Experimento de Griffith.

TRANSFORMACIÓN BACTERIANA
En 1928 Griffith investigó sobre varias cepas de neumococo:
- Cepa S Es dañina porque se cubre a sí misma con una capa de polisacáridos que
la protege del sistema inmune del individuo, causándole la muerte en 24 horas.
- Cepa R Es un mutante de neumococo que no tiene la capa de polisacáridos,
haciéndola más débil y es derrotada por el sistema inmunológico.
El experimento consiste en:

a) Inyecta células vivas de la cepa

S y el ratón muere, porque la
capa de polisacáridos le da a la
célula resistencia contra el
sistema inmune.
b) Inyecta células vivas de la cepa
R y el ratón sobrevive, porque
su sistema inmune puede
combatir estas bacterias.
c) Mata por calor las células de la
cepa S, las inyecta en el ratón y
él sobrevive.
d) Mescla las células vivas de la
cepa R con células muertas de
la cepa S, como resultado de
esto el ratón muere.
e) Al extraer una muestra de
sangre del ratón muerto se da cuenta
que hay bacterias de la cepas S ¡vivas!
Es decir, que el neumococo de la cepa
R adquiere la información para
sintetizar la capsula de polisacáridos
en el cuerpo del ratón y así produce la
enfermedad y el ratoncito se muere.
Griffith concluyó que había algún “principio transformador” que convertía a las células R
en células S.

PRINCIPIO TRANSFORMANTE DE AVERY

Cuando Avery leyó los resultados de Griffith se interesó en identificar este “principio
transformador”, Avery y su equipo comenzaron a experimentar usando un tubo de ensayo,
donde fraccionaban las bacterias S y empezaron a repetir el trabajo de Griffith, se dieron
cuenta que podían eliminar los proteínas, lípidos, polisacáridos y el ARN, y la célula R no
sufría transformaciones. Sin embargo, si purificaban el ADN y lo incubaban con las
bacterias R están se transformaban en S y al agregar una enzima que destruía el ADN no
ocurría la transformación.
El ADN era el principio transformante y concluyó que el ADN era el material hereditario
y no una proteína como se creía hasta ese entonces. Pero su evidencia no era totalmente
concluyente y para esa época el “candidato principal” para ser el material hereditario era
una proteína (por sus formas y variedad).

LOS BACTERIÓFAGOS DE HERSHEY Y CHASE

Hershey y Chase trabajaron con bacteriófagos.
- Bacteriófago (Fago) Virus que
ataca e infecta a una bacteria. Tiene
una capa externa de proteínas y un
núcleo interno de DNA.
El virus utiliza a la bacteria para
reproducirse, de las observaciones con el
microscopio electrónico, ellos conocían que
durante la infección el virus ataca a la
bacteria por sus colas, se pensaba que los
genes eran introducidos en la bacteria anfitrión, los cuales eran dirigidos a las enzimas de la
bacteria para replicar al virus.
El siguiente dibujo nos muestra en forma muy esquemática los pasos en la reproducción del
virus dentro de la bacteria y su ruptura con la distribución de nuevos virus.

Lo que se trataba de determinar, era si el ADN del fago era un principio transformador que
causaba la transformación de bacterias en fagos.
De análisis previos se sabía que el ADN contienes átomos de fósforo P, pero no de azufre
S, por otro lado, las proteínas del virus contienen átomos de azufre, pero no de fosforo.
Se utilizó átomos reactivos de:
Fosforo 32P  marcar el ADN
Azufre 35S marcar las proteínas del virus.
Se hicieron dos experimentos paralelos, donde se combinaron los virus (marcados) con las
bacterias, se espero un tiempo suficiente para que los virus infecten a las bacterias y a este
sistema se lo sometió a una licuadora.
A continuación se sometió a las muestras a una centrifugación para separar los fagos de las
bacterias, las bacterias son más grandes y más pesadas que los virus, las bacterias se
recogieron al fondo del tubo de ensayo, mientras que los fagos se quedaron en suspensión.
Examinando luego las dos muestras se verifico, en la marcada como 35S los nuevos fagos
provenientes de la bacteria infectada no contenían el azufre radiactivo, la cubierta del fago
la cual esta echa de proteína no fue usada dentro de la bacteria para hacer un nuevo fago.
Al investigar la muestra marcada con fósforo radiactivo 32P, el mismo se encontraba en los
nuevos fagos, por lo tanto el ADN del fago fue usado dentro de la bacteria para hacer
nuevos virus.
La cubierta del fago entrega el ADN dentro de la bacteria y es el ADN solamente el que
lleva las instrucciones para replicar a los fagos dentro de la bacteria, por lo que el ADN es
el material genético.

Reglas de Chargaff

Chargaff demostró que las proporciones de las bases nitrogenadas eran diferentes en los
distintos organismos, aunque seguían algunas reglas. Estas reglas de Chargaff se cumplen
en los organismos cuyo material hereditario es ADN de doble hélice y son las siguientes:

• La proporción de Adenina (A) es igual a la de Timina (T). A = T . La relación entre

Adenina y Timina es igual a la unidad (A/T = 1).
• La proporción de Guanina (G) es igual a la de Citosina (C). G= C. La relación entre
Guanina y Citosina es igual a la unidad ( G/C=1).
• La proporción de bases púricas (A+G) es igual a la de las bases pirimidínicas
(T+C). (A+G) = (T + C). La relación entre (A+G) y (T+C) es igual a la unidad
(A+G)/(T+C)=1.
• Sin embargo, la proporción entre (A+T) y (G+C) era característica de cada
organismo, pudiendo tomar por tanto, diferentes valores según la especie estudiada.
Este resultado indicaba que los ácidos nucleicos no eran la repetición monótona de
un tetranucleótido. Existía variabilidad en la composición de bases nitrogenadas.