Tecnicas Empleadas En El Estudio De La Celula

CELULA Unidad anatmica fundamental de todos los organismos vivos, generalmente microscpica, formada por citoplasma, uno o ms ncleos y una membrana que la rodea La clula es el elemento ms simple, dotado de vida propia, que forma los tejidos organizados. La clula es una unidad mnima de un organismo capaz de actuar de manera autnoma. Todos los organismos vivos estn formados por clulas, y en general se acepta que ningn organismo es un ser vivo si no consta al menos de una clula. Algunos organismos microscpicos, como bacterias y protozoos, son clulas nicas, mientras que los animales y plantas estn formados por muchos millones de clulas organizadas en tejidos y rganos. Aunque los virus y los extractos acelulares realizan muchas de las funciones propias de la clula viva, carecen de vida independiente, capacidad de crecimiento y reproduccin propias de las clulas y, por tanto, no se consideran seres vivos. La Clula est compuesta por una masa rodeada de protoplasma que contiene un ncleo. Una pared celular rodea la clula y la separa de su ambiente. Dentro del ncleo est el ADN, que contiene la informacin que programa la vida celular. El hombre est compuesto de millones de clulas. Tecnicas de Estudio de las Celulas. Cuando hablamos de tcnicas de estudio de las clulas estamos hablando de la citologa y la forma en que estudiamos esto. Dentro de estas tcnicas existen 3 que son las ms importantes y que tienen mayor importancia en este estudio de las clulas, hacindose indispensables para cualquier tipo de estudio hoy en da. Estas 3 tcnicas de estudio son las siguientes: Microscopia:

Tcnicas de estudio de las clulas

Citologa. Microscopia. Microscopio. Fraccionamiento celular. Citoqumica. Tcnicas de estudio

Tecnicas De Estudio De Las Celulas.

tecnicas de estudio de las celulas. cuando hablamos de tcnicas de estudio de las clulas estamos hablando de la citologa y la forma en que estudiamos esto. citologa: parte de la biologa que estudia la clula y sus funciones. | dentro de estas tcnicas existen 3 que son las ms importantes y que tienen mayor importancia en este estudio de las clulas, hacindose indispensables para cualquier tipo de estudio hoy en da. estas 3 tcnicas de estudio son las siguientes:

1. microscopia: - microscopia ptica. - microscopia electrnica. 2. fraccionamiento celular o divisin celular. 3. citoqumica. microscopia: consiste en el uso bsicamente de microscopios, estos son de 2 tipos, los pticos (microscopia ptica) y los electrnicos (microscopia electrnica). la microscopia como tal consiste en el aumento del objeto a observar, dado que el ojo humano tiene un poder de resolucin de 0,1 mm (100 m), y las clulas tienen tamaos inferiores. definiciones de conceptos y caractersticas de sus formas de uso: microscopio: un microscopio es cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos, estos son usados para cualquier tipo de cosas que deseemos ver mas detalladamente, que nuestros ojos no sean capaz de observar con detencion o que simplemente no podamos ver. existen 2 tipos de microscopios condiferentes funciones, ademas de tener diferente formas de empleo: 1. microscopio optico (microscopia optica): utiliza luz visible y lentes pticas para aumentar la imagen. su poder de resolucin puede llegar a 0,2 m , con lo que un objeto puede ser ampliado un mximo de 1500 veces. permite la observacin de clulas vivas. | este es el microscopio mas usado, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. el microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. estas lentes pueden aumentar un objeto...

Microscopa
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fig. m1: Un microscopio con iluminacin por lmpara de mercurio para microscopa de fluorescencia, con cmara digital acoplada y conectado a un ordenador. Microscopa (o tambin sin tilde microscopia)1 es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeez estn fuera del rango de resolucin del ojo normal. Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopa, el uso del mismo requiere para producir las imgenes adecuadas, de todo un conjunto de mtodos y tcnicas afines pero extrnsecas al aparato. Algunas de ellas son, tcnicas de preparacin y manejo de los objetos de estudio, tcnicas de salida, procesamiento, interpretacin y registro de imgenes, etc.
MICROSCOPA PTICA. INTRODUCCION Microscopio es una palabra derivada del griego cuyo significado literal es visin de lo pequeo; como bien lo indica su nombre, nos permite visualizar elementos que a simple vista no son visibles, o difcil de ver en detalle. La utilizacin de lentes para observar elementos aumentados se conoca desde tiempos de Arqumedes, pero la ptica como disciplina se vino a desarrollar durante el siglo XIII con el monje franciscano Roger Bacon. La invencin del microscopio compuesto (combinacin de varias lentes) permiti el desarrollo de la microscopa y de avances en materia como la botnica y la biologa celular; su invencin se atribuye a diversos personajes histricos como Hans y Zacharias Janssen, Galileo Galilei, Cornelius Drebbel, Robert Hooke y Anton van Leeuwenhoek, siendo Hooke, en el ao 1655, quien describe las primeras clulas (celdas) en cortes de corcho, y van Leeuwenhoek, en el ao 1674, quien descubre a protozoos y posteriormente bacterias, a los que llam animalculos. Actualmente el microscopio es un instrumento de uso cotidiano en laboratorios de diagnstico y de investigacin, en diversas reas como la bacteriologa, patologa, micologa y, como en nuestro caso, en la histologa. Por esto es necesario conocer sus componentes y principios de funcionamiento.

Sistema de iluminacin: fuente de luz, filtros y diafragma. Sistema mecnico: base, brazo, platina, tornillos, revolver, tubo y cabezal. Sistema ptico: condensador, objetivos, prismas y oculares.

Conceptos importantes en microscopa

Escala de reproduccin: es la relacin lineal que existe entre el tamao del objeto y su imagen. Por ejemplo, 4:1, 10:1, 40:1. Aumento: es la proporcin entre el tamao de la imagen observada al microscopio y el tamao real del objeto. Aumento total se calcula multiplicando aumento de ocular por el del objetivo. Distancia frontal: distancia entre el objeto observado y la lente del objetivo utilizado, cuando se encuentra bien enfocada la muestra. Es inversamente proporcional al aumento. Profundidad de campo o de foco, o poder de penetracin: espesor del preparado que se observa con nitidez, o profundidad de planos que estn en foco en un momento dado. Con aumentos ms grandes se observa slo pequeos espesores con nitidez, mientras que por arriba y debajo de estos la imagen se desvanece; por lo tanto tambin es inversa al aumento. Campo observado: porcin del preparado incluida en la imagen. Su tamao tambin es inverso al aumento utilizado y va determinado por el rea de campo visual de cada objetivo. Poder de resolucin (PR): capacidad de los lentes de mostrar separados con nitidez dos puntos. Si el PR es mayor quiere decir que la distancia que separa estos dos puntos es menor. Por lo tanto da una imagen ms detallada. Lmite de resolucin: distancia mnima que debe existir para que dos puntos del objeto se visualicen por separado. Apertura numrica: medida de la capacidad del microscopio de agrupar las refracciones de la luz producidas por los finos detalles del objeto. Es propia de cada objetivo. Tecnicas de Estudio de las Celulas. Cuando hablamos de tcnicas de estudio de las clulas estamos hablando de la citologa y la forma en que estudiamos esto.

Citologa: Parte de la biologa que estudia la clula y sus funciones.

Dentro de estas tcnicas existen 3 que son las ms importantes y que tienen mayor importancia en este estudio de las clulas, hacindose indispensables para cualquier tipo de estudio hoy en da. Estas 3 tcnicas de estudio son las siguientes: 1. Microscopia: - Microscopia ptica. - Microscopia electrnica. 2. Fraccionamiento Celular o Divisin Celular. 3. Citoqumica. Microscopia: Consiste en el uso bsicamente de microscopios, estos son de 2 tipos, los pticos (microscopia ptica) y los electrnicos (microscopia electrnica). La microscopia como tal consiste en el aumento del objeto a observar, dado que el ojo humano tiene un poder de resolucin de 0,1 mm (100 m), y las clulas tienen tamaos inferiores. Definiciones de conceptos y caractersticas de sus formas de uso: Microscopio: Un microscopio es cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para obtener una imagen aumentada de objetos minsculos o detalles muy pequeos de los mismos, estos son usados para cualquier tipo de cosas que deseemos ver mas detalladamente, que nuestros ojos no sean capaz de observar con detencion o que simplemente no podamos ver. Existen 2 tipos de microscopios condiferentes funciones, ademas de tener diferente formas de empleo: 1. Microscopio Optico (microscopia optica):

Utiliza luz visible y lentes pticas para aumentar la imagen. Su poder de resolucin puede llegar a 0,2 m , con lo que un objeto puede ser ampliado un mximo de 1500 veces. Permite la observacin de clulas vivas.

Este es el microscopio mas usado, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto que es examinado. Las lentes de los microscopios estn puestas de forma que el objeto que se desee examinar se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes. El equipamiento adicional de un microscopio optico consta de un armazn con un soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especmenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el espcimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz elctrica que dirige la luz a travs de la muestra. La fotomicrografa, que consiste en fotografiar objetos a travs de un microscopio, utiliza una cmara montada por encima del ocular del microscopio. La cmara suele carecer de objetivo, ya que el microscopio acta como tal. Petrografa de una roca La luz polarizada permite analizar esta muestra de roca lunar recogida por la misin Apolo 11. Los diferentes colores representan diferentes composiciones minerales.

Los microscopios que se utilizan en entornos cientficos cuentan con varias mejoras que permiten un estudio integral del espcimen. Dado que la imagen de la muestra est ampliada muchas veces e invertida, es difcil moverla de forma manual. Por ello los soportes de los microscopios cientficos de alta potencia estn montados en una plataforma que puede moverse con tornillos micromtricos. Algunos microscopios cuentan con soportes giratorios. Todos los microscopios de investigacin cuentan con tres o ms objetivos montados en un cabezal mvil que permite variar la potencia de aumento. Microscopios pticos especiales: Hay diversos microscopios pticos para funciones especiales. Uno de ellos es el microscopio estereoscpico, que no es sino un par de microscopios de baja potencia colocados de forma que convergen en el espcimen. Estos instrumentos producen una imagen tridimensional. - El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta. Adems, dado que la radiacin ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con fosforescencia en fotografa o con un escner electrnico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigacin cientfica. - El microscopio petrogrfico se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas metamrficas. Cuenta con un prisma de Nicol u otro tipo de dispositivo para polarizar la luz que pasa a travs del espcimen examinado. Otro prisma Nicol o analizador determina la polarizacin de la luz que ha pasado a travs del espcimen. El microscopio tiene un soporte giratorio que indica el cambio de polarizacin acusado por el espcimen. - El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal. - El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina. - Entre los microscopios avanzados se encuentran el microscopio de campo cercano, con el que pueden verse detalles algo menores a la longitud de onda de la luz. Se hace pasar un haz de luz a travs de un orificio diminuto y se proyecta a travs del espcimen a una distancia equivalente a la mitad del dimetro del orificio, formando una imagen completa. 2. Microscopio electrnico (microscopia electrnica):

Utiliza haces de electrones y lentes electromagnticas, consiguiendo un poder de resolucin de 100 (1 = 1010m), ampliando un objeto hasta 250.000 veces, que mediante tratamiento ptico digital puede llegar hasta el milln de aumentos.

La potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. El microscopio electrnico utiliza electrones para iluminar un objeto. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de 4.000 ngstroms (1 ngstrom es 0,0000000001 metros). La longitud de onda de

los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 ngstroms. Todos los microscopios electrnicos cuentan con varios elementos bsicos. Disponen de un can de electrones que emite los electrones que chocan contra el espcimen, creando una imagen aumentada. Se utilizan lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones. El sistema de vaco es una parte relevante del microscopio electrnico. Los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, de forma que tiene que hacerse un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. Por ltimo, todos los microscopios electrnicos cuentan con un sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones. Tipos de Microscopios Electronicos: Hay dos tipos bsicos de microscopios electrnicos: - El microscopio electrnico de transmisin (TEM): Dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ngstroms. Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. - El microscopio electrnico de barrido (SEM): Crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones secundarios. Los electrones perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados del espcimen. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el nmero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios electrnicos de barrido pueden ampliar los objetos 100.000 veces o ms. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los TEM o los microscopios pticos, produce imgenes tridimensionales realistas de la superficie del objeto. Microscopio electrnico de barrido. El microscopio electrnico de barrido est situado a la izquierda del operador, y las imgenes computerizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un microscopio electrnico de transmisin puede resolver objetos ms pequeos que uno de barrido, este ltimo genera imgenes ms tiles para conocer la estructura tridimensional de objetos minsculos. - Microscopio electrnico de barrido y transmisin (STEM): Combina los elementos de un SEM y un TEM, y puede mostrar los tomos individuales de un objeto. El microanalizador de sonda de electrones, un microscopio electrnico que cuenta con un analizador de espectro de rayos X, puede analizar los rayos X de alta energa que produce el objeto al ser bombardeado con electrones. Dado que la identidad de los diferentes tomos y molculas de un material se puede conocer utilizando sus emisiones de rayos X, los analizadores de sonda de electrones no slo proporcionan una imagen ampliada de la muestra, como hace un microscopio electrnico, sino que suministra tambin informacin sobre la composicin qumica del material. Fraccionamiento Celular: Consiste en la rotura de las clulas mediante un proceso osmtico, ultrasonidos, lisis enzimtica de manera mecnica, y posteriormente una centrifugacin que concentrar en diversas fases a los distintos orgnulos segn su tamao, con lo que se obtendrn separadamente, permitiendo ms fcilmente su estudio. Tambien se le denmina a esto DIVICION CELULAR. La divisin Celular: La divisin celular es el proceso por el cual el material celular se divide entre dos nuevas clulas hijas. En los organismos unicelulares esto aumenta el nmero de individuos de la poblacin. En las plantas y organismos multicelulares es el procedimiento en virtud del cual

crece el organismo, partiendo de una sola clula, y tambin son reemplazados y reparados los tejidos estropeados. Las clulas en divisin pasan a travs de una secuencia regular de crecimiento y divisin, conocida como ciclo celular. El ciclo consiste en una fase G1, durante la cual las molculas y estructuras citoplasmticas aumentan; una fase S durante la cual los cromosomas se duplican; una fase G2, durante la cual comienza la condensacin de los cromosomas y el ensamblaje de las estructuras especiales requeridas para la mitosis y la citocinesis; la mitosis, durante la cual los cromosomas duplicados son distribuidos entre dos ncleos hijos; y la citocinesis, durante la cual el citoplasma se divide, separando a la clula materna en dos clulas hijas. Las tres primeras fases del ciclo celular se conocen, colectivamente como interfase. La regulacin del ciclo celular ocurre tardamente en la fase G1, y puede implicar la interaccin de diversos factores. Las fases de la mitosis son convencionalmente cuatro: Profase, metafase, anafase y telofase. De ellas la profase es la ms larga. Si una divisin mittica ocurre en diez minutos, por lo menos 6 minutos se tarda la clula en Profase. En la Profase los centrolos se separan. Entre los pares de centrolos, formndose a medida que estos se separan, estn los microtbulos que se transforman en las fibras polares del huso. Para el final de la Profase los cromosomas estn completamente condensados y no estn separados del citoplasma.

Durante la metafase temprana, los pares de cromtidas se mueven dentro del huso, aparentemente conducidos por las fibras del huso, como si fueran atrados por un polo y luego por el otro. Finalmente los pares de cromtidas se disponen en el plano medial de la clula. Esto seala el final de la metafase. Al comienzo de la anafase, la etapa ms rpida de la mitosis, los centrmeros se separan simultneamente en todos los pares de cromtidas. Luego se separan las cromtidas de cada par y cada cromtida se transforma en un cromosoma separado, siendo ambas cromtidas atradas, aparentemente hacia polos opuestos por las fibras del cinetocoro. Al iniciarse la telofase, los cromosomas alcanzan los polos opuestos y el huso comienza a dispersarse. Luego se forman sendas envolturas nucleares que se vuelven a formar alrededor de los dos conjuntos de cromosomas, que una vez ms se vuelven difusos. En cada ncleo reaparecen los nuclelos. Citoqumica: Mediante las reacciones coloreadas, las enzimticas de inmunofluorescencia se averigua la composicin bioqumica de las estructuras celulares, su localizacin y su funcionamiento. Las Reacciones Enzimticas: - son especficas y controladas - dependen de factores como: temperatura, pH y la presencia de sales - son difciles de ver a simple vista

Inminofluorescencia: La inmunofluorescencia es una tcnica de laboratorio y su exactitud puede variar dependiendo del anticuerpo especfico que se est investigando y del laboratorio que la est aplicando. Se corta una porcin congelada del hgado de un ratn (u otras substancias) y se coloca en una laminilla portaobjeto de un microscopio, luego una pequea cantidad de suero sanguneo de la persona (parte lquida de la sangre que contiene los anticuerpos) se coloca sobre la sustancia y se lava. Un medio de contraste (fluorescena) que se ha enlazado qumicamente a los anticuerpos anti-humanos del conejo se aplica y se lava. Finalmente el anticuerpo del conejo enlazado a la fluorescena y algunos anticuerpos humanos se enlazan, permitiendo que los grupos de medios de contraste sean visibles bajo el microscopio (prueba positiva).