Formación de osazonas, prueba de Fehling y pentaacetato de glucosa

Objetivos 1.
- Conocer cmo y qu importancia tienen la formacin de osazonas al momento de identificar azucares, y conocer la aplicacin de la reaccin de acetilacin en un monosacrido. 2.- Conocer cmo funciona el poder reductor de algunos carbohidratos. Introduccin Los monosacridos pueden ser oxidados por agente oxidantes suaves como Fe o Cu en estas reacciones l carbonilo se oxida a acido carboxlico. Esta propiedad es la base de la reaccin de Fehling, ensayo que se usa para determinar la presencia o no de glcidos reductores. Los azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo intacto, y que a travs del mismo pueden reaccionar con otras molculas. Los azcares que dan resultados positivos con las soluciones de Fehling se conocen como azcares reductores, y todos los carbohidratos que contienen un grupo hemiacetal o hemicetal (un hemiacetal es una molcula que contiene un grupo hidroxilo -OH y un residuo alcxido OR) dan pruebas positivas. Los carbohidratos que solo contienen grupos acetal o cetal no dan pruebas positivas con estas soluciones y se llaman azcares no reductores.(3,5)
+3 +2
Las osazonas se forman cuando las azucares reaccionan con fenilhidrazina. La reaccin involucra la formacin de fenilhidrazona. La reaccin puede ser usada para identificar monosacridos. Involucra dos reacciones. Primero la glucosa son fenilhidrazina producen glucosafenilhidrazona por eliminacin de un molcula de agua del grupo funcional. El siguiente paso involucra la reaccin de un mol de glucosafenilhidrazina con dos moles de fenilhidrazina (exceso) El carbono alfa es atacado aqu porque es mas reactivo que los otros. Son compuestos altamente coloreados, y pueden ser detectados fcilmente.(1,3)
Laboratorio Qumica Orgnica Practica 13 (Pode reductor, formacin de osazonas y sntesis de pentaacetato de B-D-Glucosa Granda Morales Daniela, Ibarra Arias Nayeli Diana Grupo 2IMI
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Teora Disacridos: Los disacridos se forman por la unin de dos monosacridos a travs de un enlace covalente o glucosidico. Este enlace se da entre un hemiacetal y un alcohol.
Sacarosa: Se forma por glucosa y fructosa que se sintetiza en plantas. Sus dos carbonos anomericos se encuentra formando el enlace glucosidico, por lo tanto, no es un glcido reductor
Maltosa: La maltosa o azcar de malta es un disacrido formado por dos glucosas unidas por un enlace glucosdico producido entre el oxigeno del primer carbono anomrico (proveniente de -OH) de una glucosa y el oxgeno perteneciente al cuarto carbono de la otra.
Lactosa: La lactosa es un disacrido formado por la unin de una molcula de glucosa y otra de galactosa, como se puede deducir observando su frmula, se trata de un disacrido reductor.
Polisacridos: Los polisacridos son biomolculas formadas por la unin de una gran cantidad de monosacridos. Se encuadran entre los glcidos, y cumplen funciones diversas, sobre todo de reservas energticas y estructurales.(1,5)
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DISCUSIONES: 1. Formacin de osazonas de monosacridos (glucosa y fructosa) AZCAR. PRUEBA DE FEHLING. FORMACIN DE OSAZONAS. SI Fructuosa. Galactosa. Lactosa. Sacarosa. Almidn. Positiva. Positiva. Positiva. Negativa. Negativa. FORMACIN DE OSAZONAS. NO FORMACIN DE OSAZONAS. TIEMPO (min) 2 4:31
2. Formacin de osazonas de disacridos (sacarosa, maltosa y lactosa) Se colocaron en dos tubos de ensaye 3 ml de Fenhilidrazina recin preparada, y 0.2 ml de solucin saturada de bisulfito de sodio una vez con las muestras preparadas de sacarosa y lactosa al 2%, se agregaron 5ml en los tubos; se mezcl y se coloco a bao mara, se midi el tiempo al cual ocurri la formacin de osazonas. Para verificar la formacin de osazonas se tomaron muestras de la reaccin en intervalos de tiempo de 15, 20 y 30 minutos, la Lactosa torn su color de amarillo claro a naranja obscuro y finalmente tom una coloracin escarlata. Por otra parte, la sacarosa, vir su coloracin de amarillo claro a naranja obscuro. Se procedi a filtrar las muestras al igual que la mezcla de reaccin y se observaron al microscopio las osazonas formadas. La creacin de osazonas que se observ con la formacin de un precipitado color caf que tena cierto parecido a pelusas. Muestra Tiempo Formacin de osazonas Color final Lactosa 15 min si Rojo escarlata Sacarosa 20 min si Naranja oscuro El disacrido lacotosa, produce por hidrlisis D-galactosa y D-glucosa, puesto que posee un carbono anomrico libre, la lactosa es un azcar reductor. La sacarosa no tiene tomo de carbono anomrico libre, los carbonos de ambas hexosas se hallan unidos entre si, no experimenta mutarrotacin ni reaacciona con fenilhidracina aunque se hidroliza con ms facilidad que otros disacaridos, no es azucar reductor. 3. Formacin de osazonas de polisacridos. Se colocaron 5 mL de una solucin de almidn al 2% se adicion fenilhidrina y bisulfito de sodio, procediendo de la misma forma como para la prueba de los monosacridos, entonces se pudo observar una coloracin amarilla, dando como resultado una prueba negativa, demostrando que el almidn no es un azucar reductor.
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4. Formacin de osazonas de disacridos y polisacaridos hidrolizados (sacarosa, y lactosa). Azcar. Prueba de Fehling. Formacin de osazonas. SI Sacarosa. Almidn. Positiva. Negativa.. Formacin de osazonas. NO Formacin de osazonas. TIEMPO (min)
La sacarosa es un azcar no reductor esto se debe a que le enlace glucosdico que presentan no tienen carbonos anomricos y por ende no tendrn grupos OH anomricos libres. Pero cuando el enlace glucosdico se rompe por la accin del cido sulfrico, se deja libre a la fructosa, monosacrido no reductor y a la glucosa, monosacrido reductor, por presentar en su estructura un grupo carbonilo que va a intervenir en la reduccin de los iones cprico 5. Pentaacetato de D-glucosa: En un mortero se pulverizaron 2 g de glucosa anhidra y 1 g de acetato de sodio anhidro, hasta dejar un polvo con las siguientes caracteristicas: blanco y fino. Se adicion tanto esta sustancia como cuerpos de ebullicin a un matraz baln, los cuales se adaptaron a en un sistema de reflujo al que se le adicion por el refrigerante 10 mL de anhdrido actico y se calent directamente por aproximadamente 1 hora, tiempo tomado a partir de la completa disolucin de la glucosa y acetato de sodio; efectuando as una reaccin de acetilacin sobre los grupos hidroxilo de un monosacrido, en ste caso, glucosa. La mezcla de reaccin se adicion a una mezcla agua hielo para cristalizar en fro, y debido a que la molcula es poco o casi no polar se cristaliz al bajar la temperatura, pero se tuvo que inducir la formacin de cristales con agitacin constante y rallado de paredes del vaso de precipitados. Cuando se form un precipitado caf blanquecino se filtr a gravedad usando ms agua fra como disolvente. El precipitado obtenido se disolvi de nuevo con agua caliente (para aumentar la solubilidad del procurando disolver la mayor cantidad posible. Posteriormente se filtr utilizando agua caliente obteniendo residuos color caf en el papel filtro y una sustancia amarillenta que se dej temperar y luego se enfri en un bao de hielo, induciendo la cristalizacin. Despus se filtr al vaco usando agua fra y se obtuvieron unos cristales amarillo muy claro; para eliminar toda coloracin y evitar usar carbn activado, se disolvi por completo el producto en agua caliente procurando limpiar el papel filtro utilizado, luego se volvi a dejar enfriar en un bao de hielo con lo que se cristaliz el producto, entonces se filtr al vaco de nuevo, usando agua fra y se obtuvo el producto limpio, un slido blanco y cristalino.
Cuestionario: 1.-Indicar la razn de usar clorhidrato de fenilhidrazina como reactivo en lugar de fenilhidrazina base: Porque el compuesto clorhidrato de fenilhidrazina es ms estable que la fenilhidrazina base 2.-Si se utilizara clorhidrato de fenilhidrazina en la reaccin de obtencin de osazonas Cmo se obtendra la Fenilhidrazina base? Cuando se utiliza la base, ste no reacciona fcilmente 3.-Indicar por qu se utiliza la solucin de bisulfito de sodio en la formacin de osazonas? Porque es un catalizador cido que inhibe la energa de activacin para propiciar la reaccin, para que se realice la adicin de la fenilhidrazina, es necesario comenzar con una reaccin cido base. Adems, se trata de una adicin sobre el grupo carbonilo. La mayora de los aldehidos , metil alquil cetonas y cetonas cclicas reaccionan fcilmente con NaHSO3 en solucin saturada, para formar compuestos de adicin (aldehidobisulfito o cetona-bisulfito).(1,2)
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4.-Explicar las diferencias en la formacin de osazonas entre monosacaridos y disacaridos: La formacin de osazonas en los monosacridos se da de forma ms rpida debido a que su grupo carbonilo est ms disponible y es ms fcil hacerlo reaccionar con la fenilhidrazina, por otra parte, los disacridos tienen que romper su enlace glucosdico primero para que su grupo carbonilo pueda reaccionar. (4) 5.-Indicar por medio de reacciones, cules azcares dan positivo a la prueba de Fehling: Azucares reductorestienen una coloracin rojiza debido al oxido cuproso que es forma por oxidacin del azcar por medio del catin Cu 2+.
6.-Explicar por qu se utiliza cobre como tartarato y no como sulfato: Se pueden utilizar ambos, pues ambos compuestos poseen Cu que es el necesario para oxidar a los azcares. ste cobre tambin se puede reducir de 2+ a 1+ 7.-Dar 3 ejemplos de carbohidratos que den positiva la prueba de Fehling y tres que no la den: Positiva: Lactosa, Glucosa, Galactosa Negativa: Sacarosa, Fructosa, Almidn 8.- Indicar que tipo de grupos funcionales reaccionan con fenilhidrazina. Con el grupo carbonilo de los azucares. Los aldehdos y las cetonas reaccionan con un equivalente de fenilhidrazina y forman fenilhidrazonas. Las aldosas y las cetosas reaccionan con tres equivalentes de fenilhidrazina y forman ozasonas(1,2) 9.- Indicar cuantos moles de fenilhidrazina base se necesitan en la formacin de osazonas. Explicar 10.- Explicar porque las osazonas se forman nicamente en los carbonos 1 y 2 de los carbohidratos. Porque en estas posiciones es donde se encuentra los carbonos carbonilos en los cuales es ms fcil que ocurra la reaccin pues son los ms fciles de oxidar formando aldosas o cetosas 11. En la sntesis de pentaacetato de B-D-Glucosa a) Indicar cul es el papel del acetato de sodio anhidro En esta prctica se utiliz como un sustrato para acetilar en la reaccin b) Explicar porque se vierte la mezcla de reaccin en agua helada despus del calentamiento a reflujo: Para que el producto recristalice y se obtenga el producto con mayor pureza
2+
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c) Indicar porque es importante que el slido formado se agite hasta que quede finamente dividido: Para que el compuesto no se solidifique completamente hasta el punto de que sea imposible disolverlo, y podamos de este modo eliminar la mayor cantidad de impurezas posibles. 12.- Escribir las estructuras de Haworth de los pentaacetato de a-y B-D glucosa
13.- Dibujar las frmulas de haworth para los acetatos de maltosa, sacarosa y lactosa
14.- Indicar por medio de reacciones como se hace la determinacin del tamao del anillo de azcar que al metilarlo produce 2,3,4,6-tetra- O- metil-D-glucosa y al someterlo a una oxidacin con cido ntrico concentrado, produce acido 15.- La hidrolisis de sacarosa produce lo que se conoce como azcar invertido. Investigar que significa dicho trmino. El azcar invertido es la combinacin de glucosa y fructosa. Su nombre hace referencia a que el poder rotatorio de la solucin frente a la luz polarizada es invertido por el proceso de hidrlisis que separar la sacarosa en sus dos subunidades(2)
+++++++++++++++++++++++ Conclusiones:
Las formas predominantes de muchas azcares como glucosa, fructosa o ribosa, en disolucin, son formas de cadena cclica ya que stas formas son energicamente ms estables, la ciclacin se lleva a cabo con la formacin de un hemiacetal intramolecular (Reaccin entre aldehdo o cetona y alcohol) cuando el hemiacetal forma un anillo de 6 carbonos se le llama piranosa y si es con 5 carbonos, se le llama furanosa. Los azcares reductores (glucosa, fructosa, maltosa y lactosa) dan positivo a la reaccin de Fehling(color rojo), presentan equilibrio en la forma abierta de su ciclo, poseen un carbono anomrico libre, promueven la reduccin (como sales cpricas) oxidandose, presentan mutarrotacin(cambio espontneo entre las dos formas cicladas (alfa) y (beta) y forman osazonas.(3) Los azcares son en general solubles en agua y difcilmente pueden recristalizarse, sin embargo, sus osazonas fcilmente se cristalizan en ste disolvente y adems presentan un punto de fusin bien definido, por lo cual este tipo de derivados se utiliza para caracterizar carbohidratos, as como tambin para determinar sus configuraciones.
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La glucosa posee una mayor proporcin de forma carbonlica (abierta), an as, la sacarosa es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que carece de poder reductor y la reaccin con la prueba de Fehling es negativa. Azucares reductoresReducen al producto de Fehling dndole un color rojo Se observ que los monosacridos reaccionan de manera ms rpida que los disacaridos o polisacaridos por la mayor disponibilidad de su grupo carbonilo
Bibliografa: 1. M.BERG Jeremy, TYMOCZKO John L; Bioqumica 6 edicin, editorial Revert, Espaa, 2008 2. MATHEWS Christopher K, VAN HOLDE K.E., Bioqumica, 3 edicin, Pearson editorial, Madrid 2002. 3. BRADLEY Frank, ARMSTRONG Thomas, BENNETT Peter , Bioqumica, editorial Revert, Barcelona 1982 4. MOORE, J. A. y Dalrymple, D. L.Experimental Methods in Organic Chemistry 2a. Ed. W. B. Saunders Co. U.S.A. (1976) Pag. 259-269. 5. Gilman Organic Chemestry, Jhon Wiley and Sons.Inc. N.Y (1943) Capitulo 36
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