Genetica bacterian

studiaz ereditatea i variabilitatea la bacterii; suportul material al ereditii este reprezentat de genomul bacterian, suma genelor unui microorganism; gena constituie unitatea funcional de baz a informaiei genetice;

Genetica bacterian
genomul bacterian este reprezentat de

- ADN cromozomal (include gene eseniale) - ADN plasmidic (conine gene care codific
caractere de tulpin);

genotip = totalitatea informaiei nscris n genomul bacterian; fenotip = suma caracterelor observabile consecutiv interaciunii genotipului cu mediul ambiant.

Fenomenul de variabilitate genotipic - modificare brusc, transmisibil la descendeni a unuia sau a mai multor caractere prin dou mecanisme mutaia transferul de ADN de la un donor la un acceptor. Variaia fenotipic - indus de interaciunea genomului cu factori de mediu; - este reversibil i nu se transmite ereditar; - are la baz controlul transcripiei genelor n ARNm i traducerii n sinteza proteinelor, prin inducia sau represia acestora.

Mutaia
reprezint o modificare n secvena nucleotidelor ntr-o gen, datorit unei erori n cursul replicrii; eveniment rar, spontan i imprevizibil; mutaiile acumulate de-alungul a miliarde de ani, sub efectul seleciei naturale, explic evoluia speciilor;

Mutaia
noile gene aprute prin mutaie se numesc alele i ocup acelai locus genetic ca gena de origine; mecanisme moleculare ale mutaiei - substituia unei perechi de baze printr-o alt pereche, cu nlocuirea unui codon printr-un alt codon - inseria sau deleia uneia sau a mai multor baze, cu decalarea citirii mesajului genetic.

 Rata mutaiei = probabilitatea de apariie spontan a unei mutaii ntr-o populaie bacterian; rata mutaiei este foarte sczut (10-7 10-9) dar poate crete n prezena unor ageni mutageni (chimici sau fizici). Frecvena mutaiei = proporia unui anumit mutant ntr-o populaie bacterian; frecvena mutantului poate crete ca urmare a seleciei

- relative (mutantul are un timp de generaie mai scurt) - absolute (prin prezena unui factor de mediu favorabil
mutantului, dar defavorabil restului populaiei).

Mutaii bacteriene observate n laborator:

mutaii privind morfologia coloniei bacteriene (variaia S R); mutaii nutriionale (mutani auxotrofi vezi LP); mutaii care duc la pierderea unor factori de patogenitate (mutani aviruleni la S.pneumoniae care iau pierdut capsula); mutaii care conduc la apariia fenomenului de rezisten la antibiotice (att ADN cromozomic ct i cel plasmidic poate fi sediul unor asemenea mutaii).

Transferul genetic

se realileaz n sens unic, de la o bacterie donor la

una receptor; exogenot = materialul genetic transferat; endogenot = materialul genetic propriu;

Transferul genetic
evoluia exogenotului n celula receptor - recombinare: alinierea secvenelor cu omologie

structural, urmat de substiutirea uneia sau mai multor gene ntre exo- i endogenot; integrare n genomul bacteriei receptor (transpozoni, fagi); meninerea n poziie extracromozomal dac este un replicon (plasmide, fagi); supus aciunii endonucleazelor de restricie ( informaie genetic pierdut).

Mecanisme de transfer al exogenotului I. Transformarea

bacteria acceptor este capabil s primeasc ADN exogen provenit din mediu, de la bacterii moarte (stare de competen); exogenotul trebuie s prezinte o structur bicatenar i s reprezinte nu mai mult de 1% din mrimea genomului bacterian; fenomenul a fost descoperit prin experimentri pe oarece cu S.pneumoniae, n 1928, i explicat dup dou decenii mai trziu.

II.Transducia

- transfer de ADN bacterian prin intermediul

bacteriofagilor transductori; exist dou tipuri de transducie generalizat (transfer aleator al unui fragment din

genomul bacterian); specializat (transfer de gene localizate n cromozomul bacterian n vecintatea locului de integrare a profagului).

Conversia lizogen
Conversie lizogen = informaie genetic adiional, de origine fagic, avnd asemnri cu transducia specializat (toxigeneza tulpinilor de Corynebacterium diphtheriae, Streptococcus pyogenes etc).

III. Conjugare

- transfer genetic consecutiv contactului fizic ntre dou bacterii cu polaritate sexual diferit; bacteria donor (sex masculin) posed un plasmid conjugativ (factorul F+) cu gene care codific sinteza de pili sexuali, prin care se ataeaz la receptori specifici de pe suprafaa unei celule receptor ( F-, de sex feminin);

Pil sexual

Pil sexual (E. coli)

III. Conjugare

- retragerea pililor aduce cele dou celule n

-

contact, prin puntea citoplasmatic care se stabilete, urmnd s fie transferat ADN plasmidic; consecutiv acestui tip de conjugare rezult dou celule F(+) ; plasmidul F poate purta gene adiionale (ex. gene de R la antibiotice) care pot fi transferate;

III. Conjugare

- plasmidul F integrat n cromozom poate conduce la transfer de gene cromozomale (ntre o bacterie Hfr -high frequency of recombination - i una F(-)); transferul incepe din vecintatea locului de inserie a plasmidului F, care este ultimul transferat; cel mai frecvent bacteria receptor ramne F(-); transferul de ADN la bacterii gram-pozitive este controlat de feromoni sexuali (molecule de suprafa. prin care celulele bacteriene ader ntre ele).

Elemente genetice transpozabile

reprezint segmente de ADN capabile s se excizeze i apoi s se insere n acelai replicon (cromozom sau plasmid) sau n unul diferit, putnd determina blocarea expresiei unei gene n care se inser (factor mutagen); are loc cu intervenia unei enzime, transpozaza, fr s fie necesar omologia genetic.

Elemente genetice transpozabile

Tipuri de elemente transpozabile secvene de inserie (SI) constituite din gena care codific transpozaza, flancat de repetri inversate, a 20-40 perechi de baze; transpozoni, care posed n regiunea central una sau mai multe gene care codific anumite caractere (ex. rezistena la antibiotice), flancate de SI.

Patogenitatea bacteriilor
Patogenitate = ansamblul proprietilor biologice ale unui microorganism care i permit s determine mbolnvirea gazdei. Clasificarea bacteriilor n raport de patogenitate - nepatogene (prezena lor nu determin mbolnviri); - nalt patogene sau patogene primare (determin
cel mai frecvent mbolnviri la gazda normoreactiv dar lipsit de aprare specific); pe suprafeele de nveli, pot determina mbolnviri cnd:
apar disfuncii ale barierelor de aprare antimicrobian variaia genetic le confer factori de patogenitate).

- condiionat patogene sau oportuniste (prezente

Atributele majore ale unei bacterii patogene

transmisibilitatea = posibilitatea de a trece de la o gazd la alta; infectivitatea = abilitatea de a ptrunde, de a persista prin depirea sau neutralizarea barierelor i mecanismelor antimicrobiene, de a se multiplica i de a invada organismul gazdei; virulena = capacitatea microorganismului de a vtma gazda.

I. Transmisibilitatea conferit de:

- prezena endosporilor care asigur indefinit -

supravieuirea n condiii nefavorabile (specii Bacillus i Clostridium); rezistena la condiii de desicaie/uscciune (Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus aureus, Corynebacterium diphtheriae etc);

I. Transmisibilitatea conferit de:

supravieuirea i chiar multiplicarea n medii umede, minimale nutritiv (specii din familia Enterobacteriaceae sau Pseudomonas aeruginosa); adaptarea la transmiterea direct (ex. transmitere sexual) sau prin vectori biologici (artropode hematofage) n cazul speciilor extrem de fragile n mediul extern (Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, respectiv specii Rickettsia, Borrelia).

II. Infectivitatea
1. Depirea barierelor externe de aprare - discontinuiti ale tegumentului; - discontinuiti ale stratului de mucus (plcile Peyer); - producere de neuraminidaz ( hidroliza stratului de mucus); - forma spiralat i mobilitatea (Vibrio cholerae, Helicobacter pylori, Campylobacter jejuni); - producere de ureaz (neutralizeaz bariera acid gastric , ex. Helicobacter pylori, H.heilmannii); - sinteza de bacteriocine (afecteaz bariera biologic a suprafeelor).

2. Meninerea prin aderare la suprafeele de nveli

necesit participarea a doi factori: adezin sau ligant componente macromoleculare pe suprafaa celulei bacteriene, receptori celulari prezeni pe suprafaa celulelor gazdei; adezinele i receptorii interacioneaz n manier complementar i specific; confer rezisten la splarea mecanic (prin secreii sau excrete) sau prin micri peristaltice; structuri de suprafa cu rol de liganzi: fimbrii, glicocalix, proteine de suprafa (proteina M, proteina F), acizi teichoici i lipoteichoici.

Exemple:
- S. aureus si T. pallidum se leaga de fibronectin prin diferite proteine de suprafa; - S. pyogenes posed: acizi teichoici, proteina M i proteina F (ultima este ligant pentru fibronectina).

Adhesion
BACTERIUM

adhesin

receptor

EPITHELIUM

S. pyogenes
F-protein lipoteichoic acid

fibronectin

Tulpini uropatogene (E. coli - prezint pili)

Absena pililor

3. Invazia
majoritatea bacteriilor i exercit efectul patogen prin invazia esuturilor, precedat de aderarea la suprafaa mucoaselor; invazia poate fi din: - aproape n aproape - pe cale limfatic - hematogen - nervoas; bacteriile invazive sunt capabile s penetreze n celulele nefagocitare prin endocitoz, graie unor proteine de suprafa invazine;

3. Invazia
unele bacterii posed: factori de difuziune (hialuronidaz, colagenaz, fibrinolizine), exoenzime care degradeaz esutul conjuctiv care se opune invaziei (ciment intercelular, membran bazal, depozite de fibrin, fascii). - Factori de difuziune (exoenzime: hialuronidaza S. pyogenes, S. aureus; colagenaza Clostridium, stafilochinaza, streptokinaza pentru stafilococi si, respectiv streptococi).

4. Supravieuirea n organismul gazdei

- protecia fa de fagocite i complement prin:

inhibarea chemotaxiei fagocitelor i uneori a producerii i eliberrii lor din mduva hematogen; sinteza de polizaharide capsulare; supravieuirea i multiplicarea n celulele fagocitare; liza celulelor fagocitare (prin leucocidine);

- eludarea supravegherii imune:

variaia antigenic; identitatea antigenic cu celulele gazdei; diversitatea antigenic; localizarea n situs-uri privilegiate anatomic sau celular; supresia rspunsului imun.

Exemple: inhibarea chemotaxiei fagocitelor (streptolizina distruge fagocitele); S. aureus produce coagulaza legat cu producerea de fibrin: bacteria nu poate fi recunoscut de fagocite; capsula cu rol antifagocitar (S. pneumoniae, H influenzae, K. pneumoniae, E coli, S typhi); AgO aciune antifagocitar, mpiedica activarea C Proteina A a S. aureus; leag IgG prin fragmentul Fc i blocheaz fagocitoza mediat de opsonine.

- bacterii facultativ intracelulare (Salmonella spp, Shigella, E. coli enteroinvaziv (ECEI), Legionella pneumophila, Neisseria spp, Mycobacterium spp, Bordetella pertussis) si obligator intracelulare (Rickettsiia spp, Chlamydia spp, Coxiella burnetii) rezist aciunii microbicide intrafagocitare;
- leucocidine i hemolizine produse de S. aureus, S. pyogenes, C. perfringens lizeaz leucocitele, respectiv eritrocitele.

INFECTIVITATEA bacterii obligator, facultativ intracelulare i extracelulare

- eludarea supravegherii imune:

variaia antigenic; identitatea antigenic cu celulele gazdei; diversitatea antigenic; localizarea n situs-uri privilegiate anatomic sau celular; supresia rspunsului imun.

b) Eludarea supravegherii imune - variaia antigenic: infecia gonococic; Borrelia recurrentis febra recurent; - localizarea in situs-uri anatomice (ex. accesul Ac dificil in LCR, articulaii, vezica biliar) sau celulare privilegiate (e.g. bacteriile facultativ sau obligator i.c. nu sunt influenate de Ac serici);

b) Eludarea supravegherii imune - identitatea antigenic: tulpinile K1 de E. coli au determinani antigenici comuni cu polisialozilglicopeptidele cerebrale nu sunt recunoscute c nonself determin infecii bacteriemice si meningite grave la nou-nscut; ulterior, cantitatea acestor Ag-ne scade;

INFECTIVITATEA
b) Eludarea supravegherii imune: - absorbia Ac prin Ag solubile: Ag capsulare solubile neutralizeaz Ac specifici; proteina A a S. aureus inactiveaz parial IgG; - producerea de IgA proteaz (de ctre N. gonorrhoeae, N. meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae) - cliveaz specific IgA; - supresia rspunsului imun: rar implicate bacteriille (e.g. lepr, tuberculoz, cu activarea limf. T supresor).

Achiziia de nutrieni

- necesarul de Fe n medii feriprive este asigurat prin:

sinteza de siderofori (enterochelin, aerobactin); legarea transferinei sau lactoferinei la receptori de pe suprafa bacteriei; reducerea Fe feric n Fe feros.

INFECTIVITATEA
Achiziia de nutrieni: fierul. Fe complexat cu proteinele: hem i feritin, intracelular; transferina T i lactoferina - L, extracelular. H. influenzae, N. meningitidis, N. gonorrhoeae, leag, printr-un receptor de suprafata, direct L sau T, alte bacterii, (Vibrio cholerae) fixeaza hemul. Sideroforii (enterochelina, aerobactin) cu afinitate mare pentru Fe, l deplaseaza din complexele proteice ale gazdei. Proteine ale ME au rol de receptori pentru complexul Fesiderofori favorizeaza ptrunderea Fe n celul.

III. Virulena

- reprezint capacitatea microorganismelor de a

-

vtma gazda; este un atribut de tulpin cuantificabil (DLM; DL50); condiii majore pentru recunoaterea unui constituient celular ca factor de virulen (postulatele
moleculare Koch)

- genele de virulen sunt cel mai frecvent prezente pe

elemente genetice mobile (plasmide, fagi, transpozoni).

Postulatele moleculare Koch:

factorul de virulen este prezent numai la tulpinile virulente; inactivarea prin mutaie a genei care-l codific duce la pierderea virulenei; reversia la gena slbatic restaureaz virulena; produsul genei induce, de regul, un rspuns imun protector;

Mecanisme de lezare a gazdei

- mecanisme directe
exotoxine, produse de metabolism bacterian de natur proteic, eliberate n mediul extracelular att de bacterii gram-pozitive ct i gram-negative; endotoxine, prezente numai la bacterii gramnegative, eliberate numai n momentul lizei celulei bacteriene; agresine, exoenzime capabile s determine alterri tisulare. mecanisme indirecte reacii de sensibilizare de tip II, III sau IV (Coombs i Gell) vezi Imunologia

Proprieti comparative exotoxine - n general termolabile

- intens antigenice - pot fi transformate n anatoxine

endotoxine
- termostabile

- slab antigenice - nu pot fi transformate - DLM ng/Kg corp - DLM g/Kg corp - aciune specific (enterotoxine, - aciune nespecific neurotoxine, citotoxine) (febr, leucopenie urmat de leucocitoz, CID, oc endotoxinic)

Definiii
Antitoxine: Ac anti-toxine (terapie). Anatoxine: toxine care prin tratare cu formol, la cald, pierd toxicitatea dar pstreaz imunogenicitatea (vaccinare). Endotoxinele sunt mai puin imunogene (ex. si vaccinuri lipopolizaharidice)

Clasificarea exotoxinelor

citolitice atac fosfolipide din membrana citoplasmatic (fosfolipaze); creaz pori prin membrana celular (hemolizine, leucocidine). bipartite, constituite din dou subuniti subunitaea B permite legarea toxinei la un receptor celular subunitatea A, cu proprieti enzimatice, ptrunde n celul acionnd asupra unor inte moleculare. superantigene activeaz limfocitele T prin legare simultan la receptori de pe suprafaa acestora i la CMH clas II de pe suprafaa macrofagelor este stimulat eliberarea unor mari cantiti de limfokine, mediatorii fenomenelor morbide.

Membrane damaging exotoxins

Proteases Phospholipases Detergent-like action

A-B toxins
Cell surface
Active
Binding

Inhib acidul -aminobutiric (influxul nervos nu mai este blocat neuronii motori sunt stimulai n exces contracturi spastice ale musculaturii striate)

Toxina tetatnic tip AB

Superantigene
activeaz limfocitele T prin legare simultan la

receptori de pe suprafaa acestora i la CMH clas II de pe suprafaa macrofagelor este stimulat eliberarea unor mari cantiti de limfokine, mediatorii fenomenelor morbide.

Efecte biologice ale endotoxinelor

activarea complementului pe cale alternativ cu stimularea procesului inflamator; fixarea pe suprafaa macrofagelor, cu eliberare de citokine (IL-1, IL-6, IL-8, FNT etc), mediatori ai inflamaiei i ocului endotoxic; activarea unor factori ai coagulrii, care conduce la CID; activarea plasminei, cu apariia de hemoragii; fixarea pe celule endoteliale cu, creterea permeabilitii vasculare. n infecii cu bacterii gram-pozitive sau a.a.r., peptidoglicanul, acizii teichoici i respectiv arabinogalactanul pot determina efecte endotoxin-like.