c
 méthodes  sélection et la régénération 


pour l'amélioration du blé

Manoj K. Yadav 1, Manoj K. Tripathi 2, Dinesh Yadav 1, Kumar Sundeep 3, Nagendra

Singh K. 4, Anil Kumar 1 et Krishna Govind Garg 1
1
Département de biologie moléculaire et le génie génétique, GB Pant Université de
l'Agriculture et de la technologie, Pantnagar -263.145 (Uttarakhand) INDE
2
Deaprtment de la biotechnologie, Institut de Science et Technologie (Université ICFAI),
Dehradun (INDE)
3
Département de la biotechnologie, Vallabh Sardar Patel Bhai Université de l'Agriculture et
de la technologie, Meerut (UP) INDE 250110
4
Centre national de recherche pour la biotechnologie des plantes, Institut de recherche
agricole de l'Inde, New Delhi -100011

Correspondant auteur: Manoj K. Yadav

Département de la biotechnologie, Vallabh Sardar Patel Bhai Université de l'Agriculture et de
la technologie, Meerut (UP) INDE 250110
E-mail: mky711@rediffmail.com

Résumé
Le blé est un aliment de base important des cultures du monde. Les travaux sur l'amélioration
du blé se fait depuis longtemps en arrière en utilisant diverses méthodes et techniques.
Emerging le domaine de la biotechnologie en particulier la culture des tissus végétaux a
révolutionné l'ensemble du scénario de l'amélioration des cultures, notamment le blé.
Régénération des plantes à partir de cals et de  sélection in 
 est le plus important des
stratégies qui ont été utilisées pour obtenir des lignes efficaces régénéré et manipulation
génétique en utilisant la suite de blé  techniques in 
 Malgré l'importance du problème
pour la mise en œuvre réussie  techniques in 
 les facteurs qui contrôlent la création et
la régénération des cals, l'importance relative et le rôle de source d'explants, les médias,
régulateurs de croissance, le génotype, embryogenèse somatique,  sélection in 
 et 


 variations induites sont discutées dans le présent document.

Introduction
Le blé est le grain dominant du commerce mondial et est l'aliment de base de millions de
personnes dans le monde. Il est souvent utilisé pour produire une grande variété d'aliments qui
comprennent de nombreux types et les types de pains, gâteaux, nouilles, biscuits, aliments de
déjeuner, biscuits secs, biscuits, et articles de confiserie. Blé, après le riz, est le plus important
seconde récolte dans le monde. Il s'agit d'un aliment de base pour un tiers de la population
mondiale. Le blé est actuellement censé pour avoir provenu de l'Euphrate Valley aussi tôt que
10,000 BC, ce qui en fait l'une des plus anciennes du monde les cultures céréalières de la. On
croit aussi que le blé mis au point à partir d'un type de graminée sauvage sur les terres arides
de l'Asie Mineure. Initialement, Schulz (1913) regroupées toutes les espèces de blé en trois
groupes naturels, l'engrain, l'amidonnier et épeautre. En outre, Sakamura (1918) a établi les
trois groupes naturels de la forme d'une série de blé polyploïdie avec
= nombre haploïde de
chromosomes 7, 14 et 21, respectivement. Au cours de leur sélection agricoles, les souches de
blé hexaploïde modernes qui sont, avec six jeux de chromosomes par cellule, ont évolué
depuis leur diploïde sauvage parallèle relative, en termes de chromosomes. Engrain a 14
chromosomes, qui sont désignés AA. Cette espèce est censée avoir hybridée avec une espèce
d'herbe sauvage pour produire du blé amidonnier. Plus tard, il a été observé que le blé a le
jeux de chromosomes AA et BB ensembles de l'herbe sauvage. Cette tétraploïde, AABB,
désormais accouplée avec une autre espèce d'herbe sauvage, qui avait désigné le complément
chromosomique DD, pour donner AA BB DD, notre blé hexaploïde moderne, qui a 42
chromosomes. Une application importante de l'élevage polyploïdie a été le développement de
l'hybride blé seigle appelé
   Il en est résulté d'une tentative de combiner le rendement
élevé et à haute teneur en protéines des graines de blé 
  et de l'adaptabilité aux
conditions environnementales défavorables (telles que le froid et la sécheresse) et haute teneur
en lysine-de seigle.

Le blé est assez riche source de vitamines, de niacine, de thiamine, de l'énergie et les qualités
minérales de blé pour de nombreux produits alimentaires dépendent de sa protéine unique.
Teneur en protéines du grain élevés (GPC) et sa qualité influe sur la fabrication du pain de blé
propriétés (Mesfin et  2000). Les utilisations industrielles du blé comprennent la production
de l'amidon, le gluten, spiritueux distillés et de malts, etc. Le son de blé est riche en protéines
(14-18%) et des vitamines. Il est également utilisé pour nourrir le bétail. La paille de blé est
utilisée comme aliment, litière pour animaux, de compost et de fabrication de papier ondulé.

Le grain de blé contient de l'amidon (60-70%), protéines (10-17%), fibres (2-2,5%), graisse
(1.5-2.0%), sucre (2-3%) et des matières minérales (1.5-2.0 %). Dans le monde entier, le blé
est cultivé dans une zone d'environ 232 millions d'hectares avec une production annuelle
d'environ 640 millions de tonnes. Globalement, pour les cinq dernières années, la production
totale de blé est en baisse et en 2006-07 seulement 587 millions de tonnes de blé a été réalisée
( Tableau 1 ).

l'amélioration du blé à travers des approches classiques de sélection dans le 20e siècle
travaux d'amélioration du blé sur les lignes systématique a commencé seulement durant la
première décennie du 20e siècle. La période entre «1904-1962» peut être divisé en trois
phases distinctes et est bien documenté par Pal (1966). Pendant la première phase, à partir de
1904, le travail de pionnier a été fait par Albert Howard et Gabriella Howard qui a utilisé un
système de sélection de plantes unique qui leur a permis de produire plusieurs variétés de blé
comme Pusa 4, 6 et Pusa Pusa 12. Ces variétés ont été populaires non seulement en Inde mais
aussi en Afrique du Sud, Rhodésie et en Hongrie (Howard et Howard 1910). Le nain variétés
de blé semi-développée au Mexique par Norman Borlaug et ses collègues en utilisant les 10
gènes de nanisme Norin, r  et r
c attiré l'attention des sélectionneurs de blé indien.

traditionnels à faible intrants agricoles L', traditionnels de blé que de haut, des installations
d'irrigation inadéquates et rurale dans son ensemble stagner l'économie de la production de
blé conservés à son plus bas niveau très. Soudain, le régions productrices de blé de l'Inde a été
divisé entre l'Inde et le Pakistan en 1947. Jusqu'à 1965-66, les efforts de sélection n'a pas
permis d'améliorer les rendements importants en raison du manque de génotypes appropriés
qui peuvent répondre aux engrais et l'irrigation. L'Inde est devenue dépendante de l'échelle
des importations massives pour nourrir sa population croissante, une situation qui a été décrit
comme «navire à la bouche". Puis ère de blé semi-nain est venu, qui est devenu un succès
instantané et a contribué à la «révolution du blé». Les nouveaux génotypes déclenché paquet
complémentaire des technologies, des services et des politiques publiques qui a donné
naissance à ce qui était qualifié de «révolution verte» par Willium Gaud des Etats-Unis en
1968. L'Inde n'a jamais regardé en arrière à partir de ce stade. Nagarajan et al. (1998) a
observé que le gain de petite a été obtenu en blé après tous les 5-10 ans. Au moment de la
libération de Kalayan Sona, le niveau de rendement est d'environ 4,2 t / ha. Le prochain saut a
été faite par la diffusion de variétés comme WL 711 et Arjun (HD 2009) en 1975, ce qui a
entraîné un gain de rendement marginal de cinq pour cent.

scénario actuel de la production de blé

production mondiale de blé en 2006-07 est de 31 millions de tonnes de moins que dans la
saison précédente. La récolte des cultures de blé du nord hémisphère est terminée, tandis que
dans l'hémisphère sud, la récolte est en voie d'achèvement. Beaucoup de monde touche les
pays producteurs ont baisse de la production en 2006-07 qu'en 2005-06 ( tableau 1 ). La
combinaison de 2006-07 la production avec des stocks saison commence, les fournitures
mondiales de blé s'est établi à 722 millions de tonnes, 34 millions de tonnes de moins qu'en
2005-06. Les fournitures de blé plus faibles ont été la hausse des prix mondiaux du blé (US
rouge dur hiver, fob ports du Golfe), qui ont en moyenne au-dessus de 200 $ US la tonne.
L'indicateur de prix mondial du blé devrait augmenter de 32 $ US la tonne en 2006-07 à
moyenne 208 $ US la tonne.

L'histoire du succès de blé en Inde au cours des 30-35 dernières années est sans précédent
dans l'histoire de tout autre pays. La production de blé en Inde, qui a été seulement 6,4
millions de tonnes en 1950, a progressivement augmenté à 76,6 millions de tonnes en 2000.
La productivité moyenne a augmenté de 6,5 quintal par hectare à 27 quintaux à l'hectare. La
moyenne de l'État du Punjab et du Haryana sont près de 40 quintaux à l'hectare. Les
génotypes les plus récentes comme PBW 299, UP 2338, 2425 et UP PBW 343 provenant
d'autres traverse les différents génotypes ont le potentiel de rendement plus élevées, jusqu'à
55-60 q / ha.

La révolution verte de reproduction-post du programme étaient pour la plupart concentrés sur

de nouvelles améliorations du rendement, la sélection pour l'adaptabilité aux différentes
conditions climatiques et agro amélioration de la résistance aux maladies en particulier pour
les rouilles. La stratégie était de traverser quelques-unes des variétés de blé indien avec le
nain variétés de blé semi-en provenance du Mexique de combiner les caractères du grain et
Chapati fait qualités de blé local avec la photo-insensibilité, la résistance aux maladies et la
réactivité d'entrée de nain types.

Contraintes de la productivité du blé

Aujourd'hui, la production de blé peut sembler satisfaisant, mais le fait demeure que la hausse
soudaine de la population et de la Première Guerre mondiale, l'Inde devient un déficit nation
de céréales alimentaires. En fait, aujourd'hui, nous souffrons de trop-plein de go-down avec
des grains stockés. L'Inde a besoin d'un stock tampon de 14-16 millions de tonnes pour la
sécurité alimentaire, mais aujourd'hui il a plus de 50 millions de tonnes de céréales en stock
tampon. La sécurité alimentaire nationale n'a pas assuré la nourriture et la sécurité alimentaire
pour les particuliers. L'Inde a 25 pour cent de la population mondiale en dessous du seuil de
pauvreté qui ne peuvent obtenir deux repas par jour. L'apport calorique par jour est inférieure
à 1500. Les principales raisons de cette dichotomie de la famine au sein de la population sont
pauvres-économiques condition socio matraqué avec des coûts élevés de la production de blé.
Si l'Inde a la masse pour éviter la faim échelle malgré la révolution verte, il a faire face au défi
d'assurer une répartition équitable des grains de la nourriture à un prix abordable. Ce dernier
peut être atteint que par le remplacement des variétés de la révolution verte qui nécessitent un
apport coûteux de l'énergie, l'eau, les engrais et les pesticides avec des variétés qui ont été, en
plus d'être efficace dans l'utilisation de l'eau et des engrais, également résistant aux stress
biotiques et abiotiques. Pour atteindre cet objectif à un rythme accéléré; les méthodes
classiques de sélection devront être complétés par des outils modernes de la biotechnologie
tels que la culture de tissus végétaux et des techniques de génie génétique.

approches biotechnologiques dans le blé d'amélioration

Au début de la production de lignées de blé ayant des caractéristiques amélioration de la
qualité fondé sur les plantes traditionnelles techniques d'élevage qui a une limitation de la
complexité du transfert de plusieurs traits associés, portant à la fois et l'utilisation finale
attributs de qualité et agronomiques. Certains caractères comme la composition en acides
aminés des protéines de réserve pour améliorer la qualité nutritionnelle est difficile de
modifier par des techniques de sélection classiques ou du moins pas sans effets négatifs sur la
qualité d'autres traits. L'avènement de la technologie de l'ADN recombinant a conduit à la
méthodologie de transfert de gènes spécifiques avec une chance de modifier un trait
spécifiquement tout en conservant les qualités supérieures d'un cultivar connu. Les
technologies transgéniques adoptées pour l'amélioration du blé identification des besoins du
gène désiré conférant le caractère dit, la méthode optimale de transfert de gènes, 
régénération in 
 et la sélection.

Pour le développement du blé transgénique, la capacité de régénération au cours de  culture

in 
 doit être très efficace pour que transgénique stable avec le gène utile (s) peuvent être
développées. Fréquence de régénération de blé pendant  culture in 
 est un facteur
limitant pour la création d'animaux transgéniques. Méthodes de culture tissulaire en utilisant
la culture d'embryons matures suivi par la cicatrisation / embryogenèse somatique et la
sélection des cals pour leur capacité de régénération élevée peut accélérer le développement
de cépages à travers la réalisation rapide de l'homozygotie. En raison de la limitation des
essais de première génération pour le rendement, les biotechnologistes de blé ont été
intéressés par les moyens qui peuvent réduire le temps nécessaire pour atteindre
l'homozygotie pour que l'accent peut être mis sur le test des lignées homozygotes plutôt que
les efforts sur les produire. Trois approches sont (i) la descente seule graine (ii) la sélection
des cals haute régénéré avec maturité / culture d'embryons immatures et (iii) la production de
plantes haploïdes, soit par de larges croix ou la culture d'anthères, suivie par le doublement
des chromosomes.

L'applicabilité de la biotechnologie pour l'amélioration des cultures induit non la

méthodologie classique de sélection végétale. Ces nouvelles technologies ne remplaceront pas
les techniques traditionnelles de sélection, mais devrait les compléter par l'amélioration de
l'efficacité, la précision de transfert de trait et le recouvrement des utiles, la valeur ajoutée
variation (Karp 1995). la variabilité utiles peuvent être générés sans recombinaison sexuelle

sélection in 
 / variation (Larkin, 1987).

Régénération in vitro et la sélection dans le blé: situation actuelle

Régénération de plantes à partir de cals est au cœur de la plupart des stratégies qui ont été
proposés pour obtenir l'efficacité des lignes régénérée et utilisée ensuite pour le
développement du blé transgénique à caractère désiré. Les manipulations génétiques du blé en
utilisant  techniques in 
 ont été réalisées par les collègues de plusieurs. Les divers
facteurs qui influencent la



in 
 par l'intermédiaire de cals sont discutés ci-
dessous.

Source Explant
Explants sources varient dans leur capacité à générer variation (Skirvin et  1994). Très
tissus différenciés (racine, feuilles et tiges) de produire plus de variation que explants avec
existante méristèmes pré (axillaire de bourgeons, pousses et les bases des feuilles). Cultures
donner lieu à la normale ou quasi normale des plantes régénérées en l'absence de
dédifférenciation significative (cal) pas eu lieu (Peschke et Phillips, 1992). Organogenèses
peut concerner plus d'une cellule. Différences de stabilité dans la culture de tissus provenant
de sources différentes explants sont souvent causées par la variabilité du pré de la source de
explants. Plus de chlorophylle variantes déficientes sont récupérés à partir de cultures
d'embryons immatures que de cultures d'embryons matures (Cai et  1990). Le taux le plus
élevé d'induction de cal (9,1%) et la production des plantes vertes (0,8%) ont été obtenus avec
le cultivar de blé Apollo culture d'anthères utilisant (Konieczny et  2003).

Diverses sources explants, tels que des embryons immatures, les jeunes feuilles, les
inflorescences immatures, embryons matures, mésocotyles méristème apical et ont été utilisés
pour la culture de cals de blé. Utilisation de sources d'explants différents dans le blé ont été
donnés dans le tableau 2 .

culture de cals
Le succès et la mise en place d'isolement des cultures de cals dépend de plusieurs facteurs
comme source d'explants et des conditions de culture. Gallus, qui présente des caractéristiques
stables dans des conditions spécifiques, après la sous-culture à travers de nombreux passages
successifs, est un matériau approprié pour cytodifférenciation. L'avantage d'utiliser des cals
est qu'il est composé d'une masse homogène assez de cellules et peuvent être multipliées en
grandes quantités dans des conditions connues de la culture.

Effet de la composition des médias et régulateurs de croissance sur cals de blé

Gallus est initiée 

 sur  coupés ou la surface des cellules exposées en contact avec un
milieu de croissance. prolifération cal est une réponse de la plaie. Excision des explants
stimule la réaction à la blessure 
  (induction d'un stress induit-enzymes et d'autres
produits chimiques des sous-produits, et l'activation des éléments transposables) qui peut être
améliorée par des régulateurs de croissance (McClintock 1984). La plupart des régulateurs de
croissance des végétaux et plus particulièrement 2,-dichloro-acétique 4 (2, 4-D) et la 6-
benzylaminopurine ont été impliqués dans la culture de tissus variabilité induite (Evans 1988;
Shoemaker et al  Racz et  (1993) ont étudié l'effet du saccharose, 2, 4-D et
différentes vitamines sur l'induction de cals embryon de blé d'hiver explants matures. Solid
milieu MS a été optimale pour la culture des embryons matures (Leon et  Dzhas 1995 et
Kalashnikova 1998; Varshney et  Sayar et al  1999 Mendoza et Kaeppler 2002; El-
Bahr  2000 Delporte et  2001) de blé supplémenté avec différentes combinaisons de
régulateurs de croissance. Immature compléter la culture des embryons avec 2, 4-D (Subhadra
et  Taghvaii et al  1998 Rao et Chawla 1998; Kothari et  1998, El-Sherbeny et
 2001 et  Shan 2000) a donné de bons la croissance des cals. L'effet de la B5 (Rao et
Chawla, 1998), LS et moyennes pommes de terre (P1, P2 et P4) (Chaghamirza et Arzani
1999) ont été testés pour l'induction de cals. Des embryons immatures ont été cultivées en
milieu liquide MS additionné de 2 mg l-1 2, 4-D pour obtenir une variation (Ahmed et Sagi,
1993).

Des embryons immatures de 1,0-1,5 mm (14 jours après l'anthèse ont été cultivés sur milieu
MS additionné de 1,5 ou 2,0 mg l -1 2, 4-D et a conclu que 90-100% de ces embryons formés
cals (Arun et  1994) . La fréquence d'induction de cals allant de 51 à 81% et compact,
nodulaire et morphogénique fréquence cals allant de 35 à 50%. Le milieu x cultivar x 2, D-4
niveaux d'interaction sont significatifs (Rao et Chawla, 1998). Ajout de 2 , 4-D à 3 mg l -1 en
combinaison avec zéatine à 0,5 mg l -1 a été bénéfique pour la formation du cal morphogène
(Dzhas et Kalashnikova 1988).

Ozgen et  (1998) a comparé les réponses des cultures immatures et matures embryon. Des
embryons immatures ont été disséqués de façon aseptique à partir de graines et placé avec le
scutellum à la hausse sur un milieu gélosé solide contenant les composants inorganiques de
Murashige et Skoog (MS) et 2 mg l -1 2, 4-D. embryons matures ont été placés à la baisse
sillon dans les plats contenant 8 mg l -1 2, 4-D pour l'induction de cals. Les embryons
immatures se sont formés le plus grand nombre de cals sur milieu MS additionné de 2, 4-D et
Kinetin tout embryons matures formé le plus grand nombre de cals avec des anthères D. 2,4
de blé F 1 hybride (Alondrax sumai 3) sur W14 médias avec différentes concentrations d'acide
salicylique (SA) et épi-brassinolide (epi-BR) ont été observées cultures et la différenciation
important et des taux accrus de développement des cals (Yang et  1999). Cai et  (1999)
cals obtenus à partir de blé racines séminales cultivées dans un milieu contenant 6.2 mg l -1 2,
4-D. Anthères d'un haploïde doublé de cv en ligne de blé de printemps. Pavon 76, plaqué dans
le liquide P-4 milieu supplémenté avec 2,0 ou 4,0 mg l -1 2, 4-D a développé des cals bonne
(Zheng et Konzak 1999). Des embryons immatures de deux génotypes de blé ont été utilisées
pour établir des cultures de cals (Jimenez et Bangerth 2001) pour l'étude des effets des
régulateurs de croissance endogène (Marcinska et  2001). Les cals ont été induits sur milieu
MS avec 1-2 mg l -1, 2, 4-D et 1,5 mg l -1 de BA en utilisant segment hypocotyles (Jin et 
2002).

Le premier événement provoquant la variabilité induite par la culture de tissus peut

s'accompagner de troubles du cycle cellulaire causé par l'hormone exogène (Peschke et
Phillips, 1992) ou des déséquilibres pool des nucléotides (Jacky et  1983). Chromatides
sœurs fréquence de change peut augmenter avec une faible concentration de 2, 4-D (Dolezel
et  1987).

L'embryogenèse somatique chez le blé

L'embryogenèse somatique est le processus d'une seule cellule ou un groupe de cellules
d'ouverture de la voie de développement qui conduit à la régénération reproductible des
embryons somatiques non-capables de germer pour former des installations complètes. Selon
Sharp et  (1982), l'embryogenèse somatique est engagée soit par pré-embryogenèse cellules
déterminées (PEDCs) ou par induite par les cellules embryogènes déterminée (IEDCs). Le
processus de l'embryogenèse peut être divisé en deux phases principales et fondamentales:
une première «morphogénétique» stade où l 'embryon est formé et les organes et les tissus de
la future usine sont spécifiés et «deuxième étape» un métabolisme caractérisé par le stockage
des réserves (hydrates de carbone , protéines, lipides) en prévision de la germination.
Excellent sont disponibles et qui portait sur embryogenèse somatique et zygotique des
comparaisons entre eux (Goldberg et  Wilde et al  1995 Laux et Jurgens 1997;
Dodeman et  1997-Herrera et  Rojas al 2002). L'exposition de la culture en suspension à
des concentrations élevées de 2, 4-D produit des grappes de petites cellules isodiamétriques,
connu sous le nom de masse pro-embryogénèse (PEM) (Halpern, 1966). L'élimination
subséquente des auxines du milieu de culture permet l'expression de l'embryogenèse. L'une
des composantes de base d'un somatiques influencer embryogenèse moyen des céréales est le
type d'auxine (Przetakiewicz et  2003). Il est maintenant admis que, dans la présence
continue des auxines, des masses pro-embryogénèse synthétiser les produits des gènes
nécessaires pour compléter l'étape de l'embryogenèse ainsi que l'ARN m qui peut empêcher le
programme somatiques. L'épuisement des auxines se traduira par l'inactivation d'un certain
nombre de gènes, permettant le programme embryogénique de procéder, le passage à d'autres
stades de développement peut nécessiter des produits de nouveau gène (Zimmerman 1993). Il
a été observé que l'exposition des cultures cellulaires à des concentrations élevées d'auxines
peuvent provoquer l'hyperméthylation de l'ADN (Lo-Schiavo et  1989) qui, à son tour, peut
entraîner l'inactivation de la transcription des gènes méthylés (Carman 1990). Dans un passé
récent, le succès considérables ont été accomplis dans l'obtention de la régénération des
plantes reproductibles à partir de cultures embryogènes de toutes les principales céréales.

Arun et  (1994) a rapporté qu'environ 53-91% des cals produit des embryons somatiques et
la fréquence de l'embryogenèse dépend principalement de la variété. Subhadra et  (1995)
SE obtenues par culture de cellules en suspension de blé. Marciniak et  (1997) ont montré
l'effet des médias et des génotypes par culture d'anthères à la fréquence d'induction
embryoïdes (2,4 à 22,5 pour 100 anthères). Barro et  (1999) mis au point les médias
(complétée par piclorame) pour l'embryogenèse somatique des inflorescences immatures et
scutellum immatures de cultivars d'élite de blé et d'orge. Kunz et  (2000) standardisé un
protocole efficace pour la production d'embryons en culture de blé de microspores isolées.
Les cultures scutellum a une fréquence plus élevée de l'embryogenèse, par rapport à la culture
inflorescence (Lui et Lazzeri, 2001). L'effet de milieu conditionné-ovaire sur l'embryogenèse
de microspores chez le blé a été bien documenté par Zheng et  (2002). Ahmed et  (2002)
a obtenu des embryons somatiques de méristème apical de blé sur des milieux contenant BA
et 2, 4-D (0,5 mg L -1) avec une fréquence élevée de cals embryogènes (48,6%) à partir
d'embryons immatures de blé (El -Sherbeny et  2001) et 47% de cals embryogènes taux
d'induction à l'aide fragmentée embryon mature en culture sur milieu MS supplémenté avec 5
millions de 2, 4-D Delporte et al  2001). Embryons somatiques secondaires ont été produites
à partir d'embryons somatiques qui atteint somatiques capacité clonale et s'est avéré bénéfique
pour l'amélioration du système transgéniques et la promotion de l'efficacité transgéniques
génétiques chez le blé (Wu et  2005).

La sélection in vitro chez le blé

La fréquence de la variation somaclonale total doit être suffisamment élevée pour la sélection
des traits dérivable. ‰ 

 génotype x x interactions source explant contribuer à un niveau
de variation. Lorsque 

 des agents sélectifs sont ajoutées au protocole, les interactions
supplémentaires sont rencontrées (Handro 1981).

Sélection dans la culture

Un défi majeur pour l'exploitation de la variation somaclonale est l'identification des
variations utiles (Evans, 1988; Smith et al  Parce que les cellules sont génétiquement
variable dans la culture, des traits spécifiques peuvent être sélectionnés à l'aide 

 induite
par des mutations spontanées. Les cellules peuvent être sélectionnées soit dans un ou négatif
de façon positive à l'aide) direct (cellules en culture avec des agents sélectifs suivie de
l'isolement de cellules survivant, de secours (exposition des cellules à des conditions de
culture, capables de tuer ou inhiber les cellules sensibles suivie par la culture dans des
conditions différentes de récupérer ) et progressive à l'augmentation de la pression de
sélection sur le temps (Conner et Meredith, 1989). survivants 

 des agents sélectifs ont
été utilisés pour détecter les variantes utiles, par exemple, NaCl (Arzani et Mirodjagh 1999;
Zair et  2003  Yadav et 2004 ) pour la tolérance au sel, AlCl 3 pour la partie toxicité de
l'aluminium de la tolérance sol acide (Conner et Meredith, 1985; Bamabas et al  2000)
polyphénol du grain, des variantes (Cai et)  1995,) de polyéthylène glycol (Adkins que et
 une osmo-régulateur pour stimuler la sécheresse,  régénération in 
 de blé sous
différents stress de mannitol, le mannose (Yao et al. 2007), 
 criblage in 
 de lignées
de blé résistantes à la tavelure tolérante déoxynivalénol (vomitoxine) (Lu et  1998) ; ABA
pour la tolérance au gel (Sapina et al 

 
 technique de sélection a été utilisée pour améliorer la résistance au froid (Galiba
1994); tolérance à la sécheresse (Gawande et al;. Bajji 2006 et al 2004.), L'amélioration de
tolérance au sel (Zair et al;. 2003 Yadav et al !"" La maladie la résistance (Svabova et
Lebeda 2005); résistance aux herbicides peut également évoluer de la sélection de cellules
somatiques (Saunders et al ! pour la résistance contre


  dans
le blé et l'orge (Chawla et Wenzel 1987); l'acide fusarique orge. plants résistants et 

 de
sélection pour la régénération induite à haute fréquence (Yadav et  Ye et al !""" Machii
et al  1998 et al Cai  dans le blé, l'incorporation de caractères agronomiques
utiles dans le riz (Jain 2001) les performances agronomiques et les caractéristiques de qualité
des dérivés de la culture de tissus lignes de blé (Villareal et  1999) et pour augmenter la
sous-unités de gluténines et la gliadine et la teneur en protéines dans les graines de la
descendance de plantes régénérées de blé a été mis en œuvre avec succès (Hu et  1998). Shi
et  (1998) a élaboré six nouvelles lignées de blé pour la résistance à l'oïdium par le biais de
sélection 

 de la culture

Lors de la régénération in vitro chez le blé

Il n'y a que peu de rapports sur la régénération des plantes cultivées à partir d'embryons
matures de blé. Les premiers rapports sur la régénération a montré une fréquence faible (7%
d'une culture) de la régénération de la plante (Chin et Scott, 1977). Vingt pour cent de
régénération a été obtenue grâce à l'utilisation de la NAA (1 mg l -1) plus kinétine (5 mg l -1)
dans le milieu de régénération. En général, une rétrogradation dans les résultats de
concentration en auxine dans l'organogenèse et la régénération des plantes (racines et des
pousses d'induction) après le transfert du cal soit sur un milieu contenant certaine
combinaison de régulateurs de croissance ou pas de réglementation à tous les Shimada et al 
1969 Sharma et al  1981; Bajaj 1986; Ovesna et Lhotovia 1987; Elena et Ginzo 1988;
Kintzios et  Delporte et al # 2001.

Eapan et Rao (1982) a observé l'augmentation des taux de régénération des plantes matures
explants d'embryons de blé en culture sur des milieux supplémentés avec IAA et de la
cytokinine, principalement zéatine. Un auxine application exogène faible (tels que ANA à 1
mg l -1) initie racines seulement (Chin et Scott 1977; Ahloowalia 1982).

Racz et  (1993) utilisaient des embryons matures de blé d'hiver cultivé en B milieu MS
additionné de AgNO 3 (20 mg l -1) et a trouvé à améliorer la régénération. Leon et  (1995)
ont étudié l'effet des constituants différents médias (comme d'ammonium, de calcium,
saccharose) et des différents supports (Taghvaii et  1998) sur la régénération de la culture
d'embryons matures.

Varshney et  (1999), la fréquence de régénération aussi élevé que 94% sur le milieu de
régénération contenant ANA (0,2 mg l -1) plus BAP (1 mg l -1) dans 17 cultivars de 
  et 3 cultivars de  
à travers la culture d'embryons matures. Wang et  (2002)
atteint 70% la fréquence de régénération des plantes par des cals embryogènes élyme
l'utilisation d'embryons matures. El-Bahr  (2000) en culture d'embryons matures dans le
milieu MS avec 2, 4-D avec différentes concentrations de NaCl pendant 12 semaines pour
sélectionner les lignées de blé tolérant le sel. Mendoza et Kaeppler (2002) utilisé 2, 4-D et le
dicamba, à accroître le nombre de plantes régénérées par embryon et de réduire la quantité de
temps nécessaire pour la régénération des plantes par 3-4 semaines. Certaines nouvelles
techniques telles que l'endosperme appuyé méthode d'induction de cals ont été utilisés avec
succès dans l'induction de cals à partir d'embryons matures (Bartok et Sagi, 1990; Ahmed et
 Ozgen et al ! 1996 Sayar et al  Nayal et  (2002) a obtenu la régénération
dans var blé. Sonalika utilisant kinétine (0.5 à 1,5 mg l -1) avec l'IAA (0,5 mgl -1) dans le
milieu MS. Yadav et al. (2000) sélectionné R1 lignes de UP2338 génotype de blé qui a donné
un maximum de 19 pousses partir d'un cal unique dans le milieu MS additionné de l'AAI et de
la kinétine ( Fig 1. AD).

Facteurs influant sur le potentiel de régénération in vitro de différents explants de blé

prétrempage temps
La longueur de la période imbibition pourraient couvrir les différentes phases de la libération
de l'inactivité de l'embryon, la réhydratation des tissus, l'activation hormonale, la
transformation des réserves etc et peut donc influer sur la réactivité des explants en culture.
Chlyah et  (1990) utilisé plusieurs durées (16 à 64 h du imbibitions) et a signalé que de 20 h
le temps de trempage des embryons matures, près de 100% des explants ont formé des
embryons somatiques.

Effet du génotype
L'importance du génotype dans la détermination de  réponse in 
 de tissus de blé a été
reconnue et l'efficacité de l'induction des cals, le taux de croissance de cals et de la fréquence
de régénération des plantes ont tous été déclarés au génotype charge (Zhou et Lee, 1983; Racz
et al  Ozgen et  1998 Yadav et al;. Anapiiaev 2000 2000; Schween et Schwenkel
2003; Yadav et Chawla 2001; El-Sherbeny et  2001. Varshney et  (1999) évalué 17
cultivars pour leur capacité à produire des cals embryogènes à partir d'embryons matures et
signalé que la régénération pourcentage varie considérablement d'un cultivar à.

La fragmentation, l'orientation et la taille des embryons

Chlyah et  (1990) a tenté de déterminer les zones les plus embryogènes de l'embryon de blé
en le fragmentant de diverses façons avant la culture. Il a été observé que la fragmentation de
l'embryon pourrait provoquer la formation d'autant de cals embyogenic comme explants et un
grand nombre de cellules dans les différentes parties de l'embryon est devenu capable d'initier
des cals embryogènes à la fragmentation d'origine embryons matures (Delporte et  2001) .

Eapen et Rao (1982) ont étudié l'effet de l'orientation des embryons sur l'induction de cals.
Les embryons ont été placés sur le milieu de trois manières différentes: (a) scutellum vers le
haut (b) scutellum en contact avec le milieu et (c) d'un côté de l'axe embryonnaire et
scutellum en contact avec le milieu. La fréquence et l'intensité du développement de cals ont
été trouvés au mieux être de l'orientation (a) et le moins dans l'orientation (c). Chang et 
(2003) ont montré l'effet de la taille des embryons pour la mise en place d'un cal embryogène
du cultivar d'orge 

 
 L cv. Morex). embryon de petite taille a été jugé
excellent pour l'embryogenèse et la régénération.

D'autres facteurs physiologiques

Des études récentes suggèrent que le génotype déterminé ratios de régulateurs de croissance
endogène ont été responsables de la rapide



in 
 (Marcinska et  2001
Jimenez et Benegerth 2001). L'influence du génotype et du froid de pré-traitement a été bien
documentée sur la production et la régénération des embyoids de blé (Mentewab et Sarrafi
1997; Xynias et al !""
Effet du traitement à basse température (Hau et Teng 1994) et l'effet combiné de la colchicine,
L-proline et basse température après inoculation (Redha et  1998) a été associée avec un
taux de différenciation rapide dans le blé. L'effet de l'intensité du rayonnement laser de faible
(632,8 nm, 12 mW) et la régénération sur les processus morphogénétiques dans le blé (cv.
Skala) culture de cals ont été étudiées par Salyaev et  (2001). Ils ont observé une
augmentation marquée du nombre de plants régénérés lorsque le cal a été soumis à une
irradiation. Le rendement final des plantes régénérées représentaient 38% dans les
échantillons irradiés contre 25% dans les contrôles.

Lange et  (1998) a tenté d'étudier la génétique de  



$

 et la germination
précoce des embryons de blé. The results indicated a complex gene action controlling both
traits, with additive, dominance and epistatic effects. High broad-sense heritability values
were found, indicating genetic determination. In view of the complex gene control of these
traits, it is suggested that genetic improvements can be achieved by selecting for the traits in
advanced generations of the segregating population.

Occurrence of somatic variation

Somatic variation refers to all variability observed among tissue culture regenerated plants
(Larkin and Scowcroft 1981). Tissue culture regenerated variants have also been called
calliclones (Skirvin and Janick 1976), phenovariants (Sibi 1976), protoclones (Shepard et al 
1980) and subclones (Cassells et al  1991). Chromosome multiplication and structural
observations induced during culture may constitute the basis of gametoclonal and somaclonal
variations (Dogramaci et al  2001).

 culture 
 can be extremely stressful on plant
cells and involve highly mutagenic processes during explants establishment or callus
induction, maintenance, embryo induction and plant regeneration (Lorz et al  1988). Two
types of somaclonal variation can result: epigenetic (developmental) and heritable variation
(Skirvin et al  1994).

Epigenetic variation can be transient or temporary in later generations even when the material
is sexually propagated. This variation includes phenotypic changes that involve expression of
specific genes (Hartman and Kester 1983). Because explants adapt to an 

 environment
in step wise fashion by becoming more juvenile, the resulting calluses may vary in maturity
from juvenile to fully mature. Plants regenerated from these tissues also vary depending on
the developmental stage progression of the tissue when the stimulus to regenerate is applied
(Skirvin et al  1994). Shoot regeneration from dedifferentiated callus can produce an
immature, unstable clone that may eventually revert to the original parental clone. Broad
spectrum variation is available through either nuclear or cytoplasmic sources; all types of
variation could potentially be recovered and used for crop improvement (Elkonin et al  1994;
Skirvin et al  1994; Khanna and Garg 1997). Heritable variation is stable through the sexual
cycle and with repeated asexual propagation (Skirvin et al  1994). Stable genetic alterations
involve phenotypic and biochemical traits due to karyological variations (gene or
chromosome aberrations) (Lorz et al  1988). Heritable somaclonal variation involves either
single or multiple gene changes, including alterations in DNA bases, chromosome or the
entire genome (Orton 1994), single base pair changes, paracentric and pericentric inversions,
deletions, translocations and ploidy changes (D'Amato 1991; Garcia et al  1994).
Cytoplasmic variation has been found, including mitochondrial controlled male sterility
(Elkonin et al  1994). Chimeral plants subjected to tissue culture can produce a high
percentage of variants (Skirvin and Janick 1976; Skirvin et al  1994). Chimeric regenerant
frequencies range from 10-70% in sorghum and 54-79% in maize (Cai et al  1990). However,
chimeric regenerants in some plant species are rarely observed (Vasil 1983). Variation may
represent pre-existing variation or variation induced during callus formation and not during
the shoot formation process (Skirvin et al  1994).

Culture age enhances variability of regenerated plants (Symillides et al  1995; Kothari et al 

1998). This age effect can be attributed to (i) increased mutation rate per cell generation
(Murashige and Nakano 1965) and accumulation of mutations over time (ii) a lag period of
apparent culture stability caused by early generation mutations that are not detected until
sufficient mutant cells have accumulated (Benzoin and Phillips 1988), (iii) active selection of
early culture mutations that increase in number over time (Amstrong and Phllips, 1988) or (iv)
increased ploidy (Colijin-Hooymans et al  1994). As callus induction time increases, the
morphogenesis potential decreases, whereas the frequency of albino shoots and callus
producing only roots increases (Wen et al  1991). Some mutations may occur in sequence
throughout the callus phase rather than occurring randomly or all together at an early culture
stage (Fukui 1983).

Regeneration competence in %

  may be rapidly lost during differentiation and
senescence (Ozias-Akins and Vasil 1988). This loss may be due to the endogenous
concentrations of growth regulators (Vasil 1987). Tissue culture variability rate can increase
as growth regulator concentration increases (Skirvin et al  1994).


 genetic control of regeneration could be functioning specifically on response to plant
growth regulators (Komamine et al  1990). Genes controlling phytohormone signals are
directly involved in plant regeneration competence (Henry et al  1994), negating the concept
that 'dominant' genes govern regeneration and that all cultivars have genes for regeneration.
Heritability ranges of 9 to 60% (embryo germination); 30-55% (callus induction) and 15 to
49% (embryogenic callus formation) have been documented in wheat (Chevrier et al  1990).
Recently, some somaclonal variants were screened for resistance to scab (Yang et al  1998;
Liu et al  1997), improvement of agronomic traits, salt and drought tolerance in wheat
(Villareal et al  1999), Somaclones (R3 and R4 generations) regenerated from five winter
wheat genotypes were evaluated for variation in five agronomic and morphological characters
(Ivanov et al  1998).

Field selection of variants

Haploidization, somatic embryogenesis, cell suspension culture and protoplast technology all
require plant regeneration techniques for genetic manipulation and subsequent selection in
plant improving programs (Henry et al  1994). The entire 

 process from genotype and
explants selection to media induced callus, embryo and plantlet regeneration is extremely
productive in creating variation (Hossain et al. 2003). Somaclonal variations for a wide range
of agronomically important traits and yield have been observed in sorghum, sugarcane, maize
and wheat etc. In case of wheat somaclonal variations for grain colour, height, and tillers per
plant and seed storage proteins were reported by Ahloowalia (1982). Nevertheless,
somaclonal variation has not been incorporated as a standard protocol in most plant breeding
selection schemes. Perhaps this limited integration can be traced to the segregation of
biotechnology and traditional breeding laboratories or the limited understanding of molecular
events that trigger 
 
 induced variation coupled with strong beliefs in traditional
breeding methodology.

Phenotypic variation
Phenotypic variation in somaclones resulting from emrbyogenic callus regeneration is
increased with increasing time in the callus and regeneration phases (Cai et al  1990).
Phenotypically similar variations can segregate in progeny of different callus lines or reappear
in later generations. Positive variations in height, maturity, biomass, grain yield, tillering,
ploidy level and kernel oil content (Cai et al  1990; Encheva 1993; Bhaskaran et al  1987)
have been documented from various 

 programs.

Field screening techniques

A major failure for the release of more useful regenerants may be due to inappropriate
germplasm/segregating progeny selection techniques or improper field screening/evaluation
methods. Many of the field tests that have evaluated somaclonal variants have been conducted
with small, unreplicated trials because of low seed availability (Mitchell et al  1992;
Maddock 1985). Inadequate or negative phenotypic/genetic variation between regenerants and
their donor parents has discouraged wide scale adoption into many 
 
 selection and
breeding programs (Baille et al  1992). It is felt that agronomic performance of somaclonal
variants lines need to be confirmed in relevant field tests before they are incorporated in
production programs (Arnoldo et al  1992; Encheva et al. 2003).

Conclusion and future prospects

There is a need for novel and innovative approaches for increasing the crop productivity
involving traditional plant breeding and modern biotechnological approaches. In wheat there
is a need for developing superior genetic stocks with high quality grain, high fertile tillering,
and more spikelets/spike using 

 regeneration and selection methods.