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Dr Nathalie Guessennd
Unit des antibiotiques guessennd@yahoo.fr,
Dfinition (2)
antibiogramme = outil valid par un biologiste mdical mdecin de choisir le bon antibiotique, ou l'association d'antibiotiques permettant de traiter efficacement un patient.
Du prlvement l'antibiogramme
On recueille les bactries :
o o o o o dans dans dans d dans dans le sang (hmoculture). les urines, l selles, les excrments (animaux), les ll l t ( i ) les crachats, les lavages broncho-alvolaires, le liquide cphalo-rachidien,
BUT :
Trouver un traitement efficace pour le malade
Les bactries sont mises en culture et ensuite identifies et s'il est ncessaire de raliser un antibiogramme (dcision du biologiste).
Dfinition (1)
Antibiogramme permet de mesurer la capacit dun antibiotique inhiber la croissance bactrienne in vivo Il doit tre ralis selon les mthodes standards
La standardisation permet:
un antibiogramme reproductible et fiable d antibiotiques un choix adquat dantibiotiques un minimum de variation une bonne lecture une bonne interprtation
Concentration minimale inhibitrice (CMI) De dilution milieu solide mili lid milieu liquide De diffusion E-test
Diffrentes mthodes
Concentration Minimale inhibitrice (CMI) CMI= plus faible concentration dantibiotiques capable dinhiber in vitro toute culture visible de la souche tudie pendant une priode de temps dfinie
Elle sexprime en mg/l ou g/ml
disques
Antibiogramme
Mthodes (1)
la mthode par diffusion des disques imprgns dantibiotiques et la mesure des diamtres ou mthode de Kirby Bauer est celle recommande par lOMS
Mthode standardise
Selon le Comit de lantibiogramme de la Socit Franaise de Microbiologie
(http://www.sfm.asso.fr/nouv/general.php?pa=2)
Milieu recommand: Mueller Hinton Epaisseur 4 mm et horizontal et bonne composition Inoculum des colonies adjacentes mais non confluentes Pr-diffusion et pr-incubation
Diamtre dinhibition
Dmarche mthodologique
Principe de la diffusion dun antibiotique en milieu glos partir dun disque
Disque surfae fond radiale Diffusion
Standardisation
Dmarche de qualit
Milieu Mueller Hinton Composition, paisseur (4mm), horizontalit Inoculum Choix des antibiotiques Dpt des disques et incubation lecture et interprtation
en profondeur
Inoculum
Matriel Bactrie vivante: Colonies jeunes en phase exponentielle d croissance (18 h ti ll de i 24h) sur milieu non slectif Eau physiologique strile Anse pour prlever les colonies, densitomtre,
Matriel et ractifs :
Milieu de culture en fonction des germes Milieu de Mueller Hinton non supplment entrobactries, pseudomonas staphylocoque.
une colonie
2ml eau physiologique : mulsionner les colonies sur le bord du tube ensuite agiter
Ajuster la densit de l inoculum celle de ltalon 0.5 Mac Farland en y ajoutant soit un fragment de colonie soit de leau physiologique
Milieu de Mueller Hinton additionn de 5% de sang frais de mouton pour les streptocoques. Glose chocolat (sang cuit) + sang cuit isovitalex pour Haemophilus et Neisseria.
Souches fragiles
S. pneumoniae
Neisseriaceae , Haemophilus et
107 UFC : diluer linoculum (0.5 Mac Farland) 1/10: 1000l dans 10ml
Ecouvillonnage (OMS/NCCLS) :
Tremper un couvillon strile sec dans linoculum liminer lexcs dinoculum (en pressant lcouvillon et en le faisant rouler contre les parois du tube au dessus du niveau du liquide).
LECTURE
Disposition des disques dantibiotiques
o Distributeur o Pince Disques 25mm de centre centre
Faire la lecture le lendemain Mesurer et noter le diamtre de chaque zone dinhibition en mm d inhibition Les rsultats seront interprts en fonction des diamtres critiques figurant dans des tableaux dinterprtation
Lecture
OSIRIS
Automate de lecture
Appuyer doucement sur chaque disque pour assurer un contact uniforme avec le milieu Laisser diffuser 10 min (prdiffusion). Mettre les botes incuber 37C dans les 30 min qui suivent la prparation pendant 18 24 h
diamtre dinhibition pour chaque atb Ce diamtre correspond la CMI Ce diamtre est report en S, R, I en fonction des f i d diamtres officiels donns par les comits dexperts
LANTIBIOGRAMME
LES RESULTATS
Bactrie sensible : S
La bactrie ne pousse pas en prsence de lantibiotique Le traitement avec cet antibiotique sera un succs
C H
Bactrie rsistante : R
La bactrie pousse en prsence de lantibiotique Le traitement avec cet antibiotique sera un chec
F E
Bactrie intermdiaire : I
Rsultat intermdiaire
Ralisation de lantibiogramme
souche par couvillonnage Ensemencer Laisser scher Dposer les disques dantibiotiques 7/bote 90 ou 16/bote 120 Incuber 37C 18h 24h Mesurer les diamtres des zones dinhibition Interprter rendu des rsultats Par inondation
S R I
la diffusion de