CUESTIONARIO

1. Cul es la funcin del acido tricloroacetico?

cido tricloroactico (tambin conocido como cido tricloroetanico) es un anlogo del cido actico en el cual los tres tomos de hidrogeno del grupo metilo fueron substituidos por tomos de cloro. Tiene frmula qumica CCl3COOH. ES preparado por la reaccin del cloro con al cido actico en la presencia de un catalizador adecuado. CH3COOH + 3 Cl2 CCl3COOH + 3 HCl ES anchamente usado en bioqumica para la precipitacin de macromolculas tal como protenas, ADN y RNA. Su sal de sdio es usado como un herbicida. Soluciones conteniendo cido tricloroactico como ingrediente son usadas para el tratamiento de verrugas, incluyendo verrugas genitales. ES considerado seguro para el uso con este propsito durante gestao.[1] Sales de cido tricloroactico son llamados tricloroacetatos. Reduccin de cido tricloroactico resulta en cido dicloroactico, un compuesto farmacolgicamente activo que se muestra promisor en el tratamiento de cncer. 2. Cul es la reaccin de la 2,4 dinitrofenilhidrazina con el piruvato?

Los metabolitos de piruvato y acetaldehdo se encuentran presentes normalmente en muy bajas concentraciones, por tanto para demostrar su existencia como intermediario en el camino metablico, es necesario impedir que sean transformados en otros compuestos. Este proceso se usa mucho cuando se investigan caminos metablicos y se hace bloqueando la enzima que catalizas la conversin del compuesto, que se est investigando mediante inhibidores. La pirvico-descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrocina.

Oxidacin aerbica y anaerbica de glucosa en la levadura

Los cristales de las distintas hidrazonas tienen puntos de fusin y ebullicin caractersticos. Gracias a ello la 2,3-DNFH puede usarse para distinguir entre diversos compuestos con grupos carbonilos. Este mtodo es particularmente importante porque las determinaciones de punto de fusin requieren tan slo instrumental de bajo costo. Esta aplicacin en qumica analtica fue desarrollada por Brady y Elsmie.[3] Adems, no reacciona con otros grupos funcionales que contengan carbonilos, como los cidos carboxlicos, amidas y steres.

3. Que funcin cumple el NAD+ en la produccin de piruvato? La enzima Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (NAD+) EC 1.1.1.8 cataliza la reaccin de oxidacin del glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato utilizando NAD+ como aceptor de electrones. Glicerol-3-fosfato + NAD+ dihidroxiacetona fosfato + NADH

Esta enzima tambin cataliza las reacciones de oxidacin y reduccin del propano-1,2diol y del sulfato de glicerona respectivamente, pero con mucha menos afinidad. Durante la gliclisis se genera NADH en el citosol en la oxidacin del gliceraldehdo-3fosfato y se debe regenerar ms NAD+ para que la gliclisis contine. El NADH no puede pasar a la mitocondria para ser oxidado por la cadena respiratoria ya que la membrana interior mitocondrial es impermeable al NADH y NAD+. La solucin es que los electrones del NADH, en vez del propio NADH, sean transportados a travs de esta membrana. Una de las maneras de introducir electrones del NADH en la cadena respiratoria es la lanzadera del glicerol-3-fosfato. El primer paso es transferir un par de electrones desde el NADH a la dihidroxiacetona fosfato, un intermedio glicoltico, para formar glicerol3-fosfato. Esta reaccin es catalizada por la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa en el citosol. El glicerol-3-fosfato es reoxidizado a dihidroxiacetona fosfato en la superficie exterior de la membrana interior mitocondrial por una isozima de la glicerol-3-fosfato

dehidrogenasa unida a la membrana. Un par de electrones se transfiere desde el glicerol3-fosfato al grupo prosttico FAD de la enzima para producir FADH2. Esta reaccin regenera la dihidroxiacetona fosfato. Por ltimo, la flavina reducida transfiere sus electrones a al transportador de electrones Q que entra en la cadena respiratoria como QH2. La lanzadera del glicerol-3-fosfato se utiliza mucho en los msculos ya que permite mantener una alta velocidad de fosforilacin oxidativa. En cambio, en el corazn y en el hgado, los electrones del NADH citoslico son transportados a la mitocondria por la lanzadera del malato-aspartato que est formada por 2 transportadores y 4 enzimas (2 unidades de la malato deshidrogenasa y 2 unidades de la aspartato transaminasa). El ciclo de Krebs tiene lugar en las mitocondrias de las plantas y animales, mientras que en los procariotas ese ciclo ocurre en el citosol; se hace, pues en todos los organismos aerobios. El punto de entrada de todos los combustibles al ciclo de Krebs a travs del intermediario metablico acetil CoA; ste se condensa con una molcula de oxalacetato, para dar citrato, de all el nombre de ciclo del cido ctrico, y como da origen a otros cidos tricarboxlicos, tambin se llama ciclo de los cidos tricarboxlicos. El oxalacetato que se desprende en forma de CO2 corresponde al oxalacetato y no al ltimo acetilo incorporado. En consecuencia, el oxalacetato que se regenera al final del ciclo no contiene los mismos tomos de carbn que el oxalacetato original. En cada vuelta del ciclo se oxida un residuo acetil CoA a dos molculas de CO2; simultneamente se reducen 4 coenzimas 3 NAD+ a 3 NADH y 1 FAD a 1 FADH2. Adems se genera un GTP a partir de GDP + fosfato inorgnico que dar posteriormente un ATP3. La velocidad de las enzimas para regular el ciclo depende bsicamente de la cantidad de ATP; si hay demasiado, la velocidad de ciclo disminuye y, si por el contrario hay exceso de ADP la velocidad del ciclo aumenta4. El ciclo de Krebs representa la va final comn de la oxidacin aerbica de todos los sustratos de la dieta (protenas, lpidos y carbohidratos) con produccin de CO2 como desecho, reduccin de coenzimas que van a transportar tomos de hidrgeno y electrones que se utilizarn en la cadena respiratoria para la formacin de ATP y de una molcula de GTP que reaccionar con el ADP y formar ATP. As se resume la utilidad y la productividad del ciclo. Cada molcula de NAD+ acepta 2 electrones y 1 protn. El protn y uno de los electrones se une a un tomo de carbono de la molcula de NAD+; el otro electrn neutraliza la carga positiva. Esta forma reducida de NAD+ se denomina NADH. El NADH es el principal intermediario entre el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. Algunos insectos no tienen L-lactato deshidrogenasa y son completamente dependientes de la lanzadera del glicerol-3-fosfato para regeneral el NAD+ citoslico. 4. Consulte la va de la glicolisis y determine los pasos irreversibles de esta va? La gluclisis es la va metablica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y as obtener energa para la clula. Consiste esta ruta en 10 reacciones enzimticas que

convierten a la glucosa en dos molculas de piruvato, el cual es capaz de seguir otras vas metablicas y as continuar entregando energa al organismo. Es la va inicial del catabolismo (degradacin) de carbohidratos. Etapas de la gluclisis La gluclisis se divide en dos partes principales y diez reacciones enzimticas, que se describen a continuacin. Fase de gasto de energa (ATP) Esta primera fase de la gluclisis consiste en transformar una molcula de glucosa en dos molculas de gliceraldehdo. Hasta el momento solo se ha consumido energa (ATP), sin embargo, en la segunda etapa, el gliceraldehdo es convertido a una molcula de mucha energa, donde finalmente se obtendr el beneficio final de 4 molculas de ATP. 1er paso: Hexoquinasa La primera reaccin de la gluclisis es la fosforilacin de la glucosa, para activarla (aumentar su energa) y as poder utilizarla en otros procesos cuando sea necesario. Esta activacin ocurre por la transferencia de un grupo fosfato del ATP, una reaccin catalizada por la enzima hexoquinasa,[7] la cual puede fosforilar (aadir un grupo fosfato) a molculas similares a la glucosa, como la fructosa y manosa. Las ventajas de fosforilar la glucosa son 2: La primera es hacer de la glucosa un metabolito ms reactivo, mencionado anteriormente, y la segunda ventaja es que la glucosa-6-fosfato no puede cruzar la membrana celular -a diferencia de la glucosa-ya que en la clula no existe un transportador de G6P. De esta forma se evita la prdida de sustrato energtico para la clula. Tcnicamente hablando, la hexoquinasa slo fosforila las D-hexosas, y utiliza de sustrato MgATP2+, ya que este catin permite que el ltimo fosfato del ATP (fosfato gamma, -P o P) sea un blanco ms fcil para el ataque nucleoflico que realiza el grupo hidroxilo (OH) del sexto carbono de la glucosa, lo que es posible debido al Mg2+ que apantalla las cargas de los otros dos fosfatos. 2o paso: Glucosa-6-P isomerasa ste es un paso importante, puesto que aqu se define la geometra molecular que afectar los dos pasos crticos en la gluclisis: El prximo paso, que agregar un grupo fosfato al producto de esta reaccin, y el paso 4, cuando se creen dos molculas de gliceraldehido que finalmente sern las precursoras del piruvato. En esta reaccin, la glucosa-6-fosfato se isomeriza a fructosa-6-fosfato, mediante la enzima glucosa-6-fosfato isomerasa. La isomerizacin ocurre en una reaccin de 4 pasos, que implica la apertura del anillo y un traspaso de protones a travs de un intermediario cis-enedio

Puesto que la energa libre de esta reaccin es igual a +1,7 kJ/mol la reaccin es no espontnea y se debe acoplar.

3er paso: Fosfofructoquinasa Fosforilacin de la fructosa 6-fosfato en el carbono 1, con gasto de un ATP, a travs de la enzima fosfofructoquinasa-1 (PFK1). Tambin este fosfato tendr una baja energa de hidrlisis. Por el mismo motivo que en la primera reaccin, el proceso es irreversible. El nuevo producto se denominar fructosa-1,6-bifosfato. La irreversibilidad es importante, ya que la hace ser el punto de control de la gluclisis. Como hay otros sustratos aparte de la glucosa que entran en la gluclisis, el punto de control no est colocado en la primera reaccin, sino en sta. La fosfofructoquinasa tiene centros alostricos, sensibles a las concentraciones de intermediarios como citrato y cidos grasos. Liberando una enzima llamada fosfructocinasa-2 que fosforila en el carbono 2 y regula la reaccin.

4o paso: Aldolasa La enzima aldolasa (fructosa-1,6-bifosfato aldolasa), mediante una condensacin aldlica reversible, rompe la fructosa-1,6-bifosfato en dos molculas de tres carbonos (triosas): dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehdo-3-fosfato. Existen dos tipos de aldolasa, que difieren tanto en el tipo de organismos donde se expresan, como en los intermediarios de reaccin. Esta reaccin tiene una energa libre (G) entre 20 a 25 kJ/mol, por lo tanto en condiciones estndar no ocurre de manera espontnea. Sin embargo, en condiciones intracelulares la energa libre es pequea debido a la baja concentracin de los sustratos, lo que permite que esta reaccin sea reversible.

5o paso: Triosa fosfato isomerasa Puesto que slo el gliceraldehdo-3-fosfato puede seguir los pasos restantes de la gluclisis, la otra molcula generada por la reaccin anterior (dihidroxiacetona-fosfato) es isomerizada (convertida) en gliceraldehdo-3-fosfato. Esta reaccin posee una energa libre en condiciones estndar positiva, lo cual implicara un proceso no favorecido, sin embargo al igual que para la reaccin 4, considerando las concentraciones intracelulares reales del reactivo y el producto, se encuentra que la energa libre total es negativa, por lo que la direccin favorecida es hacia la formacin de G3P. ste es el ltimo paso de la "fase de gasto de energa". Slo hemos gastado ATP en el primer paso (hexoquinasa) y el tercer paso (fosfofructoquinasa-1). Cabe recordar que el 4to paso (aldolasa) genera una molcula de gliceraldehdo-3-fosfato, mientras que el 5to paso genera una segunda molcula de ste. De aqu en adelante, las reacciones a seguir ocurrirn dos veces, debido a las 2 molculas de gliceraldehdo generadas de esta fase. Hasta esta reaccin hay intervencin de energa (ATP).

Fase de beneficio Energtico 6o paso: Gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa Esta reaccin consiste en oxidar el gliceraldehdo-3-fosfato utilizando NAD+ para aadir un ion fosfato a la molcula, la cual es realizada por la enzima gliceraldehdo-3fosfato deshidrogenasa o bien, GAP deshidrogenasa en 5 pasos, y de sta manera aumentar la energa del compuesto. Tcnicamente, el grupo aldehdo se oxida a un grupo acil-fosfato, que es un derivado de un carboxilo fosfatado. Este compuesto posee una energa de hidrlisis sumamente alta (cercana a los 50 kJ/mol) por lo que se da inicio al proceso de reacciones que permitirn recuperar el ATP ms adelante. Mientras el grupo aldehdo se oxida, el NAD+ se reduce, lo que hace de esta reaccin una reaccin redox. El NAD+ se reduce por la incorporacin de algn [H+] dando como resultado una molcula de NADH de carga neutra. 7o paso: Fosfoglicerato quinasa En este paso, la enzima fosfoglicerato quinasa transfiere el grupo fosfato de 1,3bisfosfoglicerato a una molcula de ADP, generando as la primera molcula de ATP de la va. Como la glucosa se transformo en 2 molculas de gliceraldehdo, en total se recuperan 2 ATP en esta etapa. Ntese que la enzima fue nombrada por la reaccin inversa a la mostrada, y que sta opera en ambas direcciones. Los pasos 6 y 7 de la gluclisis nos muestran un caso de acoplamiento de reacciones, donde una reaccin energticamente desfavorable (paso 6) es seguida por una reaccin muy favorable energticamente (paso 7) que induce la primera reaccin. En otras palabras, como la clula se mantiene en equilibrio, el descenso en las reservas de 1,3 bifosfoglicerato empuja a la enzima GAP deshidrogenasa a aumentar sus reservas. La cuantificacion de la energa libre para el acople de ambas reacciones es de alrededor de -12 kJ/mol. sta manera de obtener ATP sin la necesidad de O2 se denomina fosforilacin a nivel de sustrato. 8o paso: Fosfoglicerato mutasa Se isomeriza el 3-fosfoglicerato procedente de la reaccin anterior dando 2fosfoglicerato, la enzima que cataliza esta reaccin es la fosfoglicerato mutasa. Lo nico que ocurre aqu es el cambio de posicin del fosfato del C3 al C2. Son energas similares y por tanto reversibles, con una variacin de energa libre cercana a cero. 9o paso: Enolasa La enzima enolasa propicia la formacin de un doble enlace en el 2-fosfoglicerato, eliminando una molcula de agua formada por el hidrgeno del C2 y el OH del C3. El resultado es el fosfoenolpiruvato.

10o paso: Piruvato quinasa Desfosforilacin del fosfoenolpiruvato, obtenindose piruvato y ATP. Reaccin irreversible mediada por la piruvato quinasa. El enzima piruvato quinasa es dependiente de magnesio y potasio. La energa libre es de -31,4 kJ/mol, por lo tanto la reaccin es favorable e irreversible. El rendimiento total de la gluclisis de una sola glucosa (6C) es de 2 ATP y no 4 (dos por cada gliceraldehdo-3-fosfato (3C)), ya que se consumen 2 ATP en la primera fase, y 2 NADH (que dejarn los electrones Nc en la cadena de transporte de electrones para formar 3 ATP por cada electrn). Con la molcula de piruvato, mediante un paso de oxidacin intermedio llamado descarboxilacin oxidativa, mediante el cual el piruvato pasa al interior de la mitocondria, perdiendo CO2 y un electrn que oxida el NAD+, que pasa a ser NADH ms H+ y ganando un CoA-SH (coenzima A), formndose en acetilCoA gracias a la enzima piruvato deshidrogenasa, se puede entrar al ciclo de Krebs (que, junto con la cadena de transporte de electrones, se denomina respiracin.

BIBLIOGRAFIA

http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol25No2/celulas.html http://www.xuletas.es/ficha/protocolo-10/ http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=CELEX:31990R267 6:ES:HTML http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp10a.pdf http://es.wikilingue.com/pt/%C3%81cido_tricloroac%C3%A9tico

INTRODUCCION La gluclisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a Etanol y CO2, y/ a cido lctico dependiendo del organismo que lo efecte, como siendo en el primer caso las levaduras las responsables. Ambas rutas de fermentacin son similares hasta la formacin de piruvato, manteniendo idnticas las etapas de conservacin de energa que conducen a la formacin de ATP. La gluclisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa que conduce a la produccin de Acetil-Co-A y a su oxidacin en el ciclo del cido ctrico, sino que tambin proporciona una va importante para metabolizar fructosa y galactosa derivada de los alimentos. La caracterstica de la gluclisis de proporcionar ATP en ausencia de oxgeno es de significado crtico biomdico, porque permite al msculo esqueltico hacer un trabajo sumamente eficiente an cuando la oxidacin aerbica se vuelva insuficiente, a la vez que los tejidos con capacidad glucoltica pueden sobrevivir a episodios de anoxia. Inversamente el msculo cardaco, que est adaptado al trabajo aerbico, tiene una capacidad glucoltica relativamente deficiente y supervivencia escasa bajo condiciones de isquemia. Hay un nmero pequeo de enfermedades en las que las enzimas del sistema glucoltico como por ejemplo la piruvatocinasa muestran actividad deficiente; estas anomalas se manifiestan principalmente como anemias hemolticas. En las clulas cancerosas que proliferan con rapidez, la gluclisis procede a una velocidad mucho mayor que la requerida por el ciclo del cido ctrico, por tanto, se produce ms piruvato que el puede ser metabolizado. El resultado es una produccin excesiva del lactato, que favorece un entorno local relativamente cido en el tumor, situacin que puede tener implicaciones con ciertos tipos de teraputica contra el cncer. Tambin se produce acidosis lctica por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.

OBJETIVOS Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentacin de levadura Observar la fermentacin de piruvato, mediante cambios de color

MATERIALES 4 tubos de ensayo 2 tubos de centrifuga Beaker de 400 ml Pipetas de 5 ml Balanza Calentador Pinzas para tubo de ensayo Termmetro Esptula Solucin de glucosa Levadura Fosfato de sodio dibsico 0,5 M Fosfato de potasio monobsico 0,5 M Acido tricloroacetico 10% 2,4 dinitrofenilhidracina saturado en HCL 2M NAOH 10%

TEORIA RELACIONADA Fermentacin. Es la extraccin de energa del piruvato en ausencia de oxgeno. Hay dos tipos de fermentacin: la fermentacin alcohlica y la fermentacin lctica o cida. En ambos casos la fermentacin produce dos molculas de ATP por cada molcula de glucosa que se rompe. Las levaduras son hongos unicelulares que en presencia de oxgeno tienen respiracin aerbica pero en ausencia de ese gas, cambian a respiracin anaerbica. Las levaduras llevan a cabo la fermentacin alcohlica, que es aquella que con vierte el piruvato en dixido de carbono y etanol (alcohol), por eso se ha dado el nombre de fermentacin alcohlica. La fermentacin alcohlica es un importante recurso econmico. Los panaderos usan la fermentacin alcohlica de la levadura para producir pan. Cuando la levadura rompe los carbohidratos de la pasta de harina, libera CO2 y este forma burbujas en la pasta y esta crece (esas burbujas son los espacios llenos de aire en la masa del pan). Cuando se hornea el pan la levadura muere y el alcohol se evapora. La fermentacin alcohlica se utiliza en la produccin de vinos, cervezas, ron y otras bebidas alcohlicas, y en la produccin de etanol que se usa para producir la mezcla de gasohol o gasolina-alcohol, usada como combustible de motor en algunos pases. Las clulas animales no desarrollan la fermentacin alcohlica, aunque algunas como las clulas musculares, pueden convertir al piruvato en cido lctico. La respiracin anaerbica que produce esta sustancia se denomina fermentacin lctica (porque produce cido lctico). Durante un ejercicio violento, puede suceder que la respiracin no provea suficiente oxgeno para suplir las necesidades de las clulas, y entonces las clulas musculares continan trabajando y cambian a respiracin anaerbica, produciendo cido lctico. Luego de un ejercicio fuerte sobreviene la fatiga muscular y sentimos dolor, ese dolor se debe a la produccin de cido lctico y su acumulacin en los msculos. La mayora de ese cido se moviliza a la sangre y en el hgado se convierte otra vez en piruvato. Cuando tenemos un calambre, el cual produce un dolor tras una contraccin fuerte de un msculo, esta se debe a una acumulacin de cido lctico producida por la contraccin que ocurri a expensas de respiracin anaerbica por las clulas del msculo.