Efeito

biolgico

antimicrobiano

dos

extratos

hidroalcolico e hexnico do Cravo da ndia (Syzygium

aromaticum).
Biologic antimicrobial effect of extracts of hydroalcoholic and hexanic Cloves (Syzygium aromaticum).

BARCAROL, Leandro
RODRIGUES, Maxuill SCHERER, Samanta

Faculdade de Farmcia Universidade de Cruz Alta Unicruz Cruz Alta - RS- Brasil correspondncia: barcaroll@yahoo.com

Resumo
O vegetal conhecido popularmente como Cravo da ndia, cujo nome botnico Syzygium aromaticum, classificado como rvore, visto que apresenta comumente porte entre 12 a 15 m. Pertencendo a famlia das Mirtaceae, possui prestigioso uso devido ao poder condimentar e, popularizado pelos povos orientais como afrodisaco. No Brasil, o cravo encontrado em regies de clima quente, como por exemplo, ao sul do estado da Bahia. Possui largo uso popular como condimento e medicinalmente em forma de infuso para distrbios de estmago e intestino, alm do famoso uso no alvio da dor de dente. Tambm possui vasto uso nas indstrias qumicas e farmacuticas. Foi realizada uma extrao hidroalcolica e outra hexnica do eugenol, leo essencial do cravo, que apresentou efeito positivo contra bactrias Escherichia coli e de Staphylococcus aureus. Palavras-chave: Cravo da ndia, antimicrobiano, eugenol, extrato alcolico.

Abstract
The plant commonly known as Cloves, whose botanical name is Syzygium aromaticum, is classified as tree, because it shows commonly sized from 12 to 15 m. Belonging to the family of
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Mirtaceae, has prestigious season use due to power, and popularized by the oriental people as an aphrodisiac. In Brazil, the stud is found in warm climates, such as the southern state of Bahia. It has wide popular use as a condiment and medicinally in the form of infusion for stomach and intestinal disorders, and the famous use in the relief of toothache. It also has wide use in chemical and pharmaceutical industries. Key-words: Cloves, antimicrobial, eugenol, alcoholic extract.

Introduo
Com as Grandes Navegaes empreendidas pelos europeus, o cravo foi popularizado no ocidente. Entretanto, relatos dos primeiros usos no oriente datam de 220 d.C, na China, quando javaneses enviaram o fruto ao imperador chins. A primeira pessoa a descrever o cravo-da-ndia foi o botnico alemo Everard Rhump, quem dizia ser a mais preciosa das plantas (RABLO, 2010). A propriedade antimicrobiana dos leos extrados das plantas medicinais e aromticas vem sendo observada desde a antiguidade, entretanto as primeiras tentativas de caracterizar essas propriedades em laboratrio datam de 1900. Com o passar do tempo, aumentam os estudos sobre as plantas, conseqncia que advm dos avanos tecnolgicos, permitindo melhor isolamento dos componentes dos vegetais e princpios ativos, estes ltimos interessando mais a rea mdica (COSTA; TSE; MIYADA, 2007). Especialmente no Brasil, vem crescendo o uso de plantas com fim teraputico de forma exponencial (NASCIMENTO et al., 2000). Esses leos so normalmente produtos volteis, presentes em partes areas, como cascas, troncos, razes, frutos, flores, sementes e resinas sendo resultado do produto do metabolismo destas plantas. Em algumas plantas, essas substncias servem como defesa contra microrganismos (LIMA et al., 2006). Os leos presentes nas plantas so fontes menos nocivas ao meio ambiente, alm disso, so utilizados pelas prprias plantas como proteo contra ataques de bactrias e fungos, ao mesmo tempo em que atraem insetos e pssaros polinizadores. A propriedade anti-sptica avaliada conforme a riqueza qumica em fenis, aldedos e alcois (RABLO, 2010). Segundo a Organizao Mundial da Sade (OMS), plantas medicinais so todo e qualquer vegetal que possui, em um ou mais rgos, compostos que podem ser utilizados com fins teraputicos ou precursores de frmacos semi-sintticos. Essas plantas medicinais devem ser consideradas no apenas como matria prima, mas sim para descoberta de novas molculas e partida para estudo de novos fitoterpicos eficazes. Por isso, a seleo do mtodo para a descoberta envolve interpretao do conhecimento cientfico e popular (MONTEIRO, 2004).
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O cravinho a gema seca da flor, sendo utilizado principalmente na culinria devido ao aroma e ao sabor caractersticos, ambos resultantes do eugenol, que o componente mais abundante da planta, representando aproximadamente 95% do leo extrado nas folhas (RAINA et al., 2001). O eugenol utilizado na odontologia como componente de seladores e produtos de antissepsia e higiene bucal (KAPLAN et al., 1999). O leo essencial do cravo possui caracterstica de ser picante, entretanto fatores extrnsecos como o clima e os solos do local de cultivo podem interferir, ocasionando variaes nos teores e nas composies qumicas do mesmo. Soma-se a isso, a adulterao do leo do cravo e tambm de outras plantas, por adio de compostos sintticos de baixo custo, objetivando aumentar o rendimento, tais como: lcool benzlico, steres do cido ftlico e at hidrocarbonetos clorados (RABLO, 2010). O eugenol possui forma molecular C10 H12O2 e massa molar 164,2g.mol-1(RABLO, 2010). Pesquisas de TSAO & YU (2000) mostraram que o eugenol possui atividade namaticida, j ELHAG; EL-NADI; ZAITOON (1999) mostraram o poder inseticida. Outras pesquisas tem mostrado a capacidade antiviral (YUKAWA et al., 2000) e bactericida (NASCIMENTO et al., 2000). PINTO et al. (2009) mostraram que S. aromaticum possui efeito inibitrio sobre bactrias fungos Candida e Aspergillus. Estudo de LEE et al. (2009) mostraram a inibio do crescimento frente as bactrias Vibrio spp., Edwardsiella spp., Aeromonas spp., Escherichia coli e Pseudomonas spp. NASCIMENTO et al. (2000) tambm mostraram alto potencial antimicrobiano frente a Pseudomonas aeruginosa. Por ltimo, TANGERINO (2006) mostrou que Escherichia coli e Staphylococcus aureus apresentaram inibio do crescimento com a tcnica de disco difuso com eugenol. Quanto ao mecanismo de destruio bacteriana, o eugenol, aps ser difundido no gel gar, inibe o crescimento bacteriano desnaturando as protenas e rompendo as membranas dos microrganismos. Quanto maior a rea de alcance da difuso do eugenol, maior ser o halo de resistncia ao crescimento bacteriano gerado pelo material (TANGERINO 2006).

Objetivos Assim, este trabalho buscou analisar o potencial citotxico dos extratos hidroalcolico e hexnico do Cravo da ndia, planta considerada condimentar e medicinal, frente s linhagens de Escherichia coli e de Staphylococcus aureus.

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Materiais e mtodos
As amostras de cravo-da-ndia foram obtidas em comrcio local, na cidade de Cruz Alta. A extrao foi realizada no laboratrio de anlise de solos da Universidade de Cruz Alta, com dois mtodos de extrao diferentes objetivando-se preparar dois extratos com concentraes diferentes. Para preparar a soluo hidroalcolica 1%, na extrao alcolica, os botes secos do cravo foram pesados na balana analtica, em seguida, misturados com lcool 70% em frascos de vidro mbar, evitando qualquer influncia da luminosidade. Esta soluo alcolica de concentrao 1% foi agitada 1 minuto diariamente por 7 dias. O extrato hexnico foi preparado segundo Zelnik et al. (1977). A extrao foi feita por macerao (oito dias) e agitao diria. Em ambos os casos a temperatura de extrao esteve entre 28-30 C e os extratos aps ltrados foram submetidos a evaporao do solventes utilizando o Rota-evaporator rotatrio. Os extratos foram protegidos da luz e armazenados em geladeira (4 C) at o momento do uso. Avaliao da atividade antimicrobiana 1. Tcnica M-27 A (CLSI) de microdiluio em caldo para avaliao da concentrao inibitria mnima (CIM) frente a fungos a adaptada a bactrias. A tcnica M-27 A utilizada na determinao da suscetibilidade de leveduras a agentes antifngicos, sendo realizado em duplicata e utilizando como padro um controle de crescimento positivo. O teste foi adaptado para bactrias, alterando-se apenas o meio de cultura usado BHI, e o tempo e temperatura de incubao da placa 24h a 37C. 1.1. Preparao do inculo As bactrias foram incubadas em tubos com gar Muller-Hinton a 37C durante 24h. Aps decorrido esse perodo, foi preparada uma suspenso dos micro-organismos em salina 0,85% estril ajustando-se a turvao visualmente de acordo com o tubo n 0,5 da escala MacFarland. A suspenso foi, ento, diluda a 1:50 no caldo BHI , pipetando-se 0,01mL da suspenso em 0,5 mL do meio, caracterizando um inoculo prvio. Esse inculo prvio foi novamente diludo a 1:20 no meio, utilizando-se 0,1mL do inculo em 1,9mL do meio. 1.2. Inoculao no meio de cultura Cada cavidade da placa de microdiluio j contendo 0,1mL da concentrao do extrato das plantas foi inoculada com 0,1mL da suspenso preparada conforme descrito acima. Esta etapa dilua a concentrao da droga, a densidade do inculo e o diluente (quando usado) s concentraes finais desejadas para o teste. A cavidade do controle positivo deve conter 0,1mL do inculo e 0,1mL do

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meio e do diluente na mesma proporo em que este foi encontrado na cavidade contendo a maior concentrao do extrato, mas sem a presena do mesmo. 1.3 Incubao As placas de microdiluio foram incubadas a 37C sem agitao e examinadas aps 24 horas, ou at que o crescimento do controle positivo pudesse ser evidenciado. 1.4 Leitura do teste A leitura do teste foi realizada aps transcorrido o perodo de incubao. A leitura foi realizada mediante comparao visual com o controle de crescimento positivo, determinando-se como CIM a menor concentrao da(s) substncia(s) testada onde no foi visualizado crescimento do microrganismo. A concentrao do extrato hidroetanlico foi de18mg/mL, enquanto que a concentrao do extrato lipoflico foi de 80mg/mL.

Resultados e discusso
A concentrao mnima obrigatria a quantidade de extrato mnimo diludo capaz de inibir o crescimento bacteriano. A qualidade dos leos essenciais depende de vrios parmetros tais como ndice de refrao, solubilidade em diferentes solventes orgnicos, densidade, dentre outros, os quais so utilizados para a avaliao da qualidade da matria prima vegetal, alm do c ontrole da identidade e da pureza do leo (RABLO, 2010). O cravo apresentou inibio mesmo em um estado relativamente diludo. A tabela abaixo mostra esses valores: Extrato Hidroalcolico CMI-Concentrao Mnima Inibitria S. aureus E. coli
E. coli.

1/64 1/4

Figura 1: tabela demonstrando o efeito antimicrobiano do extrato hidroalcolico frente a S. aureus e

Extrato Lipoflico

CMI-Concentrao Mnima Inibitria

S. aureus E. coli

1/16 1/8

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Figura 1: tabela demonstrando o efeito antimicrobiano do extrato Lipoflico frente a S. aureus e E. coli

Os resultados demonstram a atividade antimicrobiana do Cravo da ndia. Resultados mais detalhados mostram que a atividade mais eficiente em bactrias. Esses mesmos resultados, apesar de a interpretao no ser a mesma, concordam com os obtidos por NASCIMENTO, et al (2000).

Concluso
Os botes florais da planta Syzygium aromaticum fornecem um leo essencial denominado de eugenol, componente majoritrio, o qual se apresentou potente frente s bactrias Escherichia coli e, principalmente, Staphylococcus aureus. Assim, possvel concluir que o S. aureus mais suscetvel s interaes do leo quando comparado com a E. Coli, por isso, o condimento poderia oferecer uma alternativa natural para conservao de alimentos e combate a enfermidades. Os produtos naturais podem ser tima alternativa no controle de muitas doenas, visto que as bactrias vm aumentando a resistncia s drogas antimicrobianas convencionais. Outro motivo que valoriza o uso das plantas medicinais, em especial o cravo, a sua fcil obteno e barata manipulao.

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Referncias

COSTA, L. B., TSE, M. L. P., MIYADA, V.S. Extratos vegetais como alternativas aos antimicrobianos promotores de crescimento para leites recm-desmamados. R. Bras. Zootec. v. 36, n.3, p 589-595, 2007.

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KAPLAN, A. E. et al. Antimicrobial effect of six endodontic sealers: an in vitro evaluation. Endodontics and Dental Traumatology, v. 15, p. 42-45, 1999.

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MONTEIRO, O. S. Estudo analtico do eugenol contido no leo essencial extrado dos frutos da espcie Pimenta dioica Lindl e sua aplicao como agente bactericida. So Lus: UFMA, 2004 Dissertao (Mestrado) Programa de Ps-Graduao em Qumica Analtica, Universidade Federal do Maranho, So Lus, 2004.

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NASCIMENTO, G. G. F. et al. Antibacterial activity of plant extracts and phytochemicals on antibiotic-resistant bacteria. Brazilian Journal of Microbiology , v. 31, p. 247-256, 2000.

PINTO, E. et al. Antifungal activity of the clove essential oil from Syzygium aromaticum (Eugenia caryophyllus) on Candida, Aspergillus and dermatophyte species. J. Med. Microbiol., v. 58, p. 1454-1462, 2009.

RABELO, W. F., Caracterizao qumica, toxicidade e avaliao da atividade antibacteriana do leo essencial do Cravo da ndia (Syzygium aromaticum). So Lus: UFMA, 2010 Dissertao (Mestrado) Programa de Ps-Graduao em Qumica, Universidade Federal do Maranho, 2010.

RAINA, V. K. et al. Essential oil composition of Syzygium aromaticum leaf from Little, 2001.

TANGERINO, L. M. B. Estudo das propriedades antimicrobianas de copolmeros derivados do eugenol. Universidade Federal de Itajub, 2006 Dissertao (Mestrado) Ps-Graduao em Materiais para Engenharia, Universidade Federal de Itajub, 2006.

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YUKAWA, T. A. et al. Prophylactic treatment of cytomegalovirus infection with traditional herbs. Antiviral Research, v. 32, p. 63-70, 1976.

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Pgina 10