GERMINACIÓN DE ESPORAS

INTRODUCCIóN

Algunas bacterias tienen la propiedad de formar dentro del cuerpo

celular, una estructura con características diferentes a las de la celula de
origen (celula vegetativa) y que se denomina espora o endospora
bacteriana. La celula madre que rodea a la espora recibe el nombre de
esporangio. Es necesario destacar las propiedades que poseen estas
endosporas, tales como:

- Hipometabolia: casi no presentan metabolismo.

- Dormancia: pueden permanecer años o siglos en reposo.

- Alta resistencia al calor: se atribuye al bajo contenido de agua

(aprox. 15%) y al contenido de ácido dipicolínico.

- Alto grado de deshidratación: el ácido dipicolínico, que tiene una

acción quelante (capta calcio); formará el dipicolinato de calcio, que
se deposita en el citoplasma haciendo que se pierda gran cantidad de
agua.

- Resistencia a los rayos UV.

- Resistencia a agentes químicos (antisépticos): La resistencia al

efecto de los productos químicos debe atribuirse a la
impermeabilidad que presenta en esos casos la cubierta de la
espora.

Las bacterias que forman esporas se encuentran habitualmente en el

suelo, y pertenecen principalmente a los géneros: Streptomyces,
Clostridium y Bacillus.

Cuando una célula bacteriana capaz de esporular abandona su

crecimiento exponencial debido a la deprivación de nutrientes esenciales en
su hábitat debe tomar la decisión de esporular o arriesgarse a continuar
creciendo como tal y correr el riesgo de morir. Si la celula elige esporular se
embarcará en un proceso irreversible de diferenciación celular que dará
como resultado una forma de vida inactiva que permanecerá como tal
indefinidamente hasta que mejoren las condiciones de su medio externo, las
cuales le permitirán germinar y volver a crecer.

La germinación es el proceso general que convierte una espora en una

célula vegetativa, se distinguen 4 etapas:

1) Preactivación.

2) Activación.

3) Iniciación (germinación).

4) Crecimiento.
 En el presente informe se describe la actividad realizada en el
laboratorio sobre germinación de esporas bacterianas. La bacteria
que se utilizo fue: Bacillus cereus, este es un bacilo gram (+) aerobio,
formador de esporas responsable de intoxicaciones alimentarias,
siendo su hábitat natural el suelo, contamina con frecuencia cereales,
leche, budines pasteurizadas y especias, entre otros alimentos.

Objetivo: Observar el proceso de germinación de la endospora bacteriana en

periodos de tiempos determinados e identificar sus principales características.

DISCUSION

Los procesos de esporulación vienen generalmente determinados por la

ausencia de una fuente de carbono o nitrógeno. Por lo que se ha sugerido
que el agotamiento de nutrientes estimula la formación de la espora
bacteriana.

Cuando la espora se encuentra en un medio favorable para el crecimiento

de las células vegetativas, germina. El primer paso fue la activación de la
espora mediante una corta exposición a temperaturas altas (80°C por 10
min.), es decir, se sometió a la suspensión de esporas a un shock térmico,
permitiendo que se acelerará el tiempo para darle las condiciones optimas
para llevar a cabo la germinación. Luego del shock térmico se enfriaron
bruscamente produciendo así un daño en las cubiertas de estas esporas.

Es importante destacar que la esporulación es un proceso asincrónico,

por lo que habrá esporas que al final del shock térmico seguirán en ese
estado.

Una vez dañada las cubiertas, se necesita la presencia de agua, así como
de un agente activador de la germinación, que son metabolitos como L-
alanina, glucosa, adenosina, iones inorgánicos, etc., que activan enzimas
que permiten la hidrólisis de la corteza. Las condiciones que permitieron
que se llevara a cabo esta etapa se las otorgo el medio de cultivo, que en
este caso fue Agar Glucosa – levadura – triptosa, ya que este posee
componentes fundamentales para darle las condiciones nutritivas a las
esporas para que germine, como lo son la glucosa y el agua, además de
darle un temperatura adecuada en la sala de medios de cultivos.

En la etapa de iniciación, la germinación se hace irreversible. Los principales

acontecimientos bioquímicos que ocurren son:

-Se pierde ácido Dipicolínico (DPA), lo que supone perdida de Ca ++.

-El 3 fosofoglicerato (3-PG) se convierte en 2-PG, y este en PEP (fosfo-enol-

piruvato), que a su vez dona su fosfato de energía para producir ATP.
-Las pequeñas proteínas SASPs hidrolizan por una proteasa especifica (GRP),
por lo que se va a obtener gran cantidad de aminoácidos que utilizara la
espora para la germinación.

-La ARN polimerasa comienza a sintetizar RNA.

En esta etapa comienza a aumentar de tamaño la espora, ya que empieza a

captar agua; esto se observa a partir del tiempo ----------- además la primera
evidencia microscópica de la germinación es un cambio de la refractabilidad
de la espora, acompañada de un incremento de la permeabilidad a
colorantes (cristal violeta, en este caso) y una perdida de la resistencia al
calor. Esto se observa en los tiempos ------

Ya en la ultima etapa, la de crecimiento, la espora puede tomar nutrientes

del exterior (medio de cultivo) y metabolizarlos, sintetiza DNA, la pared (PG)
de la espora sirve como cebador (enganche) para la formación de la célula
vegetativa naciente. Esta etapa se pudo apreciar en los tiempos ----

Finalmente pasado ya días de la germinación se pueden observar al

microscopio como el bacilo se ha distribuido en cadenas (dibujo ------)

Como conclusión es necesario señalar la importancia de este proceso en

las bacterias, pues es de real importancia para la supervivencia de estas
mismas, de allí la relevancia de como se lleva a cabo este proceso,
evidenciar las características de cada etapa y observarlas al microscopio.
En el desarrollo de este practico se destaca una de las principales
habilidades del tecnólogo medico, como es la observación a través del
microscopio además de adquirir conocimientos microbiológicos y poderlos
ver materializados por medio de dicha observación.

BIBLIOGRAFIA

1.- Brooks, G., Butel, J. y Morse S.,

http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/2g.Endosporas_6857.pdf

http://www.terragene.com.ar/espaniol/pdf/de_bacterias_a_esporas.pdf

http://www.bvsops.org.uy/pdf/cereus.pdf

http://www.analizacalidad.com/cereus.pdf

http://fai.unne.edu.ar/biologia/bacterias/micro7.htm