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En los organismos pluricelulares existen células especializadas en esta función , que son
las células sexuales . La célula sexual masculina ( espermatozoide) y la femenina ( óvulo)
portan cada una la información genética de la especie , se unen en un proceso denominado
fecundación y a través de complejos y mas o menos prolongados procesos dan origen al
organismo completo. Como la fecundación es especifica todos los seres vivos darán
descendientes iguales a si mismo , es decir de la misma especie.
- ADN POLIMERASA I :
Su acción fundamental estriba en la reparación del ADN ya formado. Esta enzima utiliza
para realizar la catálisis de la reacción general una sola molécula cebadora , por lo que ella
sola no logra la replicación . Además tiene acción exonucleasa tanto en sentido 5’....3’
como 3’....5’ , es decir , cataliza la hidrólisis de los nucleótidos que se encuentran en los
extremos de la cadena del ADN, preferentemente en sectores donde la cadena ha sufrido
mella o ruptura.
- ADN POLIMERASA II :
Es capaz de catalizar la reacción general aunque con mucho menor actividad que la pol I ,
y posee acción exonucleasica en sentido 3’---5’ ; pero carece de esta acción en sentido 5’---3’.
Es la mas activa de todas , pero su forma biológicamente activa requiere de la unión con
una proteína a la que se ha denominado copolimerasa . Cataliza la reacción general
utilizando como molécula cebadora a cualquier ácido nucleico , tanto el ADN como el ARN,
lo cual la diferencia de la Pol . I , que solo utiliza el ADN como molécula cebadora.
OTROS FACTORES :
Los demás factores necesarios son los iones inorgánicos Mg ++ que participan como co
factores inorgánicos de las ADN polimerasas y las llamadas proteínas desenrrolladoras.
1- INICIACION :
Las cadenas una vez separadas no pueden unirse de nuevo gracias a la acción de un grupo
de proteínas nombradas estabilizadoras de ADN de una sola banda ( ssb).
Una vez separadas las dos cadenas intervienen en el proceso unas seis proteínas , que
forman un complejo unido a una cadena de ADN y que se llama : complejo de iniciación .
Estas proteínas utilizan la energía de hidrólisis del ATP y se mueven sobre el ADN , hasta
localizar una señal genética ( especifica para cada organismo ) y es donde comienza la
síntesis de un pequeño fragmento de ARN que permanece unido a la cadena del ADN
formando un híbrido ARN-ADN y recibe el nombre de ARN- iniciador . De esta forma se
producirá la síntesis de varios fragmentos de ARN .
Los fragmentos de ARN obtenidos servirán como moléculas cebadoras . Recuérdese que
la síntesis del ADN tiene que producirse exclusivamente por alargamiento de un ácido
nucleico preformado.
Se debe tener presente que esto ocurre en las dos cadenas del ADN , pero en direcciones
contrarias.
Es valido aclarar que aunque siempre nos referimos que el crecimiento de las cadenas
nuevas o hijas es unidireccional , pues este ocurre en sentido 5’ a 3’ , la replicación de las
dos cadenas es bidireccional , es decir , la horquilla de replicación se mueve en las dos
direcciones a partir del punto de origen , llegando a formarse dos horquillas que se
mueven en dirección opuesta sobre las dos cadenas del ADN .
Una vez incorporado el primer desoxinucleotido , la Pol . III continua incorporando uno
a uno los siguientes nucleótidos cuyas bases son complementarias a las que ocupa la
posición correspondiente en el ADN , luego se trata de un proceso repetitivo.
En la otra cadena se mueve en dirección contraria a la síntesis , 3’ a 5’ , pero como la
ADN-polimerasa III solo sintetiza en dirección 5’ a 3’ el movimiento de la horquilla
detendría su funcionamiento , pero se sabe que esto no ocurre .
¿ Como se resuelve este problema ? .
En esta cadena la síntesis se produce por fragmentos , cada cierto tramo de la molécula
del ADN se forma un nuevo ARN- iniciador que permite un nuevo crecimiento.
Cuando la Pol . III encuentra el híbrido ADN- ARN no puede continuar incorporando
desoxinucleotidos y entonces abandona el ADN , volviendo a unirse al extremo 3’-OH del
iniciador , formándose pequeñas cadenas de ARN y ADN unidas covalentemente .
Al llegar al ADN de doble cadena están todos los desoxirribonucleótidos pero hay dos de
ellos que no están unidos por enlaces fosfodiester , existe una mella en la cadena .
Actúa entonces la ADN – ligasa que cataliza la formación del enlace fosfodiester y sella la
mella que existía en el ADN.
Este proceso se va repitiendo constantemente en una de las cadenas por lo que se dice que
la síntesis es discontinua .
En la otra cadena sin embargo , la síntesis progresa sin interrupciones , pues se realiza
a favor del movimiento de la horquilla , por lo que en ella la síntesis es continua.
De ahí que se describe la replicación como un proceso que es al mismo tiempo continuo y
discontinuo ( algunos autores lo llaman semidiscontinuo ).
La ADN polimerasa I tiene también actividad exonucleasica y en su movimiento por el ADN
es capaz de producir desenrollamiento.
En resumen , durante la elongación las dos cadenas son alargadas de manera diferente .
Para la hebra conductora solo hace falta la participación de la Pol . III . La otra hebra se
alarga discontinuamente y requiere de la participación del complejo de iniciación , la Pol . III ,
la Pol . I y la ADN ligasa .
3- TERMINACION :
Las unidades de replicación inician el proceso a diferentes tiempos en la fase S del ciclo
celular , hasta que se copia todo el ADN , formando las dos moléculas hijas completas.
La replicación del ADN ocurre una sola vez durante el ciclo de vida de la célula , de ahí la
necesidad de que el proceso ocurra con una alta fidelidad de copia , que las moléculas hijas
contengan exactamente la misma secuencia de bases nitrogenadas que la molécula paterna.
1- La alta especificidad del apareamiento de bases formando los pares Adenina – Timina
y Citosina- Guanina .
2- La alta especificidad de las polimerasas que solo incorporan los nucleótidos que
forman pares complementarias al ADN que se esta copiando.
La base incorrecta no forma pares de bases tan estable como la correcta y esa zona del ADN
se debilita. La ADN polimerasa I , con su actividad exonucleasica 3’-5’ comienza a
eliminar los nucleótidos mal apareados , cuando llega a la zona donde el apareamiento es
correcto detiene su acción y la polimerasa III o ella misma puede continuar alargando la
cadena en la forma adecuada.
Todo estos mecanismos contribuyen a que los errores de copia sean mínimos y el proceso
transcurre con una alta fidelidad.
REPLICACION EN EUCARIOTAS :
Las polimerasas de eucariotas son mucho menos activas y tienen una velocidad muy alta ,
entre 500 y 5000 pares de bases por minuto . El tiempo de replicación del ADN es unas 1000
veces mayor que los procariotas ( unos pocos minutos ) .
Los cromosomas eucariotas utilizan múltiples puntos de replicación y la misma es
bidireccional . Se han calculado hasta 5000 sitios de iniciación en un mismo cromosoma ,
cada uno separado por 3000 pares de bases .
Por ultimo , es bueno recordar que las células de los animales superiores como el hombre
contiene una doble dotación de genes ( son diploides ) y cuando se produce la duplicación de
los cromosomas contendrá cuatro copias de genes homólogos ( son tetraploides ) .
Es decir , el numero de copias de un mismo gen es variable durante todo el ciclo celular .
Durante el periodo ( M) la información se divide en dos yendo a parar a cada una de las
células hijas , que así inician su ciclo celular nuevamente con una doble dotación de la
información genética.
ILUSTRACIONES :
CARACTERISTICAS ESTRUCTURALES DEL ARN :
Los ARN son ácidos nucleicos ubicados en todo el protoplasma celular , que tienen como
principal característica el tener como azúcar en su estructura a la ribosa .
Como quiera que el ARN descubierto hasta ahora tiene muy diversos tamaños y realiza
distintas funciones dentro de la célula , resulta imprescindible realizar su estudio según
los diferentes tipos identificados de acuerdo con su estructura y función .
Estos tipos de ARN son mas abundantes en las células y constituyen además las moléculas
de ARN mas pesadas y grandes de las conocidas ya que su peso molecular puede alcanzar
valores de varios millones de Dalton.
En realidad no existe un solo tipo de ARNr , sino que en el ribosoma bacteriano existen al
menos tres bien definidos , a los que se les denomina : 23s , 16s , y 5s de acuerdo con su
peso molecular , en tanto , en las células eucariotas se han identificado 4 tipos: 5s , 5.8s ,
18s y 28s.
A pesar de conocerse que estos ARN se encuentran unidos siempre a proteínas para formar
los complejos núcleoproteicos denominados ribosomas , y que estos organitos
citoplasmáticos son los sitios donde va a ocurrir la síntesis de proteínas , no se conoce
con exactitud el papel que desempeñan los ARNr en este mecanismo biosintetico.
2- ARN MENSAJERO :
Estos tipos de ARN son muy variables , están constituidos por una sola hebra de
polirribonucleotido y contiene solamente 4 bases nitrogenadas principales .
Su peso molecular oscila entre 200 y 500 mil Dalton.
Estos compuestos , al igual que los otros tipos de ARN son sintetizados en el núcleo ,
copiando la secuencia nucleotidica de un sector de la cadena del ADN , por lo que sera
complementaria a la hebra que copia .
Con posterioridad el ARNm pasa al citoplasma y se fija al ribosoma donde actúa como la
“plantilla” para la organización de la secuencia de aminoácidos de una proteína , por lo
que se afirma que la función básica de este tipo de ARN es la de copiar la información
genética contenida en el ADN del núcleo para trasladarla hasta el ribosoma , lugar donde
se efectúa la síntesis de proteínas.
Como quiera que cada una de las miles de proteínas presentes en la célula son sintetizadas
a partir del código que brinda el ARNm , se comprende que este ARN tiene que aparecer
en muchas formas diferentes y con muy variados pesos moleculares y que además deben
poseer una vida media muy corta.
3- ARN DE TRANSFERENCIA :
Constituyen los ARN mas pequeños conocidos , ya que solo poseen entre 75 y 90 nucleótidos
y pesos moleculares entre 23 y 28 mil Dalton.
Se conoce que cada uno de los 20 aminoácidos presentes en las proteínas tienen al menos
un ARNt especifico correspondiente , y algunos poseen mas de uno . Su función es la
de actuar como transportadores de los aminoácidos individuales específicos para
introducirlos en el sitio apropiado durante la síntesis proteica.
La unión del ARNt con el aminoácido determina que se introduzca un enlace rico en energía
en ese complejo , por lo que se facilita la posterior formación del enlace peptídico , y también
se le confiere a los aminoácidos especificidad para su incorporación a la cadena peptídica en
crecimiento en el sitio apropiado.
La estructura de estos ARN resulta la mas conocida de todos los tipos; así , se sabe que están
caracterizados por contener un elevado numero de bases raras o inusuales.
Además , todos los ARNt tienen en su extremo 5’ un residuo de ácido guanilico , en tanto
que en su extremo 3’ presentan siempre la secuencia A-C-C, siendo este sitio el punto de
unión con su aminoácido especifico.
Estos ARNt tienen una configuración tridimensional característica toda vez que poseen
entre 60 y un 70% de sus bases pareadas. Esto es posible al plegarse la cadena sobre si
misma y establecer pareamientos intratecarios .
En las células eucariotas aparece además de los tres tipos ya mencionados de ARN ,
otro tipo que ha sido denominado heterogéneo nuclear , ya que no abandona el núcleo .
Este tipo de ARN resulta el de mayor peso molecular de todos los conocidos y tiene una
vida media muy corta , solo unos minutos , lo cual dificulta considerablemente su estudio.
En algunos virus ha sido posible encontrar un tipo de ARN de doble cadena , con una
estructura y función muy similar al ADN.
TRANSCRIPCION DEL ARN :
Luego en las células deben existir mecanismos por medio de los cuales se logre la expresión
de la información genética. Ese mecanismo en líneas generales consiste en sintetizar
proteínas cuya secuencia de aminoácidos esta codificada en la secuencia de bases
nitrogenadas del ADN.
Este proceso recibe el nombre de trascripción y es el que posibilita la síntesis de todos
los tipos de ARN . Su nombre proviene de la similitud que existe entre este proceso y la
copia de una información escrita en uno de los idiomas humanos , pues el “idioma’ del
ARN se “escribe” utilizando una secuencia nucleotidica , y esta información va a ser
copiada en el mismo “idioma’ en otra molécula , la del ARN.
1- La secuencia de bases del ADN es copiada en una molécula especifica del ARN
ue recibe el nombre de mensajero ( Transcripción ).
2- Utilizar la secuencia de bases del ARN mensajero , para , a partir de ella sintetizar
una cadena polipeptídica con una secuencia especifica de aminoácidos
( Traducción ) .
Estos dos procesos que ocurren continuamente , en algunos casos hasta
simultáneamente, constituyen el mecanismo fundamental mediante el cual el ADN
determina las características estructurales y funcionales de una célula y un organismo
como un todo.
ARN polimerasa dependiente del ADN , pues en ausencia del ADN la misma carece de
actividad , esta enzima cataliza la formación del enlace 3’ 5’ fosfodiester entre los
diversos nucleótidos , para posibilitar la polimerización de los mismos y la formación
del ARN.
La porción del ADN al cual se une la polimerasa para iniciar la trascripción recibe el
nombre de promotor . En los promotores conocidos se distinguen dos secuencias
importantes , la primeras se consideran variantes de las secuencias TATAATG .
La otra secuencia importante contiene típicamente nueve bases , por ejemplo ACATTTAC.
Una vez formado el promotor abierto la enzima comienza a deslizarse sobre el ADN
hasta arribar a la primera base que va a ser copiada.
Solo se incorporara aquel capaz de formar un par con la base # 2 , es decir , la citosina .
Cuando los dos sitios están ocupados se produce la reacción y queda formado el primer
enlace fosfodiester . Inmediatamente después se produce el movimiento de la polimerasa
hacia el siguiente nucleótido.
2- ELONGACION :
Durante la elongación se forma un híbrido ADN –ARN pero mucho mas corto que el
formado en la iniciación de la replicación . Algunos autores aseguran que la zona
híbrida solo comprende dos pares de bases.
2- Una secuencia rica en GC muchas veces localizada dentro del tallo aunque puede
parcialmente estar dentro del asa .
Existen dos tipos de señales de terminación . Una de ellas es reconocida por la propia
polimerasa pero parece necesario que a ella se encuentre unida una proteína especifica
conocida como Nus A . Esta proteína se une al núcleo de la polimerasa en cualquier
momento de la elongación después de la disociación del factor sigma , pues no pueden
unirse simultáneamente al núcleo de la polimerasa .
El otro tipo de terminación ocurre por la acción de una proteína especifica denominada
( rho ) . Esta es una proteína oligomerica que no se une ni a la polimerasa ni al ADN .
Su unión al ARN estimula en ella una fuerte actividad de ATPasa . Aun cuando el
mecanismo del factor ( rho ) no esta totalmente esclarecido el mismo esta relacionado
igualmente con la existencia de pausas en el movimiento de la polimerasa que se producen
en secuencias especificas o señales de terminación .
En resumen la terminación incluye el detenimiento de la elongación , la liberación del
ARN y la ARN – polimerasa , determinadas por secuencias especificas del ADN y con
el concurso de proteínas especificas. Así se sintetiza una larga molécula de ARN , que va a
ser transformada posteriormente en un proceso de maduración post- transcripcional
para constituir los diversos tipos de ARN.
EVENTOS POST – TERMINACION : MADURACION :
Los diferentes tipos de ARN sufren modificaciones antes de ser totalmente funcionales .
Cada enzima esta formada por dos subunidades grandes y de cuatro a ocho subunidades
pequeñas .
2- Muchos ARNm tienen una vida media biológica muy larga . La vida media de los
ARNm , es de 1.8 minutos en procariontes , en tanto en eucariontes puede llegar a
varias horas .
En cuanto a los ARNr es bueno comenzar diciendo que los eucariontes tienen cuatro
tipos llamados 5s , 5.8s , 18s y 28s , debido a su coeficiente de sedimentación .
La organización de sus genes difiere de la de los procariontes.
Los genes del ARNr 5s están fuera del nucleolo. Como los genes para los ARNr , en
general , no presentan intrones su maduración es similar a la de los procariontes .
Es evidente que si cada base fuera equivalente a un aminoácido las proteínas solo
contendrían 4 aminoácidos diferentes. Si dos bases fueran equivalentes a un
aminoácido solamente se utilizarían 16. Si fueran tres las bases entonces pudieran
utilizarse 64 aminoácidos , es decir , la relación de equivalencia es de tres bases
nitrogenadas para cada aminoácido , o como se dice: la relación de codificación es 3:1.
Según Watson y Crick la secuencia de bases de los ADNs ( y por tanto de los ARNs
transcriptos ) no tiene ninguna restricción , de lo que se desprende que existirán
las 64 combinaciones y de los cuales se puede inferir además , que las 64 son utilizadas.
CODIGO GENETICO:
6- El código es universal , ya que todas las especies tienen igual código genético.
Este hecho constituye una prueba irrefutable de la evolución de las especies.
7- La base del tercer nucleótido que conforma al codon es menos especifica que
las dos primeras.
Esto representa una gran ventaja , pues si se cambia esta tercera base por otra ,
por medio de una mutación puntual , existen grandes posibilidades de que
no se produzcan modificaciones de la proteína resultante.