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Qumica Forense y pruebas de ADN La Qumica Forense es otra alternativa a los muchos caminos que puede seguir un qumico

en el mbito de la investigacin, adems de ser una buena opcin a la hora de hacer aportes significativos a la sociedad, donde su actuar, junto con su alto nivel de conocimiento analtico y su capacidad de manejo instrumental, es de vital importancia para descifrar las evidencias y contribuir a la bsqueda de la verdad. Uno de los principios fundamentales en los cuales se rige la Ciencia Forense y especficamente la Qumica Forense se basa en la premisa de que cuando dos objetos entran en contacto, habr un intercambio entre los dos. Es decir, cada contacto deja un rastro, frase que populariz Edmund Locard, padre de la Criminalstica moderna, provocando as un giro en la metodologa investigativa. Es por esto que el qumico forense rastrea este intercambio entre materiales y trae a la luz lo que es invisible a los ojos. Basndose en sus conocimientos y en las tecnologas desarrolladas, tiene la capacidad de rastrear sustancias o huellas que stas dejan en una escena del crimen. El qumico forense, por lo tanto trabaja con sustancias no-biolgicas, tales como pintura, vidrio o lquidos, trazas de plvora provenientes de un disparo, todas muestras que pueden ser muy bien analizadas mediante mtodos analticos apropiados. Entender la evidencia requiere de herramientas provenientes de muchas disciplinas como la Qumica Analtica, la Biologa, Ciencias de los Materiales y Gentica. De hecho, el anlisis de ADN est haciendo que el conocimiento en gentica sea de mucha importancia. Con el paso del tiempo la Qumica Analtica ha adquirido una gran importancia en la investigacin criminal, sobre todo a la hora de conocer la naturaleza intrnseca de cualquier sustancia o elemento y ms an, cuando sirve para auxiliar en la investigacin cientfica de los delitos. Por lo tanto los qumicos forenses tienes tres tareas principales: primero, analizar las evidencias en el laboratorio, luego, se interpreta la informacin que se saca de ellas y por ltimo, se puede llegar a defender lo encontrado, mediante la testificacin del qumico forense en un juicio.

http://www.corpein.com/quimic_forense2.html http://www.ciencia-ahora.cl/Revista19/01QuimicaForense.pdf

Manual de Qumica Forense. Patricia M. Caro. Ediciones la Roca. Buenos Aires, Argentina. 2004 Web del laboratorio Lawrence Livermore Nacional, Forensic Science Center. San Francisco, USA Handbook of Forensic Services 2003. Manual de Laboratorio Forense del FBI. http://www.grafologiauniversitaria.com/policia_cientifica_ciencias_forenses.htm

ADN: Consiste en aislar segmentos de la cadena de ADN (cido dexorribonucleico) y detectar las variaciones individuales; se puede realizar a travs de muestras de sangre, pelo (arrancado: determina el ADN-nuclear; cado/cortado: el ADN- mitocondrial), saliva, semen, restos seos, pulpa dentaria, tejidos blandos y uas. El anlisis de ADN es una de las pruebas ms concluyentes, si bien las muestras de ADN son muy sensibles a las condiciones ambientales (sequedad, humedad...). Actualmente hay investigaciones en ADN que superan la identificacin (vase Anlisis de escritos y documentos en los servicios secretos)

Secuenciador automtico en geles ABI 377


MODO OPERATIVO: PREPARACIN DE LA MUESTRA

Secuenciacin con terminadores fluorescentes


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Introducir en un tubo de PCR la muestra de ADN de doble cadena, el primer a utilizar y la mezcla de reaccin Programar la reaccin de PCR (multiplicacin del ADN) sometiendo la mezcla anterior a 25 ciclos de las siguientes caractersticas: 30s a 94C (desnaturalizacin), 15s a 45C (anillamiento) y 4min. a 60C (elongacin). Enfriar el tubo a 4C Purificar el resultado de la reaccin de secuencia de PCR, en una solucin de etanol y cloruro magnsico: dejar precipitar la mezcla, centrifugar y eliminar por aspiracin el etanol. Resuspender el resultado de la reaccin de PCR en un pequeo volumen de formamida: azul de dextrano. Desnaturalizar la muestra calentndola durnte 2 min. a 90C. Enfriar en hielo.

Cargar los fragmentos de ADN fluorescentes en el gel de secuencia.

Secuenciador automtico ABI 377 - PE Biosystems

La secuenciacin automtica mediante geles desnaturalizantes, se realiza polimerizando un gel de acrilamida/bis entre dos cristales montados adecuadamente sobre el cassette que sirve de soporte para los mismos y que posteriormente se acopla en el secuenciador automtico para proceder a la carga de la muestras. El nmero de muestras que podemos cargar en cada gel, viene determinado por el nmero de pocillos que posee el peine ( de dientes de tiburn) que utilicemos. Hay peines de cuatro tamaos distintos: de 36, 48, 64 y 96 pocillos.

La electroforesis se desarrolla durante 7 horas, y se puede realizar una lectura de unos 700pb aproximadamente, dependiendo siempre de la calidad del ADN, de la correcta cuantificacin del mismo, de la utilizacin del primer adecuado, y de la polimerizacin correcta del gel de acrilamida/bis principalmente. Cuando las muestras a secuenciar tienen una longitud no superior a 400pb, podemos disminuir el tiempo de la electroforesis a 3.5 horas, aumentando la velocidad de barrido del laser, y el resultado es igualmente optimo. IIB - CSIC

Principio de funcionamiento

Mtodo de exploracin por laser

Codificacin cromtica de las bandas de electroforsis

Durante la electroforesis las muestras pasan por delante de un haz de luz UV procedente de un laser de argn. La fluorescencia emitida por cada fragmento de ADN, correspondiente a la emisin de fluorescencia del nucletido incorporado en 3(para secuenciacin automtica empleando terminadores fluorescentes), es recogida por una cmara CCD, encargndose el software del

equipo de asignar a la fluorescencia emitida la base correspondiente.

Recogida de datos
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Colocar el secuenciador, el casete con el gel y cargar en los pocillos del mismo las muestras.de ADN a secuenciar. Aplicar el voltaje necesario para desarrollar la electroforesis de forma que dichos fragmentos migren y se separen en funcin de su tamao. Cuando al migrar los fragmentos alcanzan la zona de lectura, el haz del lser, que se est desplazando horizontalmente de forma contnua a lo largo del cristal, excita los fluoroforos. La luz emitida se proyecta hacia un espectrgrafo, dotado de una cmara CCD, donde se separa cromticamente. El software del sistema contiene informacin sobre los fluoroforos que se estn utilizando, y sus longitudes de onda y proporciona los filtros adecuados para recoger las intensidades de luz que llegan a la cmara CCD. La pantalla del ordenador visualiza, en tiempo real, la informacin que se recibe desde el secuenciador ABI Prism 377.

Cromatograma En el secuenciador ABI 377se pueden leer unas setecientas bases, en la imagen unas cuarenta. Aparecen los picos de colores y en la parte superior de estos la base con la que se corresponden.

Procesado de los datos

Finalizada la fase de lectura, antes de ser analizados, a los datos se les aplica un filtro matemtico que corrige cualquier solapamiento de los espectros de emisin ya que, aunque los terminadores presentan mximos de emisin a difererentes longitudes de onda, los espectros se solapan en cierta medida. El software utilizado procesa automticamente los datos recogidos en una secuencia de bases, los analiza y los visualiza en el monitor.

Gel de secuencia: cada uno de los carriles corresponde con una muestra, y cada una de las bandas de colores con una de las bases del ADN . El ordenador identifica color con base y dibuja un cromatograma con los picos de colores y su correspondiente base

IIB - CSIC
http://www.iib.uam.es/servicios/seq/otros/SecuenciaADN/SecuencaciaADN.html#aplicaciones

Estudio del ADN


Secuenciacin automtica de ADN
por la Dra. Gemma Rodrguez Tarduchy y Mara Concepcin Santiago Martnez Servicio de Secuenciacin automtica de ADN Instituto de Investigaciones Biomdicas (IIB - CSIC)

http://www.istockphoto.com/stock-photo-7250710-adn-1.php http://astrosurf.com/luxorion/Bio/ http://psihoghid.ro/2011/05/structura-adn-acidul-dezoxiribonucleic%E2%80%93%E2%80%9Cdesoxyribonucleic-acid-%E2%80%93-dna%E2%80%9D/