 + iones férricos------------- sulfuro ferroso (pp. negro)

 Simmons Citrato Agar
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
4
MEDIO
Medio utilizado para En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única A partir de un A 35-37 ºC, -Positivo: crecimiento y
la diferenciación de fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de cultivo puro de durante 24-48 color azul en el pico,
enterobacterias, en carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo 18-24 horas, horas, en alcalinidad.
base a la capacidad bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el sembrar en aerobiosis. -Negativo: el medio
de usar citrato como magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el superficie un Algunos permanece de color verde
única fuente de balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, inóculo ligero , microorganismo debido a que no hay
carbono y energía. que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es usando una ansa s pueden desarrollo bacteriano y no
diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar sin arrastrar el requerir hasta 4 hay cambio de color.
citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio agar. días de
como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción incubación.
de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias
poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido
tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente,
oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio
alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la
producción de citrato permeasa.
Limitaciones
-Si se usa un inóculo denso para sembrar el medio de cultivo,
puede variar el color del pico del verde al amarillo-
amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo,
pero puede afectar la visualización azul de un resultado
positivo.
-Inóculos muy densos, pueden originar resultados falsos
positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioquímicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de inoculación antes de inocular la prueba del
citrato o sino inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgánica puede originar resultados falsos positivos.
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 Kligler Hierro Agar
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACI RESULTADOS
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MEDIO ON
Medio de cultivo En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, A partir de un A 35-37°C
frecuentemente aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo cultivo puro del durante 24 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico
usado en bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de microorganismo en horas, en rojo/fondo amarillo): el
microbiología de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato estudio, sembrar el aerobiosis. microorganismo solamente fermenta la
alimentos para la necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato medio de cultivo, glucosa.
3+
diferenciación de de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe , los cuales se picando el fondo y 2-Pico ácido/fondo ácido (pico
enterobacterias, combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de extendiendo sobre amarillo/fondo amarillo): el
en base a la hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de la superficie del microorganismo fermenta glucosa, y
fermentación de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El medio. lactosa.
glucosa y lactosa, agar es el agente solidificante. 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico
y a la producción Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se rojo/fondo rojo): el microorganismo es
de ácido detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira no fermentador de azúcares.
sulfhídrico. al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se 4-La presencia de burbujas, o ruptura
reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con del medio de cultivo, indica que el
una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro microorganismo produce gas.
de color negro. 5-El ennegrecimiento del medio indica
que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.
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 Hierro y Triple Azúcar, Agar
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACI RESULTADOS
8
MEDIO ON
Medio En el medio de cultivo, el extracto de carne y la A partir de un A 35-37°C 1-Pico alcalino/fondo ácido (pico
universalmente pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el cultivo puro, durante 24 rojo/fondo amarillo): el
empleado para la desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los sembrar en TSI, horas, en microorganismo solamente fermenta la
diferenciación de hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es picando el fondo y aerobiosis. glucosa.
enterobacterias, el sustrato necesario para la producción de ácido extendiendo sobre 2-Pico ácido/fondo ácido (pico
en base a la sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de la superficie del amarillo/fondo amarillo): el
fermentación de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y medio. microorganismo fermenta glucosa,
glucosa, lactosa, producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol lactosa y/o sacarosa.
sacarosa y a la es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico
producción de balance osmótico. rojo/fondo rojo): el microorganismo es
ácido sulfhídrico. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se no fermentador de azúcares.
detectan por medio del indicador rojo de fenol,el cual vira 4-La presencia de burbujas, o ruptura
al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se del medio de cultivo, indica que el
reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con microorganismo produce gas.
una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro 5-El ennegrecimiento del medio indica
de color negro. que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.
9

UTILIDAD DEL FUNDAMENTO
MEDIO
Se emplea en Antes de emplear el agar como
estudios de agente gelificante en la elaboración
microorganismos de los medios de cultivo se
proteolíticos que empleaba la gelatina. No obstante,
degradan la presentaba inconvenientes tales
gelatina por la como la presencia de determinados
producción de microorganismos que eran capaces
gelatinasa. de utilizar la gelatina, el medio se
licuaba debido a la producción de
gelatinasa. Actualmente, la
capacidad de degradar la gelatina
por parte de algunos
microorganismos se utiliza como
carácter en la determinación e
identificación oficial.
Gelatina Nutritiva
SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
10
Sembrar Incubar el medio con el microorganismo a Positivo si hay licuefaccion de la
la estudio a 20-22°C, o bien a la temperatura gelatina despues de enfriarse.
muestra óptima para el microorganismo. Si la Negativo si la gelatina continua solida
por incubación se realiza a temperatura superior despues de enfriarse
picadura. a los 20-22°C (la gelatina será líquida) antes
de proceder a la lectura los cultivos deben
enfriarse en la nevera para no dar falsos
positivos. Por regla general se aconsejan
incubaciones máximas de 14 días con lecturas
cada 3, pero debe tenerse en cuenta que
ciertos organismos pueden tardar hasta
varios meses en licuar la gelatina.
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 Agar almidon
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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MEDIO
Inocular en tres puntos Incubar a 35ºC Inundar las placas con lugol.
HIDRÓLISIS DEL Las bacterias pueden usar alimentos equidistantes de la superficie de durante 24-48 La presencia de un halo
ALMIDÓN. macromoleculares; para ello, es necesario una las placas (tocando suavemente horas. transparente alrededor de la
comprobar qué hidrólisis extracelular preliminar, igual que con el asa un punto de dicha colonia indica que la prueba
bacterias sucede en los animales superiores. Las distintas superficie) con las bacterias de es positiva, es decir que la
producen bacterias elaboran para este fin una cierta prueba. bacteria ha hidrolizado el
amilasa y son por variedad de enzimas extracelulares que se almidón mediante la amilasa.
tanto capaces de segregan al medio.
utilizar el El objetivo de esta práctica es comprobar qué
almidón como bacterias producen amilasa y son por tanto
nutriente capaces de utilizar el almidón como nutriente.

las bacterias del género bacillus (B. thuringiensis y B. subtilis) producen

amilasa.
 Christensen Medio (Urea Agar Base).
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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MEDIO
Medio utilizado En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, A partir de un cultivo puro de 18- En aerobiosis, En el proceso de degradación
para diferenciar aportan los nutrientes para el desarrollo de 24 horas, estriar la superficie del durante 24-48 de la urea se produce
microorganismos microorganismos. El cloruro de sodio mantiene pico de flauta. Algunos horas a 35-37 °C. amoníaco, éste hace variar el
en base a la el balance osmótico, y el rojo de fenol es el microorganismos pueden color del indicador Rojo de
actividad indicador de pH. requerir mayor tiempo de Fenol (de amarillo a rojo)
ureásica. Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio incubación. poniéndose así de manifiesto
Se utiliza para de la enzima ureasa liberando amoníaco y Se recomienda no punzar la capa la actividad ureasa.
identificar dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan profunda para controlar el color.
bacterias que el medio haciendo virar el rojo de fenol del
hidrolizan urea, amarillo al rojo. En este medio, la fermentación
tales como de la glucosa activa la enzima ureasa,
Proteus spp., acelerando la velocidad del metabolismo en
otras aquellos organismos que hidrolizan lentamente
enterobacterias la urea, como especies de Enterobacter o
y estafilococos. Klebsiella.

Limitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser
Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter, viran al color
rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de
varios días de incubación.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo
porque la urea se descompone facilmente.
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 CALDO ROJO DE FENOL Y SACAROSA
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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MEDIO
El Caldo Rojo de La capacidad de las bacterias de fermentar Inocular el medio con una gota Incubar a 35 ± 2°C La presencia de un color
Fenol y Sacarosa carbohidratos es utilizada como un criterio para de una suspensión hecha con un durante 4-18 horas amarillo indica la una
es utilizado para su identificación. El medio provee los cultivo puro con las tapas flojas. reacción positiva para la
la diferenciación requerimientos nutricionales para el Examinar los tubos fermentación de la Sacarosa.
de cultivos crecimiento de los microorganismos y contiene para evaluar La presencia de una o más
puros, en base a Rojo de Fenol como indicador de pH. Este crecimiento, burbujas en la campana de
su capacidad indicador fue utilizado por Vera obteniéndose producción de Durham indica una reacción
para fermentar resultados altamente confiables. ácido y producción positiva para la producción
la sacarosa. La peptona provee la fuente de nitrógeno para de gas de gas.
el buen desarrollo de los microorganismos, el
Cloruro de Sodio mantiene el balance osmótico
del medio y el Rojo de Fenol actúa como
indicador, virando de color rojo-naranja a
amarillo en presencia del ácido producido por
la fermentación del azúcar.
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 Fenilalanina Agar.
UTILIDAD DEL MEDIO FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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Medio de cultivo En el medio de cultivo, el extracto de levadura aporta A partir de un Incubar de 18 a El análisis de los resultados debe
utilizado para diferenciar los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo cultivo puro de 24 horas a 35- realizarse dentro de los primeros
Morganella morganii bacteriano. 18-24 horas, 37 °C, en 5 minutos.
biogrupo 1 y 2, Proteus El aminoácido fenilalanina sufre la desaminación sembrar un aerobiosis.
spp. y Providencia spp., oxidativa catalizada por la enzima fenilalanina inóculo denso Positivo: desarrollo de color
de la mayoría de otros deaminasa (es una flavoproteína), para producir ácido estriando la Luego, se debe verde pálido a intenso en el pico
miembros de la familia fenilpirúvico y amoníaco. La presencia del ácido superficie del realizar el de flauta y en el líquido de
Enterobacteriaceae, en fenilpirúvico se demuestra con el agregado de cloruro medio. revelado: condensación.
base a la presencia de la férrico en medio ácido, con el cual se forma un agregar unas
enzima fenilalanina quelato de color verdoso entre el ácido fenil pirúvico y gotas de una Negativo: sin cambios de color.
deaminasa. los iones Fe3+. solución acuosa El medio permanece amarillo
Además, en este medio se suele poner en evidencia la de cloruro debido al color del reactivo
producción de pigmentos melánicos, como en el caso férrico al 10% cloruro férrico.
de Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, (código B15-
etc. 504-61).

Limitaciones
No se recomienda realizar la lectura de la prueba
después de los 5 minutos, debido a que disminuye la
intensidad del color verde.
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 Lisina Hierro Agar.
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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MEDIO
Medio de En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los Por punción En 1- Decarboxilación de la lisina:
cultivo nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de profunda aerobiosis,
utilizado para carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la con aguja de durante 24 -Prueba Positiva: Pico
diferenciar presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y inoculación. horas a 35- violeta/fondo violeta.
microorganism amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de 37 °C. -Prueba Negativa: Pico
os, ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual violeta/fondo amarillo.
especialmente es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual
Salmonella o mayor a 6.8. 2-Desaminación de la lisina:
spp., basado en Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, que
la alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. Pico rojizo/fondo amarillo. Esto
decarboxilació La decarboxilación de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo que es sucede con cepas del género
n/ necesario que la glucosa sea previamente fermentada. Proteus, Providencia y alguna
desaminación Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son cepas de Morganella spp.
de la lisina y en fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio
la producción de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de 3-Producción de ácido
de ácido color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo. sulfhídrico:
sulfhídrico. La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el
ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro. -Prueba positiva:
Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Ennegrecimiento del medio
Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfa-ceto- (especialmente en el límite del
carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno pico y fondo)
forma un color rojizo en la superficie del medio.
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 MR-VP Medio
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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MEDIO
Medio utilizado En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los Por En a-Prueba del rojo de metilo:
para la nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y inoculación aerobiosis, a
realización del la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. directa, a 35-37°C por Añadir unas gotas de una solución de rojo de metilo
ensayo de Rojo La glucosa puede ser metabolizada por los partir del 3 días. al 0.04%, observar el color del medio.
de Metilo y microorganismos, a través de distintas vías cultivo en
Voges metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán estudio. b-Prueba del Voges Proskauer:
Proskauer. productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético,
Es ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil Añadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etílico
particularment metil carbinol). absoluto y 0.2 ml de hidróxido de potasio al 40% a 2.5
e útil para la Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a
clasificación de ser reconocida por la adición de un indicador como temperatura ambiente durante 10-15 minutos.
enterobacteria rojo de metilo, para revelar la presencia de Observar el color de la superficie del medio.
s. productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e
hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de Resultados
productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloración 1-Prueba del rojo de metilo:
rojiza que aparecía después de adicionar hidróxido Positivo: color rojo.
de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos Negativo: color amarillo.
en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la
oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual 2-Prueba de Voges Proskauer:
reacciona con la peptona del medio para dar un Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos
color rojo. después de una completa agitación del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.
Limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba VP, pueden no
desarrollar el color rojo en la superficie mediante el revelado
por la metodología descripta anteriormente. En estos casos, se
recomienda calentar el medio de cultivo para favorecer el
desarrollo de color rojo.
22
 OF, Medio Basal
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
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MEDIO
Medio para la La peptona de caseína y el azúcar añadido constituyen la base Sembrar un Incubar a 35±2ºC de 48 . Los microorganismos
diferenciación de nutritiva y energética del medio. El Azul de Bromotimol tubo (O) y horas a 7 días. fermentadores dan reacción en
bacilos Gram- permite identificar las variaciones del pH. El di-Potasio otro (F) por los dos tubos. Los oxidativos
negativos, Hidrógeno Fosfato actúa como regulador del pH y el Sodio picadura a sóloen el tubo sin vaselina. La
basado en la Cloruro aporta la salinidad necesaria para el buen partir de un degradación oxidativa (color
determinación crecimiento de los gérmenes. Los ensayos se hacen por cultivo puro amarillo) sólo se observa en la
del metabolismo duplicado en dos tubos, uno cubierto con aceite de vaselina de la cepa parte más cercana a la superficie
oxidativo y/o (F) y otro sin (O). Además del cambio de color del indicador que se desea del tubo mientras que en la
fermentativo de (de verde a amarillo) es estudiar. fermentativa, se observa el color
los carbohidratos necesario observar la producción de gas y el tipo de amarillo, en toda la columna del
crecimiento obtenido. medio. Los inactivos no
provocan cambio en ningún
tubo. También puede observarse
si la cepa en estudio es inmóvil
(crecimiento sólo en el canal de
picadura) o móvil, (turbidez en
toda la columna con medio)
24
 Glucosa Nitrato Agar.
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO SIEMBRA INCUBACION RESULTADOS
25
MEDIO
Medio En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de carne aportan Por Durante 48 1-Metabolismo de la glucosa:
desarrollado por nutrientes para el desarrollo bacteriano. El cloruro de sodio mantiene el punción horas, a 35- -Microorganismos oxidativos:
Casellas, para balance osmótico, la glucosa es la fuente de energía y el azul de en 37 ºC, en color amarillo en la parte superior
estudiar bromotimol es el indicador de pH. El nitrato de potasio es el sustrato de la profundi aerobiosis. del tubo.
simultáneamente enzima nitrato reductasa. El contenido de agar, otorga la propiedad de dad con Algunos -Microorganismos fermentadores:
la reacción de ser un medio semisólido, que permite determinar la movilidad y la ansa microorganis color amarillo en todo el medio de
oxidación o distribución de los productos ácidos sobre la superficie o en el medio de recta, a mos cultivo.
fermentación de cultivo. partir de requieren -Microorganismos que no
glucosa y la Algunas bacterias pueden fermentar anaeróbicamente la glucosa, otras la un hasta 4 días, fermentan y no oxidan la glucosa:
reducción de oxidan y algunas pueden metabolizarla por ambos métodos, mientras que cultivo y otros hasta el medio permanece verde o
nitratos a otras son incapaces de usarla. Asimismo, las bacterias muestran puro de 14 días de adquiere un color azulado.
nitritos, por diferencias en los ciclos utilizados para esos procesos finales. Estas 24 horas. incubación. 2-Movilidad:
bacilos Gram diferencias ayudan a la identificación bacteriana. -Positiva: presencia de turbidez
negativos de fácil La hidrólisis de la glucosa acidifica el medio, haciendo virar el azul de que se extiende mas allá de la
desarrollo. Esta bromotimol de verde a amarillo. línea de siembra.
prueba es útil Si este viraje ocurre solo en la parte superior del tubo, indica oxidación de -Negativa: solo se observa
para diferenciar la glucosa; si todo el medio vira al amarillo, hay reacción fermentativa, y turbidez en la línea de siembra.
especies si no vira o adquiere un color azulado, se presume que el gérmen no 3-Reducción de nitratos:
bacterianas. utiliza glucosa. -Positiva: desarrollo de color
En este medio, además, puede detectarse la movilidad observando si el rosado-rojo luego del agregado de
crecimiento se aleja de la línea de punción, enturbiando el medio. los reactivos Griess A y B.
La reducción del nitrato a nitrito o gas nitrógeno por medio de la enzima - Negativa: ausencia de color
nitrato reductasa, es un proceso de oxidación por el cual el nitrato rosado rojo luego del agregado de
proporciona oxígeno para ser usado como aceptor de electrones. El los reactivos Griess A y B.
nitrito presente en el medio puede detectarse con el reactivo de Griess A .
(B15-501-61) y Griess B (B15-502-61) Britania, dando un compuesto -Prueba Positiva: ausencia de color
diazoico coloreado. rosado rojo luego del agregado de
Si se observan burbujas en el medio, éstas son de gas nitrógeno, ya que el Zinc.
nitrito intermediario inhibe las decarboxilaciones. -Prueba Negativa: desarrollo de
color rosado-rojo luego del
agregado de Zinc.
 Notas:
Los microorganismos que al reducir los nitratos a través de la 26
enzima nitrato reductasa, liberan gas nitrógeno, producen un
resultado falso negativo con la metodología detallada
previamente. Por eso, ante un resultado negativo, agregar
unas granallas de Zinc y observar el color desarrollado. Esto
permitirá dar el resultado definitivo de la prueba de
reducción de los nitratos

Notas: frecuentemente, en la reducción de nitratos a nitritos, los productos finales pueden ser nitritos (NO 2), amoníaco (NH3), nitrógeno molecular (N2), óxido
nítrico (NO), oxido nitroso (N22) o hidroxilamina (R-NH-OH).
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 CATALASA
UTILIDAD DEL FUNDAMENTO INDICACIONES RESULTADOS
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MEDIO
Se utiliza para los microorganismos que requieren la presencia de oxigeno para llevar a  Método del 1. Observar la formación
comprobar la cabo sus reacciones metabólicas es decir como aceptor final de portaobjetos inmediata de burbujas
presencia del electrones, invariablemente se encontraran, con productos tóxicos (recomendado): (resultado positivo).
enzima catalasa derivados del oxigeno, como radicales superóxido y peróxido cuya  Con el asa de
que se encuentra acumulación es fatal en estos microorganismos, sin mencionar además de siembra recoger
el la mayoría de que neutrofilos y macrófagos tienen estas mismas sustancias toxicas para el centro de una
las bacterias lisar y destruir a los microorganismos patógenos. colonia pura de
aerobias y Por lo que es de vital importancia que las bacterias aerobias y anaerobias 18-24 horas y
anaerobias facultativas dispongan de las enzimas necesarias para eliminar estas colocar sobre
facultativas que sustancias nocivas; como la catalasa , que a la vez resulta beneficiosa un portaobjetos
contienen porque evita que diversos grupos de glóbulos blancos la fagociten y lisen, limpio de vidrio.
citocromo. La siendo este un factor de virulencia.  Agregar con
principal gotero o pipeta
excepción es Pasteur una
Streptococcus gota de H2O2 al
30% sobre el
microorganismo
sin mezclarlo
con el cultivo.

Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de

agar sangre, se debe tener la precaución de no retirar algo de agar con
el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio contienen
catalasa y su presencia dará un falso resultado positivo.
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