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Ecologa Bucal

Manual de Prcticas

Prof. C.D. Amrica Paola Agassini Prez

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Prof. C.D. Yadira L. Herrera

Mercado Ecologa Bucal 1

Manual de Prcticas

Dra. Amrica Paola Agassini Prez Dra. Yadira Lilian Herrera Mercado

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Alumno: ______________________________ Grupo: __________________ ndice Barreras de proteccin Manejo y uso del microscopio Cultivos de cavidad bucal en agar sangre Coloracin de Gram Cultivo de cavidad bucal en agar saburaud Coloracin Gram

1. 2. 3. 4. 5. 6.

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Reglamento
1.-La hora de entrada tendr 5 minutos de tolerancia, despus de este tiempo, no se permitir el acceso al laboratorio 2.-Al entrar al laboratorio, el alumno deber ponerse la bata y abotonarla completamente, slo podr quitrsela al salir de ste. 3.- Las mesas debern estar siempre li mpias y desocupadas, las mochilas debern ser colocadas en los cajones de las mesas de trabajo.

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4.- No comer ni fumar en el laboratorio, no introducirse ningn objeto a la boca. 5.- Recogerse el pelo para efectuar el trabajo de laboratorio. 6.- Limpiar y desinfectar el rea de trabajo antes y despus de usarla. 7.- No pasear entre las mesas del laboratorio, el trabajo deber efectuarse sentado y en su equipo de trabajo. 8.-Hablar slo lo necesario con los compaeros. 9.- Das antes de iniciar la prctica lea cuidadosamente que es lo que se va a realizar, si no entiende pregunte al profesor. 10.- Si hay necesidad de llevar material biolgico para la realizacin de la prctica, es necesario conseguirlo de lo contrario la prctica se suspender para todo el equipo. 11.- El asa utilizada para el cultivo de microorganismos deber esterilizarse en la flama del mechero, antes y despus de su uso.

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12.-Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra. 13.-En caso de derramar material que contenga

microorganismos, cbralo con fenol o benzal y deje actuar diez minutos. Avise al profesor. 14.- Todo el material que se va a incubar o desechar, debe colocarse en el sitio indicado por el profesor. 15.-Etiquete todo el material que va a incubar con los siguientes datos: equipo, grupo, fecha, nombre del material e inciales del nombre del alumno.

16.- Despus de la incubacin es necesario la esterilizacin del material para eliminar microorganismos que pudieran hacernos dao a nuestra salud. 17.- Lvese las manos con agua y jabn antes de salir del laboratorio. 18.- Es obligacin de cada equipo entregar todo el material limpio.

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19.- No usar pantaln de mesaclilla debajo del pantaln blanco. 20.- Traer zapato clinico

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Material e instrumental

1.- Bata Blanca 2.- Cubre bocas 3.- Lentes 4.- Guantes 5.- Gorro 6.- Cajas de Cultivo (Petri) dos por alumno 7.- Porta Objetos 8.- Cubre Objetos 9.- Cotonetes esterilizados (en autoclave) 10.-Lapiz Graso o Marcador indeleble 11.- Mechero de alcohol 12.- Camisa y/o blusa blanca 13.- Zapato clnico blanco 14.- Colores

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Prctica N 1 BARRERAS DE PROTECCIN

MATERIALES:

Gorro Lentes Guantes Cubre bocas Bata desechable

Describir correctamente la colocacin de cada uno de los materiales de proteccin, el retiro de los mismos y el destino final de cada uno. Y la importancia de utilizar las barreras de proteccin.

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Firma del Maestro_____________

PRACTICA N2 MANEJO Y USO DEL MICROSCPIO PTICO

MATERIAL. SUSTANCIAS
Microscopio compuesto 0.85% Porta Y cubre objetos Palillo Hisopo

MATERIAL BILGICO
sarro dental saliva Sol. Salina. NaCl al Sol. de yodo-lugol

PROCEDIMIENTO Tcnicas de montaje hmedo La gota pendiente o las preparaciones hmedas permiten examinar organismos vivos suspendidos en un fluido. Las preparaciones hmedas se hacen colocando una gota del fluido que contiene el organismo sobre una lmina de vidrio y cubrindola con una fina pieza de vidrio (cubreobjetos): para reducir la tasa de evaporacin y eliminar corrientes de aire, generalmente se rodea la gota con vaselina. Cuando se examinan las preparaciones hmedas por microscopa de campo claro, es importante ajustar la fuente de luz de forma adecuada. Es posible disminuir la intensidad de la luz mediante la utilizacin de filtros especiales.
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Montaje en solucin salina fisiolgica (nacl 0.85%) o agua Utilizada para estudiar la movilidad de las bacterias 1.- En el centro de solucin salina un portaobjetos coloca una gota de

2.- Con un hisopo toma muestra de sarro dental o placa de un compaero que no se haya lavado los dientes y colcala en la solucin salina mezclando cuidadosamente 3.-. Examinar con objetivos de 40X y 60 X. CUESTIONARIO: 1.- Qu importancia tiene el estudiar y observar los microorganismos en muestras biolgicas?

2.- Escribe el nombre microscopio compuesto

de cada una de las partes del

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OBSERVACIONES. Dibuja lo observado en los diferentes objetivos para cada muestra que preparaste durante el experimento.

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Prctica N3 CULTIVO DE CAVIDAD BUCAL Y CEPILLO DENTAL

OBJETIVO

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El alumno aplicara la tcnica de cultivo bacteriano de La cavidad bucal y cepillo dental.

MATERIAL Cepillo dental USADO Cajas de petri con preparacin de agar Cotonetes estriles (en autoclave) Barreras de proteccin personal Lpiz graso o marcador indeleble Colores

___________________

Firma del Maestro_____________ Resultados del cultivo. El alumno identificara la diferencia de los resultados en manos sucias y desinfectadas.
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______________________________

Tiempo transcurrido Temperatura

_________ _________

Observaciones

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PRACTICA N4
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COLORACIN DE GRAM
OBJETIVO El alumno aplicar una tcnica de coloracin de Tincin de Gram para la identificacin de bacterias Gram positivas y Gram negativas... MATERIAL Microscopio Porta objetos Cubre objetos Aceite de inmersin Cepas Bacterianas

SUSTACIAS COLORANTES Colorante violeta cristal de Gram o azul de metileno Solucin decolorante alcohol acetona Safranina Yodo o lugol

Tincin de Gram. Tincin empleada en microbiologa para la visualizacin de bacterias en muestras clnicas. Tambin se emplea como primer paso en la diferenciacin bacteriana. El examen con microscopio ptico de preparacin con tincin de
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Gram se emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esfricas), bacilos (alargadas) y formas de espiral. Las bacterias pueden diferenciarse con esta tincin en dos grupos. Los microorganismos Gram Positivos se tien de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los organismos espira lados se tien de rojo y se dice que son Gram negativos. Las aplicaciones ms comunes de la coloracin de Gram son las siguientes: La presencia de cocos Gram positivos agrupados en forma de racimo sugiere estafilococos; en cadenas sugiere estreptococos. La presencia de diplococos Gram negativos son caractersticas de especies de Neisseria. Los bacilos Gram. Positivos grandes sugieren especies de Bacillus o clostridium, los bacilos Gram Positivos pequeos sugieren especies de Listeria o una de las corineiformes (difteroides). Los bacilos Gram. Negativos son las bacterias ms comunes halladas en los laboratorios clnicos e incluyen a Espiroquetas, Veillonella, Bacteroides, Fusubacterium y muchos ms. El valor diagnstico de esta tincin es variable; normalmente permite una buena orientacin al microbilogo para seleccionar las tcnicas de cultivo ms adecuadas y tambin tiene valor en orientar hacia un diagnstico etiolgico, en especial para instaurar un tratamiento inicial.
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PROCEDIMIENTO Realizacin del frotis

1. Colocar una pequea gota de agua en el centro de un

portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota de agua, que resulta suficiente.
2. Flamear

el asa de siembra, tomar, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo bacteriano en medio slido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensin homognea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos. evaporacin acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado el porta pues las clulas pueden deformarse o romperse.

3. Esperar hasta que el lquido se evapore o acelerar su

Tincin de Gram
1. Realiza la preparacin del

frotis bacteriano como se

explic en el paso anterior

2. Teir con cristal violeta 1min. 3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
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4. Cubrir con Lugol 1min. 5. Lavar con agua el exceso de Lugol. 6. Decolorar

con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparacin deje de perder color (30seg) disolvente.

7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de 8. Teir con safranina 1min. 9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste. 10. Secar la preparacin. 11.

Examinar al microscopio con aceite

de inmersin y fijndose sobre todo en el color de cada preparacin. CUESTIONARIO 1.- Que es un frotis?

2.- Con que finalidad se fija la muestra de microorganismos en el porta objetos?

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3.-Que importancia tiene teir las muestras bacterianas?

4.-De los reactivos que utilizaste para la tincin de Gram, cul es el que funciona como colorante primario?

5 -Que coloracin tien las bacterias Gram positivas_________________ y Que coloracin tien las bacterias Gram. negativas ___________ OBSERVACIONES: Realiza los dibujos y esquemas correspondientes a las tinciones realizadas

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Practica N5
OBJETIVO El alumno realizara un cultivo de cavidad bucal para la observacin de microorganismos de la flora normal bacteriana de la cavidad bucal. MATERIAL Caja de petri con agar saburaud Cotonetes estriles en autoclave Barreras de proteccin personal Lpiz Graso o marcador indeleble PROCEDIMIENTO
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El alumno utilizara un cotonete estril y tomara una muestra de la cavidad bucal de su compaero frotando lengua y carrillos, hasta impregnar completamente el cotonete. Lo llevara la caja de petri con agar sangre para su siembra.

_________________________

Firma del Maestro ___________________ PRACTICA N O 6 COLORACION DE GRAM

OBJETIVO El alumno realizara la tcnica de tincin de gran para identificar los diferentes microorganismos de la cavidad bucal.

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MATERIAL Microscopio Portaobjetos Cubre objetos Aceite de inmersin Cepas Bacterianas

SUSTANCIAS COLORANTES Cristal violeta Solucin decolorante (alcohol o acetona) Safranina o Fucsina Yodo o Lugol

PROCEDIMIENTO El alumno realizara la tcnica de tincin siguiendo los pasos de la practica numero 4. de gran

RESULTADOS

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