Aproveitamento do resduo da produo de etanol a partir de farelo de mandioca, como fonte de fibras dietticas1

M. LEONEL2,*, M. P. CEREDA3, X. ROAU4

RESUMO O presente trabalho teve por objetivo analisar resduos do farelo de mandioca resultantes de processos de hidrlise enzimtica para obteno de etanol; visando o aproveitamento destes como fonte de fibras dietticas. Foram realizados quatro ensaios enzimticos utilizando as enzimas amilolticas, amilase e amiloglucosidase, complementadas ou no com celulase e/ou pectinase. Os resduos foram caracterizados quanto composio centesimal, pH, acidez, perfil de acares e quanto s fibras (FDA, FDN, celulose, hemicelulose, lignina, acares neutros). Realizou-se tambm a anlise microscpica dos resduos. Pelos resultados obtidos na caracterizao dos resduos calculou-se a energia metabolizvel aparente (EM). Observou-se que independente do ensaio enzimtico todos os resduos podem ser usados como fonte de fibras insolveis. Os resduos resultantes dos ensaios com pectinase apresentaram uma proporo aproximada de 1:1:1 de amido, fibras e acares, sendo a glicose o acar

majoritrio, e com energia metabolizvel aparente de cerca de 2,6 kcal/g. J os resduos, onde no se utilizou a pectinase a proporo foi de 2:1:1 aproximadamente e a energia 3,1 kcal/g. A anlise microscpica dos resduos mostrou a presena de amido no hidrolisado preso s clulas em todos os ensaios enzimticos sendo que, nos resduos dos ensaios com pectinase a quantidade observada foi bem inferior aos demais. Uma possvel alternativa para diminuir o valor calrico dos resduos seria a lavagem com gua aps a prensagem para extrao do hidrolisado para fermentao. Palavras-chave: amilase, pectinase, celulase, fibras, farelo de mandioca. SUMMARY Utilization of the residue of the ethanol production from cassava fibrous waste, as source for fibre. The research had as propose to evaluate the residues of the enzymatic hydrolysis process of the ethanol production from cassava fibrous waste by dietetic fibers. Four hydrolysis process were carried out using the amylases, -amylase and amyloglucosidase, with or without pectinase and/or cellulase. Proximate percent composition, pH, acidity, sugars and components of the fiber fraction (ADF, NDF, cellulose, hemicellulose, lignin and neutral sugars) was estimated. Microscopic analysis was made and the metabolic energy also was calculated. The results showed that all residues may be used as insoluble high-fiber product. The residues of the treatment with pectinase by complementary enzyme had a proximate proportion of the 1:1:1 starch, fibers and total sugars, and the glucose was the main sugar. The metabolic

energy was 2.6 kcal/g. In the residues without pectinase the proportion was 2:1:1 and the metabolic energy was 3.1 kcal/g. Microscopic analysis showed that would have starch granules inside the unbroken cells and in the process with pectinase less granules were observed. An alternative for caloric value reduction would be the washing of the residue with water after the pressing process. Keywords: amylase, pectinase, cellulase, fibers, cassava fibrous waste.

1 INTRODUO
Durante o processo de extrao da fcula de mandioca gerado o farelo, massa ou bagao; resduo slido composto pelo material fibroso da raiz e parte da fcula que no foi possvel extrair no processamento [4]. Nas fecularias, para cada tonelada de raz processada so produzidos cerca de 928,6kg de farelo com 85% de umidade. Aps seco, este resduo apresenta em mdia 75% de amido e 11,5% de fibras. Diante de sua composio e da considervel quantidade gerada vrias pesquisas vm sendo realizadas no sentido de aproveitar este resduo [5, 16]. A utilizao do farelo como matria-prima para produo de etanol tem sido objeto de diversos trabalhos, os quais visam a otimizao do processo. Embora o desenvolvimento de um processo eficiente e econmico para produo de etanol a partir do farelo possa resultar em sua utilizao, o mesmo gera por sua vez outros resduos, como a vinhaa e o resduo fibroso final, os quais devem ter um destino, de preferncia lucrativo, e no prejudicar o meio ambiente [11, 15, 21, 32]. Quanto a vinhaa, esta poderia ser utilizada "in natura" na alimentao animal, como se utiliza a gerada no processo de produo de lcool fino de cereais [21]. J o resduo fibroso final

poderia ser aproveitado como fonte de fibras dietticas, produto esse de elevado valor agregado [18]. As fibras alimentares, na maior parte, so o material das paredes celulares das plantas, que, por sua resistncia digesto por meio de enzimas humanas, sofrem modificaes muito limitadas em sua estrutura e so eliminadas quase totalmente [1]. As fibras alimentares tm, cada qual, efeitos fisiolgicos diferentes. Em geral, as fibras solveis em gua (pectinas, gomas, mucilagens e certas hemiceluloses) retardam a passagem intestinal, o esvaziamento gstrico e a absoro da glicose, ajudando a reduzir o colesterol no soro sangneo. As fibras insolveis em gua (lignina, celulose e algumas hemiceluloses) aceleram o trnsito intestinal, aumentam o peso das fezes, desaceleram a hidrlise do amido e retardam a absoro da glicose, contribuindo para a reduo do risco de alguns males do clon [1]. Segundo CEREDA [6], o farelo de mandioca uma fonte de fibra de boa qualidade, apresentando em mdia 29% de fibra detergente neutro (FDN), 14% de fibra detergente cido (FDA) e uma proporo de 6:1 de insolveis para solveis. Neste trabalho objetivou-se analisar os resduos resultantes de quatro processos enzimticos de hidrlise-sacarificao do farelo de mandioca para obteno de etanol, visando o possvel aproveitamento desses como fonte de fibras dietticas, possibilitando indstria complementar as receitas com o lcool e a vinhaa, o que, sem dvida, viabilizaria os investimentos necessrios para a implantao do processo.

2 MATERIAL E MTODOS
Os resduos fibrosos foram obtidos em quatro ensaios enzimticos de hidrlise e sacarificao do farelo de mandioca para obteno de etanol [21]. No ensaio E1 foram utilizadas as enzimas -amilase e amiloglucosidase [26]; no ensaio 2 (E2) utilizou-se alm das enzimas do E1 a pectinase e a celulase como complementares [14]; no ensaio E3 foi utilizada somente a celulase como complementar s enzimas do E1 [17] e, no ensaio E4 a pectinase como complementar

[21]. A Figura 1 mostra o fluxograma do processo de obteno dos resduos.

As concentraes e condies de uso das enzimas foram as recomendadas pelo fabricante [24]. Os produtos comerciais foram: Termamyl 120 L (amilase), AMG 200L (amiloglucosidase), Pectinex Ultra SP-L (pectinase) e Celluclast 1,5 L (celulase). Todos os ensaios enzimticos foram iniciados com a elaborao de uma suspenso de farelo e gua (500g p/p) na concentrao de 12% de amido correspondendo a: 74,99g de matria seca, 60g de amido, 8,62g de fibras, 0,34g de acares totais, 0,86g de cinzas e 0,64g de protenas [21]. Os resduos fibrosos finais foram caracterizados quanto a: umidade

inicial (%), matria seca (g), cinzas (g), fibras (g) e protenas (g) [2], amido (g) [28] , acares totais retidos (g) [31] e seu perfil (g) [12]. Para determinao do perfil dos acares retidos no resduo foram retiradas amostras de 1g secas em estufa a 60 C e diludas na proporo 1/20 (p/p) com gua destilada a 40 C. As amostras foram centrifugadas por 5 minutos a 3000rpm. e do sobrenadante retirou se alquotas que foram analisadas em HPLC com coluna BIORAD temperatura de 70C com fluxo de 0,6ml/min, tendo gua destilada e filtrada como fase mvel [12]. O perfil de acares obtido foi confirmado por anlise dos acares totais pelo mtodo de SOMOGY [31]. Com relao s fibras, os resduos foram caracterizados quanto a: fibra detergente neutro (FDN), fibra detergente cido (FDA), lignina, celulose e hemicelulose [33,34]. Analisou-se tambm os teores de raminose, arabinose, xilose, manose, galactose e glicose da frao fibra, atravs de cromatografia (glc), coluna OV225, usando inositol como fase intermediria [3, 30]. Os resduos foram tambm analisados microscopicamente atravs de exame a fresco de amostras dos resduos diludas em gua e glicerina 50%, sendo os campos mais representativos fotografados. A comparao dos resduos finais foi realizada atravs da tcnica da anlise de varincia, complementada com o teste de comparaes de pares de mdias de TUKEY [25].

3 RESULTADOS E DISCUSSO
Os resultados apresentados na Tabela 1 mostram que os resduos resultantes dos ensaios enzimticos E1 e E3, bem como os resultantes de E2 e E4 apresentaram composio muito semelhantes. Entretanto, no ensaio E1 foi utilizado somente a -amilase e a amiloglucosidase, e no ensaio E3 utilizou-se a celulase como enzima complementar, o que evidencia o pouco efeito desta enzima auxiliar no processo de hidrlise e sacarificao. J a semelhana entre os resultados dos ensaios E2 e E4 demonstra que o uso da pectinase como enzima complementar promoveu um aumento da hidrlise, confirmando o observado por LEONEL [21], de aumento no

rendimento do processo de obteno de etanol a partir de farelo de mandioca.

Atravs da anlise microscpica dos resduos resultantes dos diferentes processos enzimticos de hidrlise do amido (Figura 2), foi possvel confirmar que todos os ensaios enzimticos promoveram a hidrlise completa dos grnulos de amido livres presentes no farelo [20]. Todavia, foi observado que no ensaio E1, onde no se utilizou as enzimas complementares, muitas clulas estavam arrebentadas, mas ainda existia muito amido preso no interior das mesmas e ligados s paredes destrudas. No ensaio E2, onde se utilizou as duas enzimas auxiliares, muitas clulas foram destrudas, mas ainda foi possvel observar grnulos de amido gelificados ligados fragmentos celulares. No ensaio E3, que utilizou a celulase como enzima auxiliar, observou-se clulas destrudas e muitos macerados de clulas com amido. J no ensaio com pectinase (E4), as clulas estavam muito destrudas e o amido gelificado, ainda presente,

estava ligado aos fragmentos de parede semelhante ao que foi observado no ensaio E2.

Os resultados obtidos levam hiptese da existncia de uma forte ligao do grnulo de amido parede celular, fazendo com que mesmo aps a hidrlise e a destruio da parede, fique algum vestgio de amido gelatinizado ligado s clulas. Com relao ao aspecto nutricional, todos os resduos, da mesma forma que a mandioca e o farelo, apresentaram baixo teor protico, sendo ricos em carboidratos.

Os resduos apresentaram elevada concentrao de acares totais, sendo 26,61% no ensaio E1, 29,10% em E2, 26,31% em E3 e 29,37% no ensaio E4. Os altos nveis de acares se devem principalmente ao hidrolisado retido no resduo aps a prensagem. Uma possibilidade para a reduo deste teor de acares seria a lavagem do resduo aps a prensagem e a recirculao da gua, pois esta no poderia ser misturada ao hidrolisado porque, promovendo diluio, aumentaria os gastos energticos. Segundo MAC ARTHUR & DAPPOLONIA [23], o farelo de aveia contm em torno de 2,6 a 3,4% de acares totais. Foi possvel observar que os resduos resultantes dos ensaios em que se utilizou a pectinase (E2 e E4) apresentaram uma proporo aproximada de 1:1:1 de amido, fibras e acares totais, sendo a glicose o acar majoritrio. J os resduos de E1 e E3 apresentaram uma maior quantidade de amido (baixo rendimento da hidrlise), ocorrendo uma proporo de 2:1:1 aproximadamente. Contudo, ao se calcular a energia metabolizvel aparente (EM) dos resduos nos diferentes ensaios enzimticos, os resduos resultantes dos ensaios com pectinase (2,59 kcal/g no E2 e 2,56 kcal/g no E4) apresentaram um menor valor energtico quando comparados com os resduos dos ensaios E1 (3,13kcal/g) e E3 (3,11kcal/g). Segundo PED e SGARBIERI [27] a energia metabolizvel aparente para cultivares de aveia variaram entre 3,82 e 3,88kcal/g. LOCKHART et al. [22], analisando o valor calrico de cereais matinais encontraram: 3,8kcal/g para farelo de aveia, 2,4kcal/g para farelo de arroz e 2,5kcal/g para farelo de trigo. J os resultados obtidos na caracterizao das fraes fibra (Tabela 2), mostraram que ocorreu uma concentrao em relao aos resultados obtidos por LEONEL et al. (1998) [20] na caracterizao do farelo de mandioca: 16,39% (FDA), 38,70% (FDN), 11,78% celulose, 22,31% hemicelulose e 4,59% de lignina.

Para os ensaios enzimticos foi possvel observar que o ensaio E1, onde utilizou-se somente as amilases, o resduo apresentou uma maior porcentagem de hemicelulose em relao aos demais resduos, o que demonstra a ao das enzimas complementares, celulase e pectinase, sobre esta frao. A baixa porcentagem de hemicelulose nos resduos dos ensaios E2 e E4 evidencia a ao hemiceluloltica citada pelo fabricante NOVO, [24] da pectinase comercial. Segundo DA SILVA et al. [7], as preparaes enzimticas, denominadas comercialmente de "pectinases", so formuladas para conter um ou mais tipos de enzimas pectinolticas dependendo do tipo de aplicao, alm de atividades de celulases, hemicelulases, proteases e amilases, constituindo um coquetel enzimtico. Em razo da ao da pectinase sobre a hemicelulase, os resduos de E2 e E4 apresentaram em sua composio a celulose como principal frao fibra, seguida da lignina e da hemicelulose. O mesmo ocorreu com o resduo resultante do ensaio com celulase (E3),mas em menor proporo. J o resduo do ensaio E1 apresentou porcentagens bastante prximas de celulose e hemicelulose, semelhante a composio da mandioca. Segundo RIVERA et al. [29], a mandioca apresenta em mdia: 4,65% de FDN, 2,79% de FDA, 1,96% de hemicelulose, 1,76% de celulose, 0,56% de lignina, 1,17% de pectina e 83,02% de amido

expressos na base seca. Com relao ao perfil de acares das fibras os resultados mostraram ser a glicose o acar majoritrio em todos os resduos, aps o que a xilose e a galactose predominaram em todos os ensaios enzimticos (Figuras 3 e 4).

Analisando-se os resultados obtidos no ensaio E1, pode verificar-se uma maior porcentagem de galactose na frao hemicelulose, visto que somente utilizaram amilases na hidrlise-sacarificao. Para os resultados dos ensaios E2 e E4 pode-se observar uma reduo em relao ao ensaio E1, o que demonstra que ocorreu a hidrlise parcial da hemicelulose. A presena de raminose nos resduos indica que o farelo apresenta uma pequena porcentagem de pectina, visto serem os polissacardeos

pcticos ricos em cido galacturnico, raminose, arabinose e galactose [7]. Como se pode depreender, os resduos fibrosos, independente do ensaio enzimtico, possuem em sua composio altos nveis de fibra, predominantemente do tipo insolvel. De acordo com DIAS et al. [8], o farelo de arroz tambm apresenta-se como produto rico em fibras insolveis contendo: 10,1% de FDA, 27,4% de FDN, 2,64% de celulose, 17,3% de hemicelulose e 20,9% de lignina. Acredita-se que as fibras insolveis tenham importante papel na preveno do cncer de clon devido capacidade de reduzir o trnsito intestinal, aumentar o volume fecal, tornar mais lenta a absoro da glicose, retardar a digesto do amido e deprimir a taxa de proliferao celular colnica [8, 9,10, 13]. Muitos outros estudos sobre os benefcios das fibras para a sade do homem vm sendo desenvolvidos, o que tem levado as indstrias de alimentos buscar cada vez mais produtos que atendam as novas exigncias nutricionais dos consumidores. Os resultados obtidos mostram que os resduos resultantes dos processos de hidrlise-sacarificao apresentaram boas caractersticas, para aplicao como base de produtos dietticos ricos em fibras insolveis. O uso da pectinase como enzima complementar gera um resduo fibroso, com boas qualidades nutricionais e o aproveitamento desse resduo poderia, sem dvida, colaborar para a viabilizao econmica do uso desta enzima como complementar no processo.

4 CONCLUSES
A partir dos resultados obtidos foi possvel concluir que:
q

independentemente do ensaio enzimtico, todos os resduos apresentaram perfil adequado para uso, como base para produtos dietticos ricos em fibras insolveis; a celulose foi a principal frao fibrosa nos resduos resultantes dos processos enzimticos, com enzimas complementares; os resduos resultantes dos ensaios E2 e E4 apresentaram

energia metabolizvel aparente 17% mais baixa, que a dos resduos dos ensaios E1 e E3; resduo gerado no ensaio enzimtico com pectinase como enzima complementar apresentou uma proporo de 1:1:1 de amido, fibras e acares; a lavagem do resduo com gua poderia diminuir o teor de acares totais, tornando-o menos calrico.

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6 AGRADECIMENTOS
Agradecemos Novo Nordisk S/A - Araucria -PR, pela concesso das enzimas e, a colaborao da Profa. Carmem Regina Marcati, do Departamento de Cincias Florestais - FCA/UNESP/Botucatu-SP, nas anlises microscpicas.

Recebido para publicao em 11/12/98. Aceito para publicao em 14/07/99. 2 Doutora Centro de Razes Tropicais (CERATI) UNESP/Botucatu SP, Caixa Postal 237, CEP: 18603-970, Fone/Fax: (014) 8219050. 3 Prof. Titular Diretora Centro de Razes Tropicais UNESP SP. 4 Doutor INRA Montpellier. * A quem a correspondncia deve ser enviada.