PRACTICA N2

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Y SU FORMA DE ESTERILIZACION MEDIOS DE CULTIVO SOLIDOS,SEMISOLIDOS,LIQUIDOS MARCO TEORICO

Los

medios

de

cultivo

son

preparados

empleados

para

cultivar

microorganismos. Segn la especie que se quiera cultivar se emplear un tipo especfico de medio de cultivo. Un medio de cultivo tendr todo lo que necesita un microorganismo para vivir: una fuente de carbono (ej: glucosa) una fuente de nitrgeno (Ej: aminocidos) sales minerales agar

El medio se vierte lquido pero al enfriarse a temperatura ambiente, el agar se solidifica. Crecimiento. Los microorganismos

unicelulares como bacterias y hongos (levaduras) suelen crecer en forma de colonia. Las colonias son el resultado del crecimiento exponencial, partiendo de una clula, en forma de pequea montaa sobre el medio de cultivo, formada por millones de clulas. Esta multiplicacin se produce por reproduccin asexual (biparticin y escisin binaria).

Adems de los nutrientes, otros factores que condicionan el crecimiento de microorganismos son: temperatura, humedad y tiempo de crecimiento.
Gonzales Perales Luis Alberto

Inocular o sembrar: trminos que se emplean para hablar de la accin de depositar microorganismos en las placas para su cultivo y crecimiento.

Incubador: Especie de horno de temperatura controlada que sirve para incubar las placas a una temperatura ptima para el crecimiento de microorganismo cultivados en ella. Las bacterias crecen ptimamente, por lo general, a 37C y las levaduras a 28C. Los microorganismos no son necesariamente patgenos y en nuestro entorno se hallan habitualmente en todas partes: superficies, aire, piel, etc.

INTRODUCCION

Gonzales Perales Luis Alberto

Los nutrientes con los cuales se formulan los medios de cultivo deben estar disueltos para que los mismos se encuentren disponibles para ser utilizados por los microorganismos. Los medios de fermentacin utilizados en la industria son casi siempre complejos y a menudo son slidos en suspensin, de manera tal que los cambios que se producen durante la esterilizacin pueden ser importantes. Las modificaciones pueden ser beneficiosas o perjudiciales. La naturaleza de las interacciones que tienen lugar entre los componentes de un medio, durante la esterilizacin por calor, depender no solamente de la naturaleza de los componentes sino tambin de la temperatura, duracin del calentamiento, pH del medio y de la agitacin. De modo que la disponibilidad de los nutrientes puede modificarse tanto cuantitativamente como cualitativamente debido a reacciones entre componentes, antes, durante o despus de la esterilizacin.

MATERIALES Y EQUIPOS PROBETA DE 1000 ML

Gonzales Perales Luis Alberto

 SOLUCION DE NaOH 1N y HCl 1N TRIPODES CON REJILLAS METALICAS TUBOS ESTERILES Y PLACAS PETRI ESTERILES BAGUETA BEAKER PAPEL INDICADOR DE Ph AGAR : TSA,SIM,EMB,gelatina CALDO: TSB, PEPTONADO

PROCEDIMIENTO
disuelve en agua destilada los medios comerciales proporcionados,

segn la indicacin del envase, a los que contengan agar ser

Gonzales Perales Luis Alberto

necesario someterlos la accin del calor hasta su completa disolucin. enfra este preparado hasta aproximadamente 50 c mide el pH del medio, con la cinta indicadora si es necesario, ajusta el pH empleando hidrxido de sodio o acido clorhdrico 1 n envasa,rotula,sealando el tipo de medio, por incubacin del mismo a 37c por 24 horas esteriliza por autoclave a 15 lb de presin por 15 a 20 minutos controla la esterilidad del medio, por incubacin del mismo a 37c por 24 horas para el caso de caldo peptonado, se proceder a la disolucin de los siguientes componentes: peptona 10g y cloruro de sodio 10 g, luego se completa con agua destilada hasta 1000 ml y se llevara a ph de 8.8.

Gonzales Perales Luis Alberto

Gonzales Perales Luis Alberto

 CUESTIONARIO
Que importancia tiene el uso de los medios slidos?

Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar. Los medios de cultivo contienen distintos nutrientes que van, desde azcares simples hasta sustancias complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de bacterias, se siembra en un medio de cultivo slido donde las clulas que se multiplican no cambian de localizacin; tras muchos ciclos reproductivos, cada bacteria individual genera por escisin binaria una colonia macroscpica compuesta por decenas de millones de clulas similares a la original. Si esta colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecer como cultivo puro de un solo tipo de bacteria.

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio; en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si est presente. Otras veces el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: as, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las
Gonzales Perales Luis Alberto

placas de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias

Cultivos bacterianos Colonias de bacterias Escherichia coli (ms grande, rosa) y Proteus vulgaris (ms pequea, de color castao) que crecen juntas en una placa Petri. En circunstancias normales estas bacterias son inofensivas y habitan en el intestino humano favoreciendo la digestin, si bien pueden convertirse en patgenas y producir infecciones del tracto urinario. Los cientficos y mdicos llevan a cabo cultivos bacterianos y estudian sus caractersticas con el fin de adquirir conocimientos respecto a las enfermedades bacterianas y su prevencin.

Que sustancia es la encargada de solidificar los medios de cultivo solido?de donde se extrae?
Gonzales Perales Luis Alberto

Es el agar. Es un carbohidrato que se extrae de algas (agarfitas). En su estructura es una mixtura compleja de polisacridos, en dos partes: agarosa (polmero) y agaropectina (polmero con carga) De estas dos partes, la agarosa cumple la funcin de gelificar mientras que la agaropectina, no tiene poder para formar geles. Normalmente, la parte interesante del agar es la azarosa, por el fin que se busca. El agar puede disolverse fcilmente en agua caliente y de forma un poco ms difcil en agua fra. Forma geles a bajas concentraciones tales como 0,5% e incluso menores. Los geles son termorreversibles (puede romperse por temperatura) La temperatura de gelificacin est en el entorno de los 30C, aen soluciones de 1-2%, por supuesto que hay que tener en cuenta la calidad del agar, su origen y dems especificaciones. El gel logrado tiene buena transparencia, mientras que puede usarse tambin como agente de suspensin de partculas y espesante del medio. Hay una relacin interesante entre el agar y el contenido de azcares, donde logra formar geles de alta dureza. Se combina muy bien con otros hidrocoloides y espesantes, por lo cual es ampliamente utilizado en la industria alimenticia. Dentro de sta, se aplica a la industria de: bebidas con y sin alcohol, crnicos, confitera, panificacin, confectionery, sopas y salsas, productos envasados. A otros grados, tiene aplicaciones definidas en el rea de pharma, donde se usa para cultivos.

Gonzales Perales Luis Alberto