CONTROLE GENTICO DE DOENAS DE PLANTAS

CONTROLE GENTICO

L.E.A. Camargo e A. Bergamin Filho

37.1 INTRODUO

O emprego de resistncia gentica no controle de doenas vegetais representa um dos mais significativos avanos tecnolgicos da agricultura. O uso de cultivares resistentes o mtodo de controle preferido simplesmente por ser o mais barato e de mais fcil utiliza;o. Na verdade, existem culturas onde o controle das doenas mais importantes d-se, quase que exclusivamente, por meio da resistncia, tais como as ferrugens e carves dos cereais e da cana-de-acar, as murchas vasculares em hortalias e as viroses na maioria das culturas. Trs etapas devem ser consideradas em qualquer programa de obteno de cultivares resistentes: 1.O fitopatologista deve primeiro identificar fontes de resistncia ,ou seja, identificar germoplasma que possui genes de resistncia procurados; 2.o segundo passo a incorporao desses genes em cultivares comerciais por meio de mtodos de melhoramento. 3.Finalmente, aps a obteno de uma cultivar resistente, o fitopatologista deve traar melhor estratgia para que a resistncia seja durvel face natureza dinmica das populaes patognicas.

37.2 FONTES DE RESISTNCIA

O primeiro passo na elaborao de um programa de melhoramento a identificao de material vegetal que fornecer os genes de resistncia. O melhorista geralmente recorrem aos genes existntes em linhagens ou cultivares comerciais, pois essas so as fontes de mais fcil acesso. Elas apresentam indiscutvel vantagens de serem

melhoradas, isto , a freqncia de alelos que controla caractersticas agronmicas indesejveis muito baixa. O trabalho de: Krupinski & Sharp (1979), que ser discutido no tem 37.4.2 um tpico exemplo da reutilizao de genes de resistncia a ferrugem amarelo presentes em cultivares comerciais de trigo. Em alguns casos, no entanto, os genes inexistem , ou, se presentes nos cultivares comerciais, no conferem o nvel satisfatrio de resistncia. Neste caso, o melhorista deve recorrer ao germoplasma selvagem, isto , no-cultivado. Em uma primeira instncia, o melhorista pode procurar tais genes em populaes selvagens ou no melhoradas que sejam da mesma espcie do cultivar a ser melhorado. Em uma segunda instncia, o melhorista pode recorrer a espcies deferentes, mas geneticamente afins, pertencentes ao mesmo gnero. A transferncia intraespecfica de genes facilmente obtida por meio de cruzamentos, ao passo que transferncias interespecficas geralmente requerem auxlio de tcnicas especiais para garantir a sobrevivncia do hbrido. Estas tcnicas, que foram discutidas no captulo 25, incluem fuso de protoplastos, cultura de anteras, resgate de embrio, etc.

Tabela 37.4- Ausncia de interao diferencial. Presena de cultivares com diferentes nveis de resistncia horizontal.

Isolados G 7 8 9 4 4 4

Cultivares H 3 3 3 I 2 2 2

TABELA 37.5- Ausncia de interao diferencial. Presena de isolados com diferentes nveis de agressividade

Isolados

Cultivares

J 10 11 12 4 3 2

K 4 3 2

L 4 3 2

TABELA 37.6- Presena de interao diferencial. Os cultivares apresentam resistncia vertical e horizontal,e os isolados (raas) tambm apresentam agrecividade e virulncia. Isolados M 13 14 15 5 2 1 Cultivares N 3 5 1 O 3 2 5

resistncia horizontal e agressividade. Na tabela 37.4, tem-se apenas resistncia horizontal, no havendo virulncia nem variao de agressividade no patgeno. Na Tabela 37.5 tem-se variao de agressividade de ausncia tanto de variao em nveis de resistncia horizontal como de resistncia vertical e virulncia. Finalmente, na Tabela 37.6, tem-se variao tanto em resistncia vertical e horizontal no hospedeiro como variao em agressividade e virulncia no patgeno.

37.3.2 Caractersticas genticas e agronmicas das resistncias vertical e horizontal 37.3.2.1 Controle gentico

comum encontrar na literatura a noo de que a resistncia vertical do tipo monognica enquanto que a resistncia horizontal do tipo oligo/polignica. Embora exista inmeros exemplos onde esta correlao verdadeira, deve-se tomar muito cuidado com esta generalizao, pois existem contra-exemplos de todos os tipos. A resistncia em sorgo a Periconia circinata, a Puccinia hordei, medida pelo tempo que leva entre inoculao e o aparecimento de sintomas (perodo latente), polignica, mas apresentam interaes diferenciais com raas do patgeno (Parlevliet, 1977).

37.3.2.2 Durabilidade

Resistncia vertical monognica passvel de ser vencida dentro da capacidade microevolutiva do patgeno. Isto significa, em outras palavras, que este tipo de resistncia tende a ser efmera. Este um fato para o qual no faltam exemplos na literatura, dentre os quais a transitoriedade da eficincia dos genes Dm de alfae contra Bremia lactucae (Crute, 1992), do genes R de resistncia a Phytophthora em batata ( Vanderplank, 1968), dos monogenes de resistncia a Pyricularia oryzae em arroz (Kiyosawa, 1989) e dos monogenes de resistncia a ferrugem e antracnose (gene ARE) em feijoeiro( Beebe & Corrales, 1991) so alguns dos mais conhecidos. Tambm geralmente aceita a idia de que a resistncia horizontal oligo-polignica est alm da capacidade microevolutiva do patgeno em ser vencida. o caso do cultivar Proctor de cevada, resistente ao fungo Ustilago nuda. O fungo penetra o embrio da planta, infectando os pistilos jovens da flor somente na poca da polinizao. No cultivar Procton, ao contrrio dos cultivares susceptveis a polinizao ocorre enquanto a inflorescncia est envolta pela bainha (cleistogamia), impossibilitando a infeco. Esta resistncia tipicamente horizontal, impresumivelmente alm da capacidade de mudana do patgeno oligognica, sendo governada por trs genes. A concepo da durabilidade da resistncia vertical e horizontal no se originou baseada apenas em dados de campo. Existem consideraes tericas que levem ao aceite de que sistemas polignicos de resistncia possuem maior capacidade tampo de resistir a mudanas genticas no patgeno do que sistemas monognicos. Estas argumentaes assumem que tanto sistemas polignicos como monognicos seguem a hiptese gene-a-gene, discutida no captulo 24. Assim sendo, uma resistncia polignica ser muito mais estvel do que uma monognica pois, para que surjam formas variantes do patgeno, no primeiro caso (assumindo as mesmas condies ambientais e genticas, tais como presso de seleo e taxa de mutao, respectivamente) so requeridas mudanas genticas em vrios loci de patogenicidade, ao contrrio do sistama monognico, onde a mudana deve ocorrer em apenas um locus.

37.3.2.3 Efeitos na epidemia

A resistncia vertical, pode ser efetiva apenas contra algumas raas do patgeno, age no sentido de reduzir a quantidade efetiva de inculo inicial, fazendo com que o incio da epidemia seja atrasado. Imagine-se, como exemplo, dois campos de batata lado a lado. Num deles cresce um cultivar sem nenhum gene R de resistncia vertical e no outro um cultivar com o gene R1, que confere resistncia a determinadas raas de Phythophthora infestans. Geralmente, no incio do ciclo da cultura, o numero de esporos do patgeno bastante pequeno, de tal forma que ambos os campos, independentemente do gentipo dos cultivares neles plantados, permanecem insentos de doena. No entanto, mais tarde, ambos so atingidos por uma leve chuvas de esporos originria, por exemplo, de campos vizinhos que foram infectados mais cedo. Dos esporos que chegam at os dois campos em discusso,
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 RESISTENTE 0.0 10 20 30 40 50 SUSCETVEL

Suponha que 99% pertena a raas que no podem infectar a variedade com gene R1, tais como as raas (0), (2), (3), k(4), (2,3), ketc. O restante 1% de esporos pertence s raas (1), (1,2), (1,3), (1,4), (1,2,3), etc., que podem infectar ambos os campos.

Para este grupo de raas, o campo com o gene R1 to suscetvel quanto o campo sem genes R. O resultado da chuva de esporos que o campo sem o gene R1 iniciou seu ciclo com um inculo efetivo 100 vezes maior do que o campo com o gene R1. O Nmero inicial de leses (por planta, por M2 , por h, enfim, qualquer unidade que se escolha) 100 vezes maior no campo sem gene R1 do que no campo com ele. Dessas leses iniciais o fungo comea a se disseminar: a epidemia tem incio. Daqui para a frente, a epidemia prosseguir com a mesma rapidez tanto num campo como no outro, mas a quantidade de inculo no campo com R1 somente 1/l00 daquela existente no outro campo. Por causa dessa menor quantidade de inculo inicial, a epidemia em R1 retardada pelo perodo de tempo necessr9io para o inculo aumentar 100 vezes. Isso se traduz em um atraso no incio da epidemia. A Figura 37.1 ilustra os fatos descritos acima. Alm dos dias de atraso no incio da epidemia, pode-se tambm notar que a taxa de aumento da doena, neste caso, no reduzida pela presena do gene R1, mostrando-se to rpida no cultivar resistente quanto no suscetvel. Isto significa que a raa (1), por exemplo. Pode atacar uma variedade R0: os esporos germinam e penetram do mesmo modo, o miclio coloniza o tecido hospedeiro com a mesma eficincia, os esporos so produzidos no mesmo modo e nos mesmos nmeros, etc. Um observador experimentando, mesmo fazendo inspees peridicas nos dois campos em discusso, no poder decidir qual deles tem o cultivar com gene R1, a no ser baseado no atraso inicial da epidemia. Com a resistncia horizontal a situao diferente. Ao contrrio da rsistncia vertical, que geralmente manifesta-se conferindo ao cultivar que posui a imunidade ou hipersensibilidade contra determinadas raas do patgeno (efeito

1.0 0.8

0.6 0.4 0.2

0.0 10 20 30 40 50 60 70

TEMPO(DIAS
qualitativo), a resistncia horizontal, apesar de efetiva contra todas as raas, apenas diminui o tamanho das leses produzidas pelo patgeno, aumenta seu perodo latente, diminui o nmero de esporos produzidas pelo patgeno, aumenta seu perodo latente, diminui o nmero de esporos produzidos por leso, e assim por diante. Todos os seus efeitos so parciais e quantitativos: em cultivares com resistncia horizontal, a eficincia de infestao menor do que um cultivar suscetvel, as leses crescem mais lentamente, os esporos so produzidos mais tardiamente e em menor quantidade, etc. Todos estes efeitos somados produzem uma reduo na taxa de desenvolvimento da doena (o valor de r na equao 30.14 do captulo 30, por exemplo), sem afetar significativamente o inculo inicial, como ilustrado na Figura 37.2. pode-se ento, de maneira geral, resumir os efeitos dos dois tipos de resistncia no curso de uma epidemia dizendo que a resistncia vertical afeta, principalmente, o inculo inicial (xo da equao 30.11 para doenas de juros compostos e Q da equao 30.13 para doenas de juros simples, conforme visto no captulo 30), enquanto que a resistncia horizontal afeta, principalmente, a taxa de desenvolvimento da doena (r da equao 30.11 para doenas de juros compostos e R da equao 30.13 para doenas de juros simples). At aqui se discutiu o efeito isolado na epidemia das resistncias vertical e horizontal. Para avaliar o comportamento da epidemia na presena de ambas, considere-se os quatro cultivares hopotticos representados na Figura 37.3. O cultivar A tem pouca resistncia horizontal e nenhuma vertical. O cultivar B tem a mesma quantidade de resistncia horizontal que A alm de resistncia vertical. O cultivar C assemelha_se ao

cultivar A por no ter resistncia vertical, mas possui uma maior quantidade de resistncia horizontal. Essa resistncia horizontal suficiente para dobrar o tempo gasto pelo patgeno para causar o dobro de doena, qualquer que seja ele, em relao ao cultivar A. O cultivar D tem a mesma resistncia vertical de B e a mesma resistncia horizontal de C. A curva D tem, portanto, a mesma inclinao da curva C. Entretanto, enquanto a curva B est somente 10 dias atrs da curva A, a curva D est 20 dias atrs da curva C porque a resistncia horizontal reduziu pela metade a taxa de infeco e duplicou o tempo necessrio para a doena recuperar a perda de inculo inicial causada pela resistncia

1.0 0.8 0.6 0.4 0.2

0.0 10 20 30 40 50 60

TEMPO(DIAS)

vertical. A resistncia horizontal do cultivar D refora grandemente a resistncia vertical que ele possui, Mesmo considerando que os nveis da resistncia vertical e da horizontal sejam pequenos, como mostrado pelas curvas B e C, o efeito combinado delas no cultivar D muito satisfatrio. Os bons resultados obtidos com a combinao de resistncia horizontal e vertical, como enfatiza Vanderplank (1968), so importantes de se conhecer. A leteratura de resistncia a doenas discute com freqncia o uso alternativo das resistncias horizontal e vertical. Raramente reconhece, no entanto, que os dois tipos apresentam resultados sensivelmente melhores quando usados em combinao.

37.4MTODOS CONVENCIONAIS DE MELHORAMENTO

O mtodo usado em programas de melhoramento para resistncia a doenas no diferem dos mtodos usados para outras caractersticas agronmicas. A escolha do melhor mtodo de seleo leva em considerao, principalmente, o tipo de reproduo do hospedeiro (autgama ou algama) e a natureza gentica da resistncia (monognica ou polignica). Neste captulo, no se pretende uma discusso aprofundada sobre os mtodos convencionais de melhoramento, uma vez que estes podem ser encontrados em textos clssicos de excelente qualidade (item 37.8). O que se pretende aqui discutir certas peculiaridades intrnsecas que devem ser levadas em considerao durante o processo de seleo de gentipos resistentes a doenas.

37.4.1 Seleo de resistncia monognica

Como discutido no captulo 24, a resistncia monognica caracteriza-se por uma distribuio descontnua do fentipo, de tal modo que indivduos resistentes podem ser facilmente distinguidos dos susceptveis. Viu-se, tambm, que esta resistncia a preferida dos melhoristas, pois muito mais fcil de ser manipulada em programas de melhoramento. Em se tratando de resistncia monognica, o melhorista, normalmente, depara-se com a seguinte situao: um gene de resistncia identificado em uma fonte de resistncia, que pode ser uma linhagem ou um germoplasma selvagem, por exemplo. O objetivo transferir o gene para um cultivar suscetvel, mas que possua um timo mercado para outras caractersticas agronmicas. A preocupao deve ser a de adotar um mtodo de seleo que preserve ao mximo as caractersticas agronmicas. A preocupao deve ser a de adotar um mtodo de seleo que preserve ao mximo as caractersticas agronmicas deste cultivar, ao mesmo tempo em que possibilite a introduo do gene de resistncia. Neste caso, o mtodo do retrocruzamento o preferido. O termo retrocurzamento refere-se ao

cruzamento repetido de uma prognie hbrida com um dos gentipos parentais, que

chamado de parental recorrente (no caso, o cultivar ao qual se quer incorporar o gene de resistncia). O gentipo parental dque fornece o gene de resistncia o doador. Na Figura 37.4 apresentada uma representao esquemtica da transferncia de um gene de resistncia raa 1 de Phytophthora megasperma f. sp. Sojae por meio do retrocruzamento. Os cultivares Mukden e Hark so, respectivamente, os parentais doador e recorrente. Neste caso, a resistncia controlada pelo gene dominante Rps. A cada ciclo, a proporo do genoma do parental doador na prognie vai diminuindo, at que, aps vrios ciclos, o genoma do parente recorrente restaurado, exceto que, agora, ele contm o gene de resistncia. Note que, no caso da transferncia de um gene dominante, o retrocruzamento extremamente simples, uma vez que existem duas classes fenotpicas: a resistente e a suscetvel. Assim, testes de prognie so necessrios para saber quais plantas retrocruzadas ao parental recorrente). O mtodo do retrocruzamento tambm pode ser utilizado para transferncia de mais de um gene simultaneamente, desde que o efeito fenotpico destes possa ser facilmente identificado. Um exemplo obteno de um cultivar que possui vrios monogenes de resistncia vertical, uma prtica chamada de piramidamento de genes, como ser visto adiante. Cada gene facilmente identificado por inoculaes com as correspondentes raas do patgeno. Segundo Fehr (1987), existem duas estratgias que podem ser utilizadas quando da transferncia de mltiplas caractersticas monognicas: a) a transferncia simultnea dos genes durantes um nico programa de retrocruzamento ou b) a transferncia dos genes em programas independentes e posterior combinao destes em um nico indivduo ao final do programa. O problema da primeira

Parente doador Resistente Mukden Rps1 Rps1

Parente recorrente Suscetvel Hark rps1 rps1

50% Mukden 50% Hark

F1 Rps1 rps1

Hark

25% Mukden 75% Hark

BC1F1 Suscetvel rps1rps1 e resistente Rps1 descartar

X Hark

12.5% Mukden 87,5% Hark

BC2F1 Suscetvel rps1 rps1 e resistente Rps1 rps1 Descartar

X Hark

Repetir por vrias geraes

Figura 37.4- Esquema de retrocruzamento para incorporao do gene Rps da resistncia a Phytophthora megasperma f.sp. sojae usando os cultivares Mukden e Hark,

respectivamente, como parental doador e recorrente ( Fehr, 1987).

estratgia que um nmero elevado de plantas deve ser obtido a cada gerao para que seja possvel obter, entre estes, um indivduo que contenha todos os alelos desejveis. A ttulo de exemplo, suponha que o objetivo seja transferir simultaneamente quatro genes de resistncia, ABCD. A frequncia de indivduos heterozigotos para cada locus (Aa Bb Cc Dd) na gerao BC1F1 de 1/16. Em contraste, se os quatro genes fossem transferidos em programas independentes, a freqncia de heterozigotos em cada programa aumentaria para . Um outro problema associado com a primeira estratgia a necessidade de inculao simultnea com diversas raas, o que pode no ser vivel na prtica.

Quando os genes so transferidos independentemente para um mesmo cultivar recorrente, obtm-se linhagens quase-isognicas (praticamente idnticas), cada uma contendo um gene diferente de resistncia. Como visto, estes genes podem ser combinados em um nico cultivar (piramidamento), mas tambm podem ser mantidos em linhagens separadas, que sero plantadas em misturas, dando origem s multilinhas( ver item 37.5.4). Autgamas Amandoim Ervilha Feijo Soja Sevada Trigo Aveia Arroz Sorgo Tomate Tabaco Citros alfae linho Algamas Milho Centeio Alfafa Repolho Brcolis Couve-flor Melancia Cebola Pepino Abacate Banana Uva Mamo Manga

37.4.2 Seleo de resistncia oligo/polignica

Os mtodos de melhoramento de resistncia oligo/polignica no diferem dos demais utilizados para outras caractersticas agronmicas quantitativas. O melhoramento d-se pelo acmulo gradual de alelos favorveis e pode ser acompanhado por meio de mdias e varincias. A principal considerao, como foi dito, quanto ao tipo de reproduo da cultura, se algama ou autgama (Tabela 37.7).

37.4.2.1 Seleo em plantas algamas

Em algamas, os mtodos de seleo massal e de famlias so muito utilizados para acumular genes de resistncia. A seleo massal a estratgia de seleo mais simples, onde os indivduos mais resistentes so selecionados e suas sementes so colhidas e misturadas, originando uma nova populao. O processo repetido, at que se

obtenha o nvel de resistncia desejado. A obteno de cultivares resistentes ao vrus do encrespamento da berterraba deu-se, no incio do sculo, por meio de seleo massal. A doena ameaava dizimar os plantios desta cultura. Indivduos resistentes foram continuamente selecionados, por mais de 27 anos,em plantios comerciais onde a doena mostrava-se severa, resultando em uma populao altamente resistente, a US1. Desta populao originou-se a maioria dos cultivares resistentes atualmente em uso nos EUA. Na seleo massal, plantas so selecionadas baseadas em suas reaes individuais doena. Na seleo de famlias (prognies). Ao contrrio, as plantas so selecionadas baseadas nas reaes de suas prognies. As sementes de plantas cujas prognies mostraram-se mais resistentes so usadas no prximo ciclo de seleo. As prognies podem ser obtidas de diversas maneiras: pela autopolinizao de uma planta, pelo cruzamento controlado entre duas plantas (prognie de irmos germanos) ou, ainda, pelo cruzamento entre uma planta me com vrias outras plantas ao acaso (prognie de meio-irmos). No ser discutido aqui o mrito de cada um destes mtodos, uma ves que o tema j foi exaustivamente tratado por Hallauer & Miranda (1988). Bleicher et al. (1993) estudaram a eficincia da seleo massal em acumular genes de resistncia a Exserohilum turcicum, agente causal da queima das folhas dom milho, no cultivar pirapoca de milho-pipoca. Os autores compararam trs de condios, capturados, taxa aparente de infeco e ao inculo inicial. Na Figura 37.5 pode-se ver o progresso obtido com a seleo nestes diversos parmetros. Nota-se, j no primeiro ciclo de seleo, uma diminuio estatisticamente sigfnificativa da ordem de 20% na porcentagem de rea folia infectada. Houve tambm uma diferena significativa para este parmetro entre o primeiro e terceiro ciclos. A diferena no nmero mdio de condios capturados foi significativa somente no promeiro ciclo, ao passo que uma diminuio significativa na taxa aparente de infeco foi verificada aps o seguundo ciclo de seleo. Os autores concluram que a seleo massal simples foi eficiente em aumentar os nveis de resistncia ao patgeno em apenas trs ciclos de seleo. Na cultura do milho, que faz uso intensivo de cultivares hbridos, depois que genes de resistncia so acumulados em uma populao, como exemplo discutido acima, os melhores indivduos so selecionados e auto-polinizados se, assim, linhagens homozigotas ou puras que podero ser, posteriormente, cruzadas entre si, gerando hbridos simples. Um

hbrido simples, por sua vez, ou com outro hbrido simples, gerando um hbrido duplo. A produo de piramidamento (ver item 37,5,2), onde os genes de resistncia de cada linhagem pura so combinados em hbridos.

47.4.2.2 Sele.co em plantas autgamas

Os mtodos de seleo em culturas autgamas devem se adequar ao sistema reprodutivo da planta. Nestas culturas, geralmente, a polinizao cruzada difcil de ser obtida na prtica, o que eleva os custos do processo. Desta forma, a regra reduzir os cruzamentos manuais ao mnimo indispensvel. Os mtodos mais utilizados em programas de melhoramento para resistncia so pedigreee bulk. No primeiro caso (Figura 37.6), uma populao F2 estabelecida e os melhores indivduos desta gerao so selecionados. Estas plantas so auto-polinizadas naturalmente, gerando famlias F3, que sero avaliadas no campo. A seleo, a partir desta gerao, feita tanto dentro de famlias como entre famlias, isto , os melhores indivduos das melhores famlias so selecionados. As sementes oriundas do auto-cruzamento destes indivduos selecionados iro compor a gerao F4. A seleo inter-e intrafamilial repetida

60 50

% AFI arente de infeco

40 30 20 10 0

0.07

0,065 0,06

0,055

0,05

2500,05

Nmero de esporos

2000.05

1500.05

1000,05

500.05

0,05 0 1 2 Ciclo de seleo Figura 37.5- Progresso na seleo massal para resistncia a E. turcicum no cultivar de milho Pirapoca medido atravs da porcentagem da rea foliar atacada (A), taxa aparente de infeco (B) e produo de esporos (c). Dados adaptados de Bleicher et al.(1993). 3

at, aproximadamente, a gerao F6-F8. Quando estas geraes avanadas so atingidas, existe um alto grau de homozigotos dentro de famlias devido aos sucessivos ciclos de autocruzamento. Entre famlias, porm, existe interfalilial, com a seleo de todos os indivduos das melhores famlias. O mtodo do bulkdifere do pedigree, pois a semente dos indivduos selecionados em cada gerao so misturadas antes do incio do ciclo seguinte.

A seleo baseada na performace individual de cada planta e no na performace de sua prognie. Este processo avana at a gerao F6-F8 comeando, a partir deste mtodo que permite a manipulao de um maior nmero de plantas at o incio da seleo interfamilial. Parlevliet & Kuiper (1985) demostraram que o mtodo do pedigree pode ser usado para selecionar genes de resistncia polignica a Puccinia hordei em cevada que prolongam o perodo latente da doena. Mais importante foi a demonstrao de que a seleo de plantas sub condies artificiais de inoculao em casa-de-vegetao eficiente Pedigree F2 F3
Prognie a 17-5-9-13 275 17-16-7 275 230 230 Planta b 265 265 Prognie 260 260

F4
Planta 308 325

F5
Prognie 278 287 Planta 300 313

F6
Prognie 329 347

A= IPL mdio da prognie. B=IPL da planta selecionada para selecionar gentipos que, mais tarde, demonstraram elevado grau de resistncia em condies de campo. Os autores estabeleceram um ndice de perodo latente (IPL), relativo ao perodo latente do cultivar suscetvel L94, que foi fixado em 100 unidades. O cultivar Cebada Capa, que alm de possuir resistncia polignica para longo IPL, tambm possui o gene vertical Pa7, foi cruzado com o cultivar Vada, que apresenta somente baixos nveis de resistncia polignica (IPL= 185), gerando uma populao F2. As plantas F2 foram inoculadas no estgio de seedling com a raa 1-2-1 do patgeno, que avirulenta ao gene Pa7. As plantas que se mostraram resistentes foram descartadas, para que a seleo continuasse na ausncia do gene vertical (ver item 37.4.3). O restante das plantas foi inoculado e avaliado no estgio do incio da formao de suas estruturas florais, sob condies de casa-de-vegetao. Nesta gerao foram selecionadas plantas F2 que apresentaram extremos de resistncia, medido atravs do perodo latente. As sementes resultantes do auto-cruzamento de cada planta F2 originou famlias F3, que tambm foram avaliadas para perodo latante. Os melhores indivduos das melhores famlias foram

selecionados e suas sementes foram utilizadas para o ciclo seguinte. O processo repetiu-se at a gerao F5. A Tabela 37.8 ilustra os progressos obtidos na seleo para longos perodos latentes em dois pedigrees resultantes do cruzamento entre Cebada Capa e Vada. O pedigree 17-5-9-13. Por exemplo, originou-se de uma planta F2 que apresentou um IPL=275. O IPL mdio da prognie resultante do auto-cruzamento desta planta foi de 230. Nesta famlia, um indivduo que apresentou IPL=265 foi selecionado e originou uma famlia cujo IPL mdio foi de 260. O IPL mdio da prognie F6 deste pedigree foi de 329, bem superior, portanto, ao IPL do cultivar parental suscetvel Vada. Como a seleo deu-se unicamente baseada em ensaios de casa-de-vegetao, o material selecionado da gerao F5 foi posteriormente testadosob condies de campo (Parlvliet et al., 1985). O IPL mdio destas variou entre 280 e 291, indicando uma boa correspondncia entre resultados de casade-vegetao e campo. Segundo os autores, o aumento obtido no perodo latente atravs da seleo reduziu em aproximadamente 100% a severidade da doena seis semanas aps o plantio, comparada severidada verificada no cultivar parental Vada. Krupinsky & Sharp (1979) realizaram um programa de melhoramento visando a resistncia polignica ferrugem amarela do trigo usando cultivares comerciais que apresentam nveis baixos e intermedirios de resistncia. O mtodo de seleo empregado foi o do pedigree. Os autores hibridizaram mais de 20 cultivares de trigo e selecionaram, em cada cruzamento, os melhores indivduos F2. As prognies destes indivduos foram avaliadas e os melhores indivduos selecionados. O progresso repetiu-se at a gerao F6. A Figura 37,7 entre os cultivares Manitou e centana. A freqencia de indivduos resistentes (leses do tipo 00,0-, 0 e 1-) aumentou de zero, na gerao F2, para mais de 90%, na gerao F6. O fato mais interessante que houve segregao transgressiva para resistncia, isto , foram obtidos indivduos mais resistentes intermedirios de resistncia, (leses do tipo 2 e 3 , respectivamente). A segregao transgressiva deu-se, neste caso, possivelmente pela combinao de genes de resistncia dos dois cultivares, ilustrando a possibilidade de utilizar cultivares com nveis intermedirios de resistncia em programas de melhoramento.

37.4.3 Seleo de resistncia oligo/polignica na presena de resistncia vertical monognica

Resistncias vertical monognica e horizontal polignica podem ocorrer em um mesmo gentipo. Neste Caso, de acordo com Parlevliet (1989), a seleo da resistncia horizontal na presena de resistncia vertical monognica pode produzir efeito contrrio ao desejado, resultando em frequncias elevadas de genes de resistncia vertical. Isto porque o efeito principal dos genes de resistncia vertical pode fazer com que o efeito secudrio dos poligenes no seja detectado sob determinadas condies experimentais (ver discusso no item 24.2.1). na tentativa de solucionar este problema, comum a noo de que o uso de misturas de raas como inculo reduz a variao devida resistncia horizontal. Segundo Parlevliet (1983), este procedimento incorreto pois, quando cultivares contendo diferentes genes verticais so inoculados com uma mistura de raas, estas podem diferir quanto ao nmero de raas na mistura a que so resistentes. Esta diferena, por sua vez, pode acarretar uma variao fenotpica quantitativa entre cultivares que, finalmente, pode ser interpretada, erroneamente, como resultante da presena de resistncia horizontal polignica. O cultivar que apresentar uma combino de genes que seja efetiva contra o maior nmero de raas na mistura apresentar, tambm, os menores nveis de severidade. O autor sugere que, nestes casos, uma raa com o espectro de virullncia o mais amplo possvel seja utilizada. 37.4.4 O efeito da Vertifolia O efeito vertifolia refere-se eroso (perda) da resistncia horizontal polignica no processo de seleo para resistncia vertical, devido a um estreitamento da base gentica do material vegetal durante o melhoramento. O termo foi cunhado por Vanderplank (1963), referindo-se eroso da resistncia horizontal verificado no cultivar Vertifolia de batata, que contm os genes R3 e R4 de resistncia a Phytophthora infestans. O autor conclui que quando a resistncia vertical de Vertifolia quebrada com isolados capazes de vencer os genes R3 e R4, a doena desenvolve-se mais rapidamente do que em cultivares devido ao efeito dos genes de resistncia vertical. Uma vez que se inicia, pporm o progresso mais rpido. Nos cultivares sem genes verticais, por outro lado, a epidemia

tem incio precocemtente, mas sua taxa de progresso reduzida. Vanderplank acredita que, durante o melhoramento de Vertifolia, os genes de resistncia horizontal foram descartados, ao passo que nos cultivares sem genes de resistncia horizontal foram descartados, ao passo que nos cultivares sem genes verticais ainda h um nvel de resistncia horizontal suficiente para reduzir a taxa de progresso da epidemia. A eroso da resistncia pode ocorrer mesmo em casos onde a seleo no intencionalmente voltada para a resistncia vertical. Davis et al. (1990) relataram a eroso de resistncia a Puccinia sorghi em uma populao de milho doce submetida a 10 ciclos de seleo massal para vrias caractersticas agronmicas, exceto para resistncia a P. Sorghi. Foi verificado um significativo aumento da suscetibilidade mdia da populao melhorada em relao a populao original, evidenciando a perda de genes de resistncia durante a seleo. A eroso, segundo os autores, pode ser devida associao da resistncia com caractersticas agronmicas indesejveis, que foram eliminadas durante a seleo. Um outro mecanismo de eroso gentica a deriva gentica, muito freqente em populaes pequenas. Segundo Falconer (1989), em populaes pequenas a frequncia de genes que no esto sob presso seletiva tende a variar de gerao em gerao de maneira aleatria devido, principalmente, a efeitos de amostragem. A deriva tem um efeito cumulativo em populaes sob seleo, porque a freqncia de um certo gene em uma dada gerao que as freqncias iro se alterar cada vez mais at atingir um de dois extremos: a fixao (quando a freqncia do gene for igual a 1,0) ou a extino (quando a freqncia do gene for igual a 0,0). No caso do cultivar Vertifolia, possvel para os genes R3 e R4. O melhorista pouco pode fazer para evitar a deriva. Ela pode ser atenuada, no entanto, se o tamanho da populao for aumentando ou, ainda, selecionandose, ao mesmo tempo , para resistncia vertical e horizontal.

37.5

ESTRATGIAS DE USO DA RESISTNCIA VERTICAL MONOGNICA

Cultivares que possuem resistncia vertical geralmente mantm-se resistentes apenas por um perodo de tempo devido ao aparecimento (por mutao) e/ou seleo de genes correspondentes de virulncia de genes de virulncia extremamente rpida e pode ser detectada de um ano para outro. Existem algumas estratgias de utilizao de genes de resistncia vertical que podem, no entanto, prolongar sua vida til. Para entender os mecanismos de atuao de tais estratgias na populao patognica faz-se entender os mecanismos de atuao de tais estratgias na populao patognica faz-se necessrio introduzir os conceitos de seleo estabilizadora e direcional. 37.51 Seleo estabilizadora e direcional as estratgias que sero discutidas a seguir baseiam-se no princpio proposto por Vanderplank (1963) de que raas com genes desnecessrios de virulncia so menos ptas em sobreviver. O experimento de Watson & Singh (1952) ilustra este. Nesse experimento, foram inoculadas, ao mesmo tempo, num cultivar de trigo com o gene R1 de resistncia vertical, duas ou trs raas de Puccinia graminis f.sp. tritici que diferiam entre si no nmero de genes de virulncia. Atravs de isolamentos e inoculaes sucessivas, foi possvel demostrar, claramente, que raas com genes desnecessrios de virulncia tem menor capacidade adaptativa quando comparadas com raas sem genes desnecessrios ou com um menor nmero deles. Os resultados esto sumarizados na Tabela 37.9.

Tabela 37.9- Efeito da passagem atravs do cultivar Federation sobre a porcentagem de vrias raas de Puccinia graminis f.sp. tritici (estrado e modificado de Vanderplank, 1963. Dados originais de Watson & Singh, 1952).
Mistura Raas* Nmero de passagens em Federation (R1)

Mistura 1

Raas (1) (1,2)

1 69.0 31.0 71.3 28.7 61.1 38.9 84.9 15.1 65.7 34.3 65.6 34.4 57.9 33.2 8.9 52.9 9.4 37.7 66.2 19.9 13.9

3 85.5 14.5 90.4 9.6 58.6 41.4 96.6 3.4 82.1 17.9 4.7 95.3 68.5 30.4 1.1 68.1 4.0 27.9 92.1 1.1 6.0

4 86.4 13.6 90.8 9.2 56.6 43.4 97.8 2.2 77.0 23.0 8.3 91.7 63.8 35.4 0.8 378.1 3.2 18.7 089.7 0.8 9.5

5 88.8 11.2 86.5 13.5 47.7 52.3 95.2 4.8 72.6 27.4 5.2 94.8 74.2 25.4 1.4 71.5 3.7 24.8 87.2 0.5 12.3

(1,2) (1.2.3)

(1,2) (1.3)

(1) (1,2,3)

(1) (1,3)

(1,2,3) (1.3)

(1) (1,2) (1,2,3)

(1) (1,2) (1,3)

(1) (1,2,3) (1.3)

*A nomeclatura das raas de Puccinia graminis f.sp. tritici foi alterada visando maior clareza. Na realidade, a raa (1) corresponde raa 126-6; a raa (1,2) 126-6; a raa (1,3) 222-2,6 e a raa (1,2,3) corresponde raa 222-1,23.

O postulado de Vanderplank implica na presena de um mecanismo de homeostase gentica, onde a freqncia de genes de virulncia em determinada populao do patgeno, aps ser perturbada por algum evento(como a introduo de um cultivar resistente), tende a reverter o seu estado original quando da remoo do evento perturbador. Este mecanismo foi demostrado por Vanderplank de seleo estabilizadora, em contraste com a seleo direcional, onde ocorre a seleo em direo virulncia. Imagine-se, como exemplo, que um cultivar R1 de um hospedeiro qualquer esteja sendo cultivado numa grande exteno de terra. No incio, ocorre seleo direcional favorecendo a raa que tem o gentipo suficiente para quebrar a resistncia conferida por R1; a raa que contm o gene 1 de virulncia. Se o cultivar for substitudo por um outro contendo os genes R1 e R2, a populao do patgeno, tambm por seleo direcional, passar a se constituir, em sua maioria, de indivduos da raa contendo os genes 1 e 2 de virulncia. Se, aps algum tempo o cultivar R1R2 for substitudo por R1, a raa (1,2) do patgeno, embora virulenta em R1, estaria menos apta a se adaptar s novas condies do que a raa (1), pois carrega um gene desnecessrio de virulncia (o gene 2). Desta forma, ocorreria seleo estabilizadora favorecendo a raa (1), que voltaria a prevalecer no campo. Um exemplo concreto da ocorrncia da seleo direcional e estabilizadora foi relatado por Watson & Luig (1963). Esses autores acompanharam o comportamento do patgeno, Puccinia graminis f.sp. tritici, quando o cultivar de trigo Eureka foi introduzido na Austrlia, em 1939. Os dados obtidos pelos autores esto presentes na Figura 37.8. Na figura, v-se claramente que em 1939, quando Eureka foi introduzida, no existia,

praticamente, a raa de ferrugem capaz de atac-la. Logo em seguida, porm, essa raa comeou a aumentar, at causar uma severa epidemia, por volta de 1945, quando Eureka foi abandonada pelos agricultores. A partir da, a raa que possua o gene de virulncia capaz de vencer a resistncia de Eureka comeou, cada vez mais, a tornar-se menos prevalecente, at desaparecer quase que completamente por volta de 1960. Desse ano em

diante, no entanto, o cultivar Eureka voltou a ser cultivado em larga escala, fato que foi acompanhado, novamente, por um aumento significativo da populao da raa em questo. Neste exemplo real, a presso seletiva que obrigou a populao do patgeno a mudar foi o cultivar Eureka, ficando bem evidenciada a ao da seleo estabilizadora quando a presso seletiva deixou de existir. 37.5.2 Piramidamento de genes O piramidamento de genes uma estratgia de usode genes de resistncia vertical cujo objetivo o de previnir o aparecimento de novas raas do patgeno. Segundo esta estratgia, vrios genes de resistncia vertical so incorporados em um nico cultivar. O sucesso do piramidamento depende da premissa de que a probabilidade de aparecimento de uma super-raa, contendo todos os genes de virulncia necessrios para atacar esta combinao de genes de resistncia, muito baixa. Assim, quanto maior o nmero de genes incorporados, mais longeva ser a resistncia do cultivar. No entanto, os crtocos do piramidamento acreditam que o aparecimento de super-raas no um evento to raro, ainda mais sob a prtica do piramidamento, uma vez que esta acaba impondo uma presso direcional tremenda em favor das super-raas. Aparecendo numa super-raa, argumentam os crticos, os genes de resistncia sero utilizados de uma s vez, ko que seria uma catstrofe. Como discutido anteriormente, o piramidamento pode ser obtido por meio de retrocruzamento,. Este foi o mtodo utilizado por Flor & Comstock (1971), por exemplo, para desenvolver um cultivar de linho contendo vrios genes de resistncia a Melampsora lini. O processo de obteno de pirmide de genes muito lento e culstos, o que representa uma sria limitao da estratgia (Fehr, 1987). O uso do piramidamento tem sido preconizado no controle da ferrugem do feijoeiro (Beebe & Corrales, 1991) e utilizado em vrios patossidtemas (Pedersen & Leath, 1988), mas a eficincia de tal estratgia em prolongar a longevidade de genes de resistncia ainda est por ser demonstrada.

37.5.3 Rotao de genes O princpio da rotao de genes o mesmo da rotao de culturas usado no controle de certas doenas (ver captulo 35). O objetivo o de reduzir a presso da seleo direcional, reduzindo a presso para o aparecimento de novas raas. Um certo cultivar contendo um gene de resistncia vertical R1 usado at que surja uma raa (1) capaz de quebrar sua resistncia. Esete cultivar ento sustitudo por um outro contendo um gene diferente de resistncia (2). Aps alguns anos, retorna-se ao cultivar R1, fechando o ciclo de rotao. A rotao de genes foi utilizada na Austrlia entre 1938 e1950 no controle da ferrugem do colmo em trigo. Tambm foi recomendada como medida de controle de doenas do arroz pelo Instituto Internacional de Pesquisas do Arroz (IRRI), em 1980 (Singh, 1986). A estratgia requer um alto grau de cooperao por parte dos agricultores, o que pode representar um srio fator limitante uma vez que o agricultor, geralmente, no muito afeto a trocar, anualmente, de cultivar. 37.5.4 Multilinhas As multilinhas so uma mistura de linhagens agronomicamente semelhantes (ou quase idnticas), mas que diferem entre si por possurem, cada qual, um diferente gene de resistncia vertical. As multilinhas so o oposto da pirmide de genes pois, na pirmide, os genes so concentrados em um nico indivduo. Ao passo que nas multilinhas, os genes esto distribudos em indivduos de linhagens diferentes. O objetivo desta estratgia o de estabilizar a estrutura racial da populao patognica, minimizando as possibilidades de aparecimento de novas raas. Existem dois conceitos de multilinha (marshall & Pryor, 1978): a multilinha suja (dirty crop) e a limpa (clean crop). Na multilinha suja, nenhuma das linhagens usadas na mistura resistente a todas as raas do patgeno. A denominao suja vem do fato de que a doena sempre estar presente no campo, embora em nveis reduzidos. Na multilinha limpa, ao contrrio, so usadas linhagens que possuem genes diferentes que

conferem resistncia maioria das raas do patgeno prevalecentes no local, com o intuito de obter um campo limpo, livre de doena. O uso de multilinhas sujas tem duas conseqncias importantes para o controle de doenas: reduz o inculo inicial e a taxa progresso da doena e estabiliza a composio racial da populao patognica (Marshall,1989). As conseqncias epidemiolgicas das multilinhas sujaspodem ser ilustradas com o seguinte exemplo. Considere uma multilinha composta por quatro linhagens, cada qual contendo um gene de resistncia: R1, R2, R3 e R4. Assim, a raa do patgeno(1) pode atacar a linhagem R1, a raa (2), a linhagem R2, a raa (1,2), as linhagens R1 e R2, e assim por diante. A multilinha, do ponto de vista epidemiolgico, apresenta as vantagens das resistncias vertical e horizontal somadas, j que tanto o inculo inicial como a taxa de desenvolvimento da doena so diminudos (ver item 37.3.2). Supondo que as raas (1), (2), (3) e (4) ocorram na mesma proporo, o inculo inicial ser reduzido a 25%. A texa de progresso da doena tambm ser grandemente afetada, j que os esporos provenientes de uma planta doente tero 75% de probabilidade de carem em alarmantes dentro da plantao bem pequena. digno de nota que a multilinha apresenta as vantagens da resistncia horixontal mesmo que suas linhagens no apresentam elevados nveis desta. Se, porm, as linhagens forem reforadas com algum nvel de resistncia horizontal em edio aos genes de resistncia vertical, o resultado ser, sem dvida, uma variedade D da figura 3. O sucesso da multilinha suja depende, a exemplo do piramidamento, do no aparecimento de uma super-raacontendo todos os genes de virulncia necessrios para atacar as multilinhas da mistura. Uma raa do tipo (1,2.3.4) seria capaz de atacar todas as multilinhas do exemplo discutido acima de uma s vez. Ento, qual a diferena entre o piramidamento e a multilinha no que diz respeito ao aparecimento de novas raas? A diferena, clamam os defensores das multilinhas, est na intensidade da seleo direcional. Num campo com genes piramidados, existe uma enorme presso para a seleo de uma super-raa, pois o patgeno no tem altlelrnativa: ele s sobreviver se possuir todos os genes necessrios para atacar o cultivar. Na multilinha, ao contrrio, a presso de seleo direcional relaxada, uma vez que sempre existir uma linhagem suscetvel. Com o

relaxamento da seleo direcional, aumenta a seleo estabilizadora contra genes desnecessrios de virulncia, o que, por sua vez, garante a no seleo de super-raas. Multilinhas tm sido empregadas no controle de doenas de culturas autgamas, tais como trigo e aveia. A Fundao Rockfeller, por exemplo, lanou um programa de desenvolvimento de multilinhas de trigo para o controle da ferrugem do colmo. A primeira multilinha, denominada de Miramar 63, foi lanada na Colmbia, no incio da dcada de 60 (Singh, 1986). A multilinha era composta pelas dez linhagens mais resistentes selecionadas entre 1200 resultantes de 600 cruzamentos envolvendo o cultivar brasileiro Frocor. Dois anos aps o incio da utilizao de Miramar 63, duas linhagens tiveram que ser substitudas, pois apresentavam nveis elevados da doena. Apesar disso, as perdas econmicas sempre se mantiveram abaixo de 20%.o programa de melhoramento de trigo do Centro Internacional de Melhoramento do Milho e Trigo (CIMMYT), no Mxico, tambm desenvolve multilinhas resistentes ferrugem do colmo, ferrugem da folha e septorioses. Um exemplo a multilinha obtida atravs do cruzamento do cultivar Siete Cerroscom mais de 500 cultivares ou linhagens provenientes de vrias partes do mundo (Fehr, 1987). Um outro exemplo do uso de multilinhas o programa de melhoramento de aveia para rresistncia a Puccinia graminis f. sp. Avenae e Puccinia coronata, desenvolvido pela Universidade de Iowa (Browning & Frey, 1969), no qual mais de 25 genes de resistncia foram incorporados, via retrocruzamento, a linhagens isognicas, resultando em seis diferentes multilinhas. O programa de melhoramento do Instituto de Melhoramento Vegetal de Cambridge, desenvolvido por M.S. Wolfe e colaboradores, tambm faz uso de uma mistura, no de linhagens, mas de cultivares comerciais, numa estratgia bem semelhante ao das multilinhas. A diferena, neste caso, que a mistura envolve um nmero reduzido de cultivares comerciais, cada um apresentando um certo nvel de resistncia ao espectro de raas presentes na rea.embora os efeitos epidemiolgicos das misturas de cultivares sejam essencialmente os mesmos das multilinhas, os genes de resistncia utilizados no seriam fortes o suficiente para garantir o aparecimento de super-raas. Segundo Wolfe e seus colegas, a composio da mistura deve ser alterada antes que a freqncia da super-

raaatinja nveis epidmicos, de modo a causar um contnuo desequilbrio nas foras seletivas que agem na composio racial da populao patognica. 37.5.5 Distribui geogrfica de genes de resistncia A estratgia de distribuio geogrfica de genes de resistncia equivale, na prtica, a um sistema multilinhas em escala maior. Segundo esta estratgia, o plantio de cultivares contendo genes de resistncia segue um padro planejado de distribuio geogrfica. No caso das ferrugens dos cereais no hemisfrio norte, por exemplo, o padro de distribuio dos genes de resistncia seguiria o caminha anualmente trilhado pelo patgeno, a chamada trilha da Puccinia. Para entender melhor o exemplo, deve-se considerar que a erradicao do hospedeiro alternativo da Puccinia graminis f. sp. Tritici, o Beriberis vulgaris , criou uma situao na qual o patgeno no pode mais sobreviver no campo na fase de cio durante o inverno. Seu ciclo de vida foi reduzido fase uredinial, que ocorre no trigo (ver captulo 4). Dessa forma, o patgeno tem que forosamente, acompanhar os plantios de seu hospedeiro. A trilha de Pucciniaocorre no hemisfrio norte porque os plantios, durante o inverno, so feitos no sul e, gradativamente, acompanhando as mudanas de estao, atravessam o continente, estendendo-se at o Canad, l chegando durante o vero. Assim sendo, as epidemias que ocorrem no norte so dependentes de inculo produzido no sul. Esta interdependncia, na opinio de Browning Frey (1969), pode ser explorada com genes de resistncia vertical, de modo a reduzir o inculo inicial. Segundo os autores, se diferentes genes de resistncia forem usados em plantios do sul e do norte, o inculo produzido em uma rea seria avirulento em outra quebrando, desta maneira, a trilha da Puccinia. A estratgia extremamente elegante e engenhosa e foi sugerida, tambm, para o controle da ferrugem de aveia e da podrido de Phytpphthora em soja no norte dos EUA, assim como para o controle da ferrugem da folha do trigo na ndia. A estratgia requer a existncia de um certo nmero de genes de eficincia similar no controle das raas prevalecentes na rea, assim como uma intensa cooperao entre melhoristas, fitopatologistas e agricultores. Segundo Fehr (1987), exemplos de uso da estratgia em grande escala nos EUA so raros, primariamente devido dificuldade de encontrar genes

de eficincia similar. Segundo o autor, caso um gene mostre-se superior aos outros, ele ser o preferido entre os melhoristas, que acabam relegando os demais a um segundo plano. 37.6 SELEO ASSISTIDA POR MARCADORES MOLECULARES: UMA NOVA PERSPECTIVA NO CONTROLE GENTCO Um dos maiores problemas associados ao melhoramento de resistncia polignica reside na difcil identificao de todos os genes responsveis por esta caracterstica. No caso de resistncia monognica, o problema no to grave assim, uma vez que, como foi visto, estes genes exercem uma grande influncia sobre o fentipo. No caso de poligenes, ao contrrio, a contribuio fenotpica individual de cada gene no to evidente. A soluo ideal seria marcar cada um dos poligenes, de modo que a seleo destes pudesse ser monitorada durante o programa de melhoramento. A idia de usar marcadores em programas de melhoramento no nova. Thoaday (1691)foi quem primeiro reconheceu a possiblidade do uso de caractersticas fenotpicas controladas por monogenes como marcadores para a seleo indireta de poligenes. A idia muito simples: se um poligene estiver em ligao (linkage) com um monogene que causa um efeito facilmente detectvel no fentipo, ento pode-se selecionar indiretamente o poligene baseado no efeito fenotpico do gene vizinho. claro qua a eficincia desta seleo vai depender muito de quo prximo do cromossomo esto os dois genes. Quanto mais prximos, menor a probabilidade de que os genes sejam separados por permuta. Para ilustrar esta idia, tome-se o exemplo da resistncia de repolho a Xanthomonas campestris pv. campestris (Camargo, 1994). A resistncia da linhagem Badger Inbred-16 oligognica, envolvendo pelo menos quatro genes. Uma planta desta linhagem foi cruzada com uma planta da linhagem de brcolis Cr-7, suscetvel ao patgeno. A anlise gentica da segregao da resistncia revelou que dois dos oligoligenes esto em ligo com dois genes que controlam o comprimento do pecola da folha, de modo que plantas resistentes apresentam pecolos curtos em plantas suscetveis apresentam, pecolos longos (lembre que a folha de repolho sssil, enquanto que a folha de brcolis possui um longo pecolo. Desta fpr, a transferncia dos dois genes de resistncia da linhagem Badger Inbred-16 para linhagem Cr-7 poderia ser feita indiretamente, \selecionando-se as plantas

com menor pecolo. Neste caso, o comprimento do pecol,o estaria sendo usado como um marcador fenotpico. O exemplo usado acima apresenta algumas limitaes prticas. A primeira diz respeito ao nvel de polimorfismo do marcador. O comprimento do pecolos pode ser usado em cruzamentos repolho versus brcolis, e no em cruzamentos existe pouca ou nenhuma variao para comprimento de pecolo (diz-se que o marcador no polimorfo nestes casos). A segunda limitao deve-se s caractersticas agronomicamente indesejveis que podem ser conferidas pelo gene marcador. Usando-se o comprimento de pecolo para a seleo de genes de resistncia no cruzamento brcolis versus repolho, resultariam linhagens resistentes de brcolis com folhas ssseis ou de pecolo curto, que fogem do padro esttico tradicional do brcolis (folhas largas e de longo pecolo); neste caso, poderia haver uma rejeio de mercado aos novos cultivares de brcolis. A terceira e mais importante limitao diz respeito quantidade de genes marcadores: apenas dois dos quatro genes de resistncia seriam selecionados, uma vez que os outros dois no esto ligados a outros genes que controlam o comprimento do pecolo. As limitaes impostas pelo uso de marcadores fenotpicos foram, em grande parte, suprimidas com o advento dos chamados marcadores moleculares, tais como os fragmentos de restrio de comprimento polimrfico, ou simplesmente RFLPs (ver item 26.7.1). Estes marcadores so fragmentos cromossmicos pequenos, gerados aps a

digesto do cido nuclico com enzimas de restrio. O tamanho de fragmentos homlogos entre indivduos distintos de uma mesma espcie pode ser altamente varivel, o que pode ser visualizado sob certas condies gis de eletroforese ou membranas de nutrocelulose. Isto faz com que seja possvel definir, por exemplo, de qual linhagem parental um indivduo F2 recebeu um certo fragmento. Considere-se o cruzamento entre um indivduo resistente e um suscetvel que mostram polimorfismo para um determinado fragmento cromossmico (RFLP) e indivduos F2 obtidos deste cruzamento, conforme ilustra a Figura 37.9. Se este fragmento vier de uma regio cromossmica que esteja muito prxima a um gene de resistncia, ento ele deve co-segregar com o gene de resistncia, isto , a grande maioria das plantas F2 que apresentarem o fragmento da planta parental resistente devero tambm ser resistentes, e a grande maioria das plantas suscetveis devero apresentar o

RFLP da planta parental suscetvel. Se, por outro lado, o RFLP vier de uma regio distante do gene de resistncia, no haver co-segregao. No exemplo da Figura 37.9, est muito claro que h co-segregao. Na prtica, no entanto, devido natureza polignica da resistncia, as diferenas no so to bvias, uma vez que outros genes envolvidos na resistncia tambm esto presentes. Neste caso, recorre-se a funes estatsticas para determinar se h cosegeegao ou no (ver item 37.8 para referncias sobre o assunto). Os RFLPs so superiores como marcadores, pois um nmero virtualmente ilimitado deles pode ser obtido, possibilitando o mapeamento de todas as regies cromossmicas e dos genes presentes nestas. Assim um RFLP pode ser identificado ligado a cada poligene de resistncia. Outra vantagem que so fenotipicamente neutros, isto , no apresentam a desvantagem de estar associados com caractersticas agronomicamente indesejveis. Finalmente, o nvel de polimorfismo bem superior aos marcadores fenotpicos . A identificao de genes responsveis por caractersticas quantitativas por meio de marcadores moleculares permite a manipulao individual de cada um,

essencialmente como se fosse genes mendelianos, seguindo a idia de H. Nilsson-Ehle, discutida no incio do captulo 24, de caractersticas quantitativa podem ser vistas como fruto da presena de vrios genes mendelianos, cada qual contribuindo para uma pequena parcela de variao fenotpica. A possibilidade de marcar cada poligene de resistncia abre novas perspectivas no controle de diversas condies ambientais e genticas. Por meio de cruzamentos genticos, pode-se construir linhagens quase-isognicas para cada poligene e estudar os efeitos de cada um, separadamente e em diversas combinaes, no desenvolvimento da doena. A combinao de genes verticais e genes horizontais polignicos pode ser obtida com relativa facilidade, possibilitando explorar as vantagens da combinao destes tipos de resistncia. A transferncia de genes recessivos de resistncia durante o retrocruzamento tambm pode ser grandemente facilitada pela eliminao da necessidade de testar pllignies. Finalmente, o mais interessante a possibilidade de piramidar vrios polignies de resistncia, talvez realizando o sonho comum de

fitopatologistas e melhoristas, ou seja, a obteno de cultivares que sejam resistentes para sempre.

37.7 BIBLIOGAFIA CITADA

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Breeding resistant varieties. Proc. Linnean Soc. N. S. Wales 88: 235-258, 1963. Watson, I. A . & Singh, D. The future for rust resistance in wheat in Australia. J. Australian Inst. Agr. Sci. 18: 190-197, 1952. 37.8 BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA Os esforos concentrados, principalmente por parte de pases desenvolvidos como os EUA, de instalar, a nvel global , uma poltica de patenteamento de genes que porventura forem descobertos em germoplasma selvagem, tanto animal como vegetal, tm suscitado grande polmica acerca do controle do material depositado em bancos de genes. Os intrigantes livros de Mooney (1986) e Juma (1989) trazem uma discusso profunda sobre este problema e so de leitura obrigatria para melhoristas e fitopatologistas interessados em aspectos histricos, sociais, econmicos e ticos da utilizao conservao do germoplasma selvagem. O artigo de Goodman (1990) aborda os custos relativos e benefcios para a agricultura da manuteno dos bancos de germoplasma. O autor apresenta uma perspectiva histrica sobre a utilizao de germoplasma selvagem em programas de melhoramento das grandes culturas, especialmente milho. Goodman , M.M. Genetic and germ plasm stocks worth conserving. Journal of Heredity 81: 11-16, 1990. Juma, C. The gene Hunters: Biotechnology and the Scramble for Seeds. New

Jersey, Princeton University Press, 1989. 288 p. Mooney, P.R. O Escndalo das Sementes. So Paulo, Livraria Nobel, 1986. 146p. Existem livros clssicos que abordam com detalhes os mtodos convencionais de melhoramento. Dentre eles, recomenda-se os livros de Allard (1960) e Fehr (1987), j citados, que so utilizados como livros de texto em disciplinas sobre mtodos de melhoramento. Recomenda-se tambm, o livro de Hallauer & Miranda Filho (1988) para

uma discusso avanada sobre os diversos mtodos de seleo massal e de prognies em espcies algamas. Finalmente, o excelente livro de Vencovsky & Barriga (1992) trta de aspectos biomtricos da seleo de caracteres quantitativos. Hallauer, A. R. & Miranda Filho, J.B. Quantitative Genetics in Maize Breeding. Ames, Iowa State University Press, 1988, 468p. Vencovsky, R. & Barriga, P. Gentica Biomtrica no Fitomelhoramento. Sociedade Brasileira de Gentica, 1992, 486p. A idia de que raas patognicas contendo genes desnecessrios de virulncia so menos aptas em sobreviver , na verdade, um axioma proposto por Vanderplank. Existe considervel controvrsia acerca da validade deste axioma. Primeiro, porque este no foi extensivamente validado na prtica. Segundo, porque no est claro se a menor aptido de sobrevivncia destas raas est ligada aos genes de virulncia Per se. Recomenda-se o captulo de Marshall sobre a validade do axioma de Vanderplank e possveis repercusses nas estratgias de emprego de genes de resistncia vertical. Os mtodos de mapeamento de genes de resistncia usado RFLPs como marcadores genticos estto descritos nos trabalhos de Edwards et al. (1987), Lander & Botstein (1989) e Tanksley bem concisa e explanatria e apresenta as vrias aplicaes na agricultura do mapeamento de genes via RFLPs. Como exemplos onde a tcnica foi utilizada para mapear genes de resistncia oligo/polignica, consulte Heun (1992), Nodari et al. (1993) e Young bet al. (1993), alm de Camargo (1994), j citado. A reviso de Melchinger (1993) e Young et al. (1993), alm de Camargo (1994), j citado. A reviso de Melchinger (1990) aborda aspectos tericos e prticos do uso de marcadores moleculares no melhoramento visando a resistncia oligognica. Edwards, M.D..; Stuber, C.W.; Wendel, J. E. Molecular-marker-facilitated

investigations of quantitative-trait loci in maize. I. Numbers, genomic distributions and types of gene action. Genetics 116: 113-125, 1987. Heun, M. Mapping quantitative powdery mildew resistance of barley using a restriction fragment length polymorphism map. Genome 35: 1019-1025, 1992.

Lander, E.S.& Botstein, D. Mapping Mandelian factors underlying quantitative traits using RFLP linkage maps. Genetics 121: 185-199, 1989.