M, Anual de Urianalisis

2011
Manual de Procedimientos en Uro anlisis
Manual de Procedimiento en Uroanlisis
AO DEL CENTENARIO DE MACHU PICCHU PARA EL MUNDO
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE UROANLISIS ELABORACION:

LARA ROLDAN JULISSA(*) LLALLE PUENTE KAREEN(*) MANTILLA REYES SHEYLA(*)
REVISADO POR:
LIC. T.M JAVIER ARAYA CAMPOMANES Coordinador Del Servicio De Laboratorio Clnico
APROBADO POR:
DR. PABLO ROLDAN ACUA Jefe Del Servicio De Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
(*) Internas del Servicio De Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica. Periodo Setiembre 2010 Octubre 2011.
Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
Introduccin
Dentro de los problemas de salud pblica que el pas debe enfrentar, que en especial han elevado su tasa de prevalencia convirtindose en una grave dificultad en sectores de menores recursos, se trata del parasitismo intestinal y de las infecciones de tracto urinario, problema que agrava ms an la ya golpeada salud de la poblacin. La presencia de factores desfavorables para la salud de la comunidad como el fecalismo, el deficiente saneamiento ambiental, la pobreza y el bajo nivel educativo, permiten la presencia y expansin del parasitismo intestinal, preferentemente en el grupo etreo de menor edad. Desde hace mucho tiempo se reconoce que las propiedades fsicas y qumicas de la orina constituye indicadores importantes del estado de salud. El objetivo de este manual es el de presentar una explicacin de las pruebas incluidas en el examen de orina y exmenes parasitolgicos de rutina y detallando las condiciones necesarias de las muestras y el procedimiento de las mismas. Tambin el de incluir alguna de las pruebas selectivas que se solicitan. El trmino selectivas implica que un resultado positivo debe ser seguido con estudios ms amplios.
EQUIPOS Y MATERIALES:
MATERIALES:
2 Microscopio binocular ZEIZZ Primo star H.W.Kessel S.A Centrifuga Thermo Scientific IEC CL10 Gradilla para tubos Tubos de plstico 13x 100 Laminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Guantes descartables Marcador de vidrio Baja lengua Tubos de vidrio 12 x 75 Papel absorbente
REACTIVOS:
Acido actico Tiras reactivas para anlisis de orina Cybow Peroxidasa Piramidon Sachet de Thevenon Valtek test del guaiaco Acido sulfosalicilico Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
EXAMEN DE ORINA COMPLETA

El examen de orina es uno de los ms solicitados en la prctica mdica, porque no solo permite evaluar el propio aparato urinario desde el rin hasta la uretra, sino que con una muestra fcil de obtener podemos tener informacin sobre patologas metablicas como la diabetes, cetosis, o de tejidos u rganos especficos como las hepatopatas, etc.
Examen fsico:
Color: La orina normal preserva una amplia gama de colores, lo cual est determinado por su concentracin. El color puede variar de un amarillo plido a un mbar oscuro, segn la concentracin de los pigmento urocrmicos y en menor medida, de la urobilina y de la uroeritrina. Cuando mas pigmento tenga, mayor ser la intensidad del color. Sin embargo existen muchos factores y constituyente que pueden alterar el color normal de la orina, incluyendo medicaciones y dietas, as como diversos productos qumicos que pueden estar presentes en situaciones patolgicas. El pH influye en el color que muchos productos qumicos producen. Por otra parte pueden existir varios factores colorantes en la misma orina, lo cual puede dar lugar a un color diferente del esperado
color
Aspecto turbio
Causas patolgicas Acido urico,clculos,bacterias,esperamtozo ides, Leucocitos
Causas medicamentosas y alimentarias Dieta alta en alimentos ricos en purinas
Aspecto lechoso
Cremas vaginales,piuria,grasas,lipuria Pigmentos biliares,mioglobina a Acido homogentisico,metahemoglobina, pigmentos biliares, melanina Leguminosas,metronidazol Compuestos de hierro,metronidazol,nitrofurantoina
Caf Pardusco(castao) negro
Verde o azul
Biliverdina, infeccin de urinario por pseudomona a Pigmentos biliares(bilirrubina),urobilina a Porfirinas,porfirobilinogeno, Uroporfirinas Hematuria, hemoglobinuria, mioglobinuria,porfirias,
tracto Azul de metileno, complejo de vitamina B,timol,fenilsalicilato Nitrofurantoina, pyridium,orina concentrada, zanahoria Fenoltaleina,rifampicina,remolacha
Amarillo naranja Rojo o purpura
fuerte
castao
Rosado o rojo
Pyridium, amiodarona,colorantes de alimentos, remolacha fosfatos
Blanco
Pus,quilo
Aspecto: La orina normal habitualmente es clara pero puede tornarse turbia por precipitacin de partculas de fosfato amorfo en orinas alcalinas o de urato amorfo en orinas acidas Fosfato amorfo = precipitado blanco que se disuelve cuando se agrega un acido. Urato amorfo = color rosado (pigmentos urinarios), se disuelve al calentar la muestra Muestra turbia = presencia de leucocitos o clulas epiteliales, bacterias, mucho tiempo expuesta en recipiente y a temperatura ambientalAspecto brumoso = Moco Aspecto ahumado o turbio = eritrocitos Cetonas = olor dulce o a frutas Densidad: El peso especfico se utiliza para medir el peso concentrado y diluyente del rin en su esfuerzo por mantener la homeostasis en el organismo, ya que la capacidad concentradora del rin es una de las principales que se pierden Intervalo normal = 1.003-1.035, en casos de hidratacin excesiva es 1. 001 (el valor del agua es 1). El estado vara segn la hidratacin y volumen urinario Peso especifico se eleva cuando la ingesta de lquidos es baja Peso especfico desciende cuando la ingesta de lquidos es alta.
EXAMEN QUMICO
El anlisis de orina de rutina incluye pruebas qumicas para pH, protenas, glucosa, cetonas y sangre oculta. Algunos laboratorios tambin incluyen pruebas de bilirrubina, urobilingeno y nitrito, segn el tipo de tira reactiva que utilice.
GLUCOSA: La glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la glucosa para formar de perxido de hidrogeno que a su vez oxida un cromgeno por la accin de peroxidasa. BILIRRUBINA Y UROBILINGENO: Las tiras reactivas se basan en la reaccin de acoplamiento de una sal de diazonio con la bilirrubina en un medio cido. Difieren, sin embargo, en la sal de diazonio utilizada y en el color que aparece. SANGRE: Permiten la deteccin de eritrocitos intactos, as como la hemoglobina libre y mioglobina. Los hemates intactos de la orina se hemolizan al contactar con el taco reactivo. La hemoglobina liberada reacciona con el reactivo dando puntos verdes sobre un fondo amarillo o anaranjado. Entonces, la presencia de hemates intactos da una reaccin de color verde punteado, mientras que la de hemoglobina libre y la mioglobina dan una coloracin uniforma de color verde o del verde al azul oscuro.
CETONAS: Contiene reactivos el nitroprusiato de sodio y un amortiguador alcalino. La reaccin con el cido diactico de la orina forma un color castao PH: Se utilizan dos indicadores, el rojo de metilo y el azul de bromotimol, que cubren la escala de pH entre 5 y 8,5 o 9. Los colores van del anaranjado al amarillo y del verde al azul. DENSIDAD: Solutos inicos presentes en la orina originan la liberacin de protones de un polielectrolito. A liberarse protones, el pH disminuye y origina un cambio de color de azul de bromotimol a azul verde y amarillo verde.
PROTENAS: Este mtodo colorimtrico se basa en el concepto conocido como error proteico de los indicadores, un fenmeno que se caracteriza por que el punto de cambio de color de algunos indicadores de pH es diferente en presencia de protenas. Por lo general el indicador cambia del amarillo al azul (o verde) entre pH 3 y pH 4, pero en presencia de protena el cambio de color se produce entre el pH 2 y el pH 3 En consecuencia, en presencia de protena se produce un error en el comportamiento del indicador. NITRITOS: en el medio cido del rea reactiva el nitrito reacciona con el cido p-arsanlico formando un compuesto de diazonio. Este compuesto se une luego con la 1, 2, 3, 4tetrahidro-benzo (h) quinolina-3-ol produciendo un color rosado. LEUCOCITOS: El pigmento azo da un cambio de color beis a violeta.
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SEDIMENTO URINARIO:
En las personas sanas la orina contiene pequeos nmeros de clulas y otros elementos formes provenientes del aparato genitourinario: cilindros, clulas epiteliales de la neurona. Clulas epiteliales del rin, vejiga, hilos de moco de espermatozoide provenientes de la prstata .posiblemente eritrocitos y leucocitos. El sedimento urinario proporciona informacin muy til tanto para el diagnostico como para el pronstico, ya que proporciona una muestra directa de la morfologa del aparato genitourinario. El sedimento debe examinarse lo ms pronto posible despus de su recoleccin, pero si no es posible hacer el examen en forma inmediata puede refrigerarse la muestra durante horas PODEMOS OBSERVAR: CLULAS: Entre las clulas que pueden estar presentes en la orina se encuentran eritrocitos (hemates o glbulos rojos), leucocitos (glbulos blancos) y clulas epiteliales provenientes de cualquier punto del tracto urinario, desde los tbulos hasta la uretra, o como contaminantes procedentes de vagina o vulva.
HEMATES: Los hemates presentes en la orina pueden provenir de cualquier punto del tracto urinario, desde el glomrulo hasta el meato urinario, y en la mujer constituyen a veces contaminacin menstrual. Cuando la muestra de orina es fresca, los hemates presentan aspecto normal de color plido o amarillento, son discos uniformes bicncavos de aproximadamente 7 m de dimetro y 2 M de grosor. Son refringentes a la luz.
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LEUCOCITOS: Los glbulos blancos pueden entrar en cualquier punto del tracto urinario desde el glomrulo hasta la uretra. En promedio, la orina normal puede contener hasta 2 glbulos blancos/campo de gran aumento.En la mujer debe tenerse en cuenta que los leucocitos hallados pueden ser de origen vaginal, sobre todo si se acompaan de una gran cantidad de clulas de epitelio plano.
OTROS ELEMENTOS FORMES:
CRISTALES
Los cristales son estructuras que se presentan por la precipitacin de solutos en la orina. Cuando la orina esta sobresaturada con un compuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de solubilidad de ste se encuentran alteradas, el resultado es la formacin de cristales. La precipitacion esta sujeta a los cambios de temperaturas , concentracion de solutos y pH que afectan la solubilidad. Los solutos precipitan mas rapidos a temperaturas bajas .Por consiguiente, la mayor parte de la formacion de cristales tiene a lugar en muestras que han permanecido a temperatura ambiente o se refrigeraron antes de realizar la prueba. La presencia de cristales en orinas recien emitidas se asocian con mayor frecuencia con muestras concentradas(densidad elevada).Una ayuda valiosa para la identificacion de cristales es el pH de la muestra porque esto determina el tipo de sustancias quimicas precipitadas .En general ,los compuestos organicos y los iatrogenos cristalizan con mas facilidad en pH acido, mientras que las sales inorganicas son menos solubles en soluciones neutras y alcalinas .Una excepcion es el oxalato de calcio que precipita en orina acida y neutra. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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EN ORINAS ACIDAS Los cristales que se encuentran comnmente en las orinas cidas son el cido rico, oxalato de calcio y los uratos amorfos. Con menos frecuencia hay cristales de sulfato de calcio, uratos de sodio, cido hiprico, leucina, tirosina, colesterol y sulfamida.
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EN ORINAS ALCALINAS:
Entre los cristales que pueden encontrarse en orinas alcalinas se incluyen los siguientes: fosfato triple (fosfato amnico-magnsico), fosfatos amorfos, carbonatos de calcio, fosfato de calcio y biuratos de amonio, tambin denominados uratos de amonio.
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CRISTALES PATOLOGICOS
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CILINDROS: Son estructuras longitudinales Formadas en los tbulos renales debido a la precipitacin o gelificacin de la mucoprotena de Tamm-Horsfall o a la inclusin de diferentes elementos a una matriz proteica, dicha mucoprotena no se encuentra en el plasma y es secretada por las clulas epiteliales del tbulo renal. Los cilindros estn constituidos por caras paralelas y extremos redondeados o romos, su forma y tamao depende de las caractersticas del tbulo donde se forme. Los cilindros pueden ser utilizados para localizar el sitio especfico del tracto urinario donde ocurre la enfermedad.
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Toma de muestra: Realizar un lavado genital completo, con abundante agua y con jabn, antes de recolectar la muestra en el recipiente estril. Recoja la primera orina de la maana de la siguiente manera: descarte la primera parte de la miccin, a continuacin, y sin detener la miccin deber recogerse la segunda mitad de la misma en un frasco estril de unos 20 o 35 ml. evitando tocar el interior o borde del frasco y descarte la ltima parte. Cuando haya terminado, ajuste la tapa del envase y limpie cualquier resto de orina que hubiera salpicado al exterior de ste. Entregue el envase con la orina, bien tapado, al personal que lo atiende, dentro de las 2 horas siguientes a la recogida la muestra.
En nios: Informar al nio o algn familiar del procedimiento a realizar. Lvese las manos. Prepare la bandeja con todo el material necesario. Colquese guantes estriles. El nio debe ser sostenido por un ayudante, en posicin decbito dorsal con las piernas dobladas y abducidas. Realizar aseo genital y fijar en forma adecuada el recolector desechable estril de 10 0cc.
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El recolector es ms fcil de aplicar si se fija primero en el perineo y se prosigue despus hasta la snfisis. Una vez que haya orinado el lactante se retira el recolector, y se extrae la muestra de orina con una jeringa estril y se introduce en el tubo correspondiente.
El recolector puede estar como mximo 30 minutos instalado, ms tiempo la muestra se considera contaminada.
Precauciones: Es aconsejable recoger la primera orina de la maana. Se debe desechar la primera parte del chorro de la miccin para evitar la contaminacin de la muestra por la flora uretral. La muestra recogida debe estar exenta de secreciones vaginales y detritus. La recogida de orina en la mujer es aconsejable que se lleve a cabo cuando no est con la menstruacin. En pacientes con sonda vesical no se debe recoger la muestra de la bolsa recolectora si esta no se ha cambiado recientemente. Nota: Tenga en cuenta que la recoleccin adecuada nos permitir proporcionar resultados tiles a su mdico. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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Procedimiento: Una vez obtenida la muestra 1. Rotular y ordenarlas con sus respectiva orden 2. Vertir la muestra en tubos de plsticos 13x100 ya rotulados 3. Realizar el examen fsico y qumico de la orina. Sumergir completamente las reas de prueba de la tira en orina fresca, bien mezclada y sin centrifugar y retirar la tira en forma inmediata. Debe tenerse cuidado de no tocar las reas reactivas.
4.
Registrar los datos en su respectiva orden. Centrifugar las orinas 3500 rpm x 5 minutos.
5.
6. 7.
Eliminar el lquido sobrenadante. Pasar una gota del sedimento al portaobjetos y cubrirla con un cubreobjetos. Examinar toda la zona a 40x.
8.
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CRITERIOS Y PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD QUE DEFINEN RESULTADOS INACEPTABLES
Limpieza del recipiente de recoleccin de la muestra (afecta la calidad de la muestra en cuanto a contaminacin). Tiempo transcurrido entre la recoleccin de la muestra y su anlisis (influye en el cambio de las estructuras y cambio en los componentes y metabolitos). Momento de obtencin de la muestra (dilucin o concentracin de la orina). Mtodo de recoleccin de la muestra (debe estar acorde al anlisis que se le haga a la orina, para no afectar el proceso). Utilizacin de medicamentos y diferentes sustancias (causa interferencia en algunas pruebas). Volumen de la muestra de orina (para que se conserve la representatividad en la misma). Tiempo y revoluciones en el proceso de centrifugacin (puede ocasionar distorsin en el anlisis). Tcnica de lectura de la tirilla reactiva y del sedimento (presencia de falsos positivos o negativos segn el caso). Falta de calibracin de los diferentes equipos (afecta la calidad de los resultados).
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DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO EN LAS HECES

A continuacin, se har referencia a los diversos aspectos con los cuales debern proceder las muestras a analizar con fines parasitolgicos para obtener resultados reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al mdico en el diagnostico, pronostico, y tratamiento del paciente. HECES FECALES SOLIDAS: Condiciones del paciente: Durante al menos tres das previos a la prueba el paciente deber evitar tomar medicamentos (antiparasitarios, antibiticos, anti diarreicos, laxantes o purgantes en caso de ser necesario debern emplearse un purgante salino, como sulfato de sodio o fosfato y carbonato de sodio. Por ningn motivo debern emplearse aceites minerales o compuestos de bismuto o magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos pueden confundirse con algunos parsitos o enmascarar su presencia. Recipiente de recoleccin: Frasco estril de boca ancha, con tapa de rosca. Cantidad de muestra requerida: 3-6 gr Toma de muestra: La muestra deber ser recolectada de la siguiente manera: 1. Con una Baja lenguas tome directamente de la cavidad anal un volumen de heces aprox. entre 3 -6 gr (equivalente al tamao de una nuez ) Nota: Evite la contaminacin de la muestra con orina, papel higinico. Jabn, agua o tierra. 2. Transfiera las heces obtenidas al contenedor estril.
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3. Cierre el envase hermticamente de forma inmediata para evitar contaminaciones bacterianas 4. Identificar el frasco con la orden del paciente Nota: Pegue la etiqueta al frasco NUNCA en la tapadera. 5. Finalmente lleve la muestra al laboratorio lo ms pronto posible. Nota: Para aumentar la eficacia de la prueba se recomienda que para estudios parasitoscoscopicos se recolecten un total de tres muestras en 3 das consecutivos ya que la expulsin de parsitos puede ser intermitente.
THEVENON
Fundamento: El examen Thevenon es un estudio se realiza para detectar la presencia de sangre oculta en las heces que puede proceder de cualquier nivel del tubo digestivo. La sangre oculta en heces es con frecuencia el nico signo de alarma de enfermedades colorrectales. Este examen se lleva a cabo para detectar posibles enfermedades que pueden generar perdida de sangre. Procedimiento: 1. En un tubo de vidrio colocar 1 o 2 ml de suero fisiolgico y diluirlo con un poco de heces. Homogenizar 2. Agregar 5 gotas por las paredes del tubo acido actico para lisar los glbulos rojos 3. Agregar 5 gotas de perxido de hidrogeno para desdoblar la peroxidasa 4. Agregar 5 gotas de piramidn en la cual va a volver fucsia la parte del oxigeno. Recomendaciones: En caso de diarrea, no haga el test hasta que se restablezca la actividad intestinal. Durante la menstruacin no se debe realizar el test. Espere unos das RESULTADOS: POSITIVO: Si se observa un anillo fucsia en la superficie del tubo Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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TEST DEL GUAIACO PARA MUESTRAS FECALES VALTEK:

Fundamento: El test de hemorragias ocultas VALTEK se basa en la denominada reaccin del guaiaco, en la cual, cuando una muestra de deposicin contiene una determinada cantidad de sangre, esta ultima reacciona con una formulacin especial que contiene guaiaco, que se encuentra impregnado en la zona de reaccin de la tarjeta, producindose una reaccin de oxidacin de un compuesto del tipo fenolilico(acido alfa guaiacolico) tras al cual se genera un compuesto de conjugacin de color azul. Es la hemoglobina la que ejerce una accin del tipo peroxidasa y facilita la oxidacin de este compuesto junto al perxido presente en la solucin revelados.
Nota: Es recomendable que el paciente se someta un adieta libre de carnes y de alto contenido en residuos y fibras. Algunos medicamentos como aspirina, anti-inflamatorios producen algn grado de irritacin gstrica, por lo cual se recomienda suprimirlos desde 2 das antes de comenzar. Procedimiento: 1. Con la paleta colocar una pequea cantidad de muestra y aplicarla sobre la ventanilla A, y la ventanilla B, cerrar la tarjeta. Nota: Si la muestra est solida diluirla con 3 o 4 gotas suero fisiolgico en la ventanilla de la tarjeta. 2. Abrir la tarjeta por el reverso, aplicar 2 gotas del frasco revelador sobre cada una de ellas. 3. Dejar reposar 10 min. 4. Observar el resultado de la prueba.
RESULTADO:
POSITIVO: Cuando se observa cualquier intensidad de color azul en la zona de reaccin
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EXAMEN PRASITOLOGICO SERIADO

Durante 3 das recolectar en el recipiente una parte de la materia fecal de cada deposicin (con la cucharita provista), tomando principalmente de las zonas mucosas y/o sanguinolentas si las hubiera. Conservar a temperatura ambiente. Si un da no tiene deposiciones, recolectar las del da siguiente de manera de completar los 3 das. En lactantes del paal recin emitidas No sirven las que estn mezcladas con orina, purgantes oleosos, antibiticos o antiparasitarios. PROCEDIMIENTO: 1. Una vez ya identificada y rotulada la muestra colocar en el extremo de la lamina portaobjeto colocar una gota de lugol y en el otro extremo una gota de solucin salina. 2. Con la ayuda de un baja lengua colocar 1 o 2 gr de heces y homogenizarla con solucin salina y lugol y cubrirla con la laminilla. 3. Observar al microscopio a 40X. NOTA: La muestra debe ser poco al colocarla en la lmina debido a que se va visualizar muy concentrado. No es aconsejable utilizar el objetivo de inmersin debido a que pueda ensuciar el microscopio RESULTADOS: Se anotara el nombre del parasito indicando la densidad por cruces. Con el lugol se observara sus estructura interna del parasito mientras que con la solucin salina se observaran los trofozoitos, quistes en forman natural con sus movimientos.
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METODO DE GRAHAM (CINTA ADHESIVA)

Fundamento: La hembra de Enterobius vermicularis deposita sus huevos en las mrgenes del ano durante la noche. La tcnica de Graham tiene por objeto adherir estos huevos a la cinta adhesiva transparente o cinta scotch, la que se extender posteriormente en una lmina portaobjeto para su observacin microscpica. Materiales: Lminas portaobjetos desengrasadas. Cinta adhesiva transparente o cinta scotch de 1 pulgada de ancho Solucin salina o tolueno. Aplicador (bajalengua). Obtencin de la toma de muestra: 1. Extender la cinta adhesiva transparente sobre la superficie de la lmina portaobjeto, adheriendo una porcin pequea a ambos extremos, dejando una lengeta separar la cinta de la lmina portaobjeto cuando se va a tomar la muestra. 2. La obtencin de la muestra se realiza en la noche, 2 a 3 horas despus que el paciente (generalmente nios) est dormido, o a la maana siguiente y sin que se haya realizado el aseo de la regin perianal.
3. El paciente debe estar inclinado exponiendo la regin gltea, se despega la cinta adhesiva levantando la lengeta hasta que quede expuesta la parte adherente y, con ayuda de un baja lengua, se aplica el lado adhesivo.
4. Se adhiere la cinta haciendo toques en la regin perianal en sentido horario o anti horario.
5. Terminada la aplicacin, extender la cinta adhesiva y volverla a pegar en la lmina portaobjeto, envolver con el papel y colocar el nombre del paciente. 6. Luego enviarla la muestra a temperatura ambiente al laboratorio donde se observaran por el microscopia con objetivo 10 X O 40X la presencia o no de los huevos de enterobios vermiculares Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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En ocasiones, se pueden observar al microscopio, huevos de otros helmintos, principalmente huevos de Taenia sp., Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura entre otros.
METODO DE GRAHAM
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INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se deber anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito as como su estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
Enterobios vermiculares
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METODOS DE CONCENTRACION
Cuando los parsitos son escasos o no se encuentran en las proporciones hmedas directas, deben concentrarse las heces. Los mtodos de concentracin pueden aplicarse para huevos y larvas de helmintos y quistes de protozoarios pero los trofozoitos se deforman o destruyen en la concentracin. La tcnica de concentracin se divide en mtodos de flotacin y de sedimentacin.
Materiales: Copas cnicas Tubos de plstico de 13x100 Pipeta de transferencia Colador Gasa Malla metlica Laminas portaobjeto Laminillas cubreobjeto Vaso de precipitacin de 500 ml Viales de vidrios estriles Baja lengua Suero fisiolgico Reactivo lugol Solucin saturada de azcar Sulfato de zinc a 33.3% densidad 1180 Microscopio Mechero Centrifuga
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METODO DE FLOTACION: TCNICA DE FAUST CON SULFATO DE ZINC AL 33.3% DENSIDAD 1180:
Fundamento: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parsitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya densidad es 1180. Es til para la bsqueda de quistes y/o huevos de parsitos y excepcionalmente se observan larvas. Procedimiento: 1. En viales de vidrio colocar agua destilada o agua corriente hasta la mitad del vial y colocar 1-2 gr de heces con la ayuda de un baja lengua y homogenizar bien. 2. En tubos de plstico 13x100, colocar toda la muestra del vial hasta 1 cm por debajo del borde del tubo. 3. Centrifugar 2500 rpm por 1 min. 4. Eliminar el sobrenadante( agitar el sedimento como la orina), adicionar agua y centrifugar 5. Repetir el paso 4 como dos veces 6. Despus de haber eliminado el sobrenadante se agrega sulfato de zinc al 33.3% a los tubos y se centrifuga 7. Se elimina el sobrenadante y agregar otra vez sulfato de zinc hasta formar un menisco en la boca del tubo y colocar laminillas y dejar de reposar 5-6 min. 8. Depositar una gota de lugol en una lamina portaobjeto 9. Retirar la laminilla, colocarla sobre la gota de lugol y observar al microscopio a 40X
RESULTADOS: Se anotara el nombre del parasito encontrado y la cantidad, expresado en cruces. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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SHEATHER SUGAR: METODO DE CONCENTRACION EN UNA SOLUCION DE AZUCAR
Fundamento: Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee mayor densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos Procedimiento: 1. En viales de vidrio colocar suero fisiolgico hasta la mitad del vial y agregar 1 o 2 gr de heces y homogenizar bien la muestra fecal. 2. Colocar toda la muestra fecal del vial en tubos de plsticos 13x100 hasta 1 cm del borde del tubo. 3. Centrifugar 2500 rpm por 1 min 4. Eliminar el sobrenadante, agitar el sedimento y agregar suero fisiolgico hasta 1 cm del borde del tubo y centrifugar. 5. Repetir el paso 4 como 2 veces. 6. Una vez eliminado el sobrenadante se agrega al tubo de plstico solucin saturada de azcar hasta el menisco del tubo y se colocara laminillas. 7. Se dejara reposar por 30 min. 8. Depositar una gota de lugol en la lmina portaobjeto. 9. Se quitara la laminilla y se colocara sobre la gota de lugol. 10. Observar al microscopio a 40X. RESULTADO: Se anotara el nombre del parasito encontrado y la cantidad, expresado en cruces.
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METODO DE SEDIMENTACION: TECNICA DE SEDIMENTACION ESPONTANEA:

Fundamento: Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar espontneamente en un medio menos denso y adecuado como la solucin fisiolgica. En este mtodo es posible la deteccin de quistes, trofozotos de protozoarios, huevos y larvas de helmintos. Procedimiento: 1. Coger 1o 2gr de muestra fecal y diluirla en suero fisiolgico o agua del grifo en un tubo limpio o en el mismo recipiente y homogenizar. Si la muestra es liquida agregar un poco de agua o suero para que no est tan espeso o concentrado. 2. Colocar un colador en la boca de un tubo de plstico que termine en forma cnica. 3. Filtrar la muestra homogenizada a travs del colador, llenando el tubo o copa hasta la cuarta parte de su contenido. 4. Llenar agua o suero fisiolgico hasta 1cm del borde de la copa o tubo. 5. Dejar que la muestra sedimente por 20-30 min 6. Eliminar el sobrenadante (menos el sedimento) y agregar agua o suero fisiolgico hasta 1cm del borde d la copa o tubo y reposar 20 o 30 min. 7. Se repite la misma operacin con agua o suero 2 o 3 veces hasta que el sobrenadante se observe limpio. 8. Agregar 1 gota de lugol y solucin salina en cada extremo de la lmina portaobjeto. 9. Luego de eliminar el sobrenadante limpio, con una pipeta de transferencia aspirar la parte del sedimento y colocar una gota en una lamina portaobjeto sobre la solucin salina y lugol y cubrirla con laminilla. 10. Observar al microscopio a 40X. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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Resultados:
Informar la presencia de las formas evolutivas de los parsitos en sus respectivas orden.
MTODO DE BAERMANN (MTODO DE CONCENTRACIN POR MIGRACIN):

Fundamento: Su utilidad se basa en la capacidad de migracin de trofozoitos y larvas, como balantidium coli y strongiloides stercolaris, adems por efecto de termotropismo, el agua tibia que se utiliza estimulara la movilidad de las larvas para salir de las heces, como tejidos expuesto a digestin artificial o suelo segn sea el caso. Procedimiento: 1. En un vaso de precipitacin se colocara 100ml de suero fisiolgico (o hasta la mitad del vaso) colocndolo en un trpode metlico para calentar el suero a 37C.No hervir 2. En un acopa de plstico se coloca una malla metlica o colador y sobre esta una gasa. 3. Se colocar 10g de heces en la gasa. 4. Luego agregar todo el suero (calentado) en la copa hasta el borde donde esta las heces 5. Reposar a temperatura ambiente o a 37C a 45min. 6. Sacar la malla metlica o coladera y con la pipeta de transferencia sacar 1ml del sedimento 7. Colocar 1 gota de sedimento en una lamina cavada o una lamina portaobjeto y colocar una laminilla 8. Observar al microscopio
RESULTADOS: Informar los estadios evolutivos de los parsitos encontrados Observar trofozotos y larvas en movimiento. En algunas ocasiones se pueden observar formas adultas de E. vermicularis macho.
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PRUEBA DE PRECIPITACION CON ACIDO SULFOSALICILICO (SSA) EN ORINA

Fundamento:
El acido sulfosalicilico precipita las protenas de las orinas causando desnaturalizacin de las protenas, las cuales al perder su solubilidad enturbian la muestra en forma proporcional a la concentracin proteica El Acido Sulfosaliclico al 3%, se emplea para la determinacin cualitativa y cuantitativa de proteinuria. Normalmente se excreta una cantidad mnima de protenas en orina, en casos patolgicos dicha cantidad se incrementa. Al mezclar la orina con el cido sulfosaliclico, se produce desnaturalizacin de las protenas, las cuales al perder su solubilidad enturbian la muestra en forma proporcional a la concentracin proteica. La prueba de acido sulfosalicilico es una precipitacin en frio que reacciona de manera igual con todas las formas de protenas. Para precipitarlas se pueden utilizar diferentes concentraciones y cantidades de SSA y los mtodos pueden presentar grandes diferencias entre laboratorios. Todas las pruebas de precipitacin deben realizarse en muestras centrifugadas para eliminar toda contaminacin extraa. De hecho cualquier sustancia precipitada por acido produce turbidez falsa en la prueba de SSA. Las sustancias encontradas con mayor frecuencia son los colorantes radiogrficos, los metabolitos de la tolbutamida, las cefalosporina, las penicilinas y las sulfonamidas que dan resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas pueden dar reacciones negativas falsas. Tambin pueden ocurrir negativos falsos en muestras muy diluidas Procedimiento: 1. Centrifugar la orina y utilizar el sobrenadante 2. En un tubo de vidrio aparte agregar 3ml de de orina centrifugada y 3ml de reactivo de Acido sulfosalicilico al 3%. 3. Mezclar por inversin y observar la formacin de turbidez 4. Clasificar el grado de turbidez.
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INFORME DE LA TURBIDEZ CON SSA
El procedimiento que se trata aqu utiliza la solucin conocida como el reactivo de exton, constituida por cido sulfosaliclico al 5% en una solucin de sulfato de sodio
Cualquier sustancia precipitada por acido produce turbidez falsa en la prueba de SSA.
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PRUEBA DE PRECIPITACION CON CALOR PARA PROTEINAS BENCE JONES

Fundamento: Las protenas Bence Jones precipita a temperaturas entre 40-60C (valor optimo a 56 C), pero se vuelve a disolver cuando alcanza los 100C.Si se deja enfriar, el precipitado reaparecer alrededor 60C y volver a disolverse por debajo de los 40C. El mieloma mltiple (MM) , una enfermedad en la que existe proliferacin maligna de las clulas plasmticas , habitualmente en la medula sea , es la enfermedad que se asocia mas menudo con la presencia de protenas Bence-Jones .Se estima que el 50-80% de los pacientes con mieloma mltiple tienen protenas Bence -Jones en su orina .El resto puede detectarse por electroforesis o por inmunoelectroforesis del suero, con lo cual es posible detectar la inmunoglobulina monoclonal Las protenas son cadenas ligeras libres de inmunoglobina y pueden ser fragmentos de inmunoglobulina o inmunoglobulinas simples homogneas. Se encuentran en la orina puesto que son pequeas, y por tanto son fcilmente aclaradas por los riones. Las cadenas ligeras pueden ser detectadas por calentamiento o electroforesis de orina concentrada. stas precipitan cuando se las calienta entre 50 y 60 C y se redisuelven entre 90 - 100 C. Estos test son esenciales en pacientes sospechosos de tener protenas de Bence -Jones en su orina ya que estas protenas no reaccionan con los reactivos que se utilizan normalmente en las pruebas habituales de orina
Materiales: Soporte de fierro Mechero Tubos de ensayo Vaso de precipitacin
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Procedimiento: 1. En un vaso de precipitacin colocar agua corriente hasta la mitad y colocarla en un soporte de fierro. 2. Colocar la muestra de orina en un tubo de ensayo estril y ponerlo sobre el vaso de precipitacin para calentar entre 3 a 5min. 3. La presencia de precipitado a 56C, es indicativo de protenas Bence-Jones. 4. Si el precipitado disminuye hasta la temperatura de ebullicin (100C), se debe la presencia de protenas Bence-Jones, mientras que si aumenta la precipitacin se debe la presencia de otras protenas. 5. Al enfriarse la orina, el precipitado correspondiente a la protena Bence-Jones reaparecer entre 60C y se disolver nuevamente por debajo de los 40C.
RESULTADOS: Positivo: Cuando se observa precipitado a una temperatura de 40 a 60C Resultados negativos falsos: Un precipitado muy cargado de protenas Bence-Jones A 56C puede no volverse a disolver al ser calentado a 100C , de modo que el procedimiento en ese caso debe repetirse diluyendo la orina.
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PREGNOSTICON
ACU-SLIDE PLUS
Prueba cualitativa Sensitivity 0.1 10 hCG /ml La prueba est basada en el principio de aglutinacin indirecta Fundamento: El hGC-Latex Test es una prueba rpida de aglutinacin en porta para la deteccin indirecta de la hormona Gonadotropina Corinica humana (hGC) en orina. La determinacin se efecta utilizando un anticuerpo anti-hCG que se aade a la orina, despus se aaden unas partculas recubiertas de hCG. Si hay hCG en la muestra, sta se une a los anticuerpos formando un complejo antgeno-anticuerpo, por lo tanto no queda anticuerpo para unirse al antgeno de las partculas por lo stas no se aglutinan. Ausencia de Aglutinacin: prueba positiva. Si no hay hCG en la muestra, o hay poca, el anticuerpo puede reaccionar con las partculas produciendo aglutinacin: prueba negativa.
Muestra requerida: Orina, se recomienda utilizar la orina de la primera hora de la maana, ya que generalmente contiene mayor concentracin de hormona. Las muestras turbias deben centrifugarse antes de usarse Muestras de orina: estable 48 horas a 2-8C o 3 meses a -20C. Materiales y Reactivos: Tarjetas o lmina de reaccin. Dispensadores plstico Monoclonal Antibody Reagent Mono ACU-SLIDE TEST HCG Bound Latex reagent Mono ACU-SLIDE TEST Control positivo y negativo. Rotador
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Procedimiento: 1. Llevar a temperatura ambiente los reactivos. 2. Las prueba de aglutinacin de partculas de ltex se realizan en tarjetas de cartn recubierta de plstico en la cual se agrega en el circulo del cartn 1 o 2 gotas de orina con sus respectivos control negativo y control positivo 3. Agregar 1 gota de reactivo Monoclonal Antibody Reagent Mono ACU-SLIDE TEST en la muestra problema y controles 4. Homogenizar durante 1-2minutos. 5. Agregar 1 gota del reactivo HCG-Bound Latex reagent Mono ACU-SLIDE TEST. 6. Homogenizar de 2-3 minutos. 7. Examinar macroscpicamente si hay presencia o no de aglutinacin RESULTADOS: POSITIVO: No hay presencia de aglutinacin. NEGATIVO: Presencia de aglutinacin.
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BACILOSCOPIA
La baciloscopia es la tcnica de eleccin para el diagnstico rpido y el control del tratamiento de la tuberculosis pulmonar del adulto. Es simple, econmica y eficiente para detectar los casos infecciosos. Por eso es la herramienta fundamental de un programa de control de la tuberculosis. La transmisin de los bacilos de la tuberculosis se produce casi exclusivamente por medio de ncleos suspendidos en pequeas gotas que son expulsadas con la expectoracin de las personas afectadas por tuberculosis pulmonar. Estas pequeas gotas pueden permanecer infectantes en el aire durante bastante tiempo y pueden ser inhaladas por otras personas. No todas las personas infectadas enferman, slo una de cada diez aproximadamente, que son las ms susceptibles. La tuberculosis puede manifestarse en cualquier rgano, porque M. tuberculosis se disemina por todo el organismo; sin embargo, la enfermedad pulmonar es la ms frecuente (80-85% de todos los casos diagnosticados) debido a que el bacilo necesita abundante oxgeno para multiplicarse. En los pulmones de los enfermos se pueden formar Cavidades en las que se alojan grandes poblaciones de bacilos que pueden ser detectados en Muestras de esputos. Los sntomas ms caractersticos de la tuberculosis pulmonar son la tos y la expectoracin persistentes por ms de 2 semanas. A las personas con estos sntomas se los llama Sintomticos Respiratorios (SR). El diagnostico se confirma por el examen microscopio directo del esputo otro tipo de muestra. En casos de tuberculosis extra pulmonar, adems de la bacislocopia debe realizarse el cultivo, para confirmar diagnostico. Para que la baciloscopia sea una buena herramienta de control no es suficiente la calidad tcnica. Tambin es necesaria la calidad de los registros, de los informes del laboratorio y el anlisis de la informacin que produce el laboratorio. El Programa de Control de Tuberculosis tiene como objetivo principal cortar la cadena de transmisin, diagnosticando tempranamente los casos infectantes y tratndolos con esquemas eficaces hasta lograr su curacin. La estrategia recomendada internacionalmente para alcanzar este objetivo es la del tratamiento abreviado estrictamente supervisado, TAES o DOTS Esta estrategia requiere el compromiso poltico para asegurar los recursos para controlar la tuberculosis, el acceso a la baciloscopia con calidad asegurada para la deteccin de casos. el control de la evolucin de los pacientes, el acceso y disponibilidad ininterrumpidos de las drogas que integran los esquemas estandarizados de tratamiento para curar a los enfermos, y un sistema Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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de registros e informacin que permita evaluar el resultado de los tratamientos y el desempeo del Programa de Control.
TOMA DE MUESTRA Para que el laboratorio pueda obtener resultados confiables no slo es necesario que ejecute las tcnicas correctamente. Tambin necesita recibir una buena muestra, entendindose por tal la que proviene del sitio de la lesin que se investiga, obtenida en cantidad suficiente, colocada en un envase adecuado, bien identificada, conservada y transportada. La muestra ms examinada es el esputo debido a que, como se ha dicho, la tuberculosis pulmonar es la ms frecuente. Sin embargo, dado que la enfermedad puede manifestarse en cualquier rgano, con menor frecuencia puede requerirse la investigacin de muestras muy variadas: orina, lquido cefalorraqudeo, lquido pleural, lquido asctico, sangre, pus de cavidades abiertas, biopsias. Estas muestras de lesiones extra pulmonares deben procesarse tambin por cultivo. RECOMENDACIONES: Los envases deben ser rgidos para evitar que se aplasten durante el traslado, tener boca ancha, tapn de rosca que permita taparlos en forma hermtica para evitar derrames y la contaminacin. Obtencin de la toma de muestra: 1. Explicar al paciente el procedimiento que se le va a realizar. 2. Explicar al paciente que se enjuague la boca con agua antes de emitir la muestra. Esto ayudara para eliminar restos alimenticios y cualquier contaminacin bacteriana en la boca. 3. Instruye al paciente que inspire profundamente y que una vez retenido el aire en los pulmones, lo lance violentamente hacia fuera por un esfuerzo de tos. Debe repetir este procedimiento con 2 o 3 veces en caso que la muestra sea insuficiente. 4. Asegurarse que el envase del paciente este bien cerrado y rotularlo con el nombre del paciente. 5. limpie el exterior del envase con un pauelo de papel y se lavarse las manos con agua y jabn
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Calidad de muestra: Una buena muestra tiene aproximadamente 3 a 5ml, es generalmente espesa y mucoide. Puede ser fluida con partculas de material purulento. El color es variable (blanco, amarillento y hasta verdoso). A veces son sanguinolentas. Las secreciones nasales, farngeas o la saliva no son buenas muestras para investigar tuberculosis, aunque es conveniente examinarlas, de todas formas, porque siempre existe la posibilidad de que contengan parte de la expectoracin o bacilos expulsados por la tos que hayan quedado en la boca, nariz o faringe.
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OTRAS MUESTRAS Todas las muestras extra pulmonares deben cultivarse: en algunos casos porque la escasa cantidad de bacilos de la tuberculosis presentes slo podr ser detectada por cultivo, en otros para confirmar o descartar que la muestra contenga mico bacterias ambientales saprofitas (como en el caso de la orina que resulta con baciloscopia positiva) o, excepcionalmente patgenas. La baciloscopia de los lquidos con volumen mayor a 1 ml debe ser realizada luego de centrifugarlos 15 minutos a 3000 g, y la de tejidos despus de disgregar el material. Por esta razn es altamente recomendable que la baciloscopia de estas muestras sea realizada en el mismo laboratorio que cultivar la muestra. ORINA: La muestra obtenida de la primera miccin de la maana es la ms recomendada, previa higiene previa. Con alguna frecuencia se suelen encontrar en las muestras de orinas mico bacterias saprofiticas, por lo que cuando se trata de investigacin para diagnostico etiolgico de tuberculosis urinaria, debe recurrirse al cultivo. Numero de muestras: 3 en das consecutivos LAVADO GASTRICO: las muestras de lavado gstrico deben cultivarse. La baciloscopia se realiza con el sedimento de la muestra centrifugada previamente durante 30 minutos a 3.000 g, por lo que es conveniente que sea hecha directamente en el laboratorio que cultiva la muestra. Nmero de muestras: al menos tres.
LIQUIDO CEFALO-RAQUIDEO Y DE OTRAS SEROSAS: Estas muestras deben recibirse en envase estril para sembrarlas de inmediato y sin previo tratamiento, porque como son muy pobres en mico bacterias, cualquier tipo de manipulacin significara disminuir aun ms la cantidad de grmenes
ENVIO DE MUESTRAS PARA CULTIVOS:

La muestras de esputo para cultivos deben recogerse en le mismo frasco recolector de esputo para bacilos copia; se recoge la muestra y se enva inmediatamente al laboratorio donde se realiza el cultivo. Las muestras de LCR y de otras serosas, se recolectan en un tubo de ensayo estril, con Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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tapa rosca; las biopsias se recolectan en un frasco estril, sin agregarle ningn preservativo, pero se pueden conservar en solucin salina estril. Si las muestras para cultivos no se pueden enviar inmediatamente al laboratorio de referencia, pueden almacenarse durante 3 o 4 das, en refrigeracin, entre 4 a 8C , Sin embargo a mayor tiempo de almacenamiento, disminuyen las probabilidades de aislamiento del bacilo en el cultivo . Es preferible que le transporte de la muestra se realice en un termo refrigerante. Nmero de muestras y momento de la recoleccin Deben recogerse 3 muestras de la siguiente manera: La primera: Debe ser tomada en el momento de la consulta cuando el mdico identifica que un consultante del servicio de salud es SR La segunda: Debe ser recolectada en la casa del paciente por la maana al despertar. La tercera: Cuando sea requerida, puede ser tomada por el servicio de salud, cuando el paciente concurre a entregar la segunda. Tambin deben tomarse muestras peridicas para realizar el seguimiento del tratamiento: El tratamiento de la tuberculosis comprende dos fases: una inicial intensiva que dura entre 2 y 3 meses y otra de consolidacin que dura de 4 a 5 meses, dependiendo de la categora del paciente y del esquema adoptado por el PNCT. Independientemente del esquema, se aconseja examinar por baciloscopia una muestra por mes de cada paciente de tuberculosis pulmonar con baciloscopia inicial positiva. Si esto no es posible, se debe examinar por lo menos una muestra MATINAL al final de la fase intensiva. Si la baciloscopia es negativa, coincidiendo con mejora clnica y cumplimiento del tratamiento, se pasa a la segunda fase de tratamiento. Si por el contrario, la baciloscopia contina positiva, sera enviada para cultivo para el caso en que se requiera prueba de sensibilidad y se evaluar si el paciente puede pasar a la fase de continuacin o si debe extenderse la primera fase.
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Luego se debe tomar al menos otra muestra para microscopa al finalizar el 4 mes para controlar la evolucin del paciente y detectar un posible fracaso del tratamiento, y una al finalizar el tratamiento para confirmar la curacin. Algunos pacientes que inician su tratamiento con baciloscopia altamente positiva y estn respondiendo bien al tratamiento pueden seguir presentando baciloscopia positiva al finalizar la fase intensiva, aunque con menor grado de positividad. Es posible tambin que expectoraren bacilos muertos que son vistos en el examen microscpico. El cultivo permite determinar si son bacilos vivos o no viables (no cultivables o muertos). Si la mayor parte o todos los bacilos vistos son no viables, el cultivo presentar escasas colonias o ser negativo, a pesar de la baciloscopia positiva y esto coincidir con una evolucin clnica favorable. Materiales y Equipos: Equipos: Microscopio binocular. Mechero de alcohol o bunsen. Materiales: Varilla de coloracin Bandeja metlica Aplicadores de madera Lamina portaobjeto 3X1 pulgada desengrasada. Plumn indeleble. Gradilla para lminas. Papel filtro. Papel toalla. Fosforo. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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Cmara de bioseguridad Reactivos: Fucsina bsica al 0.3% Alcohol acido 3% Azul de metileno 0.1% Aceite de inmersin PROCEDIMIENTO: 1. El personal de laboratorio deben lavarse y colocarse un mandil, guantes descartables y mascarilla de proteccin al momento de realizar el extendido. 2. Comprobar que los envases de las muestras estn claramente identificados con su orden de solicitud del programa. 3. Ubicar en la cmara de bioseguridad la muestras y laminas y todo los materiales requeridos para la preparacin del extendido 4. Rotular y ordenar las muestras y laminas por cada paciente 5. Tomar la primera muestra y la lmina correspondiente y colocarlas detrs del mechero de manera que la llama quede entre el personal y el frasco de manera que proteja al personal de laboratorio 6. Tomar una parte del aplicador y seleccionar la partcula ms densa o purulenta de la muestra de esputo y extenderla con suaves movimientos en el centro de la lamina Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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Verificar que el extendido tenga grosor homogneo y adecuado. Si es demasiado fino, es posible producir un resultado falso negativo. Si es muy grueso, el material puede desprenderse durante la coloracin. 7. Desechar el aplicador colocndola en el envase de la muestra con la que se realizo el esputo, cerrar y dejar a un lado la muestra. Para evitar confusiones con las dems muestras 8. Continuar de la misma manera con cada una de las muestras siguientes. Limpiar la superficie de trabajo con una toalla o algodn para desinfectarla y descartar los guantes junto con las muestras 9. Colocar las laminas en un soporte para que se realice su respectiva coloracin
Nota: Si las muestras de esputo no van a ser procesadas en el da, ES ACONSEJABLE ser conservadas en refrigerador, preferentemente dentro de la caja de plstico. Si no se cuenta con refrigerador, ubicarlas en un lugar fresco y protegidas de la luz. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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COLORACION La tcnica de Ziehl Neelsen
1.
Cubrir totalmente la superficie del extendido con fucsina bsica fenicada recin filtrada Con la llama de un hisopo embebido con alcohol calentar suavemente por debajo de los extendidos hasta que aparezca los 3 vapores. reposar por 5min.
2.
No hervir la fucsina porque la pared de los bacilos puede destruirse y colorearse mal.
3. Lavar con agua. Inclinar la lamina para eliminar el exceso de agua y as evitar diluir los dems reactivos que se va a utilizar 4. Decolorar el extendido con alcohol acido por 30 seg. Lavar
Verificar que el extendido se ha decolorado. Si se observan cmulos rojos o coloracin rosada intensa, volver a cubrir con solucin decolorante.
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5. Cubrir el extendido con azul de metileno y dejar actuar por 5 min. 6. Enjuagar las lminas.
7. Dejar secar las lminas a temperatura ambiente, apoyndolas en posicin vertical en un soporte sobre un papel absorbente. No apoyar papel absorbente sobre el extendido. 8. Examinar al microscopio a 100 X lo ms pronto posible despus de la coloracin.
Observar la calidad del extendido y de la coloracin. Si no fuesen buenas, repetir nuevamente la baciloscopia de esa muestra.
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INFORME DE RESULTADOS El nmero de bacilos encontrados es muy importante como elemento de informacin, dada su relacin con el grado de contagiosidad del paciente, as como con la severidad de la enfermedad. Por esta razn el informe debe ser no solo cualitativo sino cuantitativo La baciloscopa se cuantifica en cruces luego de la lectura de por lo menos 100 campos microscpicos:
Si en una lmina se observan de 1 a 4 BAAR EN 100 CAMPOS, SE RECOMIENDA LO SIGUIENTE: Ampliar la lectura a 200 campos. Si con esa lectura no se encuentran ms bacilos, hacer otro extendido de la misma muestra, tratando de elegir partculas purulentas. Si la lectura del segundo extendido no modifica el resultado del anterior la muestra debe informarse con el nmero exacto de bacilos observados, consignando en el Libro de Registro el hallazgo y solicitar una nueva muestra. Cultivar o enviar para cultivo estas muestras
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Nota: Registrar inmediatamente el resultado de la lectura en el Registro del Laboratorio. Marcar los resultados positivos en rojo, para identificarlos rpidamente. Escribir el resultado en el formulario adoptado para el informe por el PNCT
CONTROL DE CALIDAD DE LAS BACISLOCOPIA El control de calidad permite evaluar si la informacin producida por el laboratorio es precisa, reproducible y oportuna. Instaura un sistema de alarmas que permite prevenir, descubrir y corregir errores Resulta ms eficaz para detectar y asistir a los casos de tuberculosis y para controlar la enfermedad El control de calidad interno comprende: La evaluacin de materiales, equipos, reactivos el desempeo del personal los procedimientos la precisin y oportunidad de los informes la oferta y aplicacin adecuada de la baciloscopia el rendimiento de la baciloscopia para detectar casos El seguimiento de los resultados de los controles de calidad. Las medidas correctivas a aplicar cuando la imprecisin del resultado excede los lmites Considerados aceptables o se producen demoras evitables CONTROL DE CALIDAD INTERNO Control de colorantes: Tratar muestras positivas y negativas tratadas previamente con 10 gotas de fenol 5% durante por lo menos media hora. Preparar con ellas tantos extendidos como sean necesarios, para que puedan ser utilizados durante dos meses Si no se reciben suficientes muestras positivas, solicitar los extendidos al laboratorio de referencia. Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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Guardarlos en cajas con separaciones, diseadas para guardar extendidos, o dentro de una caja envueltas en papel suave, bien acondicionados, en lugar seco. Controlar la calidad de cada nuevo lote de colorantes tiendo una lmina negativa y otra positiva. Registrar el resultado de este control en el libro de preparacin/control de reactivos. Comprobar que los BAAR se vean completa e intensamente coloreados con fucsina o auramina y que la coloracin de fondo sea uniforme, del color esperado y que ofrezca buen contraste. Verificar si la cuantificacin de bacilos coincide con la inicialmente asignada a la muestra con la que se prepararon los extendidos positivos. Registrar los resultados de estos controles de calidad Si se detectan defectos, repetir el control con otros extendidos para descartar un posible error en la tcnica de tincin. Si persiste el defecto, descartar los reactivos defectuosos o contaminados. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO De lminas Es responsabilidad del laboratorio de referencia. Todas las lminas deben ser conservadas durante al menos un mes, porque pueden ser solicitadas por el laboratorio de referencia para su relectura. Colocar las lminas con xilol o alcohol 70%, durante no ms de 30 segundos. Guardarlas en cajas para lminas portaobjetos, o dentro de una caja comn envueltas individualmente en papel. Descartarlas despus de un mes si no han sido solicitadas por el laboratorio.
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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
1. http://es.scribd.com/doc/5275620/MANUAL-DE-LABORATORIO-DE-PARASITOLOGIA 2. http://www.essalud.gob.pe/defensoria/guia_protocolo_Laboratorio/Guia_Lab_examen_t hevenon.pdf
3. http://www.labnanni.com.ar/Parasitologico.htm 4. http://gastrolabperu.com/web/images/upload/paginaweb/archivo/oxiuros.metodo.de.gra ham.pdf 5. http://www.dep20.san.gva.es/especializada/servicios/microbiologia/documentos/TECNIC A%20DE%20GRAHAM.pdf 6. http://farcarmen.com/noticias/article/Parasitologia/143/1/print/ 7. http://books.google.com.pe/books?id=Nlego0fDRUQC&pg=PA806&lpg=PA806&dq=metod os+de+concentracion+para+heces&source=bl&ots=CZNAnV5FrK&sig=ot09cix1FM2gVmde58UvCe3Bqk&hl=es419&ei=VmlxTouwEpHAtged9LmHCg&sa=X&oi=book_result& ct=result&resnum=10&ved=0CFEQ6AEwCTgK#v=onepage&q&f=false microbiologa y parasitologa medica
8. http://www.jampar.com.pe/media/archivos/biolabtest_inserto_013010007.pdf
9. http://books.google.com.pe/books?id=uJmKmviIUdoC&pg=PA60&dq=acido+sulfosalicilico +en+orina&hl=es&ei=lhl2TqWgAY7pgQfUyKCPDA&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnu m=2&ved=0CC8Q6AEwAQ#v=onepage&q&f=false anlisis de orina y de liquidos corporales
10. http://books.google.com.pe/books?id=Eq3NnaVyNIQC&pg=PA41&lpg=PA40&ots=5dHsSk RTCi&dq=prueba+de+precipitaci%C3%B3n+al+calor+para+proteinas&hl=es#v=onepage&q &f=false Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
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11. http://www4.ujaen.es/~esiles/TemaEMBARAZO%20Y%20NEONATOLOGIA.pdf
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ANEXOS
1. Preparacin de colorantes 2. Recursos diagnostico no bacteriolgicos
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ANEXO 1
PREPARACION DE COLORANTES: Fucsina fenicada: 3gr de fucsina bsica 100ml de alcohol de 95 55ml de fenol acuoso(*) Se agita y se agrega agua destilada hasta completar un litro. Se deja reposar 24 hrs y se filtra. (*)Fenol acuoso: 100gr de fenol cristalizado y 10 ml de agua destilada, se calienta en bao mara hasta que termine de disolverse, luego se enfra. Solucin decolorante: 30 ml de acido clorhdrico 970 ml de alcohol de 95 Con una pipeta se deja escurrir por las paredes el acido clorhdrico en el matraz que contiene el alcohol, luego se agita nuevamente. Azul de metileno: 1gr de azul de metileno 100ml de alcohol 95 Se disuelve por agitacin y se agrega agua destilada hasta completar un litro. Se deja reposar 24 hrs y se filtra. Nota: cada vez que los colorantes se utilizan deben filtrarse previamente y deben conservarse en frascos de color mbar por un tiempo no mayor de un mes.
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Solucin saturada de azcar: Sacarosa (azcar rubia).................................... 500,00 g Agua destilada................................................ 500,00 mL Formol 40%...................................................... 10,00 mL Solucin de lugol: Yodo metlico........................................................ 1,00 g Yoduro de potasio.................................................. 2,00 g Agua destilada................................................ 100,00 mL Triturar juntos el yodo y yoduro en un mortero, aadir agua poco a poco y mover lentamente hasta su disolucin, aadir el resto de agua y conservar en un frasco mbar. Solucin de sulfato de zinc: Sulfato de zinc..................................................... 33,30 g Agua destilada.............................................. 1000,00 mL Mezclar hasta la completa dilucin del sulfato de zinc y medir la densidad de la solucin, la que debe ser 1,180.
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ANEXO 2
RECURSOS DIAGNOSTICO NO BACTERIOLOGICOS TBC Anatoma patolgica: en muestras de biopsias (pleural, ganglionar, transbronquial, drmica, etc) el hallazgo microscpico del granuloma caseificante caracterstico de la TB es altamente sugestivo de la enfermedad. Aunque las tinciones para BAAR sean positivas, no confirman en forma absoluta la enfermedad. Parte del material obtenido debe enviarse en solucin fisiolgica al laboratorio de TB para homogeneizacin y cultivo. Adenosin deaminasa (ADA): marcador de actividad linfocitaria, se encuentra elevada en TB de las serosas y en la meningitis TB. De acuerdo a la Red Nacional de Bacteriologa de la TB, en pleuresas serofibrinosas, un valor de ADA. 60U/l tiene una sensibilidad de 84% y una especificidad de 94% para el diagnostico de TB. En pericarditis, ascitis y meningitis el valor diagnostico y la lnea de corte para determinar positividad son controversiales. Deteccin serolgica: ELISA Detecta anticuerpos circulantes La sensibilidad vara con el antgeno utilizado Baja sensibilidad en nios; en TBC extra pulmonares; en pacientes HIV+. Es una tcnica de tamizaje. T-SPOT.TB (o ELISPOT) y QuantiferonTB Gold in tube: son tcnicas modernas de deteccin de infeccin latente. Consisten en la exposicin de los linfomonocitos del sujeto durante 6 24 horas a antgenos del M. tuberculosis (ESAT-6, CFP 10 y TB 7.7) midiendo la respuesta inmunitaria celular a travs de la produccin de gamma interferon. Las pruebas pueden dar resultado positivo, negativo o indeterminado, con independencia de la vacunacin BCG o infeccin micobacteriana en general (hay reacciones cruzadas con M. Kansasii, szulgai y marinum). Son de poca utilidad para detectar infeccin latente en pacientes HIV/Sida con inmunodepresin avanzada Estudios sanguneos: tienen solamente un valor de orientacin y seguimiento en el paciente con TB.
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Hemograma: se observa principalmente anemia hipocrmica ferropnica en pacientes con larga evolucin y desnutricin asociada. El hematocrito disminuye francamente luego de hemoptisis moderadas a graves. Las formas avanzadas de TB, as como las diseminadas presentan leucocitosis neutroflica (inclusive con granulaciones txicas), al mejorar la enfermedad con el tratamiento, la frmula blanca vira a una linfocitosis relativa. Eritrosedimentacin: suele elevarse moderadamente, disminuyendo con el curso del tratamiento anti-TB. En pacientes VIH/Sida suele estar por encima de los 100 mm en la primera hora debido a la hipergammaglobulinemia policlonal asociada a la anemia. Proteinograma electrofortico: se aprecia en formas avanzadas, especialmente de larga evolucin, hipoalbuminemia con elevacin de gamma globulina. Examen de orina: la piuria cida abacteriana es un clsico indicador de sospecha de TB renal, pudindose observar tambin hematuria y proteinuria. Frente a un cuadro clnico compatible se debe solicitar urocultivo seriado para mico bacterias. Lquido cefalorraqudeo: la meningitis TB es a lquido claro, con hipoglucorraquia e hiperproteinorraquia. La presencia de ms de 2 g/dl de proteinorraquia hace sospechar existencia de bloqueo a la circulacin del LCR. La celularidad es baja (usualmente menos de 300 elementos) a predominio neutroflico en los primeros das de la meningitis y luego linfomononuclear.

M, Anual de Urianalisis

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M, Anual de Urianalisis

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2011

Manual de Procedimientos en Uro anlisis

Manual de Procedimiento en Uroanlisis

AO DEL CENTENARIO DE MACHU PICCHU PARA EL MUNDO

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE UROANLISIS ELABORACION:

Hospital III Es salud-Chimbote | Servicio de Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica

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EXAMEN DE ORINA COMPLETA

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Causas patolgicas Acido urico,clculos,bacterias,esperamtozo ides, Leucocitos

Causas medicamentosas y alimentarias Dieta alta en alimentos ricos en purinas

Caf Pardusco(castao) negro

Amarillo naranja Rojo o purpura

Pyridium, amiodarona,colorantes de alimentos, remolacha fosfatos

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CRITERIOS Y PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD QUE DEFINEN RESULTADOS INACEPTABLES

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DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO EN LAS HECES

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TEST DEL GUAIACO PARA MUESTRAS FECALES VALTEK:

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