UNIVERSIDAD DE SUCRE

PRCTICA DE MICROBIOLOGA ______________________________________________________________________ UROCULTIVO

Martin Arrieta1, Carmen Rangel1

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Estudiantes de IV semestre de Medicina

Universidad de Sucre, Facultad de Ciencias de la Salud, Departamento de Medicina Sincelejo, Sucre, Colombia Agosto-2011

RESUMEN La infeccin urinaria est provocada por la invasin de microorganismos en el tracto urinario. Puede producirse por dos vas diferentes: por el extremo inferior de las vas urinarias (abertura en la punta del pene o de la uretra, segn se trate de un hombre o de una mujer), que es el caso ms frecuente; o bien a travs del flujo sanguneo, en cuyo caso la infeccin afecta directamente a los riones. Las infecciones de las vas urinarias ms habituales son las producidas por bacterias, aunque tambin pueden presentarse a causa de virus, hongos o parsitos. De muchas de ellas es responsable la bacteria llamada Escherichia coli, que normalmente vive en el intestino. Infeccin de orina o del tracto urinario son expresiones que engloban diferentes enfermedades infecciosas (producidas por un microorganismo o germen) y que afectan a cualquier parte del sistema urinario (rin, urteres, vejiga urinaria o uretra). Palabras clave: Urocultivo, orina, infecciones urinarias, Agar.

1. PROPSITO Con la prctica realizada en el laboratorio de microbiologa de urocultivo se busca:

Establecer las condiciones de toma de muestra requerida para el anlisis microbiolgico de una muestra de orina.

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Realizar un urocultivo teniendo en cuenta los microorganismos de importancia como causantes de infeccin urinaria. Determinar la sensibilidad de la bacteria aislada a los diferentes antimicrobianos. Identificar las posibles causas de error en el proceso.

sustancias o molculas bactericidas (destruyen a las bacterias) en la orina. El examen de orina es el ms antiguo de los exmenes de laboratorio. Ya se practicaba hace siglos cuando se pretenda adivinar los misterios de la enfermedad examinando el lquido amarillo. Hoy el anlisis de orina es el arte de la tira reactiva diagnstica de inmersin. A pesar de su utilidad, el anlisis de orina es el ejemplo de la tecnologa poco prestigiosa y relegada en el laboratorio, pero con cuidado y atencin es uno de los exmenes de Laboratorio ms valioso si se ejecuta con habilidad, experiencia y atencin constante. Para que los resultados tengan todo el valor posible, el clnico debe conocer bien cada prueba y saber que existe un sin nmero de factores que pueden afectar los resultados. Adems es responsabilidad del Clnico participar con la informacin sobre las condiciones de recoleccin de la muestra y acompaar la solicitud de laboratorio con la informacin clnica pertinente.

2. MARCO TERICO La infeccin urinaria es la ms comn de todas las infecciones bacterianas. Abarca una variedad de cuadros clnicos cuyas manifestaciones dependern de los mecanismos de defensa de quien la padece y del grado de agresividad y cantidad de bacterias que causa la infeccin. La mayora de las bacterias responsables de esta patologa provienen del intestino grueso y entran en la vejiga en forma ascendente luego de haberse instalado inicialmente en la uretra, es decir, colonizan la zona uretral y periuretral. El aparato urinario posee mecanismos de defensa frente a la agresin de bacterias a travs del flujo constante de orina que acta por arrastre, por la presencia de receptores presentes en las clulas de la mucosa urinaria que son capaces de atrapar a las bacterias y por la accin de

Anlisis de orina

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Al igual que la sangre, de la que deriva, la orina puede utilizarse fcilmente para realizar anlisis biolgicos. Refleja, a la vez, el compartimiento sanguneo y la funcin renal, y proporciona informacin sobre eventuales enfermedades de las vas urinarias. Algunos anlisis slo requieren una muestra de orina, mientras que otros exigen recogerla durante 24 horas o, en ocasiones, durante varios das seguidos. Examen citobacteriolgico de la orina (sedimento y urocultivo). Su objetivo es analizar el nmero de clulas (glbulos rojos y blancos) presentes en la orina. En caso de hemorragia de las vas urinarias (hematuria), el nmero de glbulos rojos en la orina aumenta rpidamente. En caso de infeccin urinaria (cistitis), el nmero de glbulos blancos en la orina puede ser importante. La orina se deja en cultivo algunos das, para aislar los microorganismos y para conocer la sensibilidad a los antibiticos (antibiograma). La recoleccin de orina para un urocultivo tiene exigencias mayores que para un anlisis simple. Se deben utilizar envases estriles para evitar la contaminacin de la muestra. El urocultivo se realiza mediante la siembra de una pequea cantidad de orina homogeneizada, lo que permite la cuantificacin de las eventuales bacterias presentes. Las bacterias se contabilizan utilizando el criterio de UFC/ml, porque de acuerdo a esta tcnica se considera que cada bacteria en la muestra diluida dar origen a una colonia. El

conteo de las mismas se efecta luego de un perodo de incubacin de 24 horas a 37 C, para permitir la multiplicacin bacteriana. En el anlisis qumico de orina se describe la presencia de:

Interpretacin de la apariencia y color de la orina, pueden aparecer diversas variaciones, orina clara, turbia, amarilla clara, marilla oscura, roja, verde, azul,etc.) Presencia de bilirrubina en orina Presencia de glucosa en orina Hemoglobina en orina Cetonas en orina Nitritos en orina Medicin del pH Protenas en orina Densidad de la orina Urobilingeno en orina

Preparacin en Fresco En este tipo de prparacin podemos ver: Tipos de crostales de diferentes campos. Si aparecen con relativa frecuencia, podra ser indicativo de clculos renales o afecciones de la parte superior de sistema excretor. Cristales de urea: morfologa cuadrada Cristales de oxalato: morfologa en sobre. Cristales de fosfato: morfologa en atad Resto de epitelios en forme de masas irregulares o clulas en descamacin del epitelio excretor. Estas clulas tienen la morfologa d un huevo frito,

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desgarbadas e irregulares. Cuando se presentan en gran cantidad, puede ser indicativo de infeccin. Deteccin de bacteriuria en el sedimento: presencia de bacterias en la Orina. Piuia: Presencia de Leucocitos: hay que tener en cuenta el nmero de polimorfonucleares y, dentro de estos, los neutrfilos por campo de visin. Desde que sea 10 -12 ya hay piura manifiesta. Hematura: medimos la presencia de glbulos rojos en la Orina. En este examne tambin podemos medir el pH, Ver el aspecto de la orina. Microbiologa E. coli contina siendo la especie ms frecuentemente aislada en las infecciones urinarias a cualquier edad, incluidos los ancianos. Sin embargo, en estos ltimos aumenta la frecuencia de ITU producida por grmenes distintos, como Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter, Serratia, Providencia, Morganella morganii, Staphylococcus coagulasa negativo, Streptococcus del grupo B, Enterococcus, Pseudomonas aeruginosa Candida. Segn la procedencia del paciente, el espectro de especies aisladas vara. En pacientes procedentes de la comunidad E. coli y Staphylococcus coagulasa negativo son ms frecuentemente aislados. Proteus mirabilis, P. aeruginosa, K. pneumoniae, K. stuartii son ms frecuentes en instituciones que en la comunidad, aunque E. coli contina siendo el organismo ms comn en mujeres. En

unidades hospitalarias agudas son ms frecuentemente identificados patgenos nosocomiales, como P. aeruginosa, Enterococcus spp, Candida spp y enterobacterias no E. coli. En ancianos aumenta la frecuencia de infecciones polimicrobianas y, a menudo, producidas por grmenes resistentes a los antibiticos convencionales. 3. MATERIALES Asas bacteriolgicos Medios de cultivo: Agar Mac Conkey, EMB, Sangre Solucin salina 0.9%. Coloracin de Gram. Muestra de Orina Cubre y Portaobjetos

4. PROCEDIMIENTO Una vez obtenida la muestra homogeneiz en dos partes: se

Una parte de la muestra se centrifug y se destin para el examen en fresco y posteriormente se realiz una tincin, la otra parte de la muestra se utiliz para realizar el urocultivo en las placas. Para la preparacin en fresco; ponemos una gota en la superficie de un porta y cubrimos con un cubre, esto se puede observar al microscopio con objetivo de 40X y con poca luz.

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Para el cultivo, se realiz el mtodo de asa calibrada para hacer la estimacin cuantitativa de microorganismos, el cual consisti en sembrar una placa con medio Agar MacConkey y otra con medio Agar sangre y otro en EMB en una muestra de orina, sin someterse a centrifugacin, se emple una asa de platino calibrada (4 mm de dimetro) Para realizar este procedimiento primero se mezcl la muestra de orina durante 3 minutos evitando que se derramara. Luego se tom el inculo con el asa calibrada. Seguidamente se deposit la cantidad de muestra tomada en el centro del Agar y a partir de ah se traz una lnea recta de extremo a extremo de la caja. Posteriormente con la misma asa y sin tomar ms muestra ni esterilizar el asa se realiz una estriacin en zig- zag de manera que se intercepto la lnea central de lado a lado. Despus se incub las siembras a 37 C durante 36 horas, para finalmente proceder a contar el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que la asada contiene 0.01 ml de orina.

el microscopio y las colonias que crecieron en los diferentes medios de cultivo. Como hemos visto, la siembra del cultivo debe realizarse a partir de una muestra sin centrifugar con un asa calibrada, lo que nos va a permitir una estimacin semicuantitaiva del desarrollo microbiano, adems como dato informativo debemos tener en cuenta que cerca del 70-80% de urocultivos enviados a laboratorio son negativos, cerca del 90% de las bacterias aisladas son enterobacterias, y de los gram positivos, la mayora de los microorganismos aislados son Enterococcus y Staphylococcus. En el examen fresco de la muestra de orina al microscopio se observ a un aumento de 40X, leucocito entre 1-3, hemates 5-7, bacterias abundantes y clulas epiteliales entre 0-2. Fig.1

5. RESULTADOS Y ANLISIS Luego de realizar el procedimiento descrito anteriormente, procedemos a observar los datos recogidos del urocultivo que incluye la observacin en Fig.1. Examen al microscopio Es importante recordar que los leucocitos estn presentes en infecciones,

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pielonefritis y enfermedades autoinmunes, y que estos en caso de infeccin pueden encontrarse hasta ms de 20 das de haberse eliminado la infeccin, por lo que es importante saber si el paciente tuvo algn cuadro anterior a la muestra de orina. Otro indicio importante son los eritrocitos que nos indican si existe un sangrado de las vas urinarias, y dependiendo la forma de estos puede ubicarse en que parte del tracto urinario ha ocurrido el sangrado (vas altas o bajas), y el tipo de patologa que se encuentra, adems las clulas epiteliales cuando son muchas en el campo se sospecha de una infeccin, pero cuando son escasas se dice que es normal, porque estas clulas se renuevan constantemente. Luego al observar los medios de cultivos (Agar sangre, EMB y McConkey) pudimos establecer que en todos los cultivos se dio el crecimiento de colonias de microorganismos importantes en las infecciones urinarias. En el cultivo EMB, que es un medio selectivo para buscar microorganismos no exigentes de tipo Bacilos Gram negativos, los cuales son los principales tipos de bacterias implicados en infecciones de este tipo, aqu la muestra problema creci debido a que se le prestaron todas las condiciones necesarias para que las bacterias crecieron, ya que este medio permite diferenciar entre los organismos capaces de utilizar la lactosa y la sacarosa, y aquellos que son incapaces de

hacerlo, muchas E. coli que crecen en este medio presentan un brillo metalico caracterstico que es el observado en el cultivo, lo que nos permite diferenciarlas de Candida spp, que crecen como unas colonias puntiformes de color rosa, otros Enterococcus spp, crecen en este medio en forma de colonias puntiformes y transparentes mientras que las Acinetobacter spp y otras bacterias oxidativas presentan un color azu. Estas caractersticas de observan en la imagen 2.

Fig. 2 Cultivo en medio Agar EMB, positivo para colonias de E. coli. En el cultivo de Agar sangre, que se caracteriza por ser un medio rico en nutrientes e ideal para el crecimiento de bacterias aerobias y anaerobias que nutricionalmente son muy estrictas en sus requerimientos se observ crecimiento de colonias (Fig.3) de color blanco con ms de 75.000 UFC sin hemlisis del medio, este medio se presta para que muchas bacterias crescan debido a que contiene miocardio y peptona, y un balance electroltico que mantiene una presin

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osmtica adecuada para que las bacterias puedan dividirse.

casi con total seguridad que se trata de una E. coli.

Fig. 3 Cultivo Agar sangre con crecimiento de colonias bacterianas de color blanquecino. Por ltimo en el cultivo de Mac Conkey, que es utilizado para buscar la presencia de bacilos gram negativos de fcil crecimiento, ya sean aerobios o anaerobios facultativos, el cultivo contiene peptonas que aportan todos los nutrientes necesarios que exigen este tipo de microorganismos, adems de sales biliares y cristal violeta, al ser un medio de cultivo selectivo es ideal para buscar la presencia de microorganismos importantes en infecciones urinarias, en aquellos microorganismos que no son capaces de fermentar la lactosa crecen, pero sus colonias sern de color incoloro, en el caso actual, las colonias crecieron de color blanquecino (fig.4), lo que nos indica que el microorganismo es capaz de fermentar la lactosa, lo cual coincide con una E. coli, que junto con el resultado del agar EMB y su brillo metalico caracterstico, sumado con la epidemiologia regional, se puede decir

Fig. 4 Colonias de color blanquecino sobre medio Mac Conkey. Adems del urocultivo tambin es importante realizar pruebas qumicas y fsicas a la muestra de orina, lo que nos ayudara a establecer con ms precisin el tipo de infeccin que sufre el paciente. 6. CAUSAS DE ERROR Al exponer la muestra al medio sin la adecuada manipulacin puede contaminar la muestra.

Al no inocular bien la muestra podemos obtener pruebas negativas cuando en realidad son positivas si no que el procedimiento de sembrado no fue el correcto.

Que la muestra de orina no haya sido recogida con las medidas necesarias y se haya contaminado con otros agentes bacterianos externos.

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Bacteriuria asintomtica 7.CUESTIONARIO Procedimiento para la realizacin de Urocultivos Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kaas para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminacin, se realiza de la siguiente manera:

Presencia de bacterias en la orina en ausencia de sntomas clnicos. Bacteriuria significativa (en mujeres, dos muestras consecutivas con ms de 100.000 UFC/ml; en varones, una sola muestra con ms de 100.000 UFC/ml; en portadores de sonda urinaria, una sola muestra con ms de 100 UFC/ml) con o sin piuria en ausencia de sntomas urinarios. La incidencia de bacteriuria asintomtica aumenta con la edad, y es ms comn en ancianos con limitaciones funcionales. Aparece en un 20-50% de ancianos institucionalizados no portadores de sonda vesical y en un 100% de los pacientes sondados. La presencia de piuria no siempre es indicativo de infeccin. Por ejemplo, en pacientes institucionalizados, el 90% de los pacientes con bacteriuria asintomtica tienen piuria, y un 30% de los que no tienen bacteriuria asintomtica tambin la tienen. Factores de riesgo de bacteriuria asintomtica: Vejiga neurgena y otras patologas neurolgicas. Diabetes mellitus. Estancia prolongada en residencia. Patologas obstructivas como HBP en el varn. Cambios hormonales en la mujer. Macroalbuminuria. IMC (ndice de masa corporal) bajo. Historia de ITU en el ao anterior. Incontinencia esfinteriana. Instrumentacin del tracto urinario.

Se homogeneiza la mediante agitacin.

muestra

Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1 ml. de orina en 9.9 ml. de caldo de tripticasa o de suero fisiolgico, estriles. Se preparan diluciones al 1:1000 y 1:10 000, a partir de la dilucin al 1:100. Se deposita 1 ml. de cada dilucin en placas de Petri esterilizadas, sobre las cuales se vaca un tubo de agar-tripticasa o medio CLED, fundidos y enfriados a 45. Mediante rotacin suave, se favorece la distribucin homognea de la siembra. Se incuban todas las siembras a 37 durante 24 a 48 horas.

Para calcular el nmero de colonias se eligen placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas stas, basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para obtener la cuenta total.

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E. coli es el germen ms frecuentemente aislado y parece que las cepas obtenidas de pacientes con bacteriuria asintomtica tendran menos factores de virulencia que las aisladas de pacientes con ITU sintomtica. La bacteriuria asintomtica slo habra que tratarla en pacientes que van a ser sometidos a procedimientos instrumentales genitourinarios. No se recomienda su tratamiento al realizar un sondaje urinario. La presencia de bacteriuria asintomtica en ancianos, incluidos los diabticos, no predice la aparicin de ITU sintomtica ni un aumento de mortalidad. El tratamiento de la bacteriuria asintomtica no reduce el riesgo de desarrollar una infeccin sintomtica en el futuro, y s contribuye a un aumento de las resistencias a antimicrobianos. La prevencin se realiza corrigiendo los factores predisponentes: anomalas genitourinarias, evitando sondajes urinarios prolongados o usando sistemas de drenaje cerrado en los sondajes cortos.

Los cultivos en cajas de Petri nos permiten cuantificarlas las colonias y as determinar si hay un nmero considerable de infecciones.

El principal agente causante de infecciones urinarias es la Escherichia Coli, esta se puede tratar empricamente con Nitrofurantona. 9.REFERENCIAS Microbiologa mdica, P.R. 6ta Ed. Elsevier 2009

Murray

Analisis de Orina [en lnea] [Citado el 27 de noviembre de 2011] Disponible en: http://www.tuotromedico.com/temas/ analisis_de_orina.htm# Enfermedades: Infeccin urinario o cistitis [en lnea] [Citado el 27 de noviembre de 2011] Disponible en: http://www.dmedicina.com/enfermed ades/ginecologicas/infeccionurinaria-1

8.CONCLUSIONES La prctica de urocultivo es uno de los mtodos de diagnstico ms utilizados en medicina debido a que brinda gran informacin acerca de las infecciones urinarias los cuales le permiten al clnico evaluar las caractersticas del agente y el posible tratamiento mediante la realizacin de un antibiograma.

Manejo de las infecciones urinarias comunitarias del adulto (IUC) [en lnea] [Citado el 27 de noviembre de 2011] Disponible en: http://www.infecto.edu.uy/terapeutic a/guiaatb/iu.htm#anchor24453

Lindsay E. Nicolle, MD, Asymptomatic bacteriuria. When to screen and when to treat, Infect Dis Clin N Am 17 (2003) 367394

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INFECCIN URINARIA. Manuel Antn Jimnez. Raquel Esteban Siz. Raquel Orts Gmez. Microbiologa mdica de Jawetz, Melnick y Adelberg 18 Ed. 2006