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UNI~RSIDAD AUT~NOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA

DIWSIN CIENCIAS BSICAS Y DE LA SALUD

SEMINARIO DE IWESTIGACI~N

ESTUDIOS PRELIMINARES PARA EL ESTABLECIMIENTO DE UNA COLONIA DE Ambystoma mexicanum EN LABORATORIO.

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Asesor: ARMANDO FERREIRA NUN0

Presentado por:

JUAN RICARDO CRUZ A UA

ENERO I993

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ESTUDIOS PRELIMINARES PARA EL ESTABLECMIENTO DE UNA COLONlA DE Ambystoma mexicanum EN LABORA TOMO. EN LA UAM-IZTAPALAPA

OBJETIVO GENERAL.:

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Recopilar y poner en prctica los conocimientos que existan sobre el axolote mexicano Ambystoma mexicanurn ( S b ,1769)para poder establecer una colonia bajo condiciones de laboratorio en la UAMIztapalapa.
OBJETIVOS PARTICULARES:

- Capturar o comprar ejemplares vivos de Ambystoma mexicanurn. .

-Establecer las condiciones bsicas necesariaspara su menimiento en laboratorio.

- Obtener la reproduccin de Ambystoma mexicanum

artificial.

ya sea de manera natural o

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Establecer algunos patrones reproductivos bsicos de Ambystoma mexicanurn obtenidos V e r t i l i w jecundiM, porcentaje de eclosin graab de madurez gonadal). Conocer los requerimientos bsicos para su manutencin en dverentes etapas de desarrollo.

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- Lograr obtener al menos un ciclo completo.

METAS

-MEDIANTE ESTE ESTUDIO Y OTROS POSTERIORES PODER ESTABLECER EN UN PLAZO MEDIANO UNA COLONIA AUTOSOSTmIBLE DE (Ambystoma mexicanum): PROPONER ESTRATEGIAS DE CONSERVACION PARA UN POSIBLE REPOBLAMIENTO EN SUMWIO ORIGINAL.

HIP~TESIS
Y MADURACION GONADAL DE Ambystoma mexicamrm, ENTONCES SE PODRA LOGRAR SU REPRODUCCION Y SI SE CONOCEN SUS REQUERLMIENTOS NUTRICIONALES PARA CADA ETAPA DE DESARROLLO ENTONCES DE PODRA LOGRAR SU CRECIMIENTO HASTA COMPLETAR UN CICLO.

- SI SE ESTABLECEN LAS CONDICIONES OPTIMS PARA EL MANTENIMIENTO

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Mxico esta considerado dentro de los p o s paises megabiaiiversos, sin embargo el conocimiento biologico, ecologico que se tiene de su fauna es excipiente. De acuerdo con el estudios realizado por Ticul-Alvarez (I 99I), la anfibiofana mexicana es, en comparacin con los otros grupos de vertebrados, bastante pobre en us especies, p e s t o que apenas se conocen algo n i de 280. Sin embargo, al comparar este nmero con las especies de anfibios que existen en otros pases, resulu que es proporcionalmente bastante eleva&. Por ejemplo, de las I8 familias de anjibios que hay en Amrica, I2 de e l h , que corresponden al 66%. se encuentran representadas en territorio mexicano. Lo anterior se debe, en gran mea%, a la geografh, orograf y variedad de climas que existe en nuestropas. De las I8 familias que hay en Amrica, la de los Ambystmidos se caracteriza por localizarse exclusivamente en la zona norte del continente, ya que sus cuatro gneros se distribuyen desde el sur de Alaska hasta Mxico (Barnes, 1987). En Mxico se conocen alrededor de 19* especies del gnero Ambystoma los cuales se distribuyen en la Mesa Central, desde el estado de Chihuahua hasta Puebla y que corresponde a los lmites de la region nertica de Amrica del Norte ( B r d n , 1989). Entre estas especies destacan el Ambystoma schmidti,, de 6cm. de longitud, que se encuentra al este de San Martin, en el Estado de Mxico; el Axolote lacustre, Ambystoma laastris, de 35cm. de largo, que se localiza en el Lago de Zumpango; el Axolote de Velaxo, Ambystoma velasci muy cormin el los Lagos d la Altiplanicie e mexicana (Puebla, Mxico, etc.); el Axolote rosado, Ambystoma rosaseum, que vive en Mojrachic, Chihuahua; el Axolote de las salinas9Ambystoma subsalsum, que vive en las aguas salobres de la hguna de Alchichica, Puebla; el Axolote tigre, Ambystoma tigrinium que vive de& el centro de Nebraska hasta el noreste de Mxico, el cual es el Ambystomido con ms amplia distn'bucin,y del que se cree que surgieron otros tipos de Axolotes con formas semejantes, como es el caso de Ambystoma mexicanum o Axolote mexicano. (Cendrero, 1972).
Los Anfibios del gnero Ambystoma se caracterizan por presentar el fenmeno de la neotenia, que es la capacidad que tienen algunos organismos para reproducirse us c u d an conservan una organizacin n i o menos larvaria o juvenil (Grass, 1978). En los raielos los principales cambios que se presentan h a n t e la metamorfosiss,son la desaparicin de las branquias tanto externas como internasy su sustitucin progresiva por pulmones; la maijicacin de la piel y en algunos casos la prdida de la aleta caudal, (Grass, 1978). Teniendo en cuenta lo anterior el Ambystoma mexicanum es un claro ejemplo de especie neotnica facultativa (Barnes, 1987) y que adems es endmica del Valle de Mxico, (Armstrong, et al. 1989).

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*Se tom un criterio conservacionista diversos autores sealan solo17 sp. de ambystmidospara Mexico Ambystoma schmidti = A. teumum (Nussbaum, 1989, J. Herp. 23: 78-79), Ambystoma teumum no ocurre en Mxico,
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AI Ambysioma mexicanum se le ha &ab el nombre vernculo de Ajolote, palabra que proviene del mihail Axolotl,cuyo signijicado an no esta bien &@nido y que podra ser monstruo del lago, perro de agua o gemelo acutico (Smith, 1989). Esta saknnandra llega al medir 25 cm. de largo y se dyerencia de los dems Ambysimidos en que su lengua es r e h d a d a , akzrgada, y entera, libre solamente en su circunferencia; tiene una sola hilera de dientes transversalesformando una curva en arco o una llave en los extremos, de la cual se observan los orijicios nasales posteriores; su glndula partida es larga, poco saliente, pero recorrida en tala su longiiud su longitud patrn por un surco que sigue la direccin de la hendidura de la provistas de cuatro debs en las boca. Sus patas son pequeas, no palme&, extremidades delanierasy cinco en las traseras. Sus debs son delgados, disiintos, bien separados, aunque corios. Su piel es lisa, con surcos transversales en losflancos, que son rehnabs. Su cola es corta, gruesa de su base, pero comprimida sobre todo hacia su tercio terminal; su coloracin es par& verccsca y su cuerpo es rechoncho. La coloracin de las larvas es basianie clara, de verde oliva a amarillo verabso, que con el transcurso del tiempo se va haciendo ms obscura, (Herrera, 1889).
ANTECEDENTES
En la excelenie revisin bibliogr@ca realizada por Smith et al. (1971), denominaca Xnlisis de la Literaiura on the mexican Axolotl se mencionan los siguientes aniecedenies: Laprimerareferencia impresa sobre el Axolotl apareci en el trabajo de Ximnes (1615), seguida por los irabajos de Nieremberg (1635)y Jusionus (1639). Estos tres primeros trabajosfueron la base para la publicacin post moriem de Herndz en I649 quien hizo una descripcin amplia del Axoloil basada en los apuntes de campo que realiz durante sus viajes por el Centro de Mxico de I570 a 1577. Por estas mismas pocas se difunaY el papel que represent el Axolotl en la vi& cotidiana de los aztecas en iiempos de Coris, por la traduccindel Cice Floreniino (Mahidy Vaticano) al espaol por Fray Bemardino de Sahgn, en el perodo de 1558 a 1577. D e p s de esias publicacionespasa un largo perodo de tiempo en el que no se regisiran trabajos sobre el Axolotl. En I863 llegan al Museo de Hisioria Natural de Park los primeros 34 organismos vivos procedentes de Mxico, donde se les aclimaiay reproduce; este aconiecimienio causo gran adniracin entre los naturalistasde la poca, ya que consi&raron al Axoloil como un animal raro, Y extico. muy interesante. A pariir de este acontecimiento, en 1865 comienza a surgir un auge por el esrudio de e-stosorganismos en cautiverio, destacnndo los aspectos sobresalientesy biolgicosde la especie. A l p 0 del iiernpo de esos 34 organismos iniciales slo sobrevivieron 6 (5 machos negros y I hembra albina) nmero que fue incrementado despus por la donacin de algunos Axoloies por parte del Museo de Mehedin @umeril, 1870). Dumeril en 1872, escribe que ya para esa poca existan colonias de Ambystoma mexicanum en Inglaierra, I r h d a , Italia (uiln y Npoles), H o l d , Blgica, Suiza, Alemania (Bavariay Prussia), Rusia y Suecia.

Subsecuentemenie lleg a otrospases como: Australia, Nueva Z e l d , E. U., Polonia, C&, eic. Para noviembre de I886 miles de ajolotesfueron Astribuidos a Institutos de Investigacin en toda Europa. Debido a la rpida adquisicin de ejemplares de Axolotl en el mundo, la actividad cientfica no se ha deienidoy sigue an en nuestros das. Smith et al. (1971). luego de analizar las publicaciones de Amrica y de Europa que se haban hecho sobre este animal hasta ese ao, menciona que existan 3311 libros y publicaciones sobre el Ambysioma mexicanum, desgloshdose de la siguiente forma: 830 trabajos sobre embriologa, 328 sobre regeneracin, 259 sobre meiamor$osis, I69 de endocrinologa, I56 sobre su cultivo, I34 sobre radiacin y I18 sobre transplantes.
Su cultivo en acuarios ha sido una actividad muy poplar, debido a su susceptibilidad para la propagaciny experimentacin en laboraiorio.

La Journal Wochens Chrif~y la Blditer for Aquarien ha publicado una gran tratamientoy enferme&s y hbitos del Axolotl, cantidad de artculos sobre cui-, existen alrededor de 156publicacionesserias sobre su cultivo de las cuales a excepcin de 6 publicaciones realiza& en E. U., t& las demsfueron realiza& en Alemania.

En I989 Armstrong ei al dio a conocer al pblico su libro Developmental Biology of the Axolotl, que es una recopilacin sobre las investigaciones realiza& sobre el Axolotl hasta ese ao.
JUSTIFICAC Z ~ N

Al Ambystoma mexicanum se le ha llegado ha considerar como el animal mexicano ms importantey msfmoso en el mundo entero (Smith et al. 1971), adems de formar parie de la mitologa y de las costumbres culinarias del Mxico aniiguo perrera, 1889). Cosiumbre que an en nuestros das se conserva en algunospequeos lugares de nuestropais (Llamas, 1935). El Ambysioma mexicanum es un animal nativo, endmico de los canales de Xochimilco (Armstrong. 1989), que en el pasado gozaba de una ms amplia distribucin, sin embdrgo, su actual distribucin se encuentra restringida a unos pocos canales libres de la presencia humana y de su conlaminacin, misma que ha hecho estragos en la poblacin en las ltimas dcadas a tal grado que a partir del I7 de mayo de 1991, la normaiividad mexiuma coloca al Ambysioma mexicanum en el listado de especies raras,amenazadas y en peligro de exiincin. (Diario Oficia.!).

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En algunos pases el Axolote se utiliza como un animal de experimentacin con tal frecuencia como lo puede ser un ratn, una rana o un conejillo de indias, es a tal grado la magnitud de la produccin de este organisno que incluso se v e d a instituciones de investigacin, a escuelas o incluso a acuarios, con una gran wieahd de caractersticasgenotbicas y fenotpicas. Es por estas razones que resulta p r d j i c o pensar que mientras en el extranjero existen casi un ciento de colonias de estos organisnos, en donde el problema de la reproduccin en cautiverio es un asunto casi irrisible, en Mxico su pals de origen, no se cuente ni con una sola colonia autosostenible,y aunado a este problema se sume otro ms grande, su extincin.

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ME TO DO LOG^^
Durante los primeros das del proyecto, se efectuar una revisin bibliogrfica intensiva sobre la informacin relaciona& con el axolote Ambystoma mexicanurn, principlmente de aquellos aspectos relacionados con su mantenimientoy reproduccin en acuarios. Se empezar a trabajar con la informacin disponible en Mxico y se m&n solicitar al extranjeroaquellos articulos sobresalientes al respecto. Se obtendrn los primeros organismos vivos de Ambystoma mexicanum de ser posible en mercados pblicos y si no se puede, se recolectarn en su medio natural realizandopara ello los trmites necesarios con las autoriddes correspondientes. Los organismos que se obtengan sern transportados al laboratorio S-335 del rea de Psiconeuroendocrinologa de la UAMI donde sern someti& a cuarentena y a un tratamientopara prevenir enfermeddes. Para ello se colocarn en j a u h individuales de 10 1. cu con aireacin y temperatura controlah si as lo requiere su salud As / mismo, se les dar un bao de azul de metileno, verde malaquita, sal comn, pergamanato de potasio, anfibiticos en concentracionesy combinaciones variables de acuerdo con el tipo de agente infeccioso que manifiesten. Los animales que fallezcan sern regmtrds y conservados enformo1al 10%. Dos vecespor semana, durante esta etapa se les cambiar el agua de h tinas y se les dar una alimentacin a base de hgado de res, complementada con alimento natural, como son pulgas de agua, artemia, tubifex y peces. Una vez que los animales muestren buen estado de salud, sern pesados, medihs, sexados e identflcados y sern colocados en peceras a una temperatura de 20+/-3T, pH de 7, fotoperodo natural aireaciny filtro de caja o biolgico continuo, diariamente a lo largo del experimento se registrarn en una biticora todos los datos anteriormente sealados, as como su comportamiento.

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los organismos sern evaluados en relacin a su grado de madurez tomando en cuenta aspectos externosy conhuctuales y se les colocar en parejas dentro de acuarios de 70 litros de ccy>aCiw con dimensiones de 60x40x40 cm., provistos con unfirrzo biolOgrco y colocados en un lugar poco iluminado (Uatz, 1979). Durante este perodo se vigilarn y registrar constantemente su comportamiento sexual as como los datos de

A partir del mes de enero (mes del ao en el que normalmente se reproducen),

temperatura,pH y amonio del acuario,

U a vez que las parejas empiecen a mostrar signos de actividad sexual (durante n los primeros 20 d h del mes de enero), de no ser as se les adninistrarn 0.2 U1 de Gonadotrofina Corinica por hembra, se les sacar fotografms y un video de su comportamiento hasta que ocurra lafecuruhcin y el desove.

Una vez ocurrido esto, se establecer una relacin de los pesos de las hembras
antes y despus del desove, el mimero de huevos puestos por hembra, cuantos inician el desarrollo embrionario, cuantos eclosionan y cuantos llegan a la etapa de crib. As mismo, se establecer una relacin entre la fertilidad y fecunddad entre las hembras que desovaron naturalmente con respecto a las que l hicieron de manera inducida. o

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CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

BUSQUWA BIBUOGRAFICA ADQUISICI~NE INSTALACION DE EQUrPO Y MATERIAL ~ W l j o DDE o ACUMTACION OBTENCION DE REPRODUClVRES REPRODUCCION ECLOSION RESULTADOS ANAUSIS DE LOS RESULTADOS REmRTE FINAL

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RECURSOS HUMANOS

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Para llevar a cabo los objetivos del proyecto se contar con el siguiente personal. Encargado del Proyecto Hiakobilogo Juan Ricardo Cruz Avia M. en C. Armando Ferreira Nuo.

Asesores Dr. Gustavo Casas A d e u

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Mantenimiento de la colonia
4 estudiantes de Bachillerato (Preparatoria No. 5). I estudiante de la U M - I (Servicio Social) I supervisor o encargado de la colonia.

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PRESUPUESTO

DESCRIPCION ORGANISMOS ALIMENTO Alimenio vivo Hgado de res EQUIPO Axolotes adultos

CANTIDAD VALOR WITAIUO TOTAL (en miles de pesos)

I O0
5 500

100

I00 5,000 5,000 1,500 5,000 I50 I50 500 300 500 300

I Microscopio de diseccin Microscopio ptico I Refrigerador I Balanza analiica I Balanza granaiaria I Bscub para pesar animales I Filiro de agua Turmix I Medidor de pH I Peceras (70 x 40 x 40 em.) I O Tinas de plstico de IO I 30 Tambospara almacenamienio de agua declorinada 2 Anaqueles de lmina 2 (2.00 x 1.80 m) Gavetas 2

5,000 5,000 I,500 5,000 150 I50 500 300 50 IO

50

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I O0 300
200

100

EQUIPO DE COMPUTO computadora personal 386 Impresora Lasser Jet Caja de papel para imprimir Caja de diskette Cintapara impresora
I I
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2 5

3,000 3,000 I 00 50 20

3,000 3,000 100 I O0 I 00

EQUIPO FO TOGRAFICO
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1

Cmarafotogrjica de 35mm i Accesorios de cmara 4 I Cmara de video Rollos de diapositivas I5 MATERIAL PARA LOS ACUARIOS I0 Rejillas de acrlico (tipo cancel) Filtros biolgicos I0 Filtro de caja para agua 30 Calentadorespara agua 30 (de 5 a I 00 watts) 5 Cubetas de 20 litros Termmetrosde -10 a 100T 5 Manguerapara agua I0 m (de 3.5 cm diam) Manguera para aire 50 m Calafateadora I Redes de mano I0 Tubo de silicon para I0 pegar vidrio Fibra de vidriopara 50 papeles jiltro de caja Carbn activadopara 50papetes jiltro de caja Piedras aireadoraspara 50 j l r de caja ito UATERIAL QrJIRURGICO E HISTOLOGIC0

500 500 I , 500 30

500 500 I,500 450

50 20 I0 I0
I5

500 200 300 300 50

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40 50 I0 I 00 I50 25 25 25

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5 5 5

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Estuche de diseccin Jeringas de 3, 5 y I 0 ml. Charola de diseccin

2 60 2

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200 300 60

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SUSTANCIAS Y REACTIVOS
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Am1 de metileno
Alcohol absoluto Acetona Acido actico Aciabpcrico Bemocaina Bicarbonato de sodio Cloruro de sodio Cloruro de potasio Cloruro de calcio Cloramfenicol Formo1 Hematoxiha Eritromicina Tetraciclina Oxiietraciclina Bemal

25 g

100

*
45 50 50 40 84 50 70 7 I O0 I20

I galn I litro

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500 g
IO00 g 500 g 500 g IO cqias

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50 g IO cajas

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2 galones 500 g 500 g 500 g 500 g IO
IO IO 100

Iodo

* * * *

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Metano1 Nitrato de calcio Surfato cupric0 Surfatoferroso Surfato de magnesio Gonadotropina corinica (vial con I0,OOO I/) Progesterona E t genos sr Ertracios hipojsiarios Tetosterona Tris-Bufler Base Proiactina H.Luieinizante Verde de malaauita Permanganato de potasio

80 50 35 43 I20 I O0

100 I O0 50 45 50 50 40 84 50 70 7 I O0 240 80 I O0 50 50 50 80 50 35 43 I20

I000 IO00 IO00

* *
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550 300
IO0 300

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100 g IO0 g

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CRISTALEHA Vasosde ppab de 60 ml 5 Vasos de ppdo de I O0 m . l 5 5 Vasosde ppab de 500 ml. Probeta de IO ml 5 Probeta de 50 ml 5 Probeta de IO0 ml 5 Probeta de IO00 ml 5 Porta objetos (cajas) 5 Cubreobjetos (cajas) 5 Frascos viales con tapa I O0 Frascos con tapa de 500 ml 50 Frascos con tapa de 100 ml 50 Pipetas de I ml 5 Pipetas de 5 ml 5 Pipetas de IO ml 5 MATERIAL BIBLIOGRAFICO Armstrong, J.B. y Malacinskz. (I 989). Developmental biology of the Axolotl. Oxford University Press. Smith, H.M. y Smith, R.B. (I971). Anabsis of the literature on the Mexican Axolotl. En: Eric Lundberg, Sjnopsis of the Herpetofmna of Mxico. Augusta W. V. USA.
10 20 20 IO IO 20 30 5 2 I 3
5 3

50 I O0
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50 50 100 I50 25 10 I O0 150 250

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25 25

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Suscripcin a la revista Herpetolgica.

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Fondopara solicitud de revistas en el SECOBI.

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APOYO PARA CONGRESOS,ASOCIACIONES, CERTIFICACIONES Y SOBRETIROS Inscripcin a la Sociecld Herpetoitica Mexicana. Inscripcin a la American Herpetological Sociew. Congreso anual de la Sociecld Herpetolgica Mexicana. Gastos para envo, intercambioy cerrificacin de ejemplares a una institucin extranjera. Pago de sobretiros a una revista cientfica en donde se publiquen los resultaabs.

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INFRAESTRUCTURA
Para la realizacin del proyecto se cuenta con los laboratorios S-335 y S-330 del Departamento de Biologa de la Reproduccin dentro del Area Psiconeuroehrinologi. En estos laboratorios se cuenta con algunas instrutneniosy aparatos. EQUIPO Microscopio de diseccin Bsculapara pesar animales Peceras (70 x 40 x 40 cm} Tinas de p h t i c o de I O I Tambospara almacenamiento de agua declorinada Anaqueles de Imica (2.00 x I.80 m} Gavetas MATERIAL PARA LOS ACUARIOS Filtros biolgicos Filtros de caja para agua Calentadorespara agua (de 5 a IO0 watts} Cubetas de 20 litros Calafaieadora Redes de mano
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MATERIAL QUIRURGICO E HISTOLOGIC0 Estuche de diseccin CRISTALERIA Yasmdeppdode60ml Vasos de ppdo de I O0 ml Vasos de ppdo de 500 ml Frascos con tapa de I000 ml Pipeias de I ml Pipetas de 5 mi Pipeias de IO ml
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COSTO DEL PROYECTO

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Para la realizacin del proyecto se requerir de un monto total de $50'000,000.00 (cincuenta millones de pesos).

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