Imunohematologia

Reviso: Ago/2005

Sistema ABO
A definio do grupo sangneo de um indivduo se d por duas provas: Prova Direta (ou Beth-Vincent): pesquisa dos antgenos fixados nas hemcias do paciente. Deve ser feita com soro Anti-A, Anti-B e Anti-A,B. Prova Reversa (ou prova de Simonin): pesquisa do anticorpo no soro do paciente. Deve ser feita com hemcias tipadas A e B, com ateno para o fato de que o anticorpo B costuma ser mais fraco (ttulo fraco) que os demais anticorpos. A prova reversa uma contra-prova fundamental para a concluso do exame. Assim, os resultados destas duas provas devem ser interpretados da seguinte forma:
Prova Direta (Antgeno) Antgeno A Antgeno B Antgeno A e B Ausncia de Antgenos A e B Prova Reversa (Anticorpo) Anticorpo b Anticorpo a Ausncia de Anticorpos a e b Anticorpo a e b Sistema ABO Grupo Sanguneo A Grupo Sanguneo B Grupo Sanguneo AB Grupo Sanguneo O

Quando um anticorpo presente no identificado, deve-se verificar a funcionalidade das Hemcias usadas na realizao das provas. Lembrando que as hemcias, comerciais ou preparadas pelo laboratrio, devem ser fenotipadas para os principais sistemas sangneos (Rh, Kell, Duffy, Kidd, Lewis, P, MNS, Luth e Xg). Quando um anticorpo ausente identificado, deve-se verificar a lavagem dos tubos e se as hemcias so especficas.

Sistema Rhesus Rh (D)

A determinao do Sistema Rhesus de um indivduo se d por : Determinao Rh: determinao do antgeno D do Sistema Rhesus nas hemcias do paciente. Controle Rh: um reativo controle com ausncia de anticorpo Anti-D e de qualquer outro tipo de anticorpo para todos os sistemas eritrocitrios. Este reativo controle tem por finalidade detectar erros ou patogenias existentes no paciente que resulte numa reao positiva do controle. (Exemplo: casos de hiperproteinemia). Contudo, diversos laboratrios no fazem uso deste controle em sua rotina ou tm encontrado resultado positivo para este controle, arriscando assim a confiabilidade de seus resultados. bom lembrar que no se deve usar albumina bovina, 22% ou 30%, em substituio a esse reativo controle. O correto usar o Reativo Controle Rh comercial, no importando se ele produzido com plasma ou albumina, desde que tenha os mesmos conservantes e estabilizadores do reativo do soro Rh (D), ou seja, do mesmo fabricante. Para liberar um resultado como Rh positivo deve-se fazer um estudo mais aprofundado da imunohematologia do paciente, o que inclui a observao de autoanticorpo frio ou quente (se a auto-prova for positiva), hiperproteinemia, etc. Pesquisa D fraco e Controle: devem ser feitos, quando na classificao do Rh (D) existe ausncia de aglutinao (negativa). Sua finalidade detectar o anticorpo fracamente formado, devido a sua transmisso gentica. Nesta prova necessrio usar tcnicas mais sensveis (Tcnica do Coombs Indireto-TCI) para confirmar sua positividade ou negatividade. A metodologia em Gel no dispensa a realizao desta prova. Os fabricantes tem adotado a incluso desta prova no carto. Neste caso, o laboratrio est realizando a prova no carto automaticamente. Assim, os resultados destas determinaes devem ser interpretados da seguinte forma:
Determinao Rh Positiva Negativo Negativo Positivo ou Negativo Controle Rh Negativo Negativo Negativo Positivo Pesquisa D fraco --Negativo Positivo Positivo ou Negativo Controle D fraco --Negativo Negativo Negativo Sistema Rhesus Rh(D) Positivo Negativo Positivo Indeterminado

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Se, para um D fraco positivo o laboratrio encontrar negativo, deve-se: (1) verificar se a potncia (ttulo) do Reativo Rh(D) est de acordo; (2) observar se a temperatura do Banho-Maria est calibrada e constante; (3) fazer a lavagem das hemcias corretamente e dentro da tcnica exigida, tendo o cuidado de no perder material durante o procedimento, pois perda de hemcias significa perda de antgeno; (4) verificar se a Antiglobulina Humana (AGH) est dentro das conformidades do seu controle de qualidade; (5) verificar a limpeza da vidraria (existncia de resduos qumicos e biolgicos); (6) observar presena de umidade na vidraria. Se o resultado permanecer negativo, deve-se usar Hemcias Controle de Coombs, a fim de se detectar provveis erros tcnicos ou do reativo usado, pois com a adio do Controle dever a reao dar sempre positiva.

Pesquisa Anticorpo Intra-Vascular - AIV (Coombs Direto)

Determinao da Amostra: Nesta determinao usada a hemcia do paciente com o soro de Coombs ou o soro da Anti-Globulina Humana (AGH). Determinao do Controle: O controle feito com o soro de Coombs (AGH) e o reativo de Hemcias Controle de Coombs. Este reativo composto por hemcias sensibilizadas com anticorpo IgG. Devendo dar sempre positivo. Caso der negativo deve-se verificar se o soro de Coombs est funcionando ou se h alguma impureza (sujeira) no tubo do teste. Assim, os resultados destas determinaes devem ser interpretados da seguinte forma:
Determinao Amostra Positivo Negativo Positivo ou Negativo Determinao Controle Positivo Positivo Negativo AIV (Coombs Direto) Positivo Negativo Indeterminado (verificar rotina)

Pesquisa Anticorpo Extra-Vascular - AEV (Coombs Indireto)

Hemcias: O soro do paciente deve ser pesquisado com hemcias de fentipos conhecidos para os principais sistemas eritrocitrios (tipadas), formando assim um painel de seleo. Normalmente so adotadas duas hemcias, mas o uso de uma terceira pode ocorrer para complementar as duas hemcias normalmente usadas. O importante que as hemcias usadas contenham os principais antgenos que caracterizam os anticorpos dos principais sistemas eritrocitrios (Rh, Kell, Duffy, Kidd, Lewis, P, MNS, Luth e Xg). Com isto, j se obtm um resultado satisfatrio. Auto-prova: A auto-prova visa avaliar a formao de auto-anticorpos produzidos pelo prprio paciente (sistema imunolgico) ou por um medicamento que est sendo ministrado, funcionando como um complemento e auxiliando no diagnstico e possvel tratamento. Neste teste realizada a tcnica do Coombs Indireto com o soro e a suspenso de hemcias do prprio paciente. Exemplo: Um indivduo em tratamento com L-Dopa (dopamina) reproduz nas hemcias uma simulao de um autoanticorpo, devido a substncia medicamentosa envolver as hemcias, de modo a reproduzir uma reao similar de auto-aglutinao. A simples suspenso do medicamento suficiente para que no haja mais esta reao. Assim, os resultados destas determinaes devem ser interpretados da seguinte forma:
Hemcias Negativo para todas as Hemcias testadas. Positivo para alguma das hemcias testadas. AEV (Coombs Indireto) Negativo Positivo

Algumas dicas para garantir os resultados de Coombs Indireto: Hemcia: verificar se as hemcias usadas so tipadas, pois tanto as comerciais quanto as feitas pelo laboratrio, podem no estar contemplando todos os antgenos dos principais sistemas sangneos; Caso sejam tipadas corretamente, verificar se esto dentro do prazo de validade, pois com o tempo os antgenos ficam fracos;

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Soro de Coombs: verificar a sua potncia, pois pode estar diminuda para a captao do anticorpo; alm disso poder estar inespecfico, contendo uma contaminao para outro anticorpo. Isto acarreta um falso positivo, dependo o anticorpo contaminante. Tubo: Aps a lavagem pode ficar com resduo de detergente ou com gua destilada residual, o que interfere na realizao da prova. aconselhvel rinsar com salina fisiolgica, caso haja umidade no tubo; Soro fisiolgico (Tubo): observar se o soro fisiolgico usado na lavagem das hemcias no apresenta contaminao fngica, pois sua presena interfere dando falso negativo; Gel: Para a metodologia em Gel, fazer o controle dos cartes usando o Controle de Coombs. Este controle tem um anticorpo irregular fixado em sua hemcia, devendo dar positivo no carto.

Consideraes sobre as metodologias O estudo imunehematolgico realizado em lmina no uma tcnica atual, hoje so utilizadas tcnicas em tubo, gel centrifugao e PCR (ainda pouco utilizado no Brasil) e que a lmina, por no reproduzir o mesmo nvel de confiabilidade que os demais, no deve ser usada como mtodo conclusivo para liberao de resultados de grupos sangneos. Para melhor prtica em Imunehematologia o laboratrio deve dispor de duas tcnicas para liberao dos resultados, podendo ser dois mtodos distintos ou dois kits de marcas diferentes. ATENO: A Portaria 1376 de 19/11/1993 define como obrigatria a realizao da prova direta e reversa para Sistema ABO, a Pesquisa do D fraco para o Sistema Rhesus e o uso de hemcias tipadas (com fentipo conhecido) para o Coombs Indireto.

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