FISIOLOGIA Y METABOLISMO BACTERIANO

Gustavo Varela precursoras de la biosntesis, se conoce como catabolismo. Vimos de este modo los 2 tipos de transformaciones qumicas que ocurren simultneamente en la bacteria, y as el metabolismo es el resultado colectivo de ambas reacciones. Las reacciones catablicas resultan en la liberacin de la energa qumica contenida en los nutrientes, mientras que las anablicas la consumen. Por lo tanto la energa liberada como resultado de las reacciones de xido-reduccin del catabolismo debe ser almacenada y transportada de algn modo. Una forma es como compuestos con uniones fosfato de alta energa, y son estos los que luego sirven como intermediarios en la conversin de la energa conservada en trabajo til. El compuesto fosfato de alta energa ms importante en los seres vivos es el adenosintrifosfato (ATP). Este se genera en la clula bacteriana por 2 procesos diferentes, llamados: fosforilacin a nivel del substrato y fosforilacin oxidativa. METABOLISMO PRODUCTOR DE ENERGIA En los seres vivos, la utilizacin de la energa potencial contenida en los nutrientes se produce por reacciones de oxido-reduccin. Qumicamente la oxidacin esta definida por la prdida de electrones (e-) y la reduccin por la ganancia de los mismos. En bioqumica, las reacciones de oxido-reduccin frecuentemente incluyen no slo la transferencia de e-sino de tomos enteros de hidrgeno, por lo que se conocen tambin con el nombre de reacciones de deshidrogenacin. En reacciones de este tipo hay sustancias que ceden e(dadoras) y otras que los aceptan (aceptoras). En las bacterias de inters mdico los sistemas de oxidoreduccin que transforman la energa qumica de los nutrientes en una forma biolgicamente til, incluyen la fermentacin y la respiracin. En la fermentacin tanto la molcula dadora como la aceptora de electrones, son compuestos orgnicos, mientras que en la respiracin hay un aceptor final exgeno, que cuando es el oxgeno hablamos de respiracin aerobia, y cuando es un compuesto inorgnico hablamos de respiracin anaerobia. FERMENTACION: En la fermentacin, los e- pasan del dador, un intermediario formado durante la degradacin de la molcula de substrato, hacia un aceptor constituido por algn otro intermediario orgnico, tambin generado durante el catabolismo del substrato inicial. Por lo tanto, este proceso de oxido- reduccin no requiere el aporte exgeno de un aceptor final de electrones. Hay distintos tipos de fermentaciones, pero todas llevan a una oxidacin parcial de los tomos de carbono del substrato inicial y liberan por lo tanto slo una pequea parte de la energa potencial contenida. El rendimiento

Las bacterias son seres vivos y estn compuestas al igual que las clulas eucariotas por protenas, polisacridos, lpidos, cidos nucleicos, entre otros. Estas molculas a su vez forman parte de estructuras celulares ms complejas, como por ejemplo la pared celular y la membrana citoplasmtica. Una caracterstica de los seres vivos es la capacidad para sintetizar sus propios constituyentes a partir de nutrientes que toman del medio externo. El crecimiento bacteriano se define como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de la clula. Se trata de un proceso complejo, que supone la replicacin de todas las estructuras y componentes celulares a partir de los nutrientes exgenos. El conocimiento de la fisiologa y del metabolismo bacteriano tiene algunas aplicaciones prcticas: - Permite conocer el modo de vida y el hbitat de diferentes especies bacterianas. El ser humano actuando como hospedero por ejemplo, ofrece una variedad de nichos ecolgicos que se diferencian entre s por aspectos fsicos y qumicos (temperatura, concentracin de O2, pH, presin osmtica, etc.) en los cuales pueden crecer y multiplicarse distintas especies bacterianas, de acuerdo a sus requerimientos nutricionales. - Permite formular medios de cultivo para el aislamiento e identificacin de los patgenos participantes.alguna macromolcula esencial para la sntesis de bacteria. El trmino metabolismo se refiere al conjunto de reacciones qumicas que tiene lugar en la clula, y tiene 3 funciones especficas a saber: - obtener energa qumica del entorno, almacenarla, para utilizar luego en diferentes funciones celulares, -convertir los nutrientes exgenos en unidades precursoras de los componentes macromoleculares de la clula bacteriana, - formar y degradar molculas necesarias para funciones celulares especficas, como por ejemplo, movilidad y captacin de nutrientes. El metabolismo tiene lugar a travs de secuencias de reacciones catalizadas enzimticamente, y se divide en anabolismo y catabolismo. El proceso resulta cual la conoce como anabolismo, y como por el en la produccin de nuevo material celular, tambin se denomina biosntesis. La biosntesis es un proceso que requiere energa, por lo tanto las bacterias deben ser capaces de obtenerla de su entorno para crecer y, eventualmente, multiplicarse. El conjunto de reacciones degradativas de los nutrientes para obtener energa o para convertirlos en unidades

Va de la pentosa fosfato. Mientras que la va glucoltica es la ms importante en clulas eucariotas y procariotas, no es la nica. El shunt de las pentosas es una ruta multifuncional para la degradacin de hexosas, pentosas, y otros hidratos de carbono. Para los fermentadores heterolcticos es la principal fuente productora de energa, aunque la mayora de las bacterias utilizan esta va como fuente de NADPH y de pentosas para la sntesis de nucletidos. La va de Entner-Doudoroff es la ruta principal para la degradacin de la glucosa en bacterias aerobias estrictas como Neisseria y Pseudomonas. Como sucede en la va de las pentosas, aqu slo se produce una molcula de ATP por molcula de glucosa degradada.

energtico de este proceso es menor que el de la respiracin. En las bacterias se encuentran las 3 vas centrales del metabolismo intermediario de los hidratos de carbono: - la va glucoltica o de Embden Meyerhof Parnas - la va de pentosa fosfato o shunt de las pentosas - la va de Entner-Doudoroff. La va glucoltica para la degradacin de la glucosa se divide en 3 etapas principales. La etapa 1 es preparativa, con reacciones que no son de oxido-reduccin, sin liberacin de energa, y con formacin de 2 intermediarios de 3 tomos de carbono cada uno. En la etapa 2 ocurren reacciones de oxido-reduccin, con liberacin de energa, formacin de ATP por el proceso de fosforilacin a nivel del sustrato (el ATP es generado durante un paso enzimtico especfico), y se forman 2 molculas de piruvato. En la etapa 3 nuevamente ocurren reacciones de oxido-reduccin y se generan los productos finales de la fermentacin, que varan segn la bacteria en cuestin. Slo una pequea parte del total de la energa libre que potencialmente puede derivar de la degradacin de una molcula de glucosa queda disponible por esta va, debido a que los productos finales son compuestos en los que el carbono se encuentra todava en estado reducido. Por cada molcula de glucosa que entra a esta va, se forman 4 molculas de ATP, y como se consumen 2 en la etapa 1, el balance neto es de 2 molculas de ATP por molcula de glucosa fermentada. El destino final del metabolito clave, el piruvato, depende de los procesos empleados para la regeneracin de NAD a

Destino final del piruvato. El cido pirvico derivado de la glucosa es un compuesto clave en el metabolismo fermentador de los hidratos de carbono. En su formacin, el NAD es reducido a NADH, y ste debe reoxidarse nuevamente a NAD para alcanzar el equilibrio final de oxidoreduccin. Las bacterias se diferencian de las clulas eucariotas por la forma en que eliminan el piruvato; en las bacterias la oxidacin incompleta es la regla, acumulndose gran cantidad de metabolitos finales de la fermentacin. El estudio y conocimiento de las fermentaciones bacterianas tiene importancia prctica, ya que, proporcionan productos de valor industrial, y son de utilidad en el laboratorio para la identificacin de diferentes especies. Entonces, de acuerdo a los productos finales de la fermentacin, tenemos: - Fermentacin alcohlica: el tipo de fermentacin ms

antigua que se conoce es la produccin de etanol a partir de la glucosa. Aunque ciertas bacterias producen alcohol, ste es elaborado por otras vas. - Fermentacin homolctica: Todos los miembros del gnero Streptococcus, Pediococcus y muchas especies de Lactobacillus fermentan la glucosa fundamentalmente a cido lctico con poca acumulacin de otros productos finales. El piruvato en este caso se reduce a cido lctico por accin de la enzima lctico deshidrogenasa, actuando el NADH como dador de e-. Esto ocurre en la etapa 3 de la va glucoltica. - Fermentacin heterolctica: En este tipo de fermentacin slo la mitad de la glucosa se convierte en cido lctico, el resto en una mezcla de CO2, cido frmico, cido actico, etc. En esta fermentacin se emplea fundamentalmente el shunt de las pentosas, y se da en bacterias del gnero Leuconostoc y Lactobacillus. - Fermentacin del cido propinico: es caracterstica en algunas bacterias anaerobias como Propionibacterium (bacilo Gram+ no esporulado). Este tipo de fermentacin tiene la ventaja de que genera una molcula ms de ATP. - Fermentacin cido-mixta: Es caracterstica de la mayora de las enterobacterias. Bacterias como Shigella, Salmonella y E.coli fermentan las hexosas a travs del piruvato a cido lctico, cido actico, succnico y frmico. - Fermentacin de butanodiol: Varias bacterias como

Enterobacter, Serratia y Bacillus producen 2-3 butanodiol durante la fermentacin de la glucosa. Este deriva de la condensacin de 2 molculas de piruvato en una molcula neutra de acetona que luego es reducida a 2-3 butanodiol. - Fermentacin del cido butrico: Se ve en bacterias del gnero Clostridium (bacilo Gram+, anaerobio, esporulado). Si bien hasta ahora nos hemos referido slo a la fermentacin de hidratos de carbono como procedimiento para obtener energa por parte de las bacterias, debemos destacar que otros compuestos orgnicos pueden ser fermentados como, por ejemplo, aminocidos (ala-nina, glicina). En el caso de los proteolticos la Clostridium fermentacin de aminocidos ms caracterstica es la reaccin de Stickland. Hemos discutido ms arriba el metabolismo de los hidratos de carbono en ausencia de un aceptor externo de electrones y vimos que slo una pequea parte de la energa potencial contenida en el substrato es liberada. Esto se debe fundamentalmente a que la diferencia entre los potenciales de xido-reduccin entre la molcula dadora inicial y la molcula aceptora final es muy pequea. Otras bacterias tienen la capacidad de oxidar completamente el substrato inicial a CO2, por el proceso conocido como respiracin. RESPIRACION AEROBIA Es el proceso por el cual un substrato es oxidado completamente a CO2 y H2O, con participacin de una cadena de e- (ubicada en la membrana citoplasmtica) y el aceptor final es el oxgeno molecular. Los primeros pasos en la respiracin de la glucosa son idnticos a los de la gluclisis, pero mientras en esta ltima el piruvato es convertido en productos finales de la fermentacin (cido lctico, propinico, etc.) en la respiracin es oxidado completamente a CO2 a travs del ciclo de Krebs. Por cada molcula de piruvato oxidada a travs del ciclo se generan 3 molculas de CO2. Al igual que en la fermentacin, los e- generados en el ciclo de Krebs, pasan a coenzimas que tienen NAD. Sin embargo, en la respiracin, los e- del NADH son transferidos al oxgeno para regenerar NAD a travs de un sistema transportador, en lugar de cederlos al piruvato. SISTEMAS TRANSPORTADORES DE ELECTRONES Y GENERACION DE ATP. Estos sistemas estn compuestos de "carriers" de easociados a la membrana citoplasmtica y tienen 2 funciones bsicas, 1. aceptar e- de un donador y cederlos a un aceptor, y 2. conservar algo forma energa liberadael proceso transporte en de la de ATP por durante ese

conocido como fosforilacin oxidativa. Existen varios tipos de enzimas de xido-reduccin y protenas transportadoras de e-, entre los que se destacan las NAD deshidrogenasas, las flavoprotenas, y los citocromos. Las flavoprotenas contienen un derivado de la riboflavina como grupo prosttico que se reduce y oxida alternativamente. La riboflavina, conocida como vitamina B2, es requerida como factor de crecimiento por algunas bacterias. Los citocromos son protenas que tienen anillos porfirnicos con hierro y tambin se oxidan y reducen alternativamente. Hay diferentes tipos de citocromos y se distinguen por sus potenciales de reduccin. Se los designa con letras a, b, c, etc. Tambin estn las quinonas, sustancias liposolubles relacionadas con la vitamina K, que participan en el transporte de e-. Para entender la manera por la cual se genera ATP durante el transporte de electrones debemos recodar su orientacin con respecto a la membrana citoplasmtica de la clula bacteriana. La cadena est ubicada como ya dijimos en la membrana citoplasmtica, de tal modo que durante el proceso de transporte, hay una separacin fsica entre protones y electrones. Los protones quedan fuera de la clula mientras que los e- dentro, como consecuencia de esto se genera a travs de la membrana citoplasmtica un gradiente de pH y un potencial elctrico, estando el lado externo cido y cargado positivamente y, el interior alcalino y cargado negativamente. A pesar de su pequeo tamao ni los H+ ni los OH- atraviesan libremente la membrana, por lo el tanto, equilibrio no puede establecerse espontneamente. Este "estado energizado de la membrana", similar a una batera puede ser usado por la clula para realizar un trabajo til, por ejemplo, motilidad o sntesis de ATP. Para la sntesis de ATP un componente fundamental del proceso es una ATPasa de

membrana; esta enzima cataliza la reaccin reversible entre ADP y ATP. Operando en una direccin y utilizando el gradiente de protones generado durante el transporte, cataliza la formacin de ATP a partir de ADP ms Pi. Existe una variedad de agentes qumicos llamados desacopladores que inhiben la sntesis de ATP durante el transporte de e- sin afectar el propio proceso de transporte. Ejemplos de estos agentes son el dicumarol y el dinitrofenol. Son sustancias liposolubles que impiden la formacin del gradiente de Ph y elctrico, favoreciendo el pasaje de protones a travs de la membrana, y de este modo inhibiendo la sntesis de ATP. La Polimixina B (un antimicrobiano) se adosa de manera especfica a la superficie externa de la membrana, alterando su estructura y propiedades osmticas. Se produce entonces una prdida de metabolitos y la inhibicin de cierto nmero de procesos bioqumicos que tienen lugar a ese nivel, como el transporte de e- y la sntesis de ATP entre otros. Otras sustancias, por ejemplo, cianuro o azida de sodio bloquean el propio sistema de transporte y se denominan inhibidores. Tanto los desacopladores como los inhibidores son venenos celulares, que actan tanto BALANCE ENERGETICO DE LA RESPIRACION El resultado neto de las reacciones del ciclo de Krebs es la oxidacin completa del piruvato a CO2 con formacin de 4 molculas de NADH y 1 de FADH. El NADH y el FADH pueden ser reoxidados por el sistema transportador de e-. Un total de 15 molculas de ATP son sintetizadas en cada vuelta del ciclo, por lo tanto, ya que la glucosa rinde 2 molculas de piruvato, 30 molculas de ATP son sintetizadas por cada molcula de glucosa que entra al ciclo de Krebs. Esto, sumado a las 6 molculas de la reoxidacin del NADH y las 2 del va glucoltica da un total de 38 molculas de ATP por molcula de glucosa respirada. Adems de sus funciones como mecanismo generador de energa, el ciclo de Krebs sirve como productor de metabolitos claves para la biosntesis. La reduccin del oxgeno da lugar a la formacin de radicales libres que son muy txicos para la bacteria. Entre los ms importantes se encuentra el radical superxido. Este es eliminado en las bacterias aerobias y aerotolerantes por la enzima superoxidodismutasa que cataliza la formacin de perxido de hidrgeno, compuesto tambin txico que es degradado a su vez por enzimas como catalasa y peroxidasa a oxgeno molecular y H2O. Estas enzimas estn ausentes en las bacterias anaerobias estrictas, explicando en parte la susceptibilidad de estas al oxgeno. RESPIRACION ANAEROBIA: En las bacterias

aerobias obligadas el O2 es el aceptor final de e-. Sin embargo, las bacterias anaerobias facultativas pueden utilizar, en ausencia de O2, una variedad de compuestos inorgnicos como aceptores finales de epor ejemplo, nitrato, fumarato, sulfato, etc. REGULACION DEL METABOLISMO: Cada reaccin metablica est regulada no slo con respecto a otras reacciones sino tambin con respecto a la concentracin de nutrientes en el medio. La regulacin se realiza a diferentes niveles: -Regulacin de la actividad enzimtica a travs de: enzimas alostricas, inhibicin por retroalimentacin, activacin alostrica, y cooperatividad. -Regulacin de la sntesis de enzimas por: induccin enzimtica y represin por productos finales. En las bacterias anaerobias facultativas la fermentacin (como nica va de generacin de energa) es bloqueada en presencia de oxgeno, asegurando que el suministro de energa se produzca por la respiracin, que consume menos glucosa y acumula menos lactato. En este fenmeno, conocido como efecto Pasteur, la enzima fosfofructoquinasa es activada o inhibida segn la relacin ATP/ADP, regulando as el consumo de glucosa. Este es un ejemplo de regulacin de la actividad enzimtica por una enzima alostrica. El ejemplo clsico de regulacin a nivel de la sntesis de enzimas lo constituye el opern lactosa. Hay 3 enzimas que participan en la utilizacin de la lactosa (-galactosidasa, galactsido permeasa y galactsido transacetilasa) que tienen un promotor nico. En ausencia de lactosa, la transcripcin para estas enzimas est bloqueada por accin de un represor que se une al promotor inhibiendo la accin de la ARN polimerasa. Cuando se agrega lactosa al medio, sta se une al represor, bloqueando de este modo su unin al promotor, ARN polimerasalay la sntesis de las 3 accin de la permitiendo as enzimas. CRECIMIENTO BACTERIANO Como ya vimos ms arriba puede ser definido como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de la clula. Las bacterias como grupo son extremadamente verstiles y tienen una capacidad enorme para utilizar una amplia gama de nutrientes que va desde compuestos inorgnicos simples a compuestos orgnicos ms complejos. Los nutrientes se pueden dividir en 2 clases: esenciales, sin los cuales la clula no puede crecer, y no esenciales que se utilizan cuando estn presentes pero no son indispensables. Algunos nutrientes son utilizados slo como precursores de macromolculas celulares y otros slo como fuente de energa sin ser incorporados directamente al material celular, mientras que otros cumplen las 2 funciones a la

vez. Tambin se pueden clasificar como macro y micronutrientes segn la cantidad requerida. MACRONUTRIENTES El carbono es el mayor constituyente de la clula bacteriana, por lo tanto no llama la atencin que requiera ms carbono que cualquier otro nutriente. De acuerdo a la forma en que lo utilizan tenemos fundamentalmente 2 tipos de bacterias: -Auttrofas: Son capaces de sintetizar casi todos sus componentes orgnicos a partir de compuestos inorgnicos como el CO2. -Hetertrofas: Utilizan sustancias orgnicas como fuente de carbono. En este ltimo grupo se encuentran todas las bacterias de inters mdico. La glucosa, por ejemplo, es utilizada como fuente de carbono y fuente de energa. Tambin existen bacterias que pueden usar una variedad de otras sustancias orgnicas como fuente parcial o exclusiva de carbono. Entre las bacterias ms verstiles se encuentra las del gnero Pseudomonas, muchas de las cuales pueden utilizar ms de 100 compuestos orgnicos. Despus del carbono el elemento ms abundante en la clula es el nitrgeno, representa entre el 12 y el 15% del peso seco, y es el constituyente principal de protenas y cidos nucleicos. La mayora de las bacterias son capaces de utilizar el amonio como fuente de nitrgeno, mientras que otras pueden usar los nitratos. Reduccin asimiladora: En se cual eslograr por La reduccin de nitratos, la puede reducido 1. por la va del nitrito, y 2. Reduccin desasimiladora: Donde el nitrato sirve como aceptor final de electrones. La primera est bastante extendida entre las bacterias mientras que la segunda slo es comn en bacterias anaerobias y anaerobias facultativas. El fsforo es utilizado para la sntesis de cidos nucleicos y fosfolpidos. La mayora de las bacterias lo usan en forma inorgnica como PO4=. Los fosfatos orgnicos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, pero para ser utilizados deben ser atacados primero por fosfatasas, enzimas que clivan estos compuestos liberando fsforo inorgnico. Aunque requeridos en cantidades muy pequeas los micronutrientes son importantes para la nutricin. Entre estos destacamos, cobalto, cobre y manganeso. Factores de crecimiento: Son sustancias que deben ser aportadas preformadas, ya que la bacteria que las requiere no las puede sintetizar a partir de los nutrientes ms simples, por falla o ausencia de una va metablica. Estas sustancias incluyen vitaminas del complejo B, aminocidos, purinas y pirimidinas. Las bacterias que no requieren factores de crecimiento de denominan prototrficas y las que los requieren, auxotrficas para

ese factor. Oxgeno: Las exigencias de oxgeno de una bacteria en particular reflejan en parte el tipo de metabolismo productor de energa. De acuerdo a su relacin con el oxgeno tenemos: - Anaerobios obligados: Hay de 2 tipos, estrictos y aerotolerantes, los primeros crecen en ausencia de O2 y este es sumamente txico, incluso letal cuando la exposicin es breve. Los segundos tambin crecen slo en ausencia de O2 pero toleran ms que los anteriores su presencia; - Anaerobios facultativos: Son capaces de crecer en presencia o ausencia de oxgeno. - Aerobios obligados: Rrequieren oxgeno para su desarrollo. - Microarfilos: Crecen mejor con tensiones de oxgeno bajas (3%-5%), las concentraciones elevadas (21%) tienen un efecto inhibidor para estas bacterias. En los aerobios, anaerobios facultativos y anaerobios aerotolerantes la enzima superoxidodismutasa impide la acumulacin del radical superxido; esta enzima est ausente en los anaerobios estrictos. El perxido de formado por la accin hidrgeno de la superoxidodismutasa es destruido con rapidez por la enzima catalasa o por peroxidasas, como vimos ms arriba. Dixido de carbono: Algunas bacterias como Neisseria y Brucella tienen varias enzimas con baja afinidad por el CO2 y requieren una concentracin ms elevada (10%) de la que habitualmente est presente en la atmsfera (0.03%). Estos requerimientos atmosfricos deben ser tenidos en cuenta cuando se realice el cultivo de estas bacterias. Requerimientos fsicos. POTENCIAL DE OXIDOREDUCCION: El potencial de xido-reduccin de un medio de cultivo es un factor crtico para determinar si se producir o no el desarrollo de un inculo sembrado en dicho medio. Para la mayor parte de los medios de cultivo en contacto con el aire, el potencial de xido-reduccin es de +0,2 a +0,4V a Ph 7. Los anaerobios obligados son incapaces de crecer a menos que el potencial sea tan bajo como -0,2V como mnimo. Para establecer estas condiciones en un medio de cultivo se puede eliminar el oxgeno, recurriendo a sistemas de cultivo anaerobio o agregando al propio medio compuestos que contengan sulfidrilo como por ejemplo el tioglicolato de sodio. TEMPERATURA: Para cada bacteria existe una temperatura ptima de desarrollo y un rango en el cual este puede ocurrir. Las bacterias se dividen en tres grupos de acuerdo al rango de temperatura en el que

pueden desarrollarse: - Psicrfilas: -5 a 30 C, ptimo:15C - Mesfilas: 10 a 45C, ptimo:30C - Termfilas: 25 a 80C, ptimo:55C. CONCENTRACION DE HIDROGENO (pH): Tambin aqu existe un valor de pH ptimo dentro de un rango ms amplio en el cual el crecimiento puede ocurrir. Para la mayor parte de las bacterias de inters mdico, el pH ptimo es de 7,2 a 7,6. Sin embargo hay patgenos humanos como M.tuberculosis que resisten valores muy bajos de Ph. CONDICIONES OSMOTICAS: La concentracin de solutos con actividad osmtica dentro de la clula bacteriana es superior a la concentracin exterior. Con excepcin de los Mycoplasmas y las formas lister (L), que no tienen pared celular, la mayor parte de las bacterias tienen una tolerancia osmtica importante lo que les permite soportar grandes cambios de la osmolaridad. Captacin de nutrientes La concentracin de solutos en el interior de una clula bacteriana es mayor que en el medio extracelular. Esto es aplicable tanto al medio natural como a la mayora de los medios de cultivo utilizados en el laboratorio. La principal barrera para el paso de solutos entre la clula y el medio externo es la membrana celular. Las bacterias estn rodeadas de membranas semipermeables, compuestas por una mezcla compleja de protenas, lpidos y glucoprotenas, que restringen el ingreso de la mayora de los solutos; sin embargo, tienen sistemas que han evolucionado para el transporte de sustancias pequeas a travs de dichas membranas. Las molculas mayores deben primero ser degradadas a molculas ms pequeas por enzimas secretadas al exterior por la propia bacteria (exoenzimas). En el caso de las bacterias Gram negativas estas exoenzimas se encuentran localizadas fundamentalmente en el espacio periplsmico (espacio virtual ubicado entre la membrana externa y la membrana citoplasmtica), mientras en las bacterias Gram positivas estn ancladas en la membrana citoplasmtica. Estas enzimas son activas sobre: protenas, polisacridos, lpidos y cidos nucleicos entre otros. Bacterias como S.aureus, S.pyogenes, y C. perfringens, elaboran una variedad de estas enzimas que contribuyen a la patogenia de las enfermedades por ellas producidas, destruyendo componentes vitales de los tejidos del hospedero infectado. Estas enzimas pueden ser constitutivas (se sintetizan siempre) o inducibles (se sintetizan slo cuando est presente su Con excepcin del agua y el amonio que ingresan a la clula por difusin pasiva en respuesta a un gradiente de concentracin a ambos lados de la membrana, los dems metabolitos lo hacen por sistemas de transporte ms

especficos. Porinas y canales de maltosa: Estos sistemas de transporte no requieren consumo de energa. Los canales de porinas son sistemas inespecficos y permiten el ingreso de molculas pequeas de peso molecular menor o igual a 6.000 Da. Las porinas son protenas ubicadas en la membrana externa de las bacterias Gram negativas que forman canales o poros permitiendo el pasaje de estas molculas pequeas e hidroflicas. Difusin facilitada: En este caso, una protena asociada aa membrana facilita el rpido equilibrio a ambos l lados de la misma, funcionando en conjunto con una quinasa citoplasmtica ATP dependiente. Estas protenas de membrana se denominan colectivamente permeasas, muchas de las cuales son inducidas por el substrato a ser transportado. Una vez fosforilada la sustancia por la quinasa citoplasmtica queda atrapada dentro de la clula. La difusin facilitada se parece a la difusin simple en el sentido de que el substrato se mueve por un gradiente de concentracin, desde la concentracin superior a la inferior, por lo tanto el propio proceso de transporte no requiere energa. Difiere de la difusin pasiva en que est mediada por una protena transportadora, es mucho ms rpida y muestra una Transporte activo: Este sistema permite que los solutos ingresen a la clula contra un gradiente de concentracin gracias al consumo de energa metablica. Como ejemplo veremos el sistema de la -galactsido permeasa por el cual el disacrido lactosa es concentrado dentro de una bacteria como E.coli. El transporte de la lactosa est mediado por una permeasa especfica (conocida como protena M) y esta reaccin est acoplada al gasto de energa. La energa se utiliza para disminuir la afinidad de la permeasa por la lactosa en la parte interna de la membrana, favoreciendo de este modo su liberacin rpida dentro del citoplasma. Si la generacin de energa es bloqueada por el agregado de azida de sodio al sistema, la permeasa cataliza simplemente una difusin facilitada de la lactosa, cesando el transporte cuando la concentracin del disacrido es Captacin y transporte de hierro: En medios aerobios y a H neutro la concentracin de hierro soluble es baja p como para alcanzar un desarrollo ptimo. Las bacterias han desarrollado varios sistemas para obtener cantidades adecuadas de este elemento. Siderforos: Son ligandos de peso molecular bajo cuya funcin es la de suministrar hierro a la clula. Si bien existe una variacin importante en la estructura de los

distintos tipos de siderforos conocidos, casi todos son de dos tipos: catecoles, de los cuales la enterobactina es la ms estudiada, e hidroximatos, los cuales son producidos por ciertos hongos. La enterobactina es un poderoso quelante que E.coli produce con rapidez en condiciones de dficit de hierro y que secreta al medio externo. CRECIMIENTO DE LAS POBLACIONES BACTERIANAS. El cultivo es el proceso de propagacin de los microorganismos en el laboratorio, aportando las condiciones ambientales adecuadas y los nutrientes necesarios. Debemos recordar que algunas de las bacterias que causan infecciones en seres humanos no son capaces de crecer en medios artificiales inertes. Cuando una clula bacteriana se coloca en un medio de cultivo nutricionalmente apto, aumenta de tamao y, con el tiempo, se divide para formar dos clulas. Esto prosigue, lo que da lugar a una poblacin de clulas vegetativas. El crecimiento de las poblaciones bacterianas, en un sistema de cultivo cerrado, est limitado por el agotamiento de los nutrientes o bien por la acumulacin de productos txicos del metabolismo. Cuando las bacterias se siembran en el laboratorio, en medios de cultivo slidos o lquidos, las condiciones se asemejan a las de un sistema cerrado, sin un aporte continuo de nutrientes. Si luego de sembrado el medio lquido se toman muestras a intervalos regulares, la representacin grfica de los datos (conteo de clulas viables vs. tiempo) dar la curva de crecimiento caracterstica, que consta de 4 fases a saber: a. Fase de latencia: Las bacterias transferidas de un cultivo en fase estacionaria a un medio fresco, sufren un cambio en su composicin qumica antes de ser capaces de iniciar la multiplicacin. Hay un marcado aumento de los componentes macromoleculares y de la

actividad metablica, casi sin divisin celular, asociado a un incremento de la susceptibilidad a los agentes fsicos y qumicos. Como vemos, la mal llamada fase de latencia implica intensa actividad metablica. b. Fase exponencial: Las clulas se dividen a una velocidad constante determinada por la naturaleza intrnseca de la bacteria y por las condiciones del medio. Existe un marcado aumento del nmero total de clulas viables, que puede ser expresado en forma exponencial. Prximo al final de esta fase, ocurre la liberacin de exotoxinas por algunas de las bacterias que las producen. Fase estacionaria: Eventualmente el agotamiento de los nutrientes o la acumulacin de productos txicos determina el cese del crecimiento. Hay una prdida de clulas por muerte, que es balanceada por la formacin de nuevas clulas. Cuando esto ocurre, el conteo total de clulas se incrementa levemente, aunque el conteo de bacterias viables permanece constante. Sobre el final de esta etapa puede ocurrir la esporulacin en aquellas bacterias que poseen este mecanismo de resistencia.

c.

d.

Fase de muerte: Luego de la fase estacionaria, la tasa de muerte se incrementa, el nmero de bacterias viables disminuye rpidamente, por lo que la curva declina en forma franca. Cultivo continuo: En algunos trabajos de investigacin o de produccin es conveniente tener a las bacterias en su fase de crecimiento exponencial durante un perodo prolongado.