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Tamao variable (5 a 10 mm) Ubicacin siendo en la mayora de los tipos celulares central. El ncleo tiene tres funciones primarias, todas ellas relacionadas con su contenido de ADN. Ellas son: 1. Almacenar la informacin gentica en el ADN. 2. Recuperar la informacin almacenada en el ADN en la forma de ARN. 3. Ejecutar, dirigir y regular las actividades citoplasmticas, a travs del producto de la expresin de los genes: las protenas. En el ncleo se localizan los procesos a travs de lo cuales se llevan a cabo dichas funciones. Estos procesos son: 1. La duplicacin del ADN y su ensamblado con protenas (histonas) para formar la cromatina. 2. La transcripcin de los genes a ARN y el procesamiento de stos a sus formas maduras, muchas de las cuales son transportadas al citoplasma para su traduccin y 3. La regulacin de la expresin gentica.
La envoltura nuclear
La envoltura est formada por dos membranas concntricas interrumpidas por poros nucleares y por la lmina nuclear.
La fosforilacin de las laminas provoca el desensamble de la lmina nuclear causando la ruptura de la envoltura al inicio de la divisin celular.
La lmina nuclear confiere estabilidad mecnica a la envoltura nuclear. Adems, al interactuar con la cromatina participa en la determinacin de la organizacin tridimensional del ncleo interfsico. Si bien la formacin de la lmina no se requiere durante los pasos iniciales, la organizacin de la envoltura es indispensable para el crecimiento posterior y el mantenimiento de su integridad. Las laminas se incorporan luego que la cisterna perinuclear rodea al ADN y se inicia el transporte entre el ncleo y el citoplasma. La envoltura nuclear es un derivado del sistema de endomembranas, siendo esto evidente al inicio de la divisin celular, cuando la envoltura se desorganiza y pasa a formar parte del sistema de cisternas y
vesculas del retculo endoplsmico. La aparicin de la envoltura nuclear permiti que los eucariontes aislaran los procesos genticos principales, como la autoduplicacin del ADN o la sntesis de ARN. Adems esto posibilit que el ARNm se modifique dentro del ncleo antes de ser traducido en los ribosomas. Estas modificaciones no ocurren en los procariontes, ya que a medida que la ARN polimerasa sintetiza el ARN, simultneamente el extremo 5 se une al ribosoma y comienza la traduccin.
Ocho columnas proteicas, que forman las paredes laterales del poro. Un anillo externo, formado por ocho unidades proteicas. Un anillo interno, tambin con estructura octamrica. Protenas de anclaje que fijan cada columna al espacio perinuclear. Protenas radiales que se proyectan desde las columnas hacia la luz del poro, a manera de diafragma
Protenas fibrilares fijas al anillo interno y externo. En la cara nuclear convergen para formar una canastilla o cesta. A lo largo de estas fibrillas se ubican nucleoporinas que intervienen en el transporte de sustancias a travs del poro. Un poro central o abertura.
proyectan dentro del compartimiento nuclear. Se cree que la canasta puede ser un rea importante de paso para la preparacin de las ribonucleoprotenas (RNP) antes de ser exportadas. Las molculas de mayor tamao requieren de una protena transbordadora o carioportina. La superfamilia de carioportinas esta integrada por: importinas . exportinas y transportinas .
Importacin de protenas
Las importinas son heterodmeros, formados por dos subunidades, la subunidad-a se une a la NSL de la protena nuclear permitiendo la unin con la subunidadad-b. Esta unin origina una importina funcional que lleva unida a la protena nuclear a ser transportada. El complejo importina funcional se pone en contacto con los filamentos citoslicos, donde guiado por las nucleoporinas (Nup), llega al poro central. La translocacin de complejo importina/carga es regulado por la pequea RanGTPasa que se une a la subunidad b de la importina. Esta b-importina es la encargada de interactuar con el poro provocando su dilatacin y posibilitando el ingreso de la protena nuclear. La translocacin de protenas es un proceso activo. Cuando el complejo penetra al interior del ncleo, las subunidades de importina se separan y la carga es liberada. La disociacin de las subunidades causa entonces un nuevo cambio en su forma, dejando al descubierto la NES de cada subunidad. Otras protenas en el poro central reconocen la NES y retornan las subunidades al citoplasma.
Exportacin de ARN
Los ARN maduros se asocian a protenas llamadas transportinas, las cuales actan como transbordadores permitiendo el pasaje de ARN al citoplasma. Los ARNm maduros que presentan la poli A se asocian con varias protenas, formando una partcula de ribonucleoprotena (RNP). Estas partculas se mueven linealmente a travs de la canasta nuclear. Al igual que las importinas, las RNP son recicladas hacia el ncleo. En el citoplasma, las CRBP ( del ingls, cytoplasmic RNA-binding proteins) reemplazan a las RNP para guiar a los ARNs a sus destinos citoslicos correctos.
Cromosomas y Cromatina
El ncleo contiene los cromosomas de la clula. Cada cromosoma consiste en una molcula nica de ADN con una cantidad equivalente de protenas. Colectivamente, el ADN con sus protenas asociadas se denomina cromatina. La mayor parte de las protenas de la cromatina consisten en copias mltiples de cinco clases de histonas. Estas protenas bsicas son ricas en residuos de arginina y lisina cargados positivamente. Por esta razn se unen estrechamente con los grupos fosfatos (cargados negativamente) del ADN. La cromatina tambin contiene pequeas cantidades de una amplia variedad de protenas no histnicas y RNP. La mayora de ellas son factores de transcripcin (por ej., el receptor esteroide), siendo su asociacin con el ADN pasajera. Estos factores regulan que parte del ADN ser transcripta en ARN.
H1 y formacin de la fibra de 10 nm
Cuando el cromosoma en interfase se esparce artificialmente sobre agua, tiene la apariencia de un collar de perlas. Las perlas son los nucleosomas, las unidades de enrollamiento de la cromatina. Los nucleosomas estn formados por un centro o "core" de histonas. Dicho centro posee dos copias de cada una de las siguientes histonas: H2A; H2B; H3 y H4 Alrededor del centro de histonas, 146 pares de bases del ADN se enrollan en dos vueltas. La unin de las histonas al ADN no depende de una secuencia particular de nucletidos, sino de la secuencia de aminocidos de la histona. Las histonas son unas de las molculas ms conservadas durante el transcurso de la evolucin. La histona H4 en el ternero difiere de la H4 de la planta de poroto en slo 2 residuos de aminocidos de una cadena de 102. Alrededor de 60 pares de bases de ADN unen un nucleosoma con el prximo. Cada regin de unin es el ADN espaciador. La quinta histona, la H1, conecta a los nucleosomas y acta como una banda de goma, mantenindolos juntos dentro de una misma cuerda enrollada. Esta estructura se conoce como fibra de 10nm, siendo el primer grado del empaquetamiento de la cromatina. Los nucleosomas se organizan, a su vez, en fibras de 30nm (solenoide), girando a manera de resorte alrededor de un eje virtual. Esta estructura es mantenida por la interaccin de las H1 de nucleosomas cercanos. En el siguiente nivel de empaquetamiento, las fibras de 30 nm se organizan en una serie de bucles o asas superenrolladas. Estos bucles se estabilizan gracias a la interaccin con las protenas de la matriz nuclear o andamiaje nuclear (scaffold).
Empaquetamiento de la fibra de 30 nm
El grado de condensacin de los dominios de cromatina se mantiene principalmente debido a la asociacin con la matriz nuclear y a protenas asociadas como la topoisomerasa II o girasa, encargada de controlar el grado de superenrollamiento del ADN. La unin entre la cromatina y la matriz se da a nivel de zonas altamente conservadas, denominadas secuencias SAR o MAR (scaffold associated regions/ matrix attachment regions). Las SAR son regiones de varios cientos de pares de bases ricas en residuos de adenina y timina, abundantes en la heterocromatina. Con coloraciones especiales los cromosomas, revelan diferencias estructurales de importancia funcional. Las bandas oscuras consisten en cromatina altamente condensada, mientras que las bandas claras se corresponden con cromatina ms laxa. El examen de la cromatina en bandas claras y oscuras revela que ambos tipos de cromatina estn acomodados en bucles de distintos tamaos y que a su vez se proyectan desde el andamiaje plegado. El andamiaje est muy plegado en la heterocromatina, y es ms lineal en las bandas de eucromatina, formando bucles ms amplios. Las histonas de la eucromatina estn fuertemente acetiladas. Estos cambios afectaran el grado de empaquetamiento de la eucromatina, hacindola ms accesible para la transcripcin de sus genes. Las caractersticas de la hetero y eucromatina son: Caractersticas de la Cromatina Tipo de cromatina Eucromatina Heterocromatina Estado fsico Laxa condensada Cambio qumico Acetilada Metilada Tipo de genes Activos Silentes Replicacin Fase S temprana Fase S tarda
Los cromosoma en metafase tambin poseen un revestimiento de RNP. Dicho revestimiento deriva de los componentes del nuclolo. Estos cromosomas se constituyen en el vehculo para dividir el material nucleolar entre las futuras clulas hijas. El empaquetamiento de la cromatina permite confinar al ADN 6 dentro del ncleo. La molcula de ADN de un cromosoma humano contiene 50 x 10 pares de nucletidos 6 en el cromosoma ms pequeo (1.7 cm con la molcula extendida) a 250 x 10 pares de nucletidos en el ms largo ( 8.5 cm). Midiendo extremo con extremo el total de cromosomas de una clula humana diploide, el ADN se extiende ms de 2 metros. El empaquetamiento del ADN en forma de cromatina, no solamente le permite entrar dentro de los lmites del ncleo, sino tambin lo protege del ataque de las nucleasas.
El cromosoma eucariota
Cada cromosoma eucariota consiste en una molcula simple de ADN de alrededor de 150 millones de pares de nucletidos. La molcula de ADN en el cromosoma eucariota es lineal, por lo tanto posee dos extremos (en contraste con el cromosoma bacteriano que es circular). La molcula de ADN de un cromosoma tpico eucariota contiene: Un conjunto lineal de genes que codifican para ARN y protenas interrumpido por Muchas secuencias de ADN no codificante.
El ADN no codificante incluye: Secuencias de aproximadamente 170 nucletidos de ADN satlite, repetidas miles de veces, que corresponden al centrmero.
Secuencias repetitivas en los extremos del cromosoma llamadas telmeros. Mltiples secuencias sealizadoras altamente conservadas, denominadas origen de replicacin (ORI), necesarias para que se realice la duplicacin del ADN en un tiempo breve.
Secuencias de un cromosoma eucariota estable en las diferentes etapas del ciclo celular
El centrmero es una constriccin primaria localizada centralmente o hacia los extremos de cada cromosoma. El ADN centromrico como ya mencionamos es altamente repetitivo y se encuentra siempre condensado siendo parte de la heterocromatina.
Sntesis de telmeros por la telomerasa. a) La telomerasa se une al telomero; b) La telomerasa alarga los extremos de la cadena 3`; c) La telomerasa avanza; d) La ADN polimerasa sintetiza la cadena retrasada.
Los telmeros son cruciales en la vida de la clula. Ellos son necesarios para la duplicacin completa del cromosoma, los protegen de las nucleasas, evitan que los extremos del cromosoma se fusionen entre s y facilitan la interaccin del cromosoma con la envoltura nuclear.
Los telmeros de las clulas humanas contienen la secuencia 5'TTAGGG3, que se repite aproximadamente 2000 veces.
5 '... ..TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG TTAGGG..... 3 ' 3 '... ..AATCCC AATCCC AATCCC AATCCC A..... 5 ' La cadena rica en guanosina corre en direccin 5' a 3', extendindose 12 a 15 nucletidos ms all de la cadena rica en citosina, formando un apndice en una de las cadena en cada extremo del cromosoma. Este desnivel se mantiene de generacin en generacin por medio de una enzima especial, la telomerasa, que agrega nuevas unidades al extremo 3' de la cadena rica en guanosina. La telomerasa es una ribonucleoprotena, la cual provee un molde de AAUCCC que gua la insercin de la secuencia TTAGGG. Entonces la telomerasa es una retrotranscriptasa, sintetiza ADN a partir de un molde de ARN. Las clulas con telomerasa activa pueden compensar el acortamiento de los telmeros durante la duplicacin del ADN. La telomerasa activa se encuentra solamente en: Las clulas de la lnea germinal, incluyendo clulas troncales embrionarias Eucariotas unicelulares Clulas cancerosas
Submetacntricos: un par de brazos es ms corto que el otro, pues el centrmero se encuentra alejado del centro. Acrocntricos: el centrmero se halla prximo a uno de los extremos, por lo tanto uno de los brazos es casi inexistente.
Tipos de cromosomas
Los cromosomas acrocntricos poseen una masa de cromatina llamada satlite, en el extremo del brazo corto. El satlite se halla aislado del resto del cromosoma por la constriccin secundaria. La zona aledaa al satlite de los cromosomas acrocntricos contribuye a formar el nuclolo. El ms corto de los dos brazos del cromosoma se llama p; el ms largo es el brazo q.
Una error comn es suponer que cada banda representa un slo gen. En realidad las bandas ms pequeas contienen ms de un milln de pares de nucletidos y potencialmente cientos de genes. Por ejemplo, el tamao de una banda pequea es igual a toda la informacin gentica de una bacteria. El anlisis del cariotipo es una de muchas tcnicas que nos permiten investigar las miles de enfermedades genticas que se pueden encontrar en los seres humanos.
Cariotipo femenino normal: Los autosomas se ordenan en grupos por tamao y posicin del centrmero.
Mapa estndar (Idiograma) de patrones de bandeo del cromosoma 2. Los nmeros corresponden a las regiones y bandas. A la derecha , idiograma del cariotipo humano masculino.
El nuclolo
En el nuclolo tiene lugar la formacin de subunidades ribosmicas, la sntesis y procesamiento de ARNr y actualmente se considera que desempea un importante papel en la regulacin del ciclo celular. El nuclolo es un aglomerado de fibras de cromatina de distintos cromosomas. En el hombre, los pares 13,14, 15, 21 y 22, aportan sectores de cromatina que forman el nuclolo. Todos estos cromosomas son acrocntricos y presentan constricciones secundarias denominadas organizadores nucleolares (NOR), donde estn los genes que codifican ARNr.
Esquema de nuclolo indicando los bucles de los 10 cromosomas con los genes para el ARNr
El nuclolo aparece como una estructura simple carente de componente membranoso, en la que diferenciamos dos regiones: Una zona fibrilar central, formada por ADNribosmico y ARNr naciente
Un zona granular perifrica donde los grnulos estn formados por las subunidades ribosmicas en proceso de ensamblado.
Los nuclolos, al igual que la envoltura nuclear desaparecen en la mitosis y se reorganizan alrededor de los segmentos de ADNr, que como su nombre lo indica, codifica ARNr. Siendo el ARNr el ms abundante dentro de los tipos de ARN, existen mltiples copias del gen que lo codifica. El genoma humano presenta alrededor de 200 copias del gen para ARNr. Estos genes que promedian los 10.000 nucletidos se localizan en tndem. Cada gen est separado por ADN espaciador y presenta asociado una molcula de ARN polimerasa I. De cada enzima parten perpendicularmente los ARNr nacientes, tomando la apariencia caracterstica de un rbol de navidad. Cada gen produce un transcripto llamado ARNr 45S que ser luego procesado. El tamao del nuclelo vara entre clulas y en la misma clula segn su actividad, pues si bien la velocidad de transcripcin puede acelerarse, el ensamblado de las subunidades ribosomales requiere de un tiempo ms o menos constante; es por ello que en los nuclolos grandes observamos mayor proporcin de componente granular.
Microfotografa electrnica de los genes nucleolares (ADNr) durante la transcripcin. Observe como la longitud de los transcriptos primarios aumenta a medida que nos alejamos del punto de inicio.