Diluciones seriadas

En ocasiones necesitamos saber cuantas bacterias hay en una muestra. O tal vez sabemos la cantidad y queremos verificarla para propsitos de garanta de calidad. En estos casos usamos tcnicas de enumeracin de bacterias. Existen varias tcnicas para estimar o contar los nmeros bacteriales. Se pueden usar conteos directos, estimados al microscopio y mtodos de turbidez para estimar poblaciones.

El mtodo mas sencillo seria verter 1 ml de muestra en un plato Petri, incubar y contar. Pero cuando hay millones de bacterias que hacer? La solucin es diluir la muestra, inocular las placas y contar los microorganismos. De la muestra diluida podemos recuperar un nmero manejable de microorganismos y luego calculamos el nmero de micoorganismos en la muestra original. Para diluir la muestra usamos diluciones seriadas. Estas son diluciones con incrementos progresivos y regulares, en los cuales el factor de dilucin siempre es igual. Para esto por lo general usamos diluciones en base 10. Esta es la base preferida porque es fcil de manejar y los clculos son fciles de realizar solo tenemos que mover el punto decimal y/o contar los ceros. 100 =1 101 =10 , 10 x 1 102 =100, 10x 10 1/1000 = 0.001 = 10-3 10 X 10 x10 1,000,000 =106 10 X 10 x10 x 10 x 10 x 10 El exponente es igual al nmero de ceros y al numero de veces que movemos el punto decimal. Las diluciones en base 10 se realizan tomando 1.0 ml de la muestra y diluyendo en base 10. 1 ml muestra + 9 ml solvente = 1/10 = 0.1 = 10-1 1 ml muestra + 99 ml solvente = 1/100 = 0.01 = 10-2 Como son razones fraccionales podemos usar cualquier mltiplo que nos de la misma concentracin

Ej. Dilucin 1/100 (concentracin/ml 0.01) 1 ml soluto + 99 solvente (0.01/ ml) 0.01 ml soluto + 0.99 ml solvente (0.01/ ml) 0.1 ml soluto + 9.9 ml solvente (0.01/ml)

La primera dilucin es de 1 ml + 99 = 1/100 = 10-2 La segunda esta 100 veces mas diluida = 1/100x 1/100 = 1/10,000 = 10-4 La segunda esta 100 veces mas diluida que la segunda = 1/100 x 1/100 x 1/100= 1/1,000,000 = 10-6 Cuando hacemos diluciones podemos servir la muestra y obtener un numero razonable de bacterias. Un numero razonable de bacterias es aquel que esta entre 25-250 segn los estndares. Los microbilogos prefieren conteos de 30-300. Numeros fuera de este rango pueden conducir a errores estadsticos.

Normalmente servimos muestras en placas de 1 ml. Esto nos permite estimar el nmero de bacterias por mililitro y calcular el nmero de microorganismos en la muestra original.

Si contamos 43 colonias en la dilucin #2 (1/10,000= 10-4) Significa que la placa tiene 10-4 colonias menos que la muestra original o que la muestra original tiene 104 mas bacterias que la placa. As que las bacterias en la muestra original = (# de bacterias recuperadas X factor de dilucin) 43 x 10,000 = 430,000 = 4.3 x 105 Si dispensamos 0.1 ml de muestra estamos dispensando 1/10 de lo que tenemos en la muestra o dilucin. O sea que si servimos 1/10 (0.1) de una dilucin 1/10,000 estamos diluyendo la muestra a 1/100,000 0.1 x 0.0001 = 0.00001 1/10 x 1/10000 = 100,000 10-1 x 10-4 = 10-5 Por lo tanto si contamos 43 colonias en la dilucin #2 cuando dispensamos 0.1 ml Significa que la placa tiene 10-5 colonias menos que la muestra original o que la muestra original tiene 105 ms bacterias que la placa. As que las bacterias en la muestra original = (# de bacterias recuperadas X factor de dilucin) 43 x 100,000 = 4,300000 = 4.3 x 106