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Sonia alexandra Villamil savillamillf@unal.edu.co Katlin Paola Navarro kpnavarr@unal.edu.

co Medelln, Junio 7 de 2011

OBTENCIN DE EXTENDIDOS CROMOSMICOS Clulas de un cultivo anterior del laboratorio Medio de cultivo: RPMI-1640 Medium. Suplemento con suero fetal bovino al 10% Adicin de mittico: Fitohemaglutinina (20 l) Tiempo de cultivo 56 horas.

37C Tiempo en antimittico: 30 min. (Colcemid o Colchicina) Exposicin a BrdU: 6 horas. El cultivo se centrifuga y se descarta el sobrenadante. Solucin hipotnica de KCl (0.075M) por 6 min. Goteo de fijador fresco con metanol para asegurar la muestra en el porta. Flamear

Para mantener el cultivo por largos perodos de tiempo se adiciona nuevo material de cultivo cada 2 3 das o congelar a temperatura de nitrgeno lquido.

DESCRIPCIN JURKAT
Linfocitos T obtenidos en los 70, de sangre perifrica de un nio de 14 aos con Leucemia Linfoide Aguda. Nmero cromosmico variante, se describir el clon E6-1: Clulas pseudodiploides. El nmero cromosomal estndar es 46, con un 74% de poliploida. Cariotipo: 46,XY,-2,18,del(2) (p21p23),del(18) (p11.2).

APLICACIONES
Anlisis de transduccin de seales de ciertos componentes como ZAP-70, LAT y SLP-76. Respuesta comparativa con clulas normales frente a virus. Comportamiento ante distintos estmulos.

NDICE MITTICO
# Clulas mitticas x 100 = 3.3 # Clulas totales

Conteo de cromosomas
Nmero de cromosomas Cantidad de clulas

69 65 66 63 64 62 60 61 58 59 56 57 52 47 37 43 44 41 42 39 40 49

71

73

35 32

Bimodal: 63 y 57 Media: 57.42 Varianza:24.8

5 1 1 1 1

5 2

4 1 1 1

9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26

CONCLUSIONES
Esta generacin ya est muy distinta a sus caractersticas estndares. Se recomienda hacer un clon de alguna de sus clulas para mantener la homogeneidad o comprar un nuevo cultivo.

Bibliografa

http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default. aspx?ATCCNum=TIB-152&Template=cellBiology#aPropb0644
J.B LPEZ, M.E MRQUEZ. Modelo Experimental para el Estudio Cromosmico en Clulas de Mamfero. Modificado para el Laboratorio de Biotecnologa Animal, Universidad Nacional de Colombia - Sede Medelln V. Ramrez Maldonado. L.F Granger S. Protocolo: OBTENCION DE EXTENDIDOS CROMOSOMICOS DE LINEAS CELULARES. Laboratorio de Biotecnologa Animal y Gentica. Universidad Nacional de Colombia - Sede Medelln Sucai Dong, R. Colin Hughes. Galectin-3 stimulates uptake of extracellular Ca 2+ in human Jurkat T-cells. National Institute for Medical Research, Mill Hill, London NW7 IAA, UK. Received 15 July 1996 Radosaw Januchowski, Pawe P. Jagodzinski. Trichostatin A down-regulates ZAP-70, LAT and SLP-76 content in Jurkat T cells. International Immunopharmacology 7 (2007) 198204.

Gracias!!!