UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS ESCUELA NACIONAL DE ENFERMERIA

CATEDRA: SEMIOLOGIA Dr. Gastn Zambrano NOMBRE: Mara Fernanda Torres Valverde 2 semestre D

PRUEBA DE ROSETAS COMO INDICADORES DE LA HEMORRAGIA FETOMATERNA

PRINCIPIO: Esta prueba detecta los glbulos rojos D positivo en la sangre de madres D negativos con fetos o recin nacidos D positivos. Cuando se agrega anti-D a la sangre materna con clulas fetales D positivos, estas se recubren con anti-D. Cuando subsecuentemente se agregan glbulos rojos D positivos, se forman rosetas que se pueden distinguir con facilidad, estas estn compuestas por varias clulas agrupadas alrededor de las clulas D positivo recubiertas con anticuerpos. Aunque el numero de rosetas es proporcional al de glbulos rojos D positivo presente en la poblacin original, esta prueba solo brinda informacin cualitativa acerca de la mezcla de la sangre fetal en la materna. Las muestras positivas deben someterse a estudios adicionales para cuantificar las clulas fetales. El procedimiento de elucin acida y la citometria de flujo son mtodos apropiados para ello. Si se dispone de pruebas comerciales, se deben cumplir las instrucciones del comerciante.

REACTIVOS Los reactivos pueden prepararse en el laboratorio: 1.- Control negativo: suspensin de glbulos rojos D negativos al 2% - 5% con solucin salina

2.- Control positivo: suspensin al 5% en solucin salina de una mezcla de 0.6% de globulos rojos D positivo y 99.4%de D negativo el control positivo puede prepararse agregando 1 gota de suspensin al 2% - 5% de glbulos rojos D positivos lavados, a 15 gotas de una suspensin al 2% - 5% de glbulos rojos D negativos lavados . Mezclar bien y aadir 1 gota de esta suspensin celular a 9 gotas de suspensin al 2% - 5% de glbulos rojos D negativos. Mezclar bien.

3.- Glbulos rojos indicadores: suspensin de glbulos rojos del grupo O1, R2R3, al 0,2% 0,5% en solucin salina. Pueden emplearse clulas tratadas o no tratadas con enzimas en un medio potenciador. 4.- Suero Anti- D hiperproteico o modificado: Algunos reactivos mixtos monopoliclonales no son adecuados para este mtodo. Antes de incorporar antisueros a las pruebas, es preciso evaluarlos.

PROCEDIMIENTO: Colocar una gota de reactivo anti-d en tres tubos de ensayo. Colocar una gota de clulas maternas, clulas de control negativas y clulas de control positivas, en tubos rotulados. Encubar durante 15 a 30 min a 37 C o de acuerdo con las indicaciones.

Lavar las suspensiones celulares con gran cantidad de solucin salina, por lo menos 4 veces para extraer el reactivo anti-D no fijado. Eliminar por completo la solucin salina despus del ltimo lavado.

Agregar una gota de clulas indicadoras y mezclar bien para re suspenderlas. Centrifugar los tubos durante 15 seg. a 900 1000 x g. Re suspender las clulas y examinar en el microscopio con un aumento de 100 -150X

 Contar las rosetas de glbulos rojos en por lo menos 10 campos.

INTERPRETACION: La ausencia de rosetas constituye un resultado negativo. En el caso de las clulas indicadoras tratadas con enzimas, las muestras negativas podran mostrar hasta una roseta cada tres campos. En el de las clulas indicadoras no tratadas y suspendidas en un medio potenciador, podran encontrarse hasta 6 rosetas cada cinco campos. La presencia de ms rosetas constituye un resultado positivo y la muestra debe estudiarse con un mtodo que cuantifique el monto de sangre fetal. La presencia de rosetas o aglutinacin en el tubo de control negativo indica un lavado inadecuado despus de la incubacin, que permite que el anti-D residual aglutine las clulas indicadoras D positivo. Los resultados muy positivos se observan con los glbulos rojos de mujeres con fenotipo Rh D dbil , ms que D negativo; la hemorragia feto materna masiva podra determinar un aspecto difcil de distinguir del causado por el fenotipo D dbil y es preciso cuantificar entonces las clulas fetales. Si las clulas del nio D dbil, el resultado negativo de la muestra materna debe interpretarse con cautela. En estas circunstancias se debe efectuar una prueba cuantitativa que no dependa de la expresin antignica D.

BIBLIOGRAFIA:

AABB Manual tcnico. Mtodo 5: enfermedad hemoltica del feto y del recin nacido.

Pg. 811 y 812.